云南产螺旋藻多糖的分离纯化与分析

云南程海湖工业化养殖的螺旋藻（干品）经热水提醇沉，ｓｅｖａｇ法脱蛋白，透析，再经ＤＥＡＥ－ｓｅｐｈａｄｅｘ－Ａ２５与ｓｅｐｈａｄｅｘＧ－２００柱层析纯化，得螺旋藻多糖（ＰＳＰ）。用纸层析，柱层析及电泳检查纯度，表明ＰＳＰ为单一组分。ＰＳＰ经ＵＶ－３００扫描，无核酸（２６０ｎｍ）及蛋白质（２８０ｎｍ）特征吸收峰。ＩＲ－４００扫描，出现典型多糖吸收峰。经纸层析及气相色谱分析表明ＰＳＰ组成单糖为Ｌ－岩藻糖、Ｄ－甘露糖、Ｄ－半乳糖、Ｄ－葡萄糖和葡萄糖醛酸。ＰＳＰ平均分子量约为１６６００。     

两种中药多糖对巨噬细胞超微结构影响的分析

目的：分析枸杞多糖（ＬＢＰＳ）和红毛五加多糖（ＡＧＰＳ）对小鼠腹腔巨噬细胞超微结构影响。方法：ＬＢＰＳ、ＡＧＰＳ分别腹腔注射于ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠体内,１２０ｈ后取出腹腔液,分离巨噬细胞。常规扫描电镜（ＳＥＭ）、透射电镜（ＴＥＭ）标本制作,置ＪＳＭ－３５Ｇ扫描电镜和Ｈ－６００透射电镜下观察。结果：ＬＢＰＳ、ＡＧＰＳ组巨噬细胞表面微绒毛数目增多、增长、增粗,胞质内糖原颗粒增多,线粒体增大;出现大量初、次     

L615白血病抑癌因子协同三种中药成分体内抗白血病的作用

对中药有效成分小蘖胺（Ｂｅｒ），黄芪多糖（ＡＰＳ．）和当归多糖（ＡＰ）协同白血病抑癌因子（ＣＳＦ）体内抗白血病的效应进行了实验性研究。实验结果显示Ｂｅｒ，ＡＰＳ和ＡＰ三种中药有效成分均有一定的抗白血病效应，可使Ｌ６１５白血病小鼠的生存期从６ｄ延长到８．８ｄ．注射ＣＳＦ的实验小鼠生存期显著延长，存活１５ｄ以上的小鼠占３３．３±７．２％，平均存活１５１．７±５８．５ｄ。而ＣＳＦ与Ｂｅｒ，ＡＰＳ和ＡＰ联合使用的各组小鼠生存期延长更为显著，其中ＣＳＦ／Ｂｅｒ组，有７５％的小鼠平均生存期为２７５ｄ，平均生命延长率高达４５８９％，超过治愈标准的３００％。同时各脏器组织结构恢复正常，白血病细胞和标记染色体消失，结果显示：Ｂｅｒ，ＡＰＳ和ＡＰ具有改善机体的免疫功能，促进免疫细胞活化，促进机体释放内原性抗肿瘤生物活性因子，并加强其抗肿瘤的生物活性，与ＣＳＦ联合使用，可明显增强杀伤肿瘤和抑制肿瘤生长的能力。这一结果对于在临床上进一步推广肿瘤生物学治疗的应用将有着非常重要的意义。     

