东方拟无枝酸菌中ECO-0501生物合成基因簇的筛选及其相关调控基因的初步分析

ECO-0501是从东方拟无枝酸菌代谢物中分离到的一种新型线性多烯类化合物,其不但具有良好的抗菌活性,且体内毒性较低,目前处于临床前的开发.本文通过对东方拟无枝酸菌的菌落原位杂交,筛选到4个粘粒克隆NL5B,NL9-3-1,NL3-1C,NL3-3A,可以覆盖整个ECO-0501生物合成簇,并对其中的基因ORF4进行了生物信息学分析,推测其为ECO-0501合成途径中的正调控基因.并通过该基因的过表达,成功地将ECO-0501的产量提高了6倍,为下一步ECO-0501的开发及其调控机制的研究打下基础.     

ECO-0501产生菌的发酵条件优化

优化东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)dA9发酵制备ECO-0501的工艺条件,包括种龄、初始pH、培养温度、碳氮源种类等,并通过正交试验优化发酵培养基的组成。在30℃、种龄3d、接种量8%、发酵4d的条件下,摇瓶发酵单位达115mg/L,比优化前提高了约60%。     

东方拟无枝酸菌中vcm14基因的敲除对万古霉素合成的影响

PCR-targeting是一种用于敲除或阻断放线菌染色体上某一基因的快速高效的方法 .本研究利用该方法 在大肠埃希菌中构建破坏粘粒cLYLH17(△vcm14::apr),通过结合转移首次敲除东方拟无枝酸菌HCCB10007中万古霉素生物合成基因簇中推测的haloperoxidase基因--vcm14,得到一株双交换阻断突变株A.orientalis dvcm14(Avcm14::apr).该菌不产生万古霉素及其类似物,证实vcm14基因的编码蛋白不是haloperoxidase,且该蛋白不参与万古霉素的卤化反应,可能是万古霉素生物合成途径中的一个关键酶.本研究为阐明万古霉素生物合成途径中的卤化过程提供了有益线索.     

bgtfA在东方拟无枝酸菌中异源表达及其产物鉴定

在万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)中异源表达Balhimycin产生菌来源的糖基转移酶基因bgtfA,从而在工程菌发酵液中获得杂合万古霉素,以探索糖基转移酶BgtfA能否作为一个独立的元件在异源宿主中发挥催化作用。首先将bgtfA基因克隆至载体质粒pULVK2AE,构建重组质粒pLYEBA2AE,然后采用电转化方法将质粒导入东方拟无枝酸菌,用HPLC和LC-MS检测、验证工程菌发酵液中是否存在BgtfA的催化产物。成功地在东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)异源表达bgtfA基因,经HPLC和LC-MS检测分析,在工程菌的发酵液中获得预期的BgtfA催化产物,杂合万古霉素LYV07ww01。这表明BgtfA有一定的底物宽泛性,不仅能够催化表万古糖胺与balhimycin苷元的连接,还能催化万古糖胺连接至万古苷元。     

链霉素抗性突变-万古霉素高产菌株的选育研究

以东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)AO-4为出发菌株，经紫外线(15w，253．7nm，距离30cm)诱变处理，筛选链霉素抗性突变株(链霉素浓度1000μg／ml)，从中获得万古霉素高产变株Amycolatopsis orientalis AO-29，其发酵效价较出发菌株提高170%。传代实验表明该变株的高产性能遗传特性较稳定。     

东方拟无枝酸菌HCCB10007中vcm8基因的敲除及无氯万古霉素产生菌的构建

目的:利用基因敲除的方法构建无氯万古霉素产生菌。方法:利用PCR-Targeting的方法获得破坏粘粒cLYLH15(Δvcm8::apr),通过接合转移敲除东方拟无枝酸菌HCCB10007中万古霉素生物合成基因簇中的卤化酶基因vcm8。结果:筛选得到1株突变子A.orientalisdvcm8(Δvcm8::apr)。结论:该菌不再代谢产生万古霉素,转而合成无氯万古霉素。经传代试验证明该菌株遗传稳定,可作为无氯万古霉素产生菌。     

东方拟无枝酸菌DNA转化系统的建立

对东方拟无枝酸菌HCCB10007原生质体制备和再生条件进行了探索,结果表明以含2%甘氨酸的TSB培养基培养菌丝体,28℃经1mg/ml溶菌酶处理30min,形成的原生质体约达107个/ml,原生质体再生率为2.5%.将来源于HCCB10007的gtfE基因通过安普霉素抗性基因插入失活,构建质粒pLY26并经PEG介导转化HCCB10007原生质体,PCR鉴定结果表明转化成功.     

