柚皮素诱导的K562细胞凋亡机制中PI3K和Akt的表达

目的 研究柚皮素(naringenin)对人慢性髓系白血病K562细胞株凋亡作用与PI3K/Akt路径的关系.方法 MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同培养时间对K562细胞凋亡的影响;用免疫组织化学的方法检测柚皮素作用下K562细胞中的PI3K和Akt的表达.结果 柚皮素对K562细胞凋亡有明显诱导作用;PI3K和Akt的表达与柚皮素作用浓度和时间呈负相关关系.结论 柚皮素对K562细胞具有明显的诱导凋亡作用,其作用机制可能是通过减少K562细胞表达PI3K和Akt来实现.     

柚皮素对人髓系白血病K562细胞增殖的作用

目的:探讨柚皮素(naringenin)对人慢性髓系白血病K562细胞株生长的影响及其作用机制。方法:MTT法检测柚皮素在不同浓度、不同时间对K562细胞的影响;倒置显微镜下,Wight-Giemsa染色(W-G染色),免疫荧光染色和透射电镜下观察细胞形态变化、凋亡发生情况以及超微结构的变化;并用流式细胞仪分析细胞周期分布,用免疫组织化学的方法检测细胞增殖核抗原(PCNA)的表达。结果:柚皮素对K562细胞增殖有明显抑制作用,作用24,48和72 h后的半数抑制浓度(IC50)分别为455,225和175μmol/L;柚皮素处理组细胞在普通光镜和电镜下均见观察到显著的增殖抑制和典型的细胞凋亡形态学改变;流式细胞仪分析证实柚皮素能使K562细胞聚积在G0/G1期,S期细胞减少;在处理组PCNA的表达显著低于对照组。结论:柚皮素对K562细胞具有明显的增殖抑制作用,这一作用可能是通过细胞周期阻滞和诱导凋亡两种机制实现的。     

柚皮素对人肺成纤维细胞表达血管内皮生长因子的影响

目的探讨柚皮素对人肺成纤维细胞生成血管内皮生长因子（VEGF）的影响,并研究其可能的机制。方法培养人胚肺成纤维细胞,分为对照组、香烟提取物（CSE）组和柚皮素干预组。柚皮素干预组分别与低、中、高剂量的柚皮素共孵育2h后,与CSE组一起加入CSE,调整终浓度柚皮素5μmoL／L、10μmoVL和20μmoL／L,CSE终浓度5％。培养24、48及72h后,ELISA法测定各组VEGF含量,采用Western blot法观察各组Smad3及磷酸化Smad3（p-Smad3）的表达情况。结果在人胚肺成纤维细胞中,柚皮素能抑制CSE诱导的血管内皮生长因子生成。CSE能显著提高p-Smad3水平,而添加了柚皮素后p-Smad3明显减少,并随柚皮素剂量的增加而p-Smad3水平愈低。结论柚皮素能够抑制Smad3的磷酸化,从而抑制CSE诱导的血管内皮生长因子的分泌。     

柚皮素抑制DN系膜细胞炎症因子表达的分子机制研究

目的：研究柚皮素（naringenin,NAR）对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）小鼠病情影响和肾小球系膜细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）和白细胞介素-6（interleukin-6,IL-6）表达的作用。方法：将10只雄性db/db DN小鼠随机分成柚皮素组和DN组,每组各5只;5只雄性db/m正常对照小鼠为正常组进行实验。其中柚皮素组小鼠给予50 mg/（kg×d）柚皮素连续灌胃2周处理,DN组小鼠给予等量生理盐水连续灌胃2周处理,正常组小鼠给予正常饮食。检测体质量、血糖、尿白蛋白排泄率（urinary albumin excretion,UAE）等一般指标;HE染色和电镜检测小鼠肾脏组织肾小球形态学改变。将小鼠肾小球系膜细胞给予不同葡萄糖浓度（5 mmol/L和25 mmol/L）的DMEM培养基培养。其中5 mmol/L葡萄糖浓度培养的细胞为正常组,25 mmol/L葡萄糖浓度培养的细胞为高糖组,25 mmol/L葡萄糖浓度培养基中加入柚皮素400 μmol/L培养的细胞为柚皮素组。ELISA法检测炎症因子TNF-α和IL-6表达;Western blot检测细胞质和细胞核的NF-κB p65蛋白表达情况。结果：DN小鼠给予柚皮素后,UAE[（51.48±8.54） μg/24 h]较DN组[（99.3±5.15） μg/24 h]降低（F=254.302,P=0.000）;肾小球面积[（2 098±571.84） μm2]较DN组[（4 240±536.66） μm2]减少（F=24.468,P=0.000）;电镜下系膜增生抑制。同时,给予柚皮素的肾小球系膜细胞炎症因子TNF-α和IL-6表达水平（1.99±0.29,1.76±0.15）较高糖组（2.82±0.14,2.53±0.32）下降（F=111.303,P=0.000;F=65.127,P=0.000）;细胞核NF-κB p65（0.29±0.01）较高糖组（0.81±0.02）降低（F=1579.764,P=0.000）。结论：柚皮素可缓解DN小鼠尿白蛋白和减少系膜增生,其机制可能是在系膜细胞中通过抑制NF-κB介导的炎症因子表达。     

