志贺菌对喹诺酮类药物耐药分子机制的研究

目的 研究志贺菌对喹诺酮类药物耐药性及其耐药基因gyrA和parC的变异。方法对73株临床分离的志贺菌及标准株51573进行吡哌酸(PI)、氧氟沙星(OFL)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)4种药物的药敏试验,对其DNA旋转酶gyrA基因、拓扑异构酶ⅣparC基因N末端编码区分别进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,对grA基因进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析,对parC基因进行RFLP及单链构象多态性(SSCP)分析。结果 标准株51573对4种喹诺酮类药物均敏感;73株临床分离的志贺菌属细菌对PI、CIP、NOR、OFL的耐药率分别为79.5％、60.3％、41.1％和36.9％;67株(91.8％)菌株对喹诺酮类药物敏感性降低,其中gyrA基因突变率为91％,parC基因突变率为7.5％,6株临床敏感株及标准株51573均未检测出以上两基因突变。结论 志贺菌对喹诺酮类药物耐药严重;靶基因突变是其耐喹诺酮类药物的主要机制之一,以DNA旋转酶gyrA基因突变为主,拓扑异构酶ⅣparC基因突变次之。     

73株志贺菌属细菌对11种抗生素的耐药性分析

目的研究志贺菌属细菌的耐药状况及其特点。方法采用改良Kirby-Bauer纸片法对临床分离的73株志贺菌属细菌进行11种抗生素的药敏试验,并对其耐药特点进行分析。结果志贺菌属细菌对除庆大霉素以外的传统抗生素四环素、链霉素、氯霉素、磺胺甲基异恶唑、氨苄西林的耐药率较高,在68.5%～86.3%之间;对头抱类性抗生素头孢噻吩的耐药率为34.2%;对不同喹诺酮类药物的耐药率在36.9%～79.5%之间,差异有显著性(P值均小于0.05);志贺菌属细菌的多重耐药率为79.5%,存在地区及菌型分布差异(P<0.05)。结论志贺菌属细菌对多种抗生素表现耐药,但存在地区和菌型差异,特别是对庆大霉素耐药率较低,可增加其临床应用;使用喹诺酮类药物治疗菌痢时,应做多种喹诺酮类药物药敏试验。     

志贺菌对喹诺酮类抗菌药物耐药性及耐药机制研究

目的检测志贺菌对喹诺酮类抗菌药物的耐药情况,探讨染色体介导DNA旋转酶和拓扑异构酶Ⅳ基因突变存在与志贺菌喹诺酮类药物耐药性的相关性。方法用琼脂稀释法对60株志贺菌进行耐药性检测;PCR法检测喹诺酮耐药决定区(QRDR)相关基因gyrA、gyrB、parC、parE,并对其中20株PCR扩增所得的阳性产物进行测序分析;分析志贺菌gyrA、gyrB、parC基因突变与喹诺酮类药物耐药性的关系。结果 60株志贺菌对萘啶酸、诺氟沙星、环丙沙星、左氧氟沙星的耐药率分别为90.0%、35.0%、28.3%和15.0%;测序结果显示gyrA、gyrB、parC基因突变率分别为85%、30%和100%,parE基因未发现突变。结论志贺菌对喹诺酮类耐药严重;靶基因突变是喹诺酮类药物耐药的主要机制之一,以DNA旋转酶GyrA基因突变为主,DNA拓扑异构酶IVparC基因突变次之。     

志贺菌氟喹诺酮类药物耐药的研究进展

细菌性痢疾是具有高度传染性的肠道传染病,在世界许多国家和地区散发或小规模暴发流行。我国的发病率一直处于较高水平,志贺菌感染病例数一直高居我国甲乙类法定传染病的前五位[1,2]。世界卫生组织(WHO)推荐菌痢的首选治疗药物为环丙沙星,次选为头孢曲松和匹美西林,能有效减少由志贺菌感染所引起     

