伊曲康唑治疗不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎的实验研究

目的：研究不同免疫状态下伊曲康唑治疗小鼠白念珠菌性阴道炎的疗效。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型，并应用地塞米松构建免疫抑制鼠模型；采用伊曲康唑灌服治疗；其中F组同时采用γ-IFN治疗，在灌药后不同时间动态观察阴道灌洗液真菌载量。结果：伊曲康唑治疗正常免疫组（A组）与对照组（D组）之间的疗效差异有显著性（P〈0．01）；免疫抑制组（E组）及免疫抑制后并进行免疫调节治疗组（F组）与对照组（G组）之间差异均有显著性（P〈0．01）；而A、E、F组在接种后的第5、6、7、9、11天其阴道灌洗液真菌载量无明显差异（P〉0．05）。结论：伊曲康唑治疗不同免疫状况（即正常免疫、免疫抑制、免疫调节治疗状态下）的小鼠白念珠菌性阴道炎疗效均显著，而且正常免疫、免疫抑制及免疫增强状态下对伊曲康唑的抗真菌疗效无明显影响。     

UVB诱导皮肤免疫抑制和表没食子儿茶素没食子酸酯光保护作用

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对不同剂量中波紫外线（UVB）慢性辐射BALB／c小鼠皮肤的保护作用。方法 EGCG局部外用于小鼠背部皮肤后予不同强度UVB辐射，每日1次，连续1个月，RT-PCR法检测IFN-γ和IL-10mRNA的表达水平变化。结果 不同剂量UVB慢性辐射后小鼠皮肤中IFN-γ mRNA表达水平较对照组降低（P〈0．01），IL-10mRNA表达水平较对照组升高（P〈0．01），并与UVB辐射强度呈一定剂量依赖关系。EGCG处理后可影响UVB辐射诱导上述细胞因子表达（P〈0．01）。结论 UVB辐射下调IFN-1和上调IL-10转录水平，可能与UVB辐射诱导局部免疫抑制有关。     

基质细胞衍生因子-1及受体CXCR4在阴道念珠菌病小鼠模型中的表达

目的 检测基质细胞衍生因子-1（SDF-1）及其受体CXCR4在阴道念珠菌病小鼠模型阴道组织及腰引流淋巴结中的表达情况。方法 采用雌激素化阴道念珠菌病小鼠模型，雌性昆明小鼠（80只）随机分四组，A组（雌激素处理感染组）、B组（雌激素处理未感染组）、C组（未用雌激素处理感染组）、正常对照组（5只）。前三组又再分为接种白念珠菌后第2、4、7、14和21天组（各5只）。接种后不同时间点随机取小鼠阴道组织及腰淋巴结，以RT-PCR及免疫组化SABC法检测SDF-1及CXCR4 mRNA及蛋白水平的表达。结果 （1）RT-PCR：与正常小鼠相比，雌激素（B组）对SDF-1及CXCR4 mRNA表达无影响。①小鼠阴道组织：与B组相比，A组小鼠接种后各时间点均见SDF-1 mRNA表达明显增加（F ＝ 114.87，P < 0.01），第14天CXCR4 mRNA明显增加（t = 15.61，P < 0.01）；与正常小鼠相比，C组小鼠接种后第2，4， 7天，SDF-1 mRNA明显增加；第4 ~ 21天CXCR4 mRNA均明显增加。②腰淋巴结：与B组相比，A组小鼠接种后第2天和7 ~ 21天SDF-1 mRNA明显增加（F ＝ 865.62，P < 0.01），CXCR4 mRNA于各时间点表达均增加（F ＝ 161.30，P < 0.01）；与正常小鼠相比，C组小鼠接种后SDF-1 mRNA表达无明显改变（P > 0.05）；CXCR4 mRNA于第7天和14天明显增加（P < 0.05）。（2）免疫组化：A组小鼠阴道黏膜中SDF-1及CXCR4表达在接种后第2天即开始增加，第7天时达高峰，第14天和21天开始下降，但均明显高于对照组（P < 0.05）。结论 感染组小鼠阴道黏膜及腰淋巴结中SDF-1及CXCR4的mRNA及蛋白水平均明显升高。     