体外检测近交系小鼠HBsAg特异性细胞毒T淋巴细胞方法的建立

通过磷酸钙法用含ＨＢＶＳ基因的质粒ｐＲｃ／ＣＭＶＳ与含筛选标记基因—ｎｅｏｒ基因的质粒ｐＳＶ２ｎｅｏ对ＢＡＬＢ／Ｃ近交系小鼠肥大细胞瘤细胞株—Ｐ８１５细胞进行了质粒共转染，并经Ｇ４１８筛选得到了Ｇ４１８抗性细胞，即Ｐ８１５Ｓ细胞。斑点杂交和免疫组化实验分别证实Ｐ８１５Ｓ细胞内有ＨＢＶＳ基因的存在；Ｐ８１５Ｓ细胞浆内和膜上有ＨＢｓＡｇ的表达。表明了Ｐ８１５Ｓ细胞可作为体外检测ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ的靶细胞。进一步对Ｐ８１５Ｓ细胞成功地进行５１Ｃｒ标记，以及标记靶细胞５１Ｃｒ最大释放值和自然释放值的测定表明：利用５１Ｃｒ释放法体外检测近交系小鼠（ＢＡＬＢ／Ｃ）ＨＢｓＡｇ特异性ＣＴＬ功能的方法被建立。     

螺旋藻酸性杂多糖的分离纯化和分析

螺旋藻藻粉经热水提提,乙醇沉淀,Ｓｅｖａｇ法去蛋白质,十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）沉淀得酸性杂多糖,再经ＤＥＡＥ－纤维素柱层析分经纯化两次得多糖ＰＳＰ１和ＰＳＰ２。ＰＳＰ１和ＰＳＰ２经ＨＰＬＣ的Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ柱层析为单一对称峰,证明为均一多糖。纸层析和硫酸－咔唑反应分析表明：ＰＳＰ１主要由Ｄ－半乳糖、Ｄ－甘露糖、葡萄糖醛酸及Ｄ－葡萄糖四种残基组成,比例为２．１：３．     

脑干听觉诱发电位和短潜伏期体感诱发电位对脑疝患者脑干功能的判断价值

对ＣＴ和手术证实的三组颅内占位病变测试脑干听觉诱发电位（ＢＡＥＰ）和正中神经短潜伏期体感诱发电位（ＳＬＳＥＰ）。１６例病程中出现小脑幕裂孔下疝（ＤＴＨ）的幕上病变，ＢＡＥＰ和ＳＬＳＥＰ均异常。３６例出现假性定位体征的幕上病变，ＢＡＥＰ异常３５例，ＳＬＳＥＰ异常３３例。ＢＡＥＰ异常主要为ｖ波峰潜伏期（ＰＬ），Ⅰ～Ⅴ、Ⅲ～Ⅴ峰间潜伏期（ＩＰｒ）延迟；ＳＬＳＥＰ以Ｐ（１４），波异常及Ｎ（１３）～Ｎ（２０）ＩＰＬ延迟为主。１４例幕下病变所致的枕骨大孔疝，ＢＡＥＰ和ＳＬＳＥＰ均异常，其中６例病程中复查了诱发电位。结果提示，ＢＡＥＰ和ＳＬＳＥＰ可作为ＤＴＨ患者脑干功能损害的客观指标，且可用于评价未出现ＤＴＨ患者的脑干功能。ＢＡＥＰ和单次ＳＬＳＥＰ测试对枕骨大孔疝的诊断意义不大，后颅窝病变进行ＳＬＳＥＰ动态观察，对枕骨大孔疝的早期诊断有价值。     

黑米对小鼠HyP和GSH—Px的影响

以黑米水提液，黑米醇提取，螺旋藻悬液经老龄ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠每日每只灌胃１ｍｌ经４５～６０天后，测定其皮肤及尾腱中的羟脯氨酸（ＨｈＰ）的含量及全血谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＳＨ－Ｐｘ）的活力，结果表明黑米水提液，黑米醇提取能显著提高小鼠皮肤中ＨｙＰ含量（Ｐ〈０．０１，Ｐ〈０．０５），黑米水提液能显著提高小鼠尾腱中ＨｙＰ的含量（Ｐ〈０．０５），而黑醇提液对小鼠尾腱中的ＨｙＰ含量无明显影响（Ｐ〉０．０５）。     

