三氧化二砷增强ST1571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨ST1571联合三氧化二砷(arsenie trioxide，ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察ST1571和ATO对CMI，细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 ST1571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡，并使细胞阻滞于G2／M期；当两药物联合运用时，明显增强对K562细胞增殖的抑制作用，细胞凋亡率也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强ST1571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

二烯丙基二硫对人白血病细胞HL-60增殖、细胞周期及p21表达的影响

目的观察二烯丙基二硫(DADS)作用于人白血病细胞系HL-60后，细胞增殖、细胞周期及细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p21表达的变化，探讨DADS抑制HL-60增殖、诱导G／M阻滞的作用机制。方法不同浓度DADS作用HL-60后，MTF法检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期，Western blot检测p21蛋白水平。结果在一定浓度范围之内，DADS能抑制HL-60细胞增殖，细胞周期发生G2／M期阻滞，并上调p21蛋白水平。结论DADS能通过上调p21的表达而抑制HL-60增殖，诱导其G／M期阻滞。     

三氧化二砷增强STI571对K562细胞的细胞毒作用

目的 探讨STI571联合三氧化二砷(arsenic trioxide,ATO)对慢性粒细胞白血病(CML)细胞增殖和凋亡的影响。方法 通过细胞增殖和活力检测、形态学观察、细胞凋亡率和细胞周期检测等方法观察STI571和ATO对CML细胞系K562细胞的增殖抑制与诱导凋亡效应。结果 STI571和ATO均可抑制K562细胞增殖并诱导其凋亡,并使细胞阻滞于G2／M期;当两药物联合运用时,明显增强对K562细胞增殖的抑制作用,细胞凋亡也较两药单用组明显增高。结论 ATO能增强STI571对K562细胞的细胞毒效应和诱导凋亡作用。     

新生霉素衍生物FM-Nov17抑制慢粒白血病细胞增殖与其诱导DNA损伤的关系

目的研究新生霉素衍生物FM—Nov17抑制K562和K562／G01细胞增殖的作用与其诱导DNA损伤的关系。方法3－（4,5－二甲基噻唑－2）－2,5－二苯基四氮唑溴盐（MTT）及羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂（CFSE）染色法检测FM—Nov17对K562及K562／G01细胞增殖的影响;流式细胞光度术检测FM—Nov17诱导K562及K562／G01细胞DNA损伤、细胞周期阻滞和细胞凋亡;Westernblot探讨FM—Nov17对DNA损伤、细胞周期和细胞凋亡调控通路相关蛋白表达的影响。结果FM—Nov17在体外可明显抑制K562和K562／G01细胞增殖,半数抑制率（IC50）分别为（58．28±0．31）和（62．36±0．14）μmol／L,并减少K562及K562／G01细胞的增殖分裂代数;FM—Nov17能诱导细胞DNA损伤和阻滞细胞于G。／M期,并增加细胞凋亡率,呈剂量依赖关系;FM—Nov17能增加y-H2AX、ATM、P53的磷酸化水平以及Parp和Caspase3的切割,减少CDC25A和CDC25C的表达。结论FM—Nov17通过诱导DNA的损伤,阻滞细胞于G2／M期,激活线粒体凋亡通路,诱导细胞的凋亡,抑制K562和K562／G01细胞的增殖。     

辛伐他汀依赖p53通路对K562细胞G1期调节的分子机制

目的探讨辛伐他汀体外处理后的K562细胞p53通路和K562细胞G1期的分子水平的变化,以说明辛伐他汀是否依赖p53通路参与K562细胞细胞周期G0／G1期停滞的调控和抑制K562细胞增殖。方法体外培养和用辛伐他汀处理K562细胞,用流式细胞术检测辛伐他汀作用后细胞周期和凋亡率的变化,用RT-PCR检测K562细胞p53通路和细胞周期G1期相关基因表达的变化。结果辛伐他汀能使K562细胞停滞在G1／G0期,明显诱导K562细胞凋亡,大多数p53通路基因和细胞周期相关基因的变化出现差异表达。结论辛伐他汀可能通过作用于参与细胞增殖和凋亡的p53通路,抑制K562细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

三氧化二砷诱导慢性髓系白血病细胞G2/M周期停滞及其机理

目的 研究三氧化二砷对慢性髓系白血病细胞的体外作用特点及其机理。方法 将三氧化二砷与慢性髓性白血病细胞系K562作用后，测定细胞的生长曲线及活性，流式细胞测量术检测细胞凋亡和细胞周期分布的改变；同时，采用RT-PCR方法检测药物作用前后细胞周期相关基因表达的变化。结果 ①三氧化二砷明显抑制K562细胞的生长，其作用呈时间和浓度依赖性；②三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的作用较弱，但可明显诱导K562细胞在G2／M期停滞，此效应也呈时间和浓度依赖性；③三氧化二砷作用后，细胞周期抑制基因p57表达明显上调，而细胞周期促进基因cyclinB的表达受到抑制。结论 三氧化二砷能有效抑制慢性髓系白血病细胞的生长，其机理主要为诱导细胞G2／M期周期停滞；该效应与细胞周期相关基因的表达变化有关。     