大肠埃希菌耐喹诺酮类药物回旋酶基因突变的研究

目的 研究导致大肠埃希菌DNA回旋酶A亚单位的基因变异耐喹诺酮类药物的机制。方法 收集3株大肠埃希菌耐药菌株及1株敏感株，用PCR方法扩增其回旋酶(gyraseA)基因，对扩增片段进行单链构象多态性分析(PCR--SSCP)及DNA序列分析。结果 PCR—SSCP发现3株耐药株其DNA单链与标准株及临床敏感株迁移率不同，3株耐药菌株存在Ser—83→Leu，Asp—87→Asn及His—184→Asn突变，Ser—83→Leu及Asp—87→Asn突变位于氟喳诺酮类药物耐药决定区，gyrA基因碱基552位点C→A碱基突变致组氨酸突变为天冬酰胺。结论 大肠埃希菌对氟喹诺酮类药物产生耐药性与gyrA基因点的突变有关。     

志贺菌对喹诺酮类药物的耐药性及其耐药机制

目的调查济南地区志贺菌对喹诺酮类药物的耐药情况,并研究其耐药机制,为临床抗感染治疗提供依据,以指导临床合理用药。方法采用K-B法测定菌株对萘啶酸、环丙沙星和左氧氟沙星3种喹诺酮类药物的敏感性,PCR扩增gyrA、parC和qnr基因,选取部分PCR扩增产物进行DNA测序。结果62株志贺菌对萘啶酸、环丙沙星和左氧氟沙星的耐药率分别是90.3%、29.0%和6.5%。所有菌株均扩增出了相应gyrA和parC基因产物,未检出qnr基因。耐药株均存在gyrA基因突变和parC基因突变;只对萘啶酸耐药的菌株gyrA基因存在83位氨基酸突变,而对萘啶酸和环丙沙星耐药株中则同时存在83位和87位氨基酸突变;parC基因存在80位SerIle的突变。结论该地区志贺菌对喹诺酮类药物耐药情况严重,而gyrA基因87位氨基酸突变是志贺菌对环丙沙星耐药的重要原因。     

福氏志贺菌菌型变异分析

目的 了解在盐城市人群中流行的福氏志贺菌变异情况.方法 采用肠道致病菌检验方法对收集到的菌株进行鉴定,用多种因子血清进行血清学鉴定.结果 共鉴定出福氏志贺菌48株,F2a占29.2％、F4c占25％,其他菌型有F1b、Fy和F?型(均为8.3％)、F2c等等.结论 盐城市流行的福氏志贺菌中有新的福氏亚型菌F2c、F4c、F?型等,其中F4c已经成为主要流行菌株之一.     

福氏志贺菌4c亚型的药物抗性观察

目的对一起细菌性痢疾爆发患者中分离的罕见福氏志贺菌4c(F4c)血清亚型菌株的药物抗性及其在外界存活能力进行研究。方法以K_B法作药敏试验;以大肠埃希菌8099为对照,测定其常用消毒剂最小抑菌浓度(MIC),并观察在37℃干燥环境中的存活时间。结果该菌表现为对四环素、甲氧苄啶(TMP)等耐药;在含0.2%过氧乙酸、0.125%戊二醛、4%乙醇、0.0025%新洁尔灭、125mg/L含氯培养基中生长被抑制;干燥滤纸上至少能存活72h。结论F4c与F2a耐药性相似;对乙醇、新洁尔灭、氯消毒剂较大肠埃希菌敏感,而抗干燥能力强于大肠埃希菌8099。     