中药抗真菌方干预小鼠外阴阴道念珠菌病的研究

目的:探讨中药抗真菌方灌胃是否干预小鼠外阴阴道念珠菌感染。方法:将65只BALB/c雌鼠(8周龄)随机分为A组(30只,模型中药组)、B组(30只,模型对照组)和C组(5只,空白对照组)。自第1天开始,A组小鼠予中药抗真菌方煎液灌胃,B组和C组予生理盐水灌胃,持续至实验结束。A、B两组在第4天接种白念珠菌,于第8、9、10、12、14、21天每组分别各选取5只小鼠取阴道灌洗液进行菌落培养,并通过ELISA检测IL-12、IL-10、IL-6水平。C组在第8天同时进行阴道灌洗液的采集。结果:从感染后第2天起,A组培养菌落数开始明显小于B组(P值均0.05)。A、B两组阴道灌洗液中IL-6与IL-12均出现增加,IL-10明显降低。A组和B组小鼠阴道灌洗液中IL-6水平较空白组增加,但A组与B组间无明显差异。两组间IL-12在感染后第1、5、7、14天有明显差异,IL-10则在感染后第2 d时出现明显差异。结论:中药抗真菌方可减轻小鼠外阴阴道念珠菌感染。     

不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达

目的：研究不同免疫状态下小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型D组及地塞米松构建免疫抑制鼠模型G组；采用RT-PCR方法检测D、G、H组（未雌激素化组感染）不同时间局部阴道组织中Th1／Th2因子表达。结果：正常免疫组D组局部组织中IL-2在感染早期升高较为显著，而IL-10仅在后期有短暂的升高。TGF-β1则有持续较高水平的表达。免疫抑制组G组的IL-2水平则明显下降，而IL-4、m一10和TGF-β1则在接种后不同的时间点表达水平不同程度上高于D组。结论：IL-2在感染早期的高表达与其参与清除白念珠菌有关；IL-4、IL-10的表达增加明显提高小鼠对白念珠菌的易感染性。     

小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2因子的表达

目的：研究小鼠白念珠菌性阴道炎局部组织中Th1/Th2细胞因子的表达。方法：构建ICR小鼠白念珠菌性阴道炎模型,采用RT-PCR方法检测不同时间小鼠阴道局部组织中Th1/Th2细胞因子（IL-2/IL-4、IL-10、TGF-β1）的表达。结果：雌激素化组接种小鼠阴道局部组织中IL-2水平在早期显著升高,IL-4则轻度升高,但均很快开始下降。IL-10的水平在感染后期缓慢升高并保持在高水平,而TGF-β1在整个感染过程中均在高水平且高于其他因子。结论：IL-2在感染早期及IL-10在后期的高表达分别与其参与清除及维持白念珠菌感染有关。TGF-β1可能在阴道黏膜缺乏针对白念珠菌的明显细胞免疫时发挥重要作用。     

