间日疟原虫与异种疟原虫之间的红内期交叉反应原分析

本文用１％ＮＰ－４０分别提取间日疟原虫、恶性疟原虫、食蟹猴疟原虫、伯氏疟原虫及约氏疟原虫中溶性抗原，用间日疟病血清及两株抗间疟红细胞内原虫单克隆抗体６Ｈ７和２Ｃ３对上述抗原进行免疫印迹分析。结果表明，间日疟原虫与异种疟原虫之间有一系列交叉反应原，其中食触猴疟原虫有１４条蛋白带可被间日疟病人血清识别，多于另外三种疟原虫。五的虫共有的７９ｋＤ蛋白均可被间日疟病人血清识别。此外，间日疟病人血清还识别正常     

用抗间日疟原虫单克隆抗体鉴定食蟹猴疟原虫复合体中具交叉反应性的红内期抗原

鉴于间日疟原虫(P.v.)和食蟹猴疟原虫(P.c.)在进化上较接近,且后者可以体外培养,作者用抗间日疟原虫 Belem 株红内期原虫的 McAb 鉴定间日疟和食蟹猴疟的靶抗原,以确定这些抗原在功能上的作用。     

体外培养的食蟹猴疟原虫用于间日疟的间接荧光抗体实验

培养的恶性疟原虫作为抗原用于间接荧光抗体实验(IFA)检出感染恶性疟患者的血清疟疾抗体灵敏度较高,但检出感染间日疟后血清中的抗体则灵敏度低或不理想。早巳证实与间日疟原虫相对应的食蟹猴疟原虫可用于IFA测试感染间日疟后的血清抗体,本文报道了用培养的食蟹猴疟原虫作抗原用于IFA测试间日疟病人血清中的抗体。 抗原片的制作:液氮保存已培养70天的食蟹猴疟原虫(PcC)复苏后再培养28天,按照Sulzer等的方法制成抗原片。将培养原虫去上清液后,用     

以体外培养的恶性疟原虫为抗原作间接荧光抗体试验检测间日疟

从体外培养恶性疟原虫和食蟹猴疟原虫作为抗原进行间接荧光抗体试验,发现对间日疟和恶性疟病人血清呈现交叉反应。曾对395人份间日疟病人血清以两种抗原进行测试,当血清滴度在≥1:10时,发现病人于确诊后3～60天内可全部检出荧光抗体,至2年时仍保持89.4％和86.8％的抗体阳性率,消长动态一     

间接荧光抗体试验使用两种不同疟原虫抗原进行疟疾单次横向调查

本文应用恶性疟原虫与食蟹猴疟原虫抗原作间接荧光抗体试验于1983年对五个不同类型疟区人群进行单次横向调查,同时以寄生虫学调查作对照。用平均每视野(10×40)含149.5个裂殖体的食蟹猴疟原虫抗原片与含124.4个体外培养的恶性疟原虫裂殖体的抗原片同时进行间接荧光抗体试验检测疟疾抗体。血清学测定的结果与血检相一致,而恶性疟原虫抗原与食蟹猴疟原虫抗原测出的抗体阳性率与GMRT,分别与该地恶性疟与间日疟流行水平和传播强度呈正相关。表明在恶性疟与间日疟混合流行地区,可以使用此两种抗原作间接荧光抗体试验进行血清流行病学调查,以了解恶性疟与间日疟的流行状况。     

单克隆抗体夹心斑点免疫金银染色法诊断恶性疟的初步研究

用单克隆抗体(McAb)夹心斑点免疫金银染色法(Dot-IGSSA),对采自海南省的30价原虫血症范围为0.015-0.58％的恶性疟病人血和30份正常人血进行了检测。当用McAb 11G_5、13A_2、13A_1分别与金标记McAb 14D_9夹心时,其阳性检出率分别为96.7％、93.3％和93.3％,假阳性反应约为3.3％,最低可检测出约0.0001％的疟原虫血症。其中11G_5、13A_1分别与金标记14D_9夹心时,对体外培养的云南和安徽的恶性疟红内期抗原呈阳性反应,但其McAb与诺氏疟原虫和伯氏疟原虫均无交叉反应。McAb 13A_1与14D_9夹心时,对食蟹猴疟原虫和间日疟病人感染血中的疟原虫抗原有部分交叉反应。     