耐喹诺酮类大肠埃希菌耐药机制的研究

目的探讨耐喹诺酮类大肠埃希菌的耐药机制。方法收集天津市第一中心医院2004年3月-2005年10月临床分离的大肠埃希菌,并随机选取40株作为研究对象,通过K-B药片试纸法和微量稀释法测40株目的菌株的耐药性;PCR扩增耐药株的gyrA QRDR区和parC基因,进行PCR-SSCP分析;同时,PCR扩增marOR基因,在耐药株中随机选取进行测序,检测marOR基因突变情况。结果37株对耐喹诺酮类菌株均出现了gyrA基因突变,除常见氨基酸改变外,还发现Asp87→Asn、Ala84→Pro;36株耐喹诺酮菌株发生了parC基因突变,只对萘啶酸耐药,对环丙沙星中介、氧氟沙星、加替沙星敏感的ECO24未出现parC基因突变;只对氟喹诺酮类耐药的ECO11未出现marOR区突变;存在多重耐药的ECO5 marOR区发现6处突变,且1 879 bp处的突变改变了marOR的终止密码子。结论gyrA和parC基因突变引起大肠埃希菌产生耐药,gyrA基因突变是产生对氟喹诺酮类耐药的主要原因,parC基因突变可引起菌株对氟喹诺酮类药物的高水平耐药,marOR的多位点突变在多重耐药机制中有一定的作用。     

新疆地区2000～2004年志贺菌耐药性分析

为了解新疆地区近向年志贺菌属耐药性变化特征,本对2000～2004年新疆地区腹泻监测分离到的志贺菌778株进行分析.结果报告如下。     

淋病奈瑟菌对氟喹诺酮类药物的耐药性与gyrA和parC基因突变关系的研究

目的 探讨江苏省淋球菌对氟喹诺酮的耐药状况、耐药基因突变型的分布情况及二者之间的关系。方法 采用琼脂稀释法检测淋球菌氟喹诺酮类药物（环丙沙星、左氧氟沙星）的最小抑菌浓度（MIC），采用PCR法扩增含有喹诺酮耐药决定区的gyrA和parC基因片段，并进行测序分析。结果 根据所测MIC，本研究分离的95株淋球菌对环丙沙星100％的耐药；通过测序分析，在54株淋球菌中检测到gyrA和parC的18种突变形式，parC基因突变点越多，MIC相对也较高。结论 parC基因的突变导致淋球菌对喹诺酮类药物的高水平耐药。     

80株大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮耐药影响

目的　探讨大肠埃希菌靶位基因突变对喹诺酮类药物耐药的影响。方法　本研究分别用琼脂稀释法和K -B纸片扩散法药敏试验检测了 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌环丙沙星MIC的分布和对四种喹诺酮类药物的敏感性 ;PCR扩增大肠埃希菌的gyrA和 parC基因的QRDR区 ,分别对其进行限制性内切酶酶切分析和SSCP分析 ,以检测药物靶位基因可能存在的突变。结果　 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌中有 4 7株对环丙沙星耐药 ,耐药率达 5 8.75 % ,2 0株对环丙沙星敏感的菌株 gyrA基因QRDR区未发生改变 ,而 13株敏感株和 4 7株耐药株gyrA 2 4 7bp位点处均存在突变 ,且这 13株对环丙沙星敏感的菌株均对萘啶酸耐药。 33株对环丙沙星敏感的菌株parCSSCP分析 ,均未存在突变。 结论　① 80株致泌尿系感染的大肠埃希菌对环丙沙星的敏感性和对萘啶酸的敏感性存在明显差异 ;②gyrA基因是大肠埃希菌喹诺酮类药物的主要作用靶位。在某些菌株中 ,其 2 4 7位核苷酸位点的改变仅使细菌对环丙沙星的敏感性下降 ,parCQRDR区的突变使细菌的耐药程度增加。     