中药苍柏湿毒清对小鼠阴道黏膜白介素12的影响

目的：本文旨在探讨中药苍柏湿毒清对Balb／c小鼠阴道黏膜白介素12（IL-12）浓度的影响。方法：取阴道解脲支原体培养阴性的Balb／c小鼠随机分为先干预后造模组（A1）、后造模对照组（B1）、先造模后干预组（A2）、先造模对照组（B2）、空白组（c）。A1予苍柏湿毒清水煎剂（1g生药／m1）灌胃0．2mlbid;B1予生理盐水灌胃0．2mlbid,1周后,两组皮下注射雌二醇注射液0．2mg／周,共4周。第2次注射雌二醇后,阴道注射3代8型解脲支原体茵液20ul／d,共3次,1周后补种1次,造模成功后测量阴道黏膜IL-12浓度。A2及B2组先注射雌二醇0．2mg／周,共4周,第2次注射后阴道注射uu茵液20ul／d,共3d,1周后补种1次。造模成功后进行中药水煎剂灌胃,0．2mlbid,对照组予生理盐水灌胃,0．2mlbid,共7d。干预后进行阴道黏膜白介素12浓度检测。结果：白介素12浓度先灌药后造模组与模型组比,两组有显著性差异（P〈0。05）。先干预与后干预两组比较,两组无统计学差异（P〉0．05）。先造模后灌药组与其模型组比,两组有显著性差异（P〈0．05）,而两模型组之间比较,差异不显著（P〉0．05）。干预组与空白组之间比较,均无统计学差异（P〉0．05）;同时,后造模对照组与空白组之间比较,无统计学差异（P〉0．05）,而先造模对照组与空白组间,有统计学差异（P〈0．05）。结论：苍柏湿毒清水煎剂能够使小鼠阴道黏膜白介素12的浓度恢复至正常值左右,具有修复局部炎症损伤的作用。     

小鼠白念珠菌系统性感染中白介素 4 表达的研究

目的了解白介素4（IL－4）在白念珠菌系统性感染中所起的作用。方法建立健康小鼠及地塞米松诱导的免疫抑制小鼠系统性白念珠菌感染模型,用酶联免疫吸附试验（ELISA）及逆转录－聚合酶链反应分别检测脾内IL－4及mRNA水平,用平皿稀释法检测肾内菌落形成单位（CFU）,并记录平均生存时间。结果健康鼠致死量感染后3d、7d脾中IL－4蛋白水平分别为(124.8±24.1)pg/g、(262.8±21.8)pg/g(P<0.01),肾内带菌量分别为（21.25±6.13）×102CFU、（57.52±10.41）×102CFU（P<0101）;免疫抑制鼠组感染后3d、7d脾中IL-4蛋白水平分别为（85.3±18.8）pg/g、（140.7±37.2）pg/g（P<0.05）,肾内带菌量分别为（12.00±2.80）×102CFU、（68.75±13.81）×102CFU（P<0.01）。上述两组感染后3d、7d脾中mRNA水平表达趋势与其IL-4蛋白水平个似。致死量组平均生存时间16d,免疫抑制鼠组平均生存时间12.4d。结论IL-4可能参与实验性小鼠白念珠菌系统性感染的发病。     

雌激素对白念珠菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3表达的影响

目的:确定雌激素对白念珠菌诱导的小鼠腹腔巨噬细胞NLRP3炎性体基因表达的影响。方法:体外培养小鼠腹腔巨噬细胞,将其分为5组:空白对照组、白念珠菌组、白念珠菌+10~(-10)mol/L17β-雌二醇组、白念珠菌+10~(-9)mol/L 17β-雌二醇组和白念珠菌+10~(-8)mol/L17β-雌二醇组。荧光定量PCR检测细胞内NLRP3 mRNA表达;Western Blot检测细胞内NF-κBp65和caspase-1p20的活性;酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组细胞培养上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)的含量。结果:巨噬细胞在白念珠菌的刺激下,与空白对照组比较细胞内NLRP3 mRNA的表达、NF-κB和caspase-1p20活性和细胞培养上清液中的IL-1β含量均明显升高(P0.01);加入雌激素干预后,随着雌激素浓度的增高,细胞内NLRP3 mRNA表达、NF-κB和caspase-1p20活性、细胞培养上清液中的IL-1β含量明显低于对照组(P0.01)。结论:雌激素可能通过抑制NF-κB活性抑制白念珠菌诱导的NLRP3表达、caspase-1的活化和IL-1β的分泌。     