蛋白转染用于免疫血清对食蟹猴疟原虫的抗原分析

制备疟疾疫苗首先要进行抗原分析。但人间日疟原虫(P.V)来源困难,常用食蟹猴疟原虫(P.C)代替,故弄清P.C的抗原特征,具有重大意义。本研究用蛋白转染(Western Blotting)技术,分析了各种免疫血清和单克隆抗体对P.C抗原的作用特征。 材料和方法 一、血清标本:P.V病人血清采自云南疟疾流行区,正常人对照血清采自山东长岛非疟区;兔抗P.C免疫血清由本室按常规法制备,抗食蟹猴疟原虫单克隆抗体由本室制备。二、抗原制备:     

以异种抗原ⅡFA检测间日疟抗体的观察

在以间接免疫荧光抗体试验(IIFA)对间日疟病人进行检测时,因间日疟原虫的培养尚未得到完全成功,只能采用以间日疟原虫人工感染的夜猴或黑猩猩血或病人血来制备抗原片。但是这些来源的代价很高,我国尚难加以采用。为了观察几种来源比较容易的异种抗原的检测效果,我们以猴的食蟹猴疟原虫、培养的恶性疟原虫以及鼠约氏疟原虫等三种异种抗原对单纯间日疟流行区的的同一批间日疟病人的血样进行了检测比     

用单克隆抗体分析约氏疟原虫抗原的研究 Ⅰ.约氏疟原虫红内期与人疟原虫的共同抗原

用粗提的约氏疟裂殖子免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp 2/0瘤细胞融合,获得13株分泌抗约氏疟红内期单克隆抗体的杂交瘤。这些McAb分别属于小鼠:IgG_1,IgG_(2a),IgG_(2b)及IgG_3亚类。据免疫荧光观察,13株McAb可分为4类:1.与红内期各发育阶段的原虫能出现荧光反应;2.针对晚期滋养体及裂殖体;3.抗裂殖体及裂殖子;4.单纯抗裂殖子。有5株McAb与人疟原虫发生荧光反应,其中4株只与恶性疟原虫交叉,M_(26-32)则不仅与恶性疟原虫且与间日疟原虫均有强的交叉反应,,表明约氏疟与人的两种疟原虫间有共同抗原,并提示恶性疟原虫与间日疟原虫间也有共同抗原。共同抗原在不同种间的分布和含量不尽相同。用未经固定的感染红细胞加McAb作间接荧光试验,在感染红细胞表面未观察到荧光反应。     

用诺氏疟原虫及食蟹猴疟原虫抗原作免疫荧光法检测人类疟疾抗体的比较

用人类疟原虫株制备疟疾抗原存在着困难,极需寻找一种与间日疟有交叉反应的替代抗原。到目前,已比较了用诺氏疟原虫和食蟹猴疟原虫制备的抗原的效价。用原虫血症大于50％的诺氏疟原虫和原虫血症为     

单克隆抗体夹心斑点免疫金银染色法诊断恶性症的...

In this report, the blood samples from 30 falciparum malaria patients with parasitemia 0.015-0.58% and the blood samples from 30 healthy persons were examined by monoclonal antibody (McAb) sandwich dot-immunogold silver staining assay (Dot-IGSSA). When the McAb 11G5, 13A2 and 13A1 were used for sandwich Dot-IGSSA with McAb 14D9 labeled with colloidal gold respectively, the 0.0001% of parasitemia could be detected and the McAb 11G5, 13A1 and 14D9 labeled with colloidal gold could also be used to detect the antigens of asexual blood stages of Yunnan and Anhui isolates of Plasmodium falciparum cultured in vitro. These McAbs did not cross-react with the antigens of Plasmodium knowlesi and Plasmodium berghei, however, the McAbs 13A1 and 14D9 weakly cross-reacted with the antigens of Plasmodium cynomolgi and the antigens in the infected blood samples from patients with vivax malaria.     