大黄素对裸鼠体内 K562 细胞移植瘤的抑制作用及其与调控Caspase3 和 Caspase9 表达的关系

目的 探讨大黄素对 K562 细胞裸鼠移植瘤的生长抑制作用及其与 Caspase3 和 Caspase9 表达变化的关系。方法 建立裸鼠 K562 细胞皮下移植瘤模型,随机分为大黄素低、中、高剂量 (25、50、100 mg/kg) 3 个实验组,以及模型组和羟基脲 (120 mg/kg) 阳性对照组,每组 5 只,ip 连续给药 12 d,测量各组裸鼠肿瘤体积,称取瘤体质量,计算抑瘤率。采用 HE 染色光镜和透射电镜观察肿瘤细胞的凋亡情况,应用 RT-PCR 检测肿瘤组织中 caspase-3 和 caspase-9 mRNA 表达水平。Western blotting 法检测肿瘤组织中 proCaspase3 和 proCaspase9 蛋白的表达。结果 大黄素低、中、高剂量组肿瘤相对体积 (RTV) 分别为 5.23±0.24、4.38±0.17、3.57±0.31;与模型组 (10.45±0.47) 相比,大黄素处理组肿瘤体积明显缩小,具有统计学意义 (〖WTBX〗P〖WTBZ〗＜0.01)。光镜和电镜结果表明大黄素能够诱导 K562 细胞发生明显的凋亡。RT-PCR 结果表明不同剂量的大黄素能够引起 caspase-3 和 caspase-9 mRNA 的表达上调且有剂量依赖性。与模型组相比,大黄素处理组的 proCaspase-3 和 proCaspase-9 蛋白均出现明显的下调。结论 大黄素能够明显抑制人 K562 细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能与激活 Caspase-3 和 Caspase-9 信号转导通路有关。     

柚皮素增强乙肝疫苗免疫效果的探讨

目的探讨柚皮素作为佐剂增强HBV疫苗的体液免疫效果。方法用柚皮素作为免疫佐剂免疫Balb/c小鼠,以佐剂铝盐作为阳性对照,在免疫3次后取小鼠血清做ELISA检测HBsAb滴度,比较各组的免疫效果。结果与无佐剂组小鼠对比,柚皮素和铝盐作为佐剂均可有效地引起小鼠对HBsAg的体液免疫应答。结论柚皮素可以增强乙肝疫苗的免疫效果,和铝盐相比没有统计学意义。     

柚皮素衍生物的合成及抗肿瘤活性

目的:合成甲基化柚皮素和乙酰化柚皮素,并测定其抗肿瘤活性。方法:以柚皮素为原料,碘甲烷为甲基化试剂,乙酸酐为酰化试剂,制备目标物;IR、ESI-MS1、H-NMR确证目标物结构;噻唑蓝(MTT)法测定抗肿瘤活性。结果:目标物确证为7,4′-二甲基柚皮素和5,7,4′-三乙酰柚皮素,其对人源肝肿瘤细胞SMMC-CTT 21的抑制率分别为7.60%和4.10%。结论:7,4′-二甲基柚皮素和5,7,4′-三乙酰柚皮素无抑制肿瘤细胞生长的作用。     

柚皮素对博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化的改善作用及其作用机制

目的 探讨柚皮素(NAR)对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的影响及其可能作用机制.方法 将60只雄性ICR小鼠随机分成正常对照组(Control)、模型组(Model)、阳性对照地塞米松组(DXM,3 mg/kg)、NAR低剂量组(L-NAR,25 mg/kg)和NAR高剂量组(H-NAR,100 mg/kg),每组12只....     