ICU机械通气患者胃管置入新方法的研究

目的探讨机械通气患者不同胃管置入方法一次插管成功率及对患者的不良影响。方法将279例气管插管患者随机分为常规组（A组）、头部前倾组（B组）和牵拉气管组（C组）各93例。观察并比较一次插管成功率,置管时间,插管前后心率（HR）、经皮血氧饱和度（SpO2）及插管过程中呛咳、鼻咽黏膜出血等不良反应发生率。结果①一次插管成功率比较,B组显著低于A、C组（均P〈0．01）,C组显著高于A、B组（均P〈0．01）：②置管时间,B组置管时间明显长于A、C组（均P〈0．01）;C组置管时间明显短于A、B组（均P〈0．01）;③置管后HR与各自置管前相比,C组无显著性改变（P〉0．05）,A、B组HR明显加快（P〈0．05,P〈0．01）;置管后SpO2与各自置管前相比．C组无显著变化．A、B组均显著降低（P〈0．05,P〈0．01）。④置管过程中恶心、呕叶、呛咳及鼻咽黏膜出血发生率,B组显著高于A、C组（P〈0．05．P〈0．01）,C组显著低于A、B组（均P〈0．01）。结论对气管插管患者在镇静状态下牵拉气管的同时置入胃管,准确性高、不良反应少。     

白念珠菌阴道炎鼠模型构建的研究

目的:不同条件下构建小鼠白念珠菌性阴道炎模型,为白念珠菌性阴道炎发病机制和防治研究提供平台。方法:(1)用同龄小鼠建立雌激素化,免疫抑制和正常对照鼠模型,观察不同时间点各模型小鼠阴道灌洗液真菌载量及阴道组织病理学变化。(2)再对雌激素化组中已自愈的小鼠进行再感染,观察再感染小鼠与初次感染同龄小鼠的真菌载量及阴道组织病理学的变化。结果:雌激素化组、免疫抑制组小鼠自第2天起阴道灌洗液真菌载量水平较高并持续至观察期末,与正常对照组比较前者P<0.05,后者P<0.01,而且从第4天起免疫抑制组明显高于雌激素化组(P<0.05);初发、复发组均高于正常对照组(P<0.05),初发与复发组之间差异无显著性(P>0.05)。阴道组织病理显示雌激素化、免疫抑制及复发感染小鼠在接种后第2天开始至21天,阴道黏膜可见芽生孢子或菌丝侵入,伴有较多的炎性细胞浸润。结论:几种条件下白念珠菌性阴道炎鼠模型构建是成功的,为念珠菌性阴道炎发病机制及防治的研究提供了较理想的平台。     

小鼠念珠菌性阴道炎模型中TSLP表达及其与IL-2,IL-10关系

目的探讨胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)在小鼠念珠菌性阴道炎发病机制中的作用。方法采用皮下注射雌二醇和阴道内接种白念珠菌悬液建立Balb/c小鼠念珠菌性阴道炎模型,用激光扫描共聚焦显微镜和ELISA检测实验组和对照组小鼠阴道组织中TSLP,IL-2,IL-10表达。结果实验组小鼠阴道组织中TSLP表达明显高于对照组(P0.01);IL-2水平在接种后7d明显增加(P0.01),14d时出现明显下降(P0.01);IL-10含量在接种后7d、14d均明显高于对照组(P0.01)。TSLP仅与IL-10表达呈显著正相关(P0.01)。结论 TSLP表达上调可能在念珠菌致病中起重要的免疫调节作用。     

单核细胞趋化蛋白-1及其受体在阴道念珠菌病小鼠模型中的表达

目的 探讨单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)及其受体CC趋化因子受体2(CC chemokine receptor 2.CCR2)在小鼠阴道念珠菌病发病中的作用.方法 建立阴道念珠菌病小鼠模型.以RT-PCR及ELISA方法检测小鼠阴道及腰淋巴结中MCP-1及CCR2的表达.结果 与正常小鼠相比,雌激素对MCP-1及CCR2的表达无明显影响.所有感染组小鼠阴道组织MCP-1的mRNA和蛋白水平均明显升高,其CCR2 mRNA水平亦相应升高;与之相反,所有感染组小鼠的引流腰淋巴结MCP-1的浓度与基础水平相比无明显改变,而雌激素处理感染组小鼠CCR2在接种后7～21d明显升高.结论 MCP-1及其受体CCR2可能在局部刚道黏膜白念珠菌感染中起一定的作用.     