用单克隆抗体鉴定恶性疟原虫裂殖子表面抗原

用海南省恶性疟原虫Fcc7801/HN作为抗原,制备的抗恶性疟原虫单克隆抗体C6株具有明显的抑制体外恶性疟原虫生长的作用,并且与恶性疟原虫Fcc-1/HN,Fcc7802/HN,Fcc8703/JS和伯氏疟原虫、食蟹猴疟原虫有较广泛的交叉免疫荧光反应。用免疫电镜观察,此株单克隆抗体能识别恶性疟原虫裂殖子表面抗原,用免疫印迹法测得该抗原分子量为71kDa,此抗原有可能成为疟疾疫苗的候选抗原。     

Synthetic peptides based on conserved Plasmodium falciparum antigens are immunogenic and protective against Plasmodium yoelii malaria

Two synthetic polypeptides containing multiple B- and T-cell epitopes derived from the conserved regions of two vaccine candidate antigens namely MSA-1 and RESA of human malarial parasite P. falciparum were studied for immunogenicity and protectivity. Both constructs elicited strong antibody and lymphocyte proliferation responses in BALB/c mice immunized with the carrier-free peptides. In an ELISA, these peptides also bound antibodies present in the sera from the P. vivax infected humans as well as from the P. yoelii infected mice. Significantly, our data showed that immunization of mice with these P. falciparum peptide could impart partial protection against P. yoelii challenge infection. Our finding that synthetic peptides representing portions of P. falciparum antigens were capable of stimulating protective immune responses against rodent malaria suggests that murine malaria model P. yoelii may provide a suitable system for primary screening of potentially protective synthetic immunogens.     

间日疟原虫和恶性疟原虫可溶性抗原免疫反应性比较

目的分析和比较间日疟原虫(Plasmodiumvivax,P.v)和恶性疟原虫(P.falciparum,P.f)可溶性抗原与间日疟感染者混合血清和单克隆抗体(McAb)M26-32免疫反应性的差别,以期寻找潜在的疟疾诊断抗原。方法取P.v感染者血样,用Plasmodipur滤器分离去除白细胞,经60%Percoll浓集其中的感染红细胞(i RBC)。分别制备P.v、P.f和正常红细胞(nRBC)可溶性抗原,应用P.v感染者、正常对照混合血清和M26-32单抗与相应的抗原进行免疫印迹分析。结果免疫印迹分析表明,P.v感染者能特异性识别26k、33、49、115kDaP.v抗原;100、102、110、150、175kDaP.f抗原;能够交叉识别的条带有:31、59、63、70、120kDa。M26-32单抗能识别P.f、P.v抗原中31kDa等抗原条带。结论P.v感染者能特异识别间日疟抗原组份,并能交叉识别P.f抗原,其中31kDa抗原组分具有较强的免疫原性,同时能被M26-32单抗识别,其作为P.v特异性诊断抗原的价值有待于进一步研究。     

食蟹猴疟原虫和恶性疟原虫两种抗原检测不同疟区人群中间接荧光抗体的实用性

[目的 ]比较食蟹猴疟原虫 (P c.)和恶性疟原虫 (P f.)两种抗原在不同疟区人群疟疾抗体检测的实用性。 [方法 ]1997年 5～ 10月在海南省间日疟和恶性疟混合流行区及河南省单纯间日疟区用P c 和P f 两种抗原测试人群疟疾抗体。 [结果 ]在海南省间日疟和恶性疟混合流行区P c 和P f 两种抗原检测人群疟疾间接荧光抗体阳性率分别为 37 4%和 31 3% ,其阳性符合率为 83 9% ;河南省单纯间日疟流行区的P f和P c两种抗原阳性率分别为 2 3 0 %和 9 7% ,阳性GMRT分别为 42 9%和 2 9 3%。 [结论 ]间日疟和恶性疟混合流行区P f和P c两种抗原均可用于人群疟疾抗体的检测 ,而单纯间日疟地区则以P c 抗原为优。     

