人卵巢组织中HBV DNA和HBV cccDNA的表达与HBV宫内感染的相关性研究

目的研究人卵巢组织中乙型肝炎病毒(HBV)DNA、HBV共价闭合脱氧核糖核酸(cccDNA)表达与HBV宫内感染的相关性。方法采用荧光定量聚合酶链反应方法(FQ-PCR)检测33例HBV DNA阳性孕妇卵巢组织中的HBV DNA和HBV cccDNA。采用化学发光法检测相应33例婴儿出生当日和1月龄外周血血清乙型肝炎病毒标志物(HBVM),FQ．PCR法检测婴儿血清HBVDNA含量。结果33例卵巢组织中HBVDNA和HBV cccDNA总阳性率为51．52%(17/33)。婴儿宫内感染率为12．12%(4/33,4例均为肝功能正常的孕妇)。婴儿母亲卵巢组织中HBVDNA和HBV cccDNA均阳性时,宫内感染率比HBVDNA、HBV cccDNA均阴性时显著升高(P<0．05)。宫内感染婴儿较非宫内感染婴儿母亲卵巢组织中HBV cccDNA的表达水平和阳性率明显升高(P<0．01和P<0．05)。结论HBV可感染人卵巢组织并在其中复制,且有可能通过卵细胞垂直传播至子代。     

荧光定量PCR检测母脐血HBV-DNA与母婴传播的临床研究

目的探讨孕妇乙肝病毒含量与宫内感染的相关性及母乳喂养的临床指导。方法对我院分娩的120例HBV感染产妇,采用荧光定量PCR检测法分别检测其孕晚期的血清,产时的脐血及产后乳汁中HBV-DNA含量,同时采用酶联免疫法行脐血乙肝病毒标志物检测。结果脐血HBV-DNA含量与孕母血清HBV-DNA含量有相关性;乳汁中HBV-DNA含量与其血清中HBV-DNA含量相关,同时与血清HBeAg存在显著相关。结论宫内感染的发生率与孕妇血清HBV-DNA含量相关,孕晚期高病毒血症(>108cp/ml)与宫内感染显著相关;产妇血清高HBV-DNA含量,乳汁HBV-DNA异常(>103cp/ml)或HBeAg阳性者不适宜母乳喂养。     

母源外周血中IL-6表达水平与乙型肝炎病毒宫内传播的关系

目的  探讨HBsAg阳性产妇外周血IL-6水平在乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)宫内传播中的表达变化。 方法  以陕西省西北妇女儿童医院住院分娩的314例HBsAg阳性产妇为病例组, 74例健康产妇为对照组进行流行病学调查, 采用ELISA法检测孕妇和新生儿外周血乙型肝炎5项指标, 采用实时荧光定量PCR检测HBV-DNA水平, 采用流式液相芯片法检测细胞因子IL-6水平。 结果  HBsAg阳性产妇发生宫内显性感染(dominant HBV infection, DBI)、宫内隐匿性感染(occult hepatitis B virus infection, OBI)和宫内传播(intrauterine transmission, BIT)率为10.83%(34/314)、38.22%(120/314)、49.04%(154/314)。对照组产妇IL-6水平低于HBsAg阳性产妇组(P < 0.001)、NBIT组(P < 0.001)、DBI组(P=0.006)和OBI组(P < 0.001);未抗病毒治疗组中DBI组IL-6水平低于OBI组(P=0.008);未乙肝疫苗注射组中DBI组IL-6水平低于OBI组(P=0.012);产妇HBeAg和HBV DNA载量与其IL-6水平呈正相关(均有P < 0.05);产妇HBeAb与IL-6水平呈负相关(P=0.011)。 结论  HBV可以激发孕产妇体内IL-6的表达, 但是IL-6在HBsAg阳性产妇体内的表达呈现组内分化现象, 在HBeAg阳性和高载量HBV DNA环境下其IL-6的水平会上升, 但当其水平下降时易发生DBI。     