孤儿受体ROR2诱导慢性髓细胞白血病细胞株K562凋亡的研究

目的 研究ROR2抑制慢性髓细胞白血病细胞株K562增殖并诱导其凋亡的作用,初步探讨可能的机制.方法 采用重组ROR2腺病毒(AdROR2)感染K562细胞为实验组,重组RFP腺病毒(AdRFP)感染K562细胞为对照组.采用CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡.Western blot检测实验组和对照组促凋亡基因caspase3和抗凋亡基因survivin的表达.结果 与对照组比较,实验组ROR2感染K562细胞48 h后,细胞增殖明显受抑(P＜0.05),细胞周期主要阻滞在G2/M期(P＜0.05),细胞凋亡增多,48 h凋亡显著(P＜0.05),同时促凋亡蛋白caspase3表达升高(P＜0.05),抗凋亡蛋白survivin表达下降(P＜0.05).结论 过表达ROR2能够抑制K562细胞的增殖并诱导其凋亡,其机制可能与上调了促凋亡蛋白caspase3和下调了抗凋亡蛋白survivin表达有关.     

三氧化二砷诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡与c-myc的表达

目的：观察三氧化二砷(As2O3)诱导慢性髓细胞性白血病K562细胞株凋亡和c-myc mRNA表达的作用，并探讨其作用机制。方法：应用MTT法、苔盼蓝拒染法、DNA凝胶电泳和细胞周期凋亡检测，观察0μmol／L、0．5μmol／L、lμmol／L、2μmol／L、4μmol／L、8μmol／LAs2O3分别作用24h、48h、72h后，对K562细胞增殖及活力的影响。应用RT-PCR和免疫组织化学法检测As2O3处理后K562细胞c-myc mRNA和蛋白表达的变化。结果：As2O3诱导后K562细胞核DNA凝缩，核片段化，最后形成凋亡小体。在一定范围内，随着As2O3浓度的增加和As2O3处理时间的延长，细胞存活率明显下降；流式细胞仪检测可见As2O3诱导K562细胞凋亡，影响细胞周期，细胞阻滞于G2／M期；As2O3处理后c-myc mRNA和c-myc蛋白表达均有先上调后回落的趋势。结论：As2O3可以抑制K562细胞增殖并诱导凋亡，其作用机制可能是使细胞受阻于G2／M期而进入凋亡程序，c-myc基因参与了As2O3诱导细胞凋亡的基因调控。     

PTEN基因对白血病细胞增殖、凋亡和细胞周期的影响

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人原代白血病细胞及K562细胞系的增殖、凋亡及细胞周期的影响.方法 将携带有野生型PTEN、绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及空载体腺病毒(Ad-GFP)转染原代白血病细胞和K562细胞系.采用MTT法检测细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布;光镜和电镜下观察细胞形态;TUNEL等方法检测细胞增殖及凋亡;培养细胞集落并比较不同组间集落形成的数量;实时荧光定量PCR(FQ-PER)检测PTEN mRNA水平变化,Westernblotting检测PTEN蛋白水平变化.结果 以感染复数为200转染后,与Ad-GFP相比,Ad-PTEN-GFP转染人白血病K562细胞系后,细胞增殖受抑,凋亡率增加,最大生长抑制率为35.2%,最大凋亡率为30.0%.细胞周期显示G1期阻滞,G0/G1期细胞比例增加[(54.9±2.51)% vs (78.5±4.13)%],G2/M期比例降低[(30.2±1.91)% vs (13.6±1.02)%](均P<0.05).结论 过表达PTEN可以抑制白血病细胞增殖,促进细胞凋亡,并导致细胞周期阻滞在G0/G1期.     

