滋养细胞肿瘤患者的免疫功能研究

滋养细胞肿瘤是胎盘的滋养细胞发生肿瘤性增殖,对患者退母亲来说是概念上的移植肿瘤,两者是移植肿瘤和宿主的关系,因此从免疫学观点看是意义深远的疾病。作者探索滋养细胞肿瘤的免疫学背景进行以下工作:(1)从微量全血培养法研究一般细胞免疫功能。(2)测定患者的免疫环境代表—患者血清对 PHA 淋巴细胞幼稚化反应的影响。研究结果:     

胎盘合体滋养细胞中硫化氢对激活素A影响的研究

目的:探讨胎盘合体滋养层细胞中硫化氢(H2S)对激活素A(Activin A)的调控作用。方法:利用改良的Klim法原代培养正常胎盘合体滋养层细胞,并给予不同浓度的H2S供体NaHS、前体L-半胱氨酸,H2S合成酶[胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)]抑制剂(AOAA、PAG)和D-半胱氨酸处理细胞,同时利用RNA干扰技术,将CBS和CSE的表达干扰后,再给予L-半胱氨酸处理细胞。ELISA方法检测细胞上清中Activin A的浓度。结果:给予胎盘合体滋养细胞NaSH、L-半胱氨酸处理后,随NaSH、L-半胱氨酸浓度的增加Activin A浓度明显减少(P0.01),且这种作用被H2S合成酶抑制剂AOAA所阻断(P0.01)。转染干扰CBS表达的小干扰RNA片段-siCBS后,可逆转L-半胱氨酸对Activin A的下调作用(P0.01);而加入D-半胱氨酸后,Activin A表达变化无明显差异(P0.05)。结论:在人胎盘合体滋养细胞中,H2S可能主要在H2S合成酶之一CBS的作用下产生,并发挥对Activin A的下调作用,进而可能在预防妊娠期高血压疾病的发生中发挥作用。     

合体滋养细胞微绒毛膜与子痫前期

子痫前期是严重危害母儿健康的产科常见病，是导致孕产妇和围生儿发病率和死亡率升高的主要原因之一，其病因至今未明。近年来合体滋养细胞微绒毛膜（STBM）与子痫前期发病密切相关得到重视，合体滋养细胞微绒毛膜是胎盘合体滋养细胞碎片脱落进入母体血循环后形成的，可经多种途径损害母体血管内皮细胞，影响母体自身免疫系统，从而在子痫前期的发病中起重要作用。就合体滋养细胞微绒毛膜与子痫前期的关系综述。     

合体滋养细胞微绒毛膜与子痫前期

子痫前期是严重危害母儿健康的产科常见病,是导致孕产妇和同生儿发病率和死亡率升高的主要原因之一,其病因至今未明.近年来合体滋养细胞微绒毛膜(STBM)与子痫前期发病密切相关得到重视,合体滋养细胞微绒毛膜是胎盘合体滋养细胞碎片脱落进入母体血循环后形成的,可经多种途径损害母体血管内皮细胞,影响母体自身免疫系统,从而在子痫前期的发病中起重要作用.就合体滋养细胞微绒毛膜与子痫前期的关系综述.     

树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫的实验研究

目的 观察人外周血树突状细胞(Dendritic cells,DC),体外能否诱导抗卵巢癌免疫应答。方法 用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)从健康女性外周血分化诱导DC,以源于人卵巢癌细胞系HO-8910的肿瘤抗原粗提物冲击致敏DC,将致敏DC、同源淋巴细胞和卵巢癌细胞共育,观察负载抗原DC体外诱导淋巴细胞对HO-8910细胞的杀伤作用,同时设不同类型肿瘤细胞(Eca-109和PC-12)作为对照。MTT法测定细胞杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞HO-8910肿瘤抗原脉冲致敏的DC能诱导淋巴细胞特异性地杀伤卵巢癌细胞。结论 用GM-CSF、IL-4和TNF-α从人外周血诱生的DC能从卵巢癌细胞HO-8910冻融物有效递呈抗原并诱导出高效而特异的抗卵巢癌免疫反应。     