乙肝母婴传播类型与乙肝疫苗免疫效果的关系

持续性乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染分为两类:乙型肝炎表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)阳性(显性HBV感染)和阴性(隐匿性HBV感染,occult hepatitis B infection,OBI)。对显性感染的认识相对清楚,但对OBI的认识仍然有限。本文重点介绍OBI的危害及其流行情况,并分别阐述了母婴不同乙肝传播类型与乙肝疫苗免疫效果的关系。HBV以母婴传播为主,两类HBV感染在母婴传播上表现为四种类型:(Ⅰ)母亲HBV显性-子代HBV显性;(Ⅱ)母亲HBV显性-子代OBI;(Ⅲ)母亲OBI-子代OBI;(Ⅳ)母亲OBI-子代HBV显性。HBV疫苗免疫后时代可能以Ⅱ型传播为主。应加强对OBI的研究,重新评估现有HBV免疫策略对HBV母婴传播的影响。     

C基因型HBV变异与宫内传播的关系

目的:分析携带C基因型HBV的母亲病毒基因组变异情况,探讨其与HBV宫内传播的关系。方法:选取2011-2013年在太原市第三人民医院产科住院的399对携带HBV的母亲及其新生儿,通过问卷调查和病历查阅获得母亲及其新生儿基本情况。采用荧光定量PCR和电化学发光法分别检测母亲及其新生儿血清HBV DNA及HBV血清学标志...     

HBV-DNA与乙型肝炎病毒宫内感染之间的关系

目的 探讨HBV-DNA在乙型肝炎病毒(HBV)垂直传播中的作用.方法 选择2009年1月-2010年1月在我院正规产检的HBsAg阳性孕妇,定量检测其血清HBV-DNA和新生儿脐带血HBV-DNA含量.结果 HBsAg阳性孕妇外周血和新生儿脐带血HBV-DNA含量具有相关性(r=0.401,P<0.001),HBeAg阳性孕妇其新生儿宫内感染率较HBeAg阴性孕妇的新生儿宫内感染率明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);脐带血HBV-DNA阳性孕妇中,剖宫产组与阴道分娩组HBV-DNA滴度对数之间差异无统计学意义(t=0.466,P=0.642).结论 母体血清HBV-DNA高滴度和HBeAg阳性是导致宫内感染的高危因素,而且HBV垂直传播与分娩方式无关.     

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA的检测与临床应用

目的 建立检测乙型肝炎病毒(HBV)共价闭合环状DNA(cccDNA)聚合酶链反应法,研究其临床应用价值.方法 根据HBV-cccDNA核苷酸序列特点设计PCR引物,应用PCR的方法检测急性和慢性乙型病毒性肝炎、肝硬化、拉米夫定治疗等病患者的血清、外周血细胞及肝组织cccDNA.结果 急性及慢性乙型病毒性肝炎、拉米夫定治疗等病患者血清的HBV cccDNA检出阳性率分别为15.6％、50.0％、21.2％;前两者外周血细胞检出阳性率分别为10.7％、19.6％;慢性乙型病毒性肝炎(含肝硬化)、拉米夫定治疗等病患者肝组织的HBV-cccDNA检出阳性率分别为91.1％、32.8％.结论 该方法操作简单、特异性强,可用于HBV-ccc DNA的检测,评价抗乙型肝炎病毒药物的疗效.     

