17β-雌二醇对肾上腺素诱导的心肌细胞肥大及原癌基因c-fos表达的影响

目的利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观察17β雌二醇(17βestradiol)对肾上腺素(phenylephrine)诱导的心肌细胞肥大及其原癌基因cfos蛋白表达的影响。方法以培养的乳鼠心肌细胞为模型并分组给药后,用计算机图像分析软件测量心肌细胞表面积,免疫细胞化学方法检测心肌细胞原癌基因cfos的蛋白表达。结果17β雌二醇明显抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积增大,同时减弱肥大心肌细胞原癌基因cfos的蛋白表达。结论17β雌二醇可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞肥大,其作用机制可能和抑制原癌基因cfos的蛋白表达有关。     

雌孕激素对宫颈癌细胞体外生长的影响

目的研究17-β雌二醇（E2）和孕酮（P）对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响。方法采用MTT法检测不同浓度的E2、P和E2＋P作用24h、48h、72h后对Hela细胞的影响。结果24h、48h和72h E2浓度为10^-5mol／L时刺激Hela细胞增殖;4hP浓度为10^-6～10^-5mol／L时,以及48h和72hP浓度为10^-7～10^-5mol／L时出现抑制作用;24h E2＋P浓度为10^5mol／L时,以及48h和72h E2＋P浓度为10^-7～10^-5mol／L时均抑制细胞增殖。结论E2促进Hela细胞增殖,P则是抑制作用,E2＋P联合也出现抑制作用。     

雌、孕激素对卵巢癌细胞转化生长因子α蛋白表达的影响

目的：研究雌、孕激素作用后卵巢癌细胞转化生长因子α（TGF—α）蛋白表达的变化。方法：用细胞计数法检测不同浓度雌二醇（E2）、孕激素（P）对卵巢癌细胞PE04、PE014生长的影响,再用Western Blot方法检测两细胞TGF—α蛋白表达的变化。结果：E2刺激PE04细胞生长（P〈0．05）,轻度抑制PE014细胞生长（P〉0．05）;可以增加PE04细胞中TGF—α蛋白表达,不影响PE014细胞中TGF—α蛋白表达。P抑制两细胞株生长,并降低细胞中TGF—α蛋白表达。结论：雌激素可能通过雌激素受体（ER）介导上调TGF—α蛋白分泌,刺激卵巢癌细胞生长;孕激素则可能通过孕激素受体（PR）介导降调节TGF—α蛋白分泌,抑制卵巢癌细胞生长。     

雌、孕激素联合应用对豚鼠心室乳头肌动作电位的影响

目的：观察不同浓度17-β雌二醇(17-β-estradiol，E2)与孕酮(progesterone，P)联合运用对豚鼠心室乳头肌细胞动作电位的影响。方法：采用常规玻璃微电极技术记录豚鼠心室乳头肌细胞动作电位。结果：(1)E2与P单独应用可使动作电位时程(APD90、APD)延长，APD20缩短．APA、Vmax降低。(2)不同浓度E2与P联合应用，P可加强E2的效应，这种作用可能呈现浓度依赖性。结论：E2与P可能抑制钾、钠通道，应用时应以低浓度为宜。     

17β-雌二醇对体外机械牵张诱导心肌细胞肥大的影响

目的:研究17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对体外机械牵张诱导的心肌细胞肥大的影响。方法:以机械牵张刺激体外培养的新生大鼠心肌细胞,建立心肌细胞肥大模型,采用免疫荧光方法分析心肌细胞表面积、Western blot方法检测肥大指标之一β-MHC的表达,以观察E2对机械牵张诱导的心肌细胞肥大的影响,并采用Western blot方法检测心肌细胞整合素β1(inte-grinβ1)表达的变化。结果:与对照组相比,机械牵张24 h后,心肌细胞表面积、心肌细胞胎儿型蛋白β-MHC表达增加,表明机械牵张24 h可诱导心肌细胞肥大。同时,机械牵张24 h心肌细胞整合素β1水平亦显著增加。100 nmol/L E2预处理30 min可明显减轻机械牵张诱导的心肌细胞表面积和β-MHC蛋白水平的增加,降低机械牵张诱导的心肌细胞整合素β1增加,该效应可被雌激素受体非特异性拮抗剂ICI182780逆转。结论:一定水平的E2可改善机械牵张诱导的心肌细胞肥大反应,并且能降低机械牵张诱导的integrinβ1表达的增加。     