螺旋藻多糖对小鼠巨噬细胞及K细胞ADCC活性的影响

Ｃ（５７）ＢＬ／６Ｊ小鼠腹腔注射ＰＳＰ１００ｍｇ·ｋｇ（－１），连续１２ｄ，可明显促进小鼠Ｋ细胞ＡＤＣＣ活性，ＰＳＰ组Ｋ细胞毒指数（ＣＩ）比对照组升高５４．７％。在５ｍｇ／Ｌ～３２０ｍｇ／Ｌ浓度范围内，ＰＳＰ可促进体外培养的Ｃ（５７）ＢＬ／６Ｊ小鼠腹腔巨噬细胞ＡＤＣＣ活性，最适浓度为８０ｍｇ／Ｌ其ＣＩ值为对照孔的５．１４倍。     

肉苁蓉多糖的纯化及其对T细胞功能调节的研究

目的：研究肉苁蓉主要成分之一－多糖对小鼠胸腺Ｔ细胞的功能调节。方法：采用沉淀法获肉苁蓉粗多糖，以ＤＥＡＥ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ａ－５０和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００柱层析，获得肉苁蓉多糖（ＣＤＰＳ）。再采用噻唑蓝比色法（ＭＴＴ）观察ＣＤＰＳ对小鼠脾、胸腺淋巴细胞增殖反应的影响及对正常小鼠脾淋巴细胞分泌ＩＬ－２的影响。结果：ＣＤＰＳ纯化后经ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－２００鉴定为单一对称峰。ＣＤＰＳ体外实验     

一种简易制备白蛋白纯品及抗血清的方法──凝胶切割制备法

利用凝胶切割纯化法得到免疫纯人血清白蛋白（ＡＬＢ），经聚丙烯酰胺凝胶（ＰＡＣ）电泳确认为单一带，经ＳＤＳ－ＰＡＣＥ确定其相对分子质量为６７４６２．８０Ｕ，与Ｓｉｇｍａ纯品ＡＬＢ及日本产羊抗人ＡＬＢ抗血清免疫双扩散融合试验验证其为纯品ＡＬＢ。利用得到的ＡＬＢ免疫绵羊制备羊抗人白蛋白抗血清，与日本产品比较，为单价特异性抗血清。     

Radiosensitizing effects of Lycium barbarum polysaccharide for Lewis lung cancer]

The radiosensitizing effects of the Lycium barbarum polysaccharide (LBP) were observed by the model transplanted Lewis lung cancer on C57 BL mice. When LBP alone was administered, it was not obvious that LBP inhibited the growth of Lewis lung cancer. The significant radiosensitizing effects were obtained by combination of LBP and radiation. The mean numerical value of the dose modifying factors (DMF) was 2.05. The results also showed certain radiation enhancement effects of LBP to acute hypoxic cells of Lewis lung cancer. LBP presented few toxicity to the mice.     

枸杞多糖分离纯化及其结构光谱分析与显微学观察

目的 提取枸杞多糖并分析其结构性质和显微学形态,为枸杞的进一步开发利用提供参考。方法 采用水提醇沉法得到枸杞多糖,Sephadex G-150凝胶色谱柱纯化得LBP3-I,应用傅里叶变换光谱、气相色谱对LBP3-I进行组成结构分析,通过环境扫描电镜和原子力显微镜观察该组分的显微学形态。结果 LBP3-I是一种含有结合蛋白的多糖复合物。其单糖组成为鼠李糖基、阿拉伯糖基、木糖基、甘露糖基、葡萄糖基、半乳糖基,且摩尔比率为2.07∶2.38∶3.11∶1.00∶1.12∶2.86。红外光谱结果显示LBP3-I具有明显的糖类物质特征吸收峰且含有吡喃环;环境扫描电镜下LBP3-I呈现高分支结构,主要呈链状,且糖链间多相互缠绕聚集成环状。结论 LBP3-I是一种含有结合蛋白的多糖复合物,具有分支结构,主要成链状。     