HBsAg阳性母亲HBV核心启动子突变与宫内传播的关系

目的 分析HBV为C基因型的HBsAg阳性母亲核心启动子（BCP）区突变与宫内传播的关系。方法 2011年6月至2013年7月太原市第三人民医院妇产科HBsAg阳性母亲及新生儿399对。收集一般人口学资料,采用荧光定量PCR和电化学发光法分别检测母婴血清HBV DNA及HBV血清学标志物。选择HBV DNA载量≥10⁶ IU/ml的113例母亲为研究对象,其新生儿发生宫内传播的22例为宫内传播组,随机选取其中22例未发生宫内传播者作为对照组,母亲HBV DNA经提取、扩增、克隆、测序和序列编辑及剪接后与从NCBI下载的标准序列比对进行基因分型,最终选择C基因型的39例母亲进行突变分析。结果 HBV为C基因型（88.63%）的母亲共39例,其中宫内传播组19例,对照组20例。母亲A1762T/G1764A双突变率在两组差异显著（7.53% vs.27.72%,P<0.001）。非条件logistic回归分析显示A1762T/G1764A双突变可能是宫内传播的保护因素（aOR=0.065,95% CI：0.006～0.746,P=0.028）。母亲A1762T/G1764A双突变可能与新生儿HBeAg水平有关（P=0.050）。结论 HBV C基因型的HBsAg阳性母亲HBV DNA BCP区A1762T/G1764A双突变可能降低HBV宫内传播的风险。     

HBV—DNA定量与HBV血清学标志物的相关性探讨

目的探讨HBV—DNA定量与HBV血清学标志物（HBV—M）的相关性。方法采用实时荧光定量PCR（FQ—PCR）检测449例乙肝感染者血清的HBV—DNA含量,并用酶联免疫吸附试验（ELISA）对其血清学标志物进行检测。结果在不同HBV—M模式中,HBV—DNA与preS1总检出率无显著差异。在模式HBsAg（＋）、HBeAg（＋）和HBcAb（＋）中血清HB—DNA含量明显高于其他模式。在278例HBV—DNA阳性的标本中,HBV—DNA与preS1检出率无显著差异（P〉0．05）,HBV—DNA与HBeAg检出率有显著差异（P〈0．01）,同时preS1阳性组HBV～DNA定量值显著高于preS1阴性组。结论HBV—DNA或preS1与HBV复制密切相关,preS1较HBeAg更能敏感反映HBV在体内的复制状况,联合检测HBV—DNA与HBV血清学标志物,在乙型肝炎的诊断治疗中更有重要的临床指导价值。     

垂直传播中乙型肝炎病毒S区变异株检出及其流行病学意义

目的　研究垂直传播中乙型肝炎病毒Ｓ基因变异的流行病学意义。方法　以配偶无乙型肝炎病毒（ＨＢＶ） 标志的４ 名女性携带者与６ 名男性携带者及其子宫内感染ＨＢＶ 的胎儿为对象,以双脱氧链末端终止法检测母子、父子所携ＨＢＶＳ区４５１ ～６６０ 位核苷酸序列。结果　母子、父子间同源性９８ ％ ～１００ ％ ,检出４９１ 、４９４、５３０ 、５４６、５８１ 位点变异致使１１３ 、１１４、１２６ 、１３１、１４３ 位氨基酸替代,其中２ 对父母与胎儿检出１２６ 位变异。４ 例胎儿检出１３１ 位变异,其中２ 例胎儿合并检出１４３ 位变异。结论　ＨＢＶ垂直传播中存在Ｓ基因变异株,可能以１２６、１３１、１４３ 位氨基酸变异株为主,这些变异株可能使ＨＢ疫苗免疫失败。     

HBV cccDNA检测技术进展

乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA（hepatitis B virus covalently closed circular DNA,HBVcccDNA）是乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）复制的中间体,是HBV mRNA和前基因组RNA合成的模板。     

可溶性细胞间黏附分子-1在HBV感染不同免疫状态患者血清中变化

目的 观察乙型病毒性肝炎(HBV)感染不同免疫状态及HBV感染相关原发性肝癌(PHC)患者可溶性细胞间黏附分子-1 (sICAM-1)的变化及其意义.方法 利用ELISA法对60例HBV感染耐受、60例免疫清除、60例免疫不全(其中免疫不全A组30例,B组30例)及60例HBV感染性PHC患者进行血清sICAM-1检测,另选30例非HBV感染健康体检者作为正常对照组.结果 HBV感染不同免疫状态者中免疫清除、免疫不全A、免疫不全B及HBV感染相关PHC患者sICAM-1较正常对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05);免疫耐受、免疫不全A组与正常对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05).结论 检测血清sICAM-1变化对判断HBV感染不同免疫状态病情变化具有一定的临床意义.     