甘草次酸对K562细胞增殖抑制作用及其机制研究

目的 研究甘草次酸对髓系白血病细胞系K562体外增殖抑制作用,分析其引起细胞周期的变化及探讨其可能的抗癌机制.方法 MTT法检测甘草次酸对K562细胞增殖活性的影响;Hoechst 33258染色法观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术分析细胞周期的变化以及cyclin D1和cyclin E蛋白表达的变化;RT-PCR测定细胞中cyclin D1和cyclin E mRNA表达的改变.结果 甘草次酸对K562有增殖抑制作用,其抑制作用呈现为量效和时效依赖性,作用48 h的IC50值为(93.1±3.7)μmol/L.甘草次酸可以诱导细胞发生凋亡,Hoechst染色可见细胞核内凋亡小体.甘草次酸可以诱导K562细胞周期阻滞于G0/G1期,同时G2/M期细胞比例减小,S期变化不明显,仅在最大浓度组稍有降低.甘草次酸可以同时下调K562细胞内cylin D1和cyclin E蛋白和基因的表达,下调作用与剂量呈正相关.结论 甘草次酸能明显抑制K562细胞增殖,并诱导其周期阻滞于G0/G1期.该效应可能与其下调周期蛋白cyclin D1和cyclin E表达有关,有望成为新型抗肿瘤中药.     

人肺腺癌细胞系GLC-82中p21WAF1和p53基因的过表达

目的 探讨p21^WAF1和p53基因过表达对人肺腺癌细胞生长和细胞凋亡的影响。方法 用带有p21cDNA的真核表达载体pCEP和带有p53的腺病毒表达载体pAdCMV,分别通过基因转染和腺病毒感染,使其在人肺腺癌细胞系(GLC—82)中过表达;通过流式细胞仪、透射电镜和原位末端分析(TUNEL)观察细胞的生长和凋亡情况。结果 p21过表达的细胞系G1期细胞增加,细胞生长抑制,克隆形成率下降,电镜下未见特征性凋亡小体,原位细胞凋亡分析未见凋亡信号;p53腺病毒感染的肿瘤细胞增殖明显抑制并出现死亡,原值细胞凋亡检测到凋亡信号。结论 P21和p53基因的过表达能够抑制人肺腺癌细胞的生长,其中p53能够诱发细胞凋亡,因此这两种基因在肿瘤基因治疗上有着广泛的应用前景。     

曲古抑菌素A对膀胱癌细胞的抑制作用及其机制

目的本研究探讨曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌细胞的杀伤作用和机制.方法以不同浓度的TSA作用于体外培养的膀胱癌BIU-87细胞株;采用MTT法检测细胞生长抑制率;以流式细胞术(FCM)测定不同浓度的TSA作用前后膀胱癌细胞的凋亡情况及细胞周期变化;应用RT-PCR分析了TSA作用前后膀胱癌细胞中p21^WAF1 mRNA表达的变化.结果 TSA在纳摩尔级浓度即能有效抑制膀胱肿瘤细胞增殖,FCM结果表明TSA能显著诱导细胞发生凋亡且主要诱导G1期细胞发生凋亡而出现凋亡峰,RT-pCR结果示TSA处理能显著诱导p21^WAF1 mRNA表达.上述结果都呈现出明显的量-效与时-效关系.结论 TSA在体外能有效抑制对传统化疗耐药的人膀胱癌细胞生长,其抗肿瘤生长机制之一可能是通过上调p21^WAF1蛋白水平实现的.     

尿多酸肽诱导慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药细胞生长抑制及分化的体外观察

目的观察尿多酸肽（CDA-2）在体外对慢性粒细胞性白血病（CML）伊马替尼（IM）耐药细胞株K562R生长抑制及诱导分化的作用。方法MTT和集落形成实验观察CDA-2对CML细胞株K562、IM耐药细胞株K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞生长抑制作用。吉姆萨染色观察细胞形态,膜联蛋白-V（Annexin-V）／碘化丙啶（PI）染色分析细胞凋亡,流式细胞术分析细胞分化抗原CD11b、CD14的表达,反转录PCR（RT-PCR）检测细胞分化相关基因、细胞周期调节基因及DNA甲基化转移酶基因的表达。结果CDA-2均可抑制K562、K562R、IM耐药和非耐药CML患者骨髓细胞的生长,且对K562R细胞和IM耐药CML患者骨髓细胞的生长抑制更明显;CDA-2改变了K562和K562R细胞形态,诱导细胞向成熟分化,并引起细胞周期在G1期的停滞;这种停滞可能与CDA-2抑制DNA甲基转移酶活性,逆转细胞周期调节基因的甲基化状态有关。结论CDA-2在体外对K562R细胞株有很强的生长抑制和诱导分化的作用,提示CDA-2可能成为治疗IM耐药的CML患者的一种新药。     