凋亡、坏死合体滋养细胞微粒对内皮细胞增殖与凋亡的影响

目的:探讨凋亡、坏死合体滋养细胞微粒对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖、凋亡的影响。方法:培养原代HUVECs,物理方法诱导滋养细胞凋亡、坏死。采用三步超速离心法制备凋亡合体滋养细胞微粒(a STBM)、坏死合体滋养细胞微粒(n STBM)(实验组),同时制备RBC膜(对照组),并检测胎盘碱性磷酸酶(PLAP)含量。将不同浓度(20、80、320μg/ml)a STBM、n STBM和RBC膜分别与HUVECs共同孵育4、16、32h。采用MTT法检测细胞增殖抑制率,采用流式细胞仪AV-PI双标记观察细胞凋亡情况。结果:(1)80μg/ml a STBM组作用4、16、32h时的细胞增殖抑制率分别为29.19±0.47、44.73±0.69、54.01±1.61;80μg/ml n STBM组作用4、16、32h的细胞增殖抑制率分别为57.15±0.70、64.35±0.89、71.67±0.63。a STBM、n STBM均能明显抑制HUVEC增殖,抑制作用呈浓度时间依赖性;n STBM对HUVECs的增殖抑制性明显高于a STBM,差异有统计学意义(P0.001)。RBC膜处理组对HUVECs增殖无明显影响,与空白组比较差异无统计学意义(P0.05)。(2)80μg/ml a STBM组的细胞早期凋亡率、晚期凋亡-坏死率分别为29.05%和7.46%。80μg/ml n STBM组分别为15.93%和30.31%。RBC膜处理组对HUVECs的凋亡无明显影响,与空白对照组相比,差异无统计学意义(P0.05)。a STBM、n STBM组均能引起HUVECs凋亡,n STBM作用HUVECs的晚期凋亡率高于a STBM组,两者有统计学意义(P0.001)。a STBM主要诱导HUVECs早期凋亡。结论:a STBM、n STBM对内皮细胞有抑制细胞增殖作用,a STBM主要以促进内皮细胞早期凋亡为主,而n STBM以内皮细胞晚期凋亡为主,n STBM对内皮细胞造成的损害强于a STBM。     

合体滋养细胞微粒对人脐静脉内皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:检测合体滋养细胞微粒(STBM)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)增殖和凋亡的影响,探讨子痫前期可能的病因和发病机制。方法:选取2009年6月至10月在上海交通大学附属第六人民医院住院行选择性剖宫产的4例正常健康孕妇的胎盘,机械法体外制备STBM。STBM与HUVECs共培养,MTT法和流式细胞仪检测HUVECs的增殖和凋亡情况。结果:(1)STBM作用12h后,HUVECs悬浮细胞数增加,48h后可见大量悬浮细胞,细胞生存受到明显抑制;(2)30、90、150mg/L STBM作用48h后,内皮细胞增殖抑制率分别为(55.58±2.40)%、(67.94±1.93)%、(86.37±1.59)%,组间差异显著(P<0.01),呈剂量依赖性。(2)30、90、150mg/L STBM作用24h后,内皮细胞凋亡率分别为(17.39±1.11)%、(22.13±1.02)%、(30.42±1.98)%,组间差异显著(P<0.01),呈剂量依赖性。结论:STBM可抑制HUVECs细胞增殖,诱导细胞凋亡,提示其可能是子痫前期内皮细胞功能紊乱的原因。     

重度子痫前期患者胎盘合体滋养细胞凋亡的研究

目的 比较早发型与晚发型重度子痫前期患者胎盘合体滋养细胞凋亡水平变化,探讨其病因及发病机制的差异.方法 选择2008年11月至2009年5月在上海交通大学附属第六人民医院住院剖宫产分娩的早发型重度子痫前期患者15例(早发型组)、晚发型重度子痫前期患者15例(晚发型组)和健康妊娠妇女10例(对照组),采用酶联免疫吸附试验检测孕妇血浆中合体滋养细胞微粒(STBM)水平,蛋白印迹法检测胎盘组织中凋亡蛋白--半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达水平.结果 (1)STBM:早发型组孕妇血浆STBM水平为(71±21)μg/L,高于晚发型组的(42±30)μg/L和对照组的(26±11)μg/L,分别比较,差异均有统计学意义(P＜0.05);晚发型组血浆STBM水平与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).(2)caspase-3蛋白:早发型组胎盘组织中caspase-3蛋白表达水平为0.85±0.61,晚发型组为0.77±0.46,对照组为0.32±0.15,早发型和晚发型组胎盘组织中caspase-3蛋白表达水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);但早发型组和晚发型组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 早发型与晚发型重度子痫前期可能存在不同的发病机制,早发型重度子痫前期可能是一种胎盘疾病,而晚发型则可能与母体因素有关.     