HBV感染单个核细胞对阻断乙肝垂直传播的影响

目的:探讨乙型肝炎病毒(HBV)感染新生儿单个核细胞(PBMC)的情况及其对高效价乙肝免疫球蛋白(HBIG)及乙肝疫苗阻断垂直传播的影响。方法:选择HBV感染孕妇257例,检测新生儿脐血血清和脐血单个核细胞(UBMC)中的HBV-DNA;所有新生儿出生24h内和生后2周分别注射HBIG200IU,1月时按0、1、6方案注射乙肝疫苗,并在1岁时检测血清HBsAb和HBV-DNA。结果:血清HBV-DNA阳性产妇的新生儿UBMC中24·18%HBV-DNA阳性,低于该组新生儿血清HBV-DNA阳性率(35·29%,P<0·05)。正规注射HBIG和乙肝疫苗后,新生儿脐血清和UBMC中HBV-DNA同时阳性组婴儿1岁时HBsAb阳转率明显低于血清HBV-DNA阳性、UBMC阴性组(50·00%vs·77·78%,P<0·05),二者都低于HBV-DNA阴性婴儿组(96·67%,P<0·05)。单独血清HBV-DNA阳性和UBMC同时阳性组1岁时HBV-DNA阳性率分别为11·11%和15·79%。结论:HBV能够感染新生儿PBMC,降低HBIG联和乙肝疫苗阻断垂直传播的效果。并因新生儿期的免疫耐受而造成HBV感染的持续与慢性化。     

不同分娩方式对乙型肝炎病毒母婴传播的影响

目的 了解不同分娩方式对乙型肝炎(简称"乙肝")病毒母婴传播情况的影响.方法 在北京市海淀区妇幼保健院产前检查的孕妇中随机抽取乙肝表面抗原阳性者292例作为研究对象,分为自然分娩组180例,剖宫产术组(简称手术组)112例.所有孕妇孕期均未使用过乙肝疫苗及乙肝免疫球蛋白和其他任何抗病毒药物.观察婴儿生后0、3、6个月静脉血乙肝抗原即乙肝表面抗原、乙肝e抗原定性.结果 自然分娩组180例新生儿乙肝病毒阳性者5例,乙肝病毒阳性率为2.78%;剖宫产术组112例新生儿乙肝病毒阳性者4例,乙肝病毒阳性率为3.57%.两组新生儿乙肝病毒阳性率无显著性差异(χ2=0.146,P=0.736).所有乙肝病毒阳性新生儿乙肝e抗原均呈阳性.自然分娩组乙肝表面抗原无阳性,剖宫产术组乙肝表面抗原阳性者2例,阳性率为1.79%,经检验差异亦无统计学意义(P=0.146).结论 乙肝病毒携带者剖宫产与自然分娩新生儿乙肝病毒阳性率差异无显著性.乙肝表面抗原阳性仅占乙肝病毒阳性新生儿的少数,所有乙肝病毒阳性新生儿均可出现乙肝e抗原阳性.     