柚皮素脂质体冻干粉的制备及其药效学评价

目的制备柚皮素脂质体冻干粉,并观察其对急性肺损伤(ALI)大鼠模型的治疗效果。方法乙醇注入法制备柚皮素脂质体并进行质量评价,加入冻干保护剂甘露醇(5%,W/V),冻干并进行相关粉体学评价。大鼠气管喷注脂多糖(LPS)(5 mg/kg)制备急性肺损伤模型,将48只SD雌性大鼠随机分成6组(n=8),分别为空白对照组(A组)、模型组(B组)、柚皮素原料药+LPS组(C组)、脂质体冻干粉+LPS组(D组)、地塞米松+LPS组(E组)和空白脂质体冻干粉+LPS组(F组),光学显微镜观察给药后各组大鼠肺组织形态学改变,并测定肺组织湿/干重比。结果最佳处方制得的柚皮素脂质体包封率为(82.44±0.98)%,平均粒径为(133±11)nm,Zeta电位为(-35.9±5)m V。冻干粉的休止角为36°,堆密度为0.3 g/ml。光镜观察结果显示,与A组空白对照比较,B~F组肺组织均出现不同程度炎性细胞的浸润、毛细血管充血、出血和肺泡壁增厚,其中以B组和F组改变最为显著,C组次之,D组和E组最轻。LPS诱导后B~F组肺组织湿/干重比均有不同程度增加,但D组和E组湿/干重比的增加量明显低于B组(P=0.0012,P=0.0018)。结论乙醇注入法制备柚皮素脂质体工艺简单可行,其冻干粉对大鼠急性肺损伤疗效显著。     

增强对大鼠疗效的柚皮素磷脂化复合物

柚皮素是天然的黄酮类化合物，具有多种生物活性。但由于该物质半衰期短和从体内快速排出，所以要频繁服药以维持有效的血药浓度。作者研究了柚皮素磷脂化复合物对CCl4处理的大鼠的抗氧化应激作用，并与纯的柚皮素作了比较。     

PTEN基因对K562细胞增殖、凋亡及对Bcl-2和Caspase家族的影响

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病K562细胞系的增殖、凋亡及对凋亡相关基因Bcl-2及Caspase-3/7及-9的影响.方法 将携带有野生型PTEN及绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病K562细胞系.通过MTT检测细胞生长曲线,流式细胞仪分析转染效率、细胞凋亡率和细胞增殖指数,同时观察光镜、电镜下细胞形态,DNA ladder、荧光染色等方法检测细胞凋亡,荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN及Bcl-2 mRNA水平变化,Western Blotting检测PTEN及Bcl-2蛋白变化,应用试剂盒检测Caspase-3/7及-9蛋白活性.结果 以感染复数为200的Ad-PTEN-GFP 转染K562细胞后,最大生长抑制率为37.1%,早期和中晚期凋亡率均高于转染Ad-GFP组和未转染组(P＜0.05),转染PTEN基因3 d后Bcl-2 mRNA及蛋白表达水平分别是Ad-GFP组的0.27倍和 0.58倍,Caspase-3/7及-9蛋白活性在转染PTEN基因后3 d内呈时间依赖性升高.结论 过表达PTEN基因可能通过抑制抗凋亡分子Bcl-2表达,增强Caspase-3/7及-9活性从而抑制K562细胞系增殖,促进细胞凋亡.     