约氏疟原虫与伯氏疟原虫侵入期抗原的初步研究

目的　用针对鼠约氏疟原虫(Plasmodiumyoelii)侵入期的8种单克隆抗体,对约氏疟原虫和伯氏疟原虫(P.berghei)侵入期即动合子、裂殖子和子孢子棒状体和表面抗原检测分析。　方法　间接免疫荧光实验(IFA)对各侵入期抗原进行亚细胞结构定位,SDSPAGE及Western印迹对两种鼠疟原虫的不同侵入期进行抗原组分分析。　结果　经上述两种方法检测发现,顶端复合体抗原成分复杂,约氏疟原虫和伯氏疟原虫的棒状体有共同的抗原表位,约氏疟原虫的动合子与其自身的裂殖子有类似成分,也有各自独特的抗原。两种鼠疟原虫动合子抗原有类似成分。约氏疟原虫的子孢子具有与裂殖子、动合子不同的抗原成分。　结论　疟原虫侵入期棒状体和表面抗原在同一虫种的不同侵入期和不同虫种中有共同的抗原表位,也有各自的独特组分。     

An anti-Chitinase malaria transmission-blocking single-chain antibody as an effector molecule for creating a Plasmodium falciparum-refractory mosquito

Indirect evidence has suggested the existence of a second chitinase gene, PgCHT2, in the avian malaria parasite Plasmodium gallinaceum. We have now identified PgCHT2 as the orthologue of the P. falciparum chitinase gene PfCHT1, a malaria transmission-blocking target. Computational phylogenetic evidence and biochemical and cell biological functional data support the hypothesis that an avian-related Plasmodium species was the ancestor of both P. falciparum and P. reichenowi, and this single lineage gave rise to another lineage of malaria parasites, including P. vivax, P. knowlesi, P. berghei, P. yoelii, and P. chabaudi. A recombinant PfCHT1/PgCHT2-neutralizing single-chain antibody significantly reduced P. falciparum and P. gallinaceum parasite transmission to mosquitoes. This single-chain antibody is the first anti-P. falciparum effector molecule to be validated for making a malaria transmission-refractory transgenic Anopheles species mosquito. P. gallinaceum is a relevant animal model that facilitates a mechanistic understanding of P. falciparum invasion of the mosquito midgut.     

重组质粒DNA探针用于间日疟诊断的研究

用~(32)P标记含间日疟原虫DNA片段的重组质粒pVA1作为探针,通过DNA打点杂交试验检测红内期间日疟原虫。该探针检测间日疟原虫基因组DNA的敏感度达1ng;与现场采集的25份间日疟患者血样(原虫血症为0.003％～0.7％)的杂交阳性率为72％,与6例恶性疟和3例食蟹猴疟血样中各1例杂交阳性;与3例约氏疟和6例正常人血样均为阴性。     

PCR检测Pf60.1基因诊断恶性疟实验方法研究

为探讨通过PCR技术检测Pf60.1基因来诊断恶性疟的可行性,采用PCR技术检测了4年前采集贮存的20例疑似疟疾病人的血样。阳性对照为恶性疟原虫FCC1／HN培养株;阴性对照为食蟹猴疟原虫、间日疟原虫及非疟区的正常供血员血样。结果为FCC1／HN株、12例镜检定为恶性疟和2例混合感染的血样扩增出长度为313bp～320bp的特定Pf60.1基因片段;而阴性对照均未产生DNA带型。此结果说明检测Pf60kD中的Pf60.1基因片段的方法稳定性好,特异性强和敏感性高,是恶性疟诊断的理想方法之一。