妊娠期孕妇人乳头状瘤病毒感染的分型与母婴垂直传播的相关性研究

目的探讨妊娠期孕妇人乳头状瘤病毒(HPV)感染的分型与母婴垂直传播的相关性,分析妊娠期HPV感染对分娩新生儿的影响。方法回顾性分析医院产前检查且分娩的HPV感染产妇262例(HPV感染组)及按照2∶1比例选取的131例无HPV感染产妇(对照组)资料,分析HPV感染分型、母婴垂直感染情况。结果 262例HPV感染孕妇16种高危型及5种低危型均有检出,其中单型感染者210例,占80.15%,多型感染者52例,占19.85%,高危型感染者238例,占90.84%,低危型感染者24例,占9.16%;HPV感染组产妇阴道分娩、剖宫产、胎儿宫内生长受限、早产、胎膜早破、呼吸窘迫综合征及产妇产后出血发生率分别为67.94%、32.06%、3.05%、6.49%、11.83%、3.44%、1.15%,对照组分别为71.76%、28.24%、2.29%、4.58%、10.69%、3.81%、0.76%,两组比较差异均无统计学意义;分娩新生儿HPV感染率46.18%,均为隐形感染,其中咽拭子、外阴分泌物、咽拭子及外阴分泌物同时感染率分别为19.85%、22.52、3.82%,53例新生儿HPV感染型别与孕妇感染型别一致,68例感染型别与孕妇不一致。结论妊娠期孕妇HPV感染主要以单一型感染、高危型感染为主,孕妇HPV感染可通过垂直传播途径引起宫内感染,造成新生儿HPV隐形感染,但与分娩方式及妊娠结局无关,新生儿HPV感染型别与孕妇并不完全一致,原因尚不完全明确。     

母血HBV DNA含量与新生儿HBV感染关系

目的 探讨HBsAg阳性孕妇外周血乙型肝炎病毒(HBV)DNA含量及细胞转运与新生儿HBV感染的关系.方法 用荧光定量PCR方法定量检测HBsAg阳性孕妇血清HBV DNA;用等位基因特异性PCR及半巢式PCR技术扩增HBsAg阳性孕妇新生儿外周血中母亲DNA,通过检测谷胱甘肽-S-转移酶(GSTM1)、血管紧张素转换酶(ACE)等位基因确定母-胎细胞转运;用巢式PCR检测新生儿血清、外周血单个核细胞(PBMC)中HBV DNA.结果 随着孕妇血清HBV DNA含量的增加,新生儿HBV DNA阳性的危险性呈现增高趋势(X~2=13.16,P<0.05,趋势X~2=12.42,P<0.05),而孕妇血清HBV DNA含量与新生儿PBMC HBV DNA阳性无关(总X~2=2.41,P>0.05,趋势X~2=0.35,P>0.05);孕妇血清HBV DNA含量与母-胎细胞转运无关(总X~2=4.14,P>0.05,趋势X~2=0.001,P>0.05);母-胎细胞转运与新生儿外周血PBMC HBV DNA阳性有关(X~2=10.26,P<0.05),而与新生儿外周血HBV DNA阳性无关(X~2=0.49,P>0.05).结论 HBsAg阳性孕妇血清HBV DNA含量、母-胎细胞转运与新生儿HBV感染有关,分别是新生儿血清、PBMC HBV感染的重要危险因素.     

稳定表达HBV C蛋白羧基端siRNA抑制HBV cccDNA的实验研究

目的研究乙型肝炎病毒(HBV)C蛋白羧基端短小的干扰RNA(siRNA)对HBV超螺旋双链闭环DNA(cccDNA)水平的影响.方法设计合成1对能稳定表达针对HBV C基因羧基端(2389nt-2410nt)序列的22-mer siRNA寡核苷酸,其两端带有限制性酶切位点,表达后可形成发夹结构,退火后形成双链;然后将这一双链寡核苷酸与重组腺相关病毒载体(rAAV)连接,构建重组体rAAV-siRNA.将重组体rAAV-siRNA加入培养增殖良好的22.1.5细胞中孵育,72 h后用实时聚合酶链反应(Real timePCR)法检测经处理过的22.1.5细胞和培养上清中HBV cccDNA的表达水平和HBV DNA的复制水平.结果重组体rAAV-siRNA实验组HBV cccDNA水平较空白对照组显著降低(P＜0.01),HBVDNA的复制水平在实验组亦明显下降;在无关序列对照组未发现对HBV cccDNA水平影响和HBV DNA复制的抑制作用.结论HBV羧基端siRNA能显著降低HBV cccDNA的水平和HBVDNA的复制.     