脂多糖结合蛋白联合降钙素原、白细胞介素-6对胎膜早破早产儿细菌感染的早期诊断价值

目的:评估脂多糖结合蛋白（LBP）、降钙素原（PCT）和白细胞介素-6（IL- 6）在胎膜早破（PROM）合并细菌感染的早产儿诊断价值。方法:选取93例入住惠州市中心人民医院新生儿科的PROM早产儿。根据是否发生细菌感染（生后72 h内）,分为感染组（45例）和非感染组（48例）,于出生后24 h内取血,测定血清LBP、PCT和IL-6的水平,通过联合绘制受试者工作特征（ROC）曲线,计算曲线下面积（AUC）。LBP、PCT和IL-6中两组的组合指标与每个指标比较,评估联合指标在预测PROM早产儿早期细菌感染的诊断价值。结果:LBP和PCT、LBP和IL-6、PCT和IL-6在诊断PROM早产儿早期细菌感染诊断中的AUC分别为0.976、0.977和0.728。LBP/PCT与PCT、LBP/IL-6与IL-6、PCT/IL-6与PCT、PCT/IL-6与IL-6在AUC值上有显著性差异。LBP/PCT与LBP、LBP/IL-6与LBP的AUC值比较差异无统计学意义。结论:联合检测LBP、PCT、IL-6可提高PROM早产儿细菌感染的早期诊断价值。     

枸杞多糖对细胞膜流动性及蛋白激酶C的体外效应

目的：研究枸杞多糖（LBP）体外免疫调节效应的作用机制。方法：以DPH作为荧光深剂，采用荧光偏振法观察LBP对免红细胞膜流动性的影响。并以32P-组蛋白内参入的放射性强度检测法，观察LBP对淋巴细胞胞膜和胞浆蛋白激酶C（PKC）活性的影响。结果：100mg／LLBP可明显促进兔红细胞细胞膜的流动性，并能增强10mg／L和25mg／LConA对膜流动性的促进作用。同时100ms／LLBP尚可增加ConA活化后的小鼠脾淋但细胞膜上的PKC的活性，但对胞浆PKC的活性无影响。结论：LBP的体外作用途径可能是作用于细胞膜，通过促进细胞膜的流动性及促进ConA活化的小鼠脾淋巴细胞胞浆内PKC从胞浆到胞膜的激活移位而发挥免疫调节效应的。     

枸杞多糖对酒精性脂肪肝大鼠肝细胞色素P4502E1基因及蛋白表达的影响

目的：通过观察枸杞多糖（LBP）对酒精性脂肪肝（AFL）大鼠肝细胞色素P4502E1基因和蛋白的影响,揭示其治疗机制。方法：用乙醇灌胃10周造成大鼠慢性AFL模型,再用5％、10％LBP和10％阿托莫兰（GSH）治疗10周,戒酒组为阳性对照．作治疗前后比较：肝脏病理形态,肝匀浆还原型谷光甘肽GSH、丙二醛MDA含量,肝细胞色素P4502E1（CYP2E1）基因及蛋白表达水平。结果：LBP能明显改善酒精所致大鼠肝脏脂肪性病理变化,增加GSH含量,减少MDA产生,抑制CYP2E1基因及蛋白表达水平,与阿托莫兰组无显著差异,优于单纯戒酒组。结论：LBP抑制CYP2E1基因及蛋白表达,减轻脂质过氧化作用,有效的治疗AFL。     

枸杞多糖对人白血病K562细胞株凋亡作用的基础研究

目的 探讨枸杞多糖（LBP-X）抑制人慢性粒细胞白血病（CML）K562细胞增殖的作用机制,研究LBP-X对K562细胞凋亡的影响,探讨LBP-X与三氧化二砷（As2O3）诱导K562细胞凋亡的剂量对应关系.方法 用LBP-X、As2O3处理K562细胞,四氮甲唑蓝（MTT）比色法检测药物对细胞的抑制作用,倒置显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪分析细胞DNA含量变化及凋亡细胞的比例.结果 LBP-X对K562细胞的IC50约为227.50 μg/ml,经LBP-X作用后,K562细胞呈现凋亡的形态学改变.流式细胞仪可在2倍体前检测到凋亡峰,凋亡细胞比例为8.43%-57.92%.结论 LBP-X对K562细胞有抑制作用,并能诱导其发生凋亡.LBP-X对K562细胞的效能和效价强度约为As2O3的1/1 000.     