脂质及其在合体滋养细胞微粒导致子痫前期过程中的影响

微粒是细胞受到刺激活化或凋亡后产生的细胞碎片,在循环中微粒作为运载工具承载和转运多种蛋白质、DNA片段和RNA片段,在细胞间信号传递过程起作用。微粒可以促进血栓形成,介导促炎效应,也可能直接导致内皮细胞功能紊乱。体内多种细胞都可以产生微粒。研究发现子痫前期患者体内合体滋养细胞微粒的释放明显多于正常妊娠者。体外研究还发现,微粒样品中脂质水平对脐静脉内皮细胞的增殖及凋亡也有影响。脂质水平越高,则微粒样品抑制脐静脉内皮细胞增殖和促进其凋亡的能力就越强。摄入高脂饮食者循环中微粒总量较正常饮食者高。     

KiSS-1基因对滋养细胞生物学行为影响的实验研究

目的 :探讨KiSS 1基因对滋养细胞生物学行为的直接影响 ,进一步证实妊娠高血压综合征患者胎盘“浅着床”与滋养细胞中肿瘤转移抑制基因KiSS 1表达增高有关。方法 :含有人KiSS 1基因全长cDNA的重组真核表达载体pcDNA3 KiSS 1经酶切和测序鉴定正确后 ,转染滋养细胞株JAR ,观察其KiSS 1mRNA表达、细胞生长和增殖能力和细胞侵袭力的变化。结果 :pcDNA3 KiSS 1成功转染JAR细胞 ,KiSS 1mRNA表达阳性 ,而亲本JAR细胞为阴性。转染目的基因后细胞生长曲线、软琼脂克隆形成率等与未转染之细胞无差异 ,但细胞侵袭能力明显下降 ,穿透Matrigel膜细胞数明显少于未转染组。结论 :KiSS 1基因对滋养细胞的生长、增殖能力无影响 ,但抑制其侵袭能力 ,这可能是导致妊高征“浅着床”的原因     

蜕膜基质细胞条件培养液对滋养细胞浸润功能的影响

目的:探讨蜕膜基质细胞条件培养液(DSCM)对滋养细胞浸润力的影响。方法:体外培养人早孕正常蜕膜基质细胞,收集DSCM处理早孕滋养细胞系(B6Tert)。应用浸润实验分析B6Tert细胞浸润力的改变,采用RT-PCR与明胶酶谱技术检测B6Tert细胞中基质金属蛋白酶(MMPs)的表达变化。结果:DSCM浓度较低时(占细胞培养液5%),可促进B6Tert细胞的浸润力与该细胞MMP-2mRNA及pro-MMP-2的表达;反之,高浓度的DSCM(20%)则抑制滋养细胞的浸润力与MMP-2的表达,差异有统计学意义(P<0.05)。DSCM不影响B6Tert细胞中MMP-9的表达。结论:早孕DSCM可能通过调节滋养细胞中MMP-2的表达影响滋养细胞的浸润能力。     

树突状细胞与生殖道黏膜免疫

树突状细胞是机体内功能最强大的抗原提呈细胞,广泛分布于机体黏膜表面,在固有免疫应答和适应性免疫应答中发挥重要作用.女性生殖道黏膜免疫既涉及对外来病原体的免疫防御,又涉及到对同种异体的精子及半同种异体移植物(胚胎)的免疫耐受,必然具有特殊的免疫学机制.综述树突状细胞与生殖道黏膜免疫研究进展.     

套管拭子获取胎儿合体滋养细胞在产前诊断中的应用

产前诊断已从侵入性技术逐渐向非侵入性技术过渡。经孕妇生殖道采集胎儿细胞 ,正以其取材简便、容易获取胎儿细胞及费用低这一优势吸引着众多的研究者。如何提高胎儿细胞获取率 ,如何克服来自精液污染等干扰因素 ,又是该领域中出现的新问题。本研究通过使用自行设计的套管拭子 ,选择子宫下段作为取样部位 ,与普通拭子法进行比较性研究 ,探讨解决上述问题的新途径。一、资料与方法1.套管拭子的制备 :取一条长 2 3ｃｍ ,直径 0 2 5ｃｍ ,一端有螺纹的钢棒 ,螺纹端缠少许棉纤维。另备一条直径0 45ｃｍ的塑料套管 ,外有一用来控制拭子进入宫腔…     

树突状细胞与生殖道黏膜免疫

树突状细胞是机体内功能最强大的抗原提呈细胞,广泛分布于机体黏膜表面,在固有免疫应答和适应性免疫应答中发挥重要作用。女性生殖道黏膜免疫既涉及对外来病原体的免疫防御,又涉及到对同种异体的精子及半同种异体移植物（胚胎）的免疫耐受,必然具有特殊的免疫学机制。综述树突状细胞与生殖道黏膜免疫研究进展。     