乙肝病毒血清标志物与HBV复制的关系及其临床意义

目的探讨乙型肝炎（下称乙肝）患者血清中HBcAg、HBeAg、HBV—DNA与乙肝病毒（HBV）复制的关系及其临床意义。方法对171例临床诊断为乙肝的病人采用ELISA法检测血清HBcAg、HBeAg及荧光定量PCR检测血清HBV—DNA。结果171例乙肝病人中，HBcAg阳性检出率为42．1％，HBV—DNA阳性检出率为48．0％，HBeAg阳性检出率为38．6％，HBeAg阳性病人中，HBcAg阳性检出率为95．4％，HBVDNA阳性检出率为98．5％。PCR检测HBV—DNA阳性病人中，HB—cAg阳性检出率为87．2％。结论检测血清HBcAg与检测血清HBV—DNA具有高度地一致性，HBeAg和HBcAg亦具有良好的相关性，荧光定量PCR检测HBV—DNA是灵敏度最高的判断HBV复制的检测方法。     

HBV父婴垂直传播水平与HBV-DNA载量的相关研究

目的 探讨HBsAg阳性父亲血HBV-DNA的不同载量水平对其新生儿发生HBV父婴垂直传播的影响.方法 对161例HBsAg阳性的父亲及其新生儿(母亲血清HBVM全阴性或仅HBsAb阳性及HBV-DNA均为阴性)HBV感染状况进行调查分析.采用ELISA检测HBVM,FQ-PCR法检测血清HBV DNA载量水平.结果 (1)父亲血HBV-DNA载量水平与新生儿脐带血HBV DNA阳性存在剂量反应关系趋势(χ~2=64.117,P=0.000).父亲血HBV-DNA≥1.0×107 copies/ml组新生儿的HBV父婴垂直传播水平显著高于＜1.0×107 copies/ml组(χ~2=71.539,P=0.000);(2)HBeAg阳性组与HBeAg阴性组父亲其新生儿的HBV-DNA阳性率差异有统计学意义(χ~2=6.892,P=0.009).结论 父亲血清HBV-DNA载量水平与是否发生HBV父婴垂直传播密切相关,随血清HBV-DNA载量增加而上升,并存在影响传播的浓度界面;父亲血清HBV-DNA 1.0×107 copies/ml及HBeAg阳性是HBV父婴垂直传播的危险因素.     

HBV感染相关蛋白Human Annexin-V在卵巢组织表达

目的:观察HBV感染相关蛋白—人膜联蛋白V(Human Annexin-V,HA-V)在卵巢组织,特别是卵细胞上的表达,探讨其在HBV感染卵巢及卵细胞中的可能作用。方法:用SP免疫组化的方法检测HA-V在引产胎儿卵巢及卵细胞,血清HBsAg阳性及阴性的成人卵巢、卵细胞上HA-V的表达及分布。结果:①所有卵巢组织均有HA-V的表达,与HBsAg阳性与否及卵巢成熟无关。阳性表达分布于卵巢的卵细胞(包括原始卵细胞、初级卵母细胞、次级卵母细胞及成熟卵母细胞)、颗粒细胞及间质细胞。②免疫组化图像分析系统显示血清HBsAg阳性成人卵巢与血清HBsAg阴性成人卵巢及胎儿卵巢HA-V表达无明显差别。结论:HA-V是卵巢组织及卵细胞上的一种固有蛋白;HA-V可能作为HBsAg的特异性受体介导了HBV与卵巢组织各种细胞,特别是卵细胞的粘附、内化等过程并最终导致了HBV对卵巢及卵细胞的感染。