Caspase8、3蛋白在PUVA诱导K562细胞凋亡时的变化

目的研究Caspase8、3蛋白在补骨脂素（PSO）加长波紫外线（UVA）光化学疗法（PUVA）诱导人白血病K562细胞凋亡时的变化。方法用不同浓度的中药补骨脂中提取的PSO和（或）不同照射时间、波长为360nm的UVA作用于K562细胞,检测细胞凋亡率、在电镜下细胞超微结构改变及Caspase8、3蛋白的表达,用多因素方差分析法对定量资料进行统计分析。结果PSO、UVA照射及PUVA均可使细胞凋亡率增加,后两者上调Caspase8、3蛋白的表达,PUVA的作用显著强于前两者;PUVA处理后的K562细胞超微结构出现明显的凋亡形态学改变。结论PUVA可通过激活Caspase8、3基因诱导K562细胞凋亡。     

肝细胞性肝癌中Caspase-3和PCNA的表达

目的探讨Caspase-3和PCNA在肝细胞肝癌的表达及其在肝细胞肝癌发生、发展中的作用。方法应用组织芯片技术和免疫组化方法（sP法）检测95例肝细胞肝癌组织、68例癌旁组织和19例正常肝组织中Caspase-3和PCNA的表达。结果Caspase-3在肝细胞肝癌中表达阳性率（34．7％）显著低于癌旁组织（79．4％，P〈0．01）和正常肝组织（84．2％，P〈0．01）；Caspase-3的表达与肝细胞肝癌的组织分级和HBsAg有关（P〈0．01，P〈0．05），与患者年龄、性别、肿瘤大小和转移无关（P〉0．05）。PCNA在肝细胞肝癌中的表达阳性率（68．4％）显著高于癌旁组织（26．5％，P〈0．01）和正常肝组织（15．8％，P〈0．01）；PCNA的表达与患者组织分级、转移有关（P〈0．01，P〈0．05），与年龄、性别、肿瘤大小、和HBsAg无关（P〉0．05）。在肝癌组织中Caspase-3与PCNA的表达呈显著负相关（r=-0．598，P〈0．001）。结论肝细胞肝癌中Caspase-3的低表达与PCNA的高表达在肿瘤的发生、发展过程中可能起重要作用。     

Caspase抑制剂对缺氧诱导的心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨Caspase-3特异性抑制剂在缺氧诱导的培养乳鼠心肌细胞凋亡中的作用及其相关基因的表达。方法 将SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为对照组、缺氧72 h组及Caspase-3抑制剂组（缺氧72 h前加入0.1μmol/L的Z-DEVD-fmk）3组。应用Western blot分析法和RT-PCR技术检测Caspase-3、PARP蛋白及Caspase-3mRNA的表达,同时利用流式细胞仪分析心肌细胞凋亡的变化;借助Caspase-3荧光分析试剂盒,荧光比色法检测心肌细胞凋亡过程中Caspase-3活性的变化。结果 Caspase-3抑制剂组细胞凋亡百分率为（14.93±2.47）%,显著低于缺氧72 h组的（48.43±4.18）%,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。Caspase-3抑制剂组PARP及Caspase-3蛋白表达显著低于缺氧72 h组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。RT-PCR分析显示,Caspase-3抑制剂组Cas-pase-3 mRNA的表达量较缺氧72 h组降低了62.05%,差异有高度统计学意义,Caspase-3活性检测显示,Caspase-3抑制剂组的Caspase-3活性较缺氧72 h组降低了52.85%,差异有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论 Caspase-3抑制剂能明显抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡、Caspase-3蛋白和mRNA的表达、Caspase-3蛋白酶活性和PARP的裂解。     

人肾透明细胞癌组织中细胞增殖与凋亡及凋亡相关因子的表达

目的:本课题旨在通过检测人肾透明细胞癌组织中细胞增殖(PCNA)与凋亡(TUNEL法)及凋亡相关因子Caspase-3、Caspase-9表达的变化,研究这些因子的表达与肾癌的关系.方法:标本离体后分成三组,(Ⅰ)肾透明细胞癌组;(2)癌旁组织组;(3)证常肾组织组,应用HE染色法、TUNEL法及免疫组织化学方法进行观察研究.结果:(1)HE染色结粜:肾透明细胞癌组织镜下可见肿瘤细胞体积较大,圆形或多边形,胞质染色浅,透明或颗粒状,核同缩,间质富有毛细血管和血窦.(2)TUNEL检测结果:在肾癌组织、癌旁组织及正常肾组织组均有凋亡发生.凋亡肾组织细胞表现为染色质凝集、边集,核固缩.正常肾组织组细胞核有弱的阳性表达,癌旁组织表达明显增多,肾癌组织阳性表达最少.(3)PCNA免疫组化染色结果:正常肾组织内的细胞核有弱的阳性表达,癌旁阳性表达增加,肾癌组织阳性表达明显增多.(4)Caspase-3、Caspase-9免疫组化结果:Caspase_3 Caspase-9在难常肾组织中可见少量弱的阳性反应,癌旁组织阳性表达增加,肾癌组织表达明显减少.结论:癌旁细胞组织Caspase-3和Caspase-9的蛋白表达明显高于正常肾组织及癌组织,癌组织表达最少;而PCNA则相反,癌组织高于癌旁组织和正常肾组织,正常肾组织表达最少.癌组织中Caspase-3和Caspase-9表达下降,PCNA表达升高说明细胞凋亡减少,癌组织细胞增殖旺盛,是肿瘤形成的重要机制.Caspase-3、Caspase-9、PCNA于肾透明细胞癌的表达在肿瘤分期间无明显差异性.     