妊娠性滋养细胞疾患免疫研究的新进展

妊娠性滋养细胞疾患包括葡萄胎、侵蚀性葡萄胎和绒癌,它们组成了一组来自妊娠,与其相互有关并具有不同局部侵蚀和远处转移潜能的肿瘤。近三十年来,由于对这一组疾患在病理学、演变过程以及内分泌方面认识的提高,使这类肿瘤的临床处理有了明显的改善。1956年。L1等报道采用甲氨喋吟(MTX)治愈3例转移性绒癌病例,开创了妊娠性绒癌治疗的新纪元,妊娠性滋养细胞肿瘤即使有广泛转移,化疗亦可治愈。化疗对滋养细胞肿瘤的明显疗效是人类恶性肿瘤中获得最显著成功的代表之一。     

miR-10b对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭功能的影响

目的:研究人微小RNA-10b(microRNA-10b,miR-10b)对滋养细胞肿瘤细胞系JEG-3细胞侵袭力的影响.方法:通过化学方法合成成熟型人miR-10b,以脂质体包裹miR-10b并转染JEG-3细胞为miR-10b转染组,无关序列转染组及空白转染组分别为阴性对照组与空白对照组;RT-PCR检测各组miR-10b的表达.应用Transwell chamber法检测各组细胞侵袭能力的差别.结果:RT-PCR结果提示miR-10b转染组miR-10b的表达量与阴性对照组和空白对照组相比明显升高,差异有统计学意义(P<0.05).Transwell chamber法检测miR-10b转染组细胞的侵袭率与阴性对照组、空白对照组相比均有升高,差异有统计学意义(P<0.05).阴性对照组与空白对照组的侵袭率差异无统计学意义(P>0.05).结论:miR-10b能显著上调JEG-3细胞的侵袭力,有望作为滋养细胞疾病的治疗靶点.     

可控性树突状细胞活疫苗产生抗卵巢上皮性癌免疫应答的实验研究

目的研究可调控存活状态的树突状细胞(DC)活疫苗在体内产生的抗肿瘤免疫效应。方法(1)将大鼠骨髓来源的DC与转导有自杀基因Ⅰ型单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(HSV1TK)的卵巢上皮性癌细胞株NuTu19细胞,以聚乙二醇法融合制成DC活疫苗。以流式细胞仪、共聚焦激光显微镜分析DC活疫苗的生物学特性;RTPCR技术、蛋白印迹法鉴定DC活疫苗中TK基因的表达;四甲基偶氮唑蓝比色法测定更昔洛韦(GCV)对DC活疫苗的杀伤效应。(2)在体内实验中,将大鼠分为活疫苗组、活疫苗 GCV组、死疫苗组、DC NuTu19/TK组、GCV组和对照组。各组大鼠经二次免疫后,或以乳酸脱氢酶释放法检测脾T淋巴细胞的细胞毒活性,或再给予NuTu19细胞攻击后观察肿瘤的发生与生长情况。活疫苗 GCV组在给予NuTu19细胞攻击后1周开始腹腔注射GCV,将疫苗在体内灭活。结果(1)DC活疫苗高表达表面分子主要组织相容性复合物Ⅱ类分子OX6、共刺激分子B72、整合素OX62和细胞间黏附分子ICAM1,其阳性率分别为(876±34)%、(711±93)%、(680±74)%和(771±20)%;DC与NuTu19/TK细胞的融合率为(23±14)%;DC活疫苗中TK基因呈阳性表达。(2)活疫苗组大鼠脾T淋巴细胞对NuTu19细胞的杀伤活性为(618±83)%,明显高于死疫苗组的(260±38)%(P<005)。与对照组相比,活疫苗组大鼠的肿瘤发生率     

氧对滋养细胞功能的调节与妊高征

人类胚胎植入部位及胎盘组织内氧含量的变化从着床持续到分娩的全过程。氧调节滋养细胞的增殖、分化和功能，滋养细胞氧含量异常与妊娠高血压综合征(PIH)、胎儿宫内发育异常等妊娠病理相关，深入了解氧对滋养细胞功能的调节有重要的意义。     

氧对滋养细胞功能的调节与妊高征

人类胚胎植入部位及胎盘组织内氧含量的变化从着床持续到分娩的全过程.氧调节滋养细胞的增殖、分化和功能,滋养细胞氧含量异常与妊娠高血压综合征(PIH)、胎儿宫内发育异常等妊娠病理相关,深入了解氧对滋养细胞功能的调节有重要的意义.