TGF-β1诱导大鼠心肌细胞肥大中钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号途径研究

目的：探讨TGF-β1诱导的大鼠心肌细胞肥大中钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ信号途径的信号表达.方法：建立TGF-β1诱导的体外大鼠心肌细胞肥大模型.PI染色标记细胞双链RNA法检测心肌细胞RNA表达量,间接检测心肌细胞肥大.实时荧光定量PCR检测心肌细胞肥大相关基因肌球蛋白重链β亚型（β-MHC）的表达.Western blotting检测心肌细胞中p-CaMKⅡ蛋白表达.结果：TGF-β1可诱导体外培养心肌细胞肥大基因的表达,β-MHC的表达明显高于对照组（P＜0.01）.PI染色TGF-β11组PI含量明显增高（P＜0.01）,TGF-β13 μg/L组心肌细胞内PI含量最高（80.57±3.56）;与对照组相比,TGF-β1可明显上调的表达p-CaMKⅡ（108.83±12.15 vs 10.6±1.35,P＜0.01）,并于TGF-β1诱导2h表达达峰.结论：TGF-β1可诱导心肌细胞肥大的形成,此过程中CaMKⅡ蛋白表达明显增加.     

神经肽Y、维拉帕米对大鼠心肌细胞肥大的影响

通过测定培养的心肌细胞~3H-leucine(~3H-亮氨酸)掺入率和膜片钳全细胞记录方法记录Ca~(2 )电流(I_(ca)),研究神经肽Y(NPY)、维拉帕米对大鼠心肌细胞肥大的影响。结果:0.1μmol/L NPY促使培养的心肌细胞~3H-leucine掺入率增大,达(136.0±4.4)min~(-1),与对照组(91.0±4.O)min~(-1)相比,差异有显著性意义(p<0.01)。10nmol/L维拉帕米与NPY共同作用于心肌细胞24h,可使NPY促~3H-leucine掺入率增大的作用受到抑制(P<0.01)。NPY可显著增大心肌细胞I_(ca),为(12.0±3.1)pA,与对照组(5.5±2.4)pA比较,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:NPY促使培养的心肌细胞蛋白质合成率增大的作用可被维拉帕米阻断,而NPY增加细胞内游离钙,触发心肌蛋白质合成增加,可能是促进心肌肥大的机制之一。     

机械刺激诱导心肌细胞肥大的分子机制

机械负荷过度将导致病理性心肌肥大并严重危害人类健康。机械刺激作用于心肌细胞后,可通过细胞表面的机械感受器（如整合素）或分泌细胞因子（血管紧张素Ⅱ及内皮素等）,激活一系列信号通路,主要的有丝裂原激活蛋白激酶通路、詹纳斯激酶／信号转导蛋白转录激活因子通路及由钙离子介导的信号通路。心肌细胞将机械信号转化为化学信号,调节肥大相关基因的表达,致使心肌细胞发生肥大。     

10-23脱氧核酶对新生大鼠心肌细胞ET-1mRNA表达的影响

目的:将体外筛选具有切割内皮素-1(endothelin-1,ET-1)mRNA的10-23脱氧核酶转染原代培养新生大鼠心肌细胞,观察其对心肌细胞ET-1 mRNA的影响.方法:体外转录ET-1全长RNA底物,设计并合成5条ET-1 10-23脱氧核酶(DZ1～DZ5),其5‘及3‘端各有2个核苷酸硫代修饰,体外切割ET-1 RNA底物,筛选有效脱氧核酶;5‘标记荧光素FAM的10-23脱氧核酶瞬间转染新生大鼠心肌细胞以观察对10-23脱氧核酶的摄取;采用半定量RT-PCR检测ET-1基因的表达.结果:DZ2、DZ3、DZ4及DZ5在体外均可切割RNA底物,其中DZ4两侧结合区结合自由能之差最大,其切割效率最高,达83.5%,而DZ3两侧结合区结合自由能之差最小,其切割效率亦最低(47.3%);瞬间转染新生大鼠心肌细胞24h,心肌细胞内可见10-23脱氧核酶的分布,半定量RT-PCR结果显示转染24h后的DZ4(0.2μmol/L)可减少血清诱导肥大心肌细胞ET-1mRNA及细胞总蛋白,降低细胞活力与蛋白质合成速率(P＜0.05).结论:本研究设计的10-23脱氧核酶能切割体外转录的ET-1全长RNA底物,转染心肌细胞后,可抑制ET-1 mRNA的表达,减缓血清诱导心肌细胞肥大,10-23脱氧核酶两侧结合区自由能的差值与切割效率有关.     