外阴阴道念珠菌病患者阴道分泌物IL-12和IL-23的检测

目的探讨细胞因子IL-12和IL-23的表达水平与不同严重程度外阴阴道念珠菌病发病的关系。方法ELISA法检测轻中度、重度各组外阴阴道念珠菌病及复发性外阴阴道念珠菌病(RVVC)患者阴道分泌物中IL-12p70和IL-23p19的表达水平,以正常女性白念珠菌携带者为对照组。结果各组外阴阴道念珠菌病患者的IL-12p70和IL-23p19表达水平均低于对照组,且各组间比较差异均有显著性(F=13.486,P=0.000:F=11.869,P=0.000);组间两两比较,重度外阴阴道念珠菌病组和RVVC组IL-12p70的水平均低于对照组,差异有显著性(t=2.243,P=0.035;t=3.397,P=0.000);RVVC组IL-23p19的水平低于对照组,差异有显著性(t=3.289,P=0.000)。结论IL-12和IL-23的表达异常可能与外阴阴道念珠菌病的发病、病情严重程度和复发有关。     

外阴阴道念珠菌病小鼠模型阴道组织趋化因子MCP-1和MIP-2 mRNA水平测定

目的 探讨趋化因子在白念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道组织中的表达情况.方法 采用雌激素化小鼠念珠菌性阴道炎模型,另以雌激素化但未接种白念珠菌组、接种等量白念珠菌但未雌激素化组为对照组,动态观察小鼠阴道灌洗液的真菌生长情况,并在接种后不同时间随机摘取小鼠的阴道组织,半定量RT-PCR方法检测组织内单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)mRNA的表达情况.结果 与未雌激素化的小鼠比较,雌激素化并接种白念珠菌小鼠阴道灌洗液自第2天开始即可发现念珠菌生长并持续到接种后21d,自第4天起阴道组织内有高水平的MCP-1 mRNA表达,并持续高于另外两组直到观察期末.3组小鼠的MIP-2 mRNA表达水平在接种后第2天明显高于完全阴性对照组,但以后各时间点3组间两两比较差异无统计学意义.结论 MCP-1 mRNA高水平表达可能与白念珠菌持续的阴道感染过程有关,而MIP-2在感染过程中的作用不明显.     

小鼠系统性白念珠菌感染脾γ-干扰素水平测定

目的通过测定脾脏γ-干扰素含量在小鼠系统性白念珠菌感染不同时期水平,推测其在系统性白念珠菌感染过程中所起的作用。方法建立健康小鼠及环磷酰胺诱导的免疫抑制鼠系统性感染模型,用酶联免疫吸附试验(ELISA)测出脾脏γ-干扰素含量,用平皿系列稀释法检测肾内菌落形成单位(CFU),并记录平均生存时间。结果白念珠菌感染组小鼠脾脏γ-干扰素均在感染后7天达最高峰;其中亚致死量感染组(B组)γ-干扰素含量高于亚致死量白念珠菌感染及免疫抑制剂组(A组)(P<0.05),A组高于免疫抑制组(C组)(P<0.05);B组肾脏菌落计数明显低于A组(P<0.01),肾脏菌落计数与γ-干扰素水平呈明显负相关(P<0.01)。结论小鼠白念珠菌感染早期γ-干扰素是升高的,推测其有限制真菌生长、繁殖、增强机体抗白念珠菌作用。     