万古霉素产生菌的选育与发酵培养基优化

万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌（Amycolatopsis orientalis）5－13经紫外线（30W，253.7nm，距离30cm，照射50s）诱变后，在含万古霉素1000μg/ml的浓度梯度平板上筛选万古霉素抗性变株，得到一株万古霉素抗性变株A.orientalis 6-21，其摇瓶效价较出发菌株提高23％，对万古霉素的抗性提高200％。传代试验表明该变株的高产性能遗传特性较稳定。用正交试验法对万古霉素发酵培养基进行了优化，与原发酵培养基相比，万古霉素的摇瓶发酵效价提高了14.3%。     

大肠埃希菌尿潴留患者尿液分离株同时检出六种抗菌制剂外排泵基因

目的调查7种抗菌制剂外排泵基因(smr-2、emrB、emrD、emrE、mdfA、tehA、qacE△1)在一株大肠埃希菌尿潴留患者尿液分离株(ECO-024)中的存在情况。方法大肠埃希菌ECO-024于2009年2月分离自宁波市第一医院一例尿潴留患者的尿液标本,采用聚合酶链反应(PCR)检测7种外排泵基因。结果ECO-024共检出6种外排泵基因:emrB、emrD、emrE、mdfA、tehA、qacE△1,只有smr-2未能检出。结论同时检测这7种抗菌制剂外排泵基因是国内首次报道。其中有6种基因在大肠埃希菌尿液分离株中被检测到,这或许是导致分离株呈多重耐药的一个重要原因。在大肠埃希菌中检出mdfA、emrB、emrD、emrE基因为国内首次报道。     

用分批与连续培养法进行万古霉素生产

东方拟无枝菌酸菌(Amycolatopsis orieritalis)产生糖肽抗生素万古霉素和N-去甲基万古霉索。糖肽类抗生素对革兰阳性菌具有特殊的作用方式，即与肽葡聚糖末端的羧基相结合。尽管近年来关于耐药菌的报道有所增加，但万古霉素及有关糖肽类仍然是抗     

子宫中隔切除术后预防粘连方法探讨

目的 探讨子宫中隔并不孕患者宫腔镜术后不同处理方法预防宫腔粘连的效果.方法 55例子宫中隔并不孕患者行腹腔镜监护下宫腔镜子宫中隔切除术(TCRS),术后针对不同患者采用不同术后处理措施,包括宫腔放置与不放IUD,是否进行人工周期治疗,部分患者术后使用GnRH-a类药物治疗术后第1、3个月行宫腔镜检查随访,宫内放置IUD的患者;于术后第3个月取环.结果 54例患者术后进行宫腔镜检查随访,其中40例分别于术后第1、3个月完成了术后2次宫腔镜检查,另14例只完成一次检查.宫腔术后放环与否对术后宫腔形态影响无差异(P>0.05),术后使用人工周期治疗患者较未使用者子宫内膜厚,此两者术后第3个月宫腔镜检查发现宫底创面均已有内膜覆盖.使用GnRH-a类药物患者术后官腔形态满意.结论 TCRS术后宫腔放置IUD无助于预防术后粘连的发生;术后人工周期治疗应更个体化并有针对性的使用GnRH-a类药物治疗.术后及时进行宫腔镜检查随访可防止术后宫底新粘连的形成.     

10例狂犬病误诊原因分析

狂犬病近年来发病率有逐年增加的趋势,近十二年来,我们共遇见狂大病２３例,其中１０例被误诊为其它疾病,现就其误诊原因进行分析如下。１临床资料１．１ 一般资料：男８例,女２例;年龄最大７８岁,最小４岁。发病季节为３月～１１月。首诊科室,儿科３例、内科３例、转院３例、急诊科１例。１．２ 临床表现：发热７例,恐风５例,恐水６例,怕光３例,流涎１０例,胸闷、气促、呼吸困难４例,烦躁不安１０例,多汗７例,恐惧６例,肢体麻木４例,抽搐４例,恶心、呕吐２例,昏厥１例。所有病例发病至死亡时间为２天～６天,死亡原因为…     