辛伐他汀通过Caspase-12活化途径诱导K562细胞凋亡的实验研究

目的 探讨Caspase-12在辛伐他汀诱导K562细胞凋亡中的作用.方法 在K562细胞培养液中分别加入毒胡萝卜素(阳性对照组)和辛伐他汀10、20、30μmol/L(辛伐他汀组)培养72 h,采用荧光显微镜观察凋亡细胞的形态变化,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率.激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2 抖浓度,RT-PCR检测GRP78、Calpain基因mRNA表达水平,Western blot检测GRP78、Caspase-3,-6,-7,-9,-12蛋白水平.结果 10、20、30μmol/L辛伐他汀作用K562细胞72 h后,细胞出现典型的凋亡形态,凋亡率分别为12.41%士0.32%、19.08士0.26%、23.41士0.36%;细胞内Ca2 浓度增加,荧光强度分别为43士2.9、54士2.7、64士2.6:GRP78、Calpain基因mRNA表达上调;Western blot检测显示:Caspase-3,-6,-7,-9,-12剪切活化,GRP78表达增强.结论 Caspase-12作为细胞凋亡的重要途径参与了辛伐他汀诱导K562细胞的凋亡.     

3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺诱导大鼠神经元凋亡及凋亡相关因子的表达

目的 研究腹腔注射(ip)3,4 -亚甲基二氧基甲基苯丙胺(MDMA)对实验大鼠大脑神经元的凋亡诱导作用,以及凋亡相关因子Caspase-3和细胞色表C(CytC)在不同脑区的表达情况.方法 将20只大鼠均分为4组,随机选3组为MDMA实验组(B、C、D),另1组为对照组(A).B组予MDMA 20 mg/kg,ip,单次,C组予MDMA 20 mg/kg Bid×2 d,ip,D组予MDMA 20 mg/kg Bid×4 d,ip;A组给予等体积生理盐水(ip, 单次).采用TUNEL法检测神经元的凋亡,免疫组织化学方法检测Caspase-3和CytC的表达.结果 与对照组相比,给予MDMA后,B、C和D组大鼠各相关脑区 (额叶皮层、海马和纹状体)有凋亡细胞形成,Caspase-3和CytC有程度不同的表达.C组和D组较B组的凋亡细胞增加且凋亡相关因子的表达增加(P<0.05).结论 MDMA可导致实验大鼠神经元的凋亡,并诱导凋亡相关因子Caspase-3和CytC的表达.     

半枝莲提取物诱导白血病K562细胞凋亡

目的 :探讨中药半枝莲诱导人类慢性髓性白血病K5 6 2细胞株的凋亡作用。方法 :采用MTT法检测半枝莲乙醇提取物对K5 6 2细胞的增殖抑制作用 ;HT荧光染色观察细胞形态变化 ;琼脂糖凝胶电泳测定凋亡细胞DNA的片段化 ;caspase 3单克隆抗体检测半枝莲提取物作用后K5 6 2细胞内caspase 3的表达。结果 :半枝莲提取物能明显抑制K5 6 2细胞增殖 ,使K5 6 2细胞出现凋亡所具有的形态学及生物化学特征 ,同时对K5 6 2细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用具有一定的浓度依赖性 ,经半枝莲提取物作用后的K5 6 2细胞内caspase 3表达增加。结论 :中药半枝莲提取物能诱导K5 6 2细胞凋亡 ,抑制肿瘤细胞增殖呈一定的浓度依赖关系 ,其作用机制可能与caspase 3的表达升高和活化有关。