转化生长因子β1与大鼠心肌细胞肥大关系的实验研究

目的 探讨转化生长因子β1(TGF—β1)与大鼠心肌细胞肥大的关系。方法 培养新生大鼠心肌细胞，检测[^3H]—亮氨酸掺入量和心房利钠因子(ANF)的表达判断心肌细胞肥大，同时检测肥大心肌细胞TGF—β1表达。结果 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和TGF—β1均能增加心肌细胞[^3H]—亮氨酸掺入和ANF表达，两者合用效果更显著；AngⅡ还促进心肌细胞自分泌TGF—β1。结论 AngⅡ诱导心肌细胞分泌TGF—β1，AngⅡ和TGF—β1在诱导心肌细胞肥大中有协同作用。     

苦参碱对内皮素诱导心肌细胞肥大及肌球蛋白基因表达的影响

目的：探讨苦参碱对内皮素（ET）诱导心肌细胞肥大及肌球蛋白重链（MHC）基因表达的影响。方法：采用测定心肌细胞直径、数目、^3H－亮氨酸(^H-Leu）掺入率及分子杂交的方法,观察内皮素（ET）对大鼠培养心肌细胞肥大及MHC基因表达的影响,并用苦参碱治疗。结果：ET显著促进心肌细胞直径增大（P＜0．05）及^3H-Leu掺入率的增加（P＜0．01）,并诱导心肌细胞β-MHC基因表达,α－MHC基因表达相对减少,苦参碱对ET诱导心肌细胞直径增大及^3H-Leu掺入率增加作用无明显影响,但显著抑制ET致心肌细胞MHC同功蛋白的病理性转换作用,即增加α－MHC基因表达,减少β－MHC基因表达。结论：苦参碱对ET诱导心肌细胞肥大作用无明显影响,但显著逆转MHC同功蛋白的病理性转换作用,故苦参碱在心肌细胞肥大的防治中仍有一定价值。     

葛根素对异丙肾上腺素诱导的心肌细胞肥大及凋亡的影响

[摘要]目的利用体外培养的大鼠乳鼠心肌细胞,探讨葛根素(puerarin,Pue)对异丙肾上腺素(isoproterenol,ISO)所致心肌细胞肥大和心肌细胞凋亡的影响。方法新生大鼠心肌细胞培养,除对照组外,分别给予ISO(10-5mol/L)、Pue(10-6mol/L)、ISO(10-5mol/L)+Pue(10-6mol/L)、ISO(10-5mol/L)+普萘洛尔(propranolol,Pro, 2×10-6 mol/L),检测培养心肌细胞蛋白质含量、细胞体积、蛋白质的合成及细胞凋亡率。结果和对照组相比,ISO可使心肌细胞总蛋白含量、体积和凋亡率明显增加(P<0.01);Pue可以抑制由于ISO诱导所出现的上述情况,结果与Pro相近。结论Pue能对抗ISO引起的心肌肥大及细胞凋亡,此效应可能是葛根素抑制心肌肥厚发生的保护机制之一。     

神经肽Y(NPY)诱导大鼠心肌细胞肥大的效应观察

目的 :观察神经肽Y(NPY)诱导大鼠心肌细胞肥大效应。方法 :用不同浓度NPY(10nmol/L、10 0nmol/L)刺激心肌细胞 ,应用3 H Leu掺入量法测定心肌细胞蛋白质合成速率、RT PCR法测心肌细胞c junmRNA表达。结果 :1.心肌细胞3 H Leu掺入量测定 :较大剂量NPY刺激心肌细胞蛋白合成速率显著增加。与对照组相比 ,NPY10nmol/L组3 H Leu掺入量有所增高 ,但差异无显著性 ,而NPY10 0nmol/L组心肌细胞 3H Leu掺入量较对照组明显增高 (P <0 .0 5 )。 2 .心肌细胞内c junmRNA表达 :NPY组心肌细胞c junmRNA的RT PCR产物量明显高于对照组(P <0 .0 0 1)。结论 :NPY刺激心肌细胞蛋白质合成增加、心肌细胞原癌基因 (肥大早期反应基因 )c junmRNA表达增加 ,提示NPY可通过其生长因子样效应 ,诱导心肌细胞肥大。     

蛋白酶体抑制剂MG132抑制体外培养心肌细胞肥大的实验研究

目的研究蛋白酶体抑制剂MG132对体外培养的大鼠心肌细胞肥大的影响。方法采用[3H]-亮氨酸参入率测定心肌细胞蛋白质合成代谢,采用IPP 6.0图像分析软件分析心肌细胞表面积,以及用RT-PCR检测β-肌球蛋白重链(β-MHC)表达。结果 MG132预处理逆转了苯肾上腺素诱导的心肌细胞[3H]-亮氨酸参入率增加(P<0.01)、表面积增大(P<0.01)和β-MHC mRNA表达上调(P<0.05)。结论 MG132能够抑制心肌细胞肥大,具有心肌保护作用。     