枸杞多糖对P38MAPK介导2型糖尿病大鼠背根神经节细胞凋亡的保护作用

目的探讨枸杞多糖对氧化应激激活P38MAPK信号转导通路诱导2型糖尿病大鼠背根神经元细胞凋亡的保护作用及其机制。方法取SD大鼠高脂高糖喂养8周后,腹腔小剂量注射STZ(35 mg/kg)诱导2型糖尿病大鼠模型后,分为模型组、枸杞多糖小剂量组、大剂量组及α-硫辛酸对照组,治疗10周后通过免疫组化方法检测大鼠背根神经节中pP38MAPK及其诱导的凋亡指标Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达。结果经图像分析处理,枸杞多糖大剂量组对糖尿病大鼠背根神经节中Bcl-2蛋白的表达有上调作用,对pP38MAPK、Bax和Caspase-3蛋白的表达有抑制作用,其平均光密度值与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论枸杞多糖可调节机体内的氧化应激状态,通过抑制P38MAPK途径,上调背根神经元细胞中Bcl-2表达,抑制Bax及Caspase-3的表达,从而保护神经细胞免受氧化应激损伤导致的凋亡,这可能是其保护DPN的作用机制之一。     

应用Diapason内固定治疗腰骶椎不稳

目的介绍一种新的脊柱内固定系统及其特点,观察腰椎管减压、横突间植骨和Diapason内固定手术治疗腰骶椎不稳定合并腰椎管狭窄症患者的早期临床疗效.方法回顾性分析总结16例腰椎管狭窄合并腰骶椎不稳定患者经腰椎管减压、横突间植骨和Diapason内固定术后临床症状、X光表现.结果 16例腰椎管狭窄合并腰椎不稳定患者中,术前腰痛临床评分为47.5±0.8,术后腰痛评分(31.9±2.3)较术前明显改善(P＜0.001).随访(平均6.2个月)时,X线检查未见脊柱滑移,未发现内植物松动、断裂.无神经系统并发症和感染发生.结论应用Diapason内固定治疗腰骶椎不稳定,术后早期效果良好,手术操作容易,并发症少.     

枸杞多糖对大鼠坐骨神经损伤修复后影响的实验研究

目的：评价应用枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides,LBP)对大鼠坐骨神经损伤修复后再生的影响。方法:取SD大鼠40只，随机分为4组，切断右侧坐骨神经后原位吻合，造成损伤模型。术后实验组给以枸杞多糖腹腔注射。对照组给等量生理盐水。各组分别于术后第4、8周行运动神经传导速度、形态学及图像分析等测定各项指标。结果:LBP实验组在术后4周、8周时吻合口远段再生神经纤维轴突的数目、有髓神经纤维直径均不如对照组。术后8周时。运动神经传导速度恢复率低于对照组。结论:枸杞多糖有抑制大鼠坐骨神经断伤吻合后神经再生的作用。     

对脂多糖结合蛋白致炎的多肽序列分析

目的应用噬菌体随机12肽库探讨脂多糖结合蛋白(LBP)致炎作用的多肽序列.方法以LPS为目标分子,对噬菌体12肽库进行亲合筛选,4轮筛选后,检测随机挑取的噬菌体克隆的结合活性和抑制活性,将得到的16个可与LBP竞争性结合LPS的噬菌体克隆进行生物学功能检测,对获得的9个阳性克隆进行测序,并与LBP序列比较.结果9个阳性克隆展示多肽的核心序列为WKXRKXFXKXXG,与LBP的91～102位氨基酸序列有较高同源性.结论LBP的91～102位氨基酸可能为其致炎作用部位.