系统性尖端赛多孢感染小鼠干扰素γ表达的研究

目的 了解系统性尖端赛多孢感染小鼠干扰素γ(IFN-γ)的表达特征,探讨IFN-γ在系统性尖端赛多孢感染中所起的作用.方法 建立小鼠系统性尖端赛多孢感染模型,用酶联免疫吸附试验及逆转录-聚合酶链反应分别检测脾内IFN-γ蛋白质及mRNA水平,用平皿系列稀释法检测肾内菌落形成单位(cfu),并记录平均生存时间.结果 IFN-γ的表达:正常组为0.430±0.148(IFN-γ/G₃PDH,下同),致死量组第3天为0.211±0.124,第7天为0.386±0.180,均低于正常组,但两组比较,第3天P<0.05,第7天P>0.05;亚致死量组第3天为0.705±0.206,第7天为0.895±0.101,均高于正常组,两组比较第3天P<0.05,第7天P<0.01,且7d与3d比较P<0.01;免疫抑制组第3天为0.221±0.127,第7天为0.470±0.223,第3天结果低于正常组,两组比较第3天P<0.05,第7天P>0.05.此外,免疫抑制组均低于相应时间亚致死量组(第3天、第7天均P<0.01).肾内带菌量:致死量感染组第3天为(15.32±2.44)×10²cfu,第7天为(78.58±19.97)×10²cfu;免疫抑制组第3天为(10.16±1.52)×10²cfu,第7天为(65.72±18.64)×10²cfu;亚致死量组第3天为(5.51±1.66)×10²cfu,第7天为(1.29±0.49)1×10²cfu,致死量感染组及免疫抑制组肾内均有大量菌生长,亚致死量组肾内菌量较少.平均生存时间:致死量感染组平均13.6d死亡,免疫抑制组平均14.2d死亡,对照组和亚致死量组生存时间均超过45d.结论 健康鼠大量菌感染及免疫抑制鼠少量菌感染均可引起致死性感染,而IFN-γ在小鼠系统性尖端赛多孢感染中可能具有保护作用.     

IL-35在特应性皮炎样小鼠模型中的表达

目的：检测IL-35在特应性皮炎小鼠模型中的表达。方法：将30只BALB/c小鼠随机分为模型组及对照组,每组15只,使用丙酮：橄榄油3：1溶液作为基质配置0.5% 2,4-二硝基氟苯（DNFB）经皮致敏建立特应性皮炎样小鼠模型。造模成功后使用ELISA法检测小鼠血清中IL-35、IL-4、IFN-γ、IL-17的水平,采用RT-PCR法检测皮肤组织中IL-12p35mRNA及EBI3mRNA水平。结果：模型组小鼠背部皮肤出现明显炎症,病理表现为表皮增厚、海绵水肿、真皮浅层炎细胞浸润。模型组小鼠血清中IL-35水平明显低于对照组（P<0.05）,IL-4、IL-17水平明显高于对照组（P<0.05）且IL-35与IL-17水平呈负相关（P<0.05）;模型组小鼠背部皮损组织中IL-12p35及EBI3mRNA水平均低于对照组（P<0.05）。结论：IL-35可能在特应性皮炎发病中发挥作用。     

念珠菌性阴道炎模型小鼠阴道黏膜中CD11c+树突状细胞的变化

目的:研究白念珠菌感染后,小鼠阴道黏膜树突状细胞(DC)的变化。方法:8~10周龄ICR系小鼠,建立激素依赖型小鼠念珠菌性阴道炎模型,于感染后第2、4、7、14、21d取材,进行阴道灌洗液真菌载量分析及组织病理观察并用免疫组化方法检测小鼠阴道黏膜DC的变化。结果:实验组小鼠阴道灌洗液真菌载量显示,自接种后第2天起即有高水平的CFU计数,并持续到观察期末;阴道组织病理学检查可见大量菌丝附着黏膜表面和黏膜组织内,并有炎性细胞浸润;白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜内CD11c DC平均光密度值明显高于对照组(P<0.05)。结论:白念珠菌感染后小鼠阴道黏膜CD11c DC的表达增高,CD11c DC可能参与宿主抗念珠菌感染的免疫机制。