神经肽Y诱导大鼠心肌细胞肥大的钙信号机制

目的 探讨钙依赖的信号途径在神经肽Y（NPY）诱导心肌肥大中的作用。方法 NPY刺激乳鼠心肌细胞，加入钙调神经磷酸酶（CaN）抑制剂环胞素A（CsA）进行干预（5μg／mL），观察心肌细胞蛋白合成速率（^3H-Leu掺入量）、早期肥大反应基因（c-jun mRNA）表达以及胞浆和核内[Ca^2＋]i的变化。结果 经100nmol／L NPY刺激24h后，心肌细胞^3H-Leu掺入量、c-jun mRNA表达以及胞浆和核内[Ca^2＋]i均明显高于不加药对照组（P〈0．05，P〈0．01）；而CsA干预后的心肌细胞^3H-Leu掺入量和c-jun mRNA表达与对照组比较则无显著差别。结论 Ca^2＋／CaM依赖的CaN信号途径在NPY诱导心肌细胞肥大中起重要作用；NPY刺激细胞内[Ca^2＋]i增加，可能是活化CaN信号途径的始动环节。     

非对称二甲基精氨酸诱导大鼠心肌细胞肥大的作用

目的：探讨非对称二甲基精氨酸（ADMA）诱导心肌细胞肥大的作用机制。方法：原代取材新生SD大鼠的心肌细胞进行细胞培养。原代培养的第4天，用不同浓度的ADMA（4～16μmol／L）和L-精氨酸（L-arg）（0．8～3．2mmol/L）处理心肌细胞，24h后测定细胞上清液中一氧化氮（NO）的含量、一氧化氮合酶（NOS）的活性，细胞内氧活性物质（ROS）的水平、RNA含量、总蛋白量以及心肌细胞表面积。结果：①4μmol／L，8μmol／L，16μmol／L的ADMA分别能剂量依赖性使细胞内NO的含量减少，NOS的活性降低（P〈0．05）；②16μmol／L的ADMA能使心肌细胞内ROS的水平升高、细胞内RNA含量和总蛋白含量增加以及心肌细胞表面积增加（P〈0．05）；⑧0．8mmol／L，1．6mmol／L，3．2mmol/L的L-arg对ADMA诱导的心肌细胞内ROS水平的升高、细胞内RNA含量和总蛋白含量的增加以及心肌细胞表面积的增加产生剂量依赖性的抑制作用（P〈0．05）。结论：ADMA能够诱导心肌细胞肥大，NO的前体L-arg能够剂量依赖性地抑制ADMA诱导的心肌细胞肥大。     

维拉帕米对高糖与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大的影响

目的 利用体外培养的乳鼠心肌细胞,观察维拉帕米对高浓度葡萄糖与去甲肾上腺素共同诱导的肥大心肌细胞的影响,并推测其作用机制。方法 以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后,用[^3H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成;利用计算机图象分析系统测心肌细胞的体积。结果 一定浓度的维拉帕米在对高糖和去甲肾上腺素诱导的肥大心肌细胞的蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。结论 维拉帕米能有效抑制高糖与去甲肾上腺素诱导的心肌细胞肥大。     

探析黄芪多糖对脂多糖诱导大鼠心肌细胞肥大的影响

目的：通过临床实践,探析黄芪多糖对脂多糖诱导大鼠心肌细胞肥大的影响。方法选取新生的SD大鼠作为研究对象,将其细胞按照规定培养2d之后,同时设定对照组、模型组,按照黄芪多糖的浓度设定为低、中、高质量组,采用先进的仪器检测对其检测。结果经过以上实验检测,与对照组相比,LPS 1 mg/L能够让机体的心肌细胞的体积明显地变大,心房利钠多肽（ANP）mRNA的表达能力明显地提高,细胞分泌的TNF-α蛋白的含量也呈现一个直线上升的趋势,并且机体的心肌细胞内[Ca 2＋]i的短时间的峰值有显著地增大（P＆lt;0.05）。在与模型组的比较中,黄芪多糖的低、中、高质量组在预先服药之后,能够有效地抑制机体心肌细胞体积得增大,让机体细胞所产生的TNF-α得到明显地降低,心房利钠多肽（ANP）mRNA的表达能力明显地下降（P＆lt;0.05）。结论黄芪多糖对脂多糖诱导大鼠心肌细胞肥大可以起到非常好的保护效果,改善机体的生活质量,其机理与降低[Ca 2＋]i、抑制TNF-α的产生等有着密切地联系,对于一些机理仍需进一步探索。