外源性p21WAF1/CIP1基因转染对人胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响

目的：探讨外源性p21^WAF1／CIP1基因对胶质瘤细胞生长和细胞周期的影响．方法：采用脂质体介导法将p21^WAF1／CIP1基因质粒转导人人胶质瘤细胞系SHG44细胞，然后用电镜、流式细胞仪等技术对细胞形态、生长及细胞周期进行观察。结果：酶切电泳和斑点杂交显示p21^WAF1／CIP1基因成功的转染至SHG44细胞。转染p21^WAF1／CIP1基因的细胞光镜及电镜下可见凋亡产生；生长速度明显慢于亲代细胞，其倍增时间约是对照细胞的二倍；细胞周期发生明显改变，G1期明显增多，S期明显减少．结论：外源性p21^WAF1／CIP1基因对SHG44细胞的生长和细胞周期有明显的抑制作用，并可诱导细胞凋亡产生。     

氨茶碱对K562细胞增殖与凋亡的影响

目的 为探讨磷酸二酯酶抑制剂在慢性粒细胞白血病细胞系增殖与凋亡中的作用,研究了非选择性磷酸二酯酶抑制剂氨茶碱对K562细胞系的影响.方法 采用MTT检测观察细胞增殖变化,膜联蛋白V染色观察细胞凋亡率.结果 MTT显示氨茶碱对K562细胞系增殖呈浓度依赖性抑制作用,膜联蛋白V染色显示氨茶碱诱导细胞凋亡率增加.结论 氨茶碱可诱导K562细胞凋亡.     

维甲酸对培养咽癌细胞增殖及抑癌基因p21WAF1表达的调控

目的 :探讨维甲酸对咽癌细胞增殖和基因表达的影响及意义。方法 :咽癌细胞株 Fa Du及Detroit562体外培养 ,采用 Brd U核掺入法计算增殖细胞的百分率 ,双重标记的免疫荧光染色共焦点显微镜 ( LSM)观察以及 Western印迹杂交法检测了抑癌基因 p53,p2 1 WAF1蛋白表达量。结果 :维甲酸添加后细胞形态发生细胞凋亡样改变 ,Brd U增殖细胞核掺入率也显著低于对照组( P<0 .0 1 ) ,p53蛋白表达无明显变化 ,p2 1 WAF1蛋白表达增强。结论 :维甲酸显著抑制咽癌细胞的增殖 ,其作用机理可能与诱导抑癌基因 p2 1 WAF1的表达及细胞发生凋亡有关。     

Growth inhibition of gastric cancer cells by all-trans retinoic acid through arresting cell cycle progression

目的　探讨ATRA调节胃癌细胞生长的作用机理。方法　Westernblot测定蛋白表达水平 ,免疫沉淀测定蛋白激酶活性 ,MTT方法检测细胞生长和流式细胞术分析细胞周期。结果　ATRA有效地诱导细胞滞留G0 /G1期并抑制胃癌细胞生长。ATRA通过依赖P5 3和非依赖P5 3途径诱导ATRA敏感细胞的P2 1WAF1/CIP1表达 ,由此导致CDK4 和CDK2 活性下降 ,但对CDK4 和CDK2 蛋白表达没有影响。另外 ,由于ATRA抑制CDK4 和CDK2 活性 ,导致Rb蛋白去磷酸化水平上升。结论　ATRA通过调节细胞周期进程的相关蛋白而抑制胃癌细胞生长。     

Study on Taxol in Inhibiting Human Leukemia Cell Proliferation andInducing Apoptosis

Objective: To explore the effects of Taxol in inhibiting human leukemia k562 cell proliferation and inducing apoptosis in vitro. Methods: Human leukemia K562 cells were treated with Taxol of different concentrations for 12-72 hrs. Cell proliferation was evaluated by MTT assay and morphological changes of apoptosis were examined by microscopy. Cell apoptosis was determined by flow cytometry (FCM) and DNA gel electrophoresis. Results: Growth of K562 cells was inhibited by Taxol with an IC50 value of 0. 84μg/ml. Typical nuclear condensation and apoptosis bodies were observed as early as 24 hrs after a 0.5μg/ml Taxol treatment; Apoptotic rate of the Taxol-treated K562 cells increased from 3.7% to 24.0% in 24 hrs. No DNA ladder was observed by DNA gel electrophoresis. Conclusion: Taxol could inhibit K562 cell growth and induce apoptosis in vitro.     

Effect and Comparison of Sodium Butyrate and Trichostatin A on the Proliferation/Differentiation of K562

Thereisampleevidence ,bothinvitroandinvivo,thatHDACinhibitorsblocktheenzymaticac tivityofdeacetylasesandinducehyperacetylationofhistones[1] Furthermore ,aplethoraofculturedtu morcellshasbeentestedforsusceptibilitytoHDACinhibition UpontreatmentwithHDACinhibitors ,thesecellsshowsignsofapoptosis ,growtharrest,differentiationandaltered geneexpression HDACinhibitorsare potentially promisingcandidatedrugsfordifferentiationtherapyofcancer ButyratewasthefirstHDACinhibitortobei dentified[2 ] a…