住院患者精神用药情况调查分析

目的：了解目前住院精神患者的药物使用情况。方法：采用一日法调查西安市精神卫生中心403例住院精神患者诊断和治疗情况，并与上海市精神卫生中心2004年调查结果相比较。结果：①传统精神药物使用显著减少，新型精神药物使用占据首位；②抗精神病药物使用趋向小剂量化；③本组联用丙戊酸盐类药物显著增多；④我院精神药物使用情况与上海精神卫生中心比较有显著差异。结论：近年来精神药物使用情况已发生了显著变化，与新型精神药物疗效好，副作用少，患者依从性高有关。     

欧洲药典适用性认证介绍

目的介绍欧洲药典适用性认证程序,为国内药品监管机构和原料药生产企业提供信息,促进我国原料药生产企业的国际化。方法通过查阅调研欧盟相关药品法规和与EDQM同行面对面的交流,详细了解欧洲药典适用性认证的组织机构和具体程序。结果与结论欧洲药典适用性认证程序在对原料药的质量控制有重要作用,加强了药典的监管力度,进一步保证了原料药的质量、安全性和有效性。     

新疆维吾尔自治区基层医院平均住院日调查分析

目的 通过对新疆维吾尔自治区14个县乡级医疗机构住院患者平均住院日及影响因素进行分析,为县乡级医疗机构进一步提高医疗管理质量提供依据.方法 将2009-2010年1504例县乡级医院住院患者平均住院天数,按性别、年龄、院别、付费方式、疾病分类进行描述性统计和秩和检验分析.结果 不同性别间及院别间平均住院日差异均有统计学意义(均P＜0.05),男性平均住院日为10.39 d,女性为8.69d,乡级医院为9.27d,县级医院为9.50 d.不同年龄间平均住院日差异有统计学意义(P＜0.05),小于15岁组、15 ～24岁组、25～44岁组、45 ～65岁组、大干65岁组平均住院日分别为8.10 d、7.66d、8.83 d、10.26 d和11.33 d.自费患者平均住院日为8.39 d,新农合组为9.10 d,商业保险组10.17 d,社会基本医疗保险患者则为11.08 d.不同疾病分类间平均住院日差异明显,妊娠类平均住院日最短,为6.73 d,而肿瘤患者则为14.26 d.结论 不同性别、不同年龄段、不同疾病分类及不同付费方式间平均住院日存在差异,县级医疗机构和乡级医疗机构住院患者平均住院日也存在差异.     

不同方法治疗慢性宫颈炎的疗效分析

目的慢性宫颈炎是妇科最常见的疾病之一,可引起盆腔脏器炎症,并且与宫颈癌的发生关系密切。本文诣在探讨不同方法在慢性宫颈炎中的疗效。方法回顾性分析新乡市中心医院收治的210例宫颈炎患者,采用药物保妇康栓、聚焦超声治疗及宫腔镜下宫颈电切术的临床效果进行统计分析。结果宫颈电切术治疗有效率为97.9%,明显高于另外两组,差异有统计学意义。结论宫腔镜下宫颈电切术治愈慢性宫颈炎,并且切除宫颈移行带,减少宫颈癌发生。     

The effect of temperature and of cetrimide on the rate of loss of refractility of spores of Bacillus megaterium

The rate of germination of spores of Bacillus megaterium at 30° is not significantly different from the rate at 37° but the onset of germination is delayed; outgrowth is normal. At 45° germination of some spores occurs but the rate is much slower than at 37°, and there is no lag; emergence occurs from only a proportion of the germinated spores and after 3 or 4 vegetative cells have been produced, replication ceases. A single regression equation can represent the germination rate of the spores at 37° in the presence of from 0.0005 to 0.02% w/v of cetrimide and in its absence. In 0.0005% w/v of cetrimide, germ cells emerge from some of the germinated spores but many of them become swollen and disintegrate. Concentrations of 0.00125% w/v or more progressively inhibit swelling and completely inhibit emergence.     

经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果对比

目的 对比分析经尿道前列腺汽化电切术与经尿道前列腺电切术治疗前列腺增生症的效果.方法 将本院2011年3月～2013年2月收治的90例前列腺增生症患者随机分为观察组（n=45）和对照组（n=45）,观察组患者采用经尿道前列腺汽化电切术治疗,对照组患者采用尿道前列腺电切术治疗,比较两组患者的疗效.结果 观察组的手术时间、术中出血量、术后冲洗时间、术后留置导尿管时间、住院时间少于对照组（P＜0.05）,残余尿量、国际前列腺症状评分和生活质量评分优于对照组（P＜0.05）,但是两组患者的并发症发生率差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 经尿道前列腺汽化电切术治疗前列腺增生症具有疗效更确切、出血少、恢复快等优势,可以作为治疗前列腺增生症的首选方法.