肠炎沙门菌临床分离株耐药性与耐药基因分析

目的对分离自北京、广州、新疆3个地区腹泻病人粪便标本中的肠炎沙门菌菌株进行耐药性监测,并分析其耐药基因的变异情况。方法应用生化试验、血清凝集试验对分离的疑似沙门菌菌株进行鉴定。采用K-B药敏纸片法对鉴定出的肠炎沙门菌进行抗生素敏感性试验。利用PCR技术扩增其耐药基因DNA促旋酶gyrA基因和拓扑异构酶parC基因,同时进行测序。结果共分离鉴定出20株肠炎沙门菌,分离菌株对环丙沙星、庆大霉素、头孢他定、亚胺培南的敏感率为100%,对萘啶酸耐药;75%的菌株呈现多重耐药性(multidrug resistance,MDR)序列比对结果显示gyrA基因Asp87及Gly133密码子处发生了点突变,其中Gly133是新的突变点。未发现parC基因密码子突变。结论肠炎沙门菌临床分离株MDR情况比较严重,对萘啶酸普遍耐药,这可能与20株菌的gyrA基因QRDR的突变相关。为防止多重耐药现象的蔓延和加重,除了应加强耐药性及耐药性相关基因的实验室监测外,临床治疗沙门菌感染时需慎用抗生素。     

福氏志贺菌4c亚型的药物抗性观察

目的对一起细菌性痢疾爆发患者中分离的罕见福氏志贺菌4c（F4c）血清亚型菌株的药物抗性及其在外界存活能力进行研究.方法以K-B法作药敏试验;以大肠埃希菌8099为对照,测定其常用消毒剂最小抑菌浓度（MIC）,并观察在37℃干燥环境中的存活时间.结果该菌表现为对四环素、甲氧苄啶（TMP）等耐药;在含0.2%过氧乙酸、0.125%戊二醛、4%乙醇、0.0025%新洁尔灭、125mg/L含氯培养基中生长被抑制;干燥滤纸上至少能存活72h.结论F4c与F2a耐药性相似;对乙醇、新洁尔灭、氯消毒剂较大肠埃希菌敏感,而抗干燥能力强于大肠埃希菌8099.     

儿童122株福氏志贺氏菌菌型分布及耐药性分析

目的:了解儿童感染福氏志贺氏菌菌型分布及耐药性.方法:对2007～2011年在唐山市妇幼保健院就诊的≤14岁腹泻患儿粪便分离的福氏志贺氏菌122株,采用纸片扩散检测其抗菌药物的耐药性,最后对药敏结果进行分析.结果:122株福氏志贺氏菌以F2a为主,占65.6％.122株志贺氏菌属对14种抗生素的药敏结果呈不同程度的耐药现象,对氨苄西林耐药率高达100.0％,对复方磺胺、氨苄西林/舒巴坦、阿莫西林/克拉维酸耐药率分别为88.9％、88.6％和82.2％,对头孢曲松、头孢噻肟耐药率分别为74.7％、66.2％,对环丙沙星、氨曲南、左氧氟沙星耐药率分别为22.4％、22.3％和11.6％,对亚胺培南未发现耐药菌株.结论:儿童福氏志贺氏菌属对某些抗生素产生耐药,而耐药率逐渐呈上升趋势,临床医生应引起高度重视.     

志贺菌敏感株诱导耐药与marOR基因突变关系

目的 对志贺菌敏感株进行诱导使其耐多药,研究其诱导耐药前后marOR基因的差异.方法 用4类抗生素的次抑菌浓度对临床分离鉴定的志贺菌敏感株进行诱导耐多药试验.对志贺菌敏感株及诱导耐多药株的marOR基因进行聚合酶链反应(PCR)扩增后,测序比较其诱导耐药前后marOR基因序列的差异.结果 成功获得志贺菌诱导耐多药株,命名为YD株;其最小抑菌浓度(MIC)分别为初始菌株的6～8倍;该诱导耐药株对庆大霉素、诺氟沙星、磺胺甲基异恶唑、头孢噻吩等均耐药;测序结果发现诱导耐药株marOR基因YD株有6个位点出现突变,其中5个为同义突变,1个为错义突变(1630位点A→G,赖氨酸→精氨酸).结论 marOR基因的突变可能是志贺菌诱导耐药的调控机制之一.