蛇床子素/壳聚糖衍生物胶束对破骨细胞分化及其特异性分子表达的影响

目的观察蛇床子素(osthale,OST)/壳聚糖衍生物胶束(osthole-loaded N-octyl-O-sulfonyl chitosan micelles,NSC-OST)对破骨细胞分化及其特异性分子表达的影响,初步探讨其抗骨质疏松的分子机制。方法通过使用大鼠骨髓单核细胞体外建立破骨细胞诱导模型;将细胞分为空白组、对照组、OST组、NSC-OST组,以巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)和核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor kappa-Βligand,RANKL)诱导细胞分化,药物组以相同的有效浓度干预细胞;采用CCK-8法观察NSC-OST对细胞活性的影响;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法测定阳性细胞数;制备骨磨片并将其与细胞共培养,通过甲苯胺蓝染色测定各组骨吸收陷窝面积;通过扫描电镜观察骨吸收陷窝的微观结构;使用荧光素酶报告基因法观察NSC-OST对细胞中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)转录表达的影响;应用Western blot法检测NSC-OST对细胞中NFATc1等相关破骨特异分子蛋白表达的影响。结果 CCK-8法发现OST和NSC-OST对骨髓前体细胞均没有细胞毒性;对照组、OST组、NSC-OST组TRAP染色阳性细胞数分别为148.8±12.5、107.6±9.7、75.0±7.4 (个),OST和NSC-OST均可抑制破骨细胞的生成(P0.05),但NSC-OST的抑制效果更明显(P0.05);该3组诱导的破骨细胞生成的骨陷窝吸收面积分别为:1 344 942±164 150、824 080±37 484、597 716±14 659 (μm2/片),两药物组的骨吸收活性均受到明显抑制(P0.05),且NSC-OST组的抑制效果更明显(P0.05);对照组、Cs A组、OST组和NSC-OST组的荧光素酶报告基因表达量分别为29 174±1 540、9 073±824、21 661±1 430、13 434±879,两药物组均可明显抑制NFAT的转录表达,且NSC-OST组的抑制效果更好;与对照组相比,药物组均可抑制破骨特异分子NFATc1、Fos蛋白(cellular oncogene fos,c-Fos)、组织蛋白酶K (cathepsin K,CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)的蛋白表达(P0.05),且NSC-OST组的效果更显著(P0.05)。结论NSC-OST可以抑制破骨细胞的分化以及NFATc1等相关破骨特异分子的表达,且其效果优于OST。     

蛇床子素/壳聚糖衍生物胶束对破骨细胞分化及其特异性分子表达的影响

目的观察蛇床子素(osthale,OST)/壳聚糖衍生物胶束(osthole-loaded N-octyl-O-sulfonyl chitosan micelles,NSC-OST)对破骨细胞分化及其特异性分子表达的影响,初步探讨其抗骨质疏松的分子机制。方法通过使用大鼠骨髓单核细胞体外建立破骨细胞诱导模型;将细胞分为空白组、对照组、OST组、NSC-OST组,以巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stimulating factor,M-CSF)和核因子κB受体活化因子配基(receptor activator of nuclear factor kappa-Βligand,RANKL)诱导细胞分化,药物组以相同的有效浓度干预细胞;采用CCK-8法观察NSC-OST对细胞活性的影响;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)染色法测定阳性细胞数;制备骨磨片并将其与细胞共培养,通过甲苯胺蓝染色测定各组骨吸收陷窝面积;通过扫描电镜观察骨吸收陷窝的微观结构;使用荧光素酶报告基因法观察NSC-OST对细胞中活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells,NFAT)转录表达的影响;应用Western blot法检测NSC-OST对细胞中NFATc1等相关破骨特异分子蛋白表达的影响。结果 CCK-8法发现OST和NSC-OST对骨髓前体细胞均没有细胞毒性;对照组、OST组、NSC-OST组TRAP染色阳性细胞数分别为148.8±12.5、107.6±9.7、75.0±7.4 (个),OST和NSC-OST均可抑制破骨细胞的生成(P<0.05),但NSC-OST的抑制效果更明显(P<0.05);该3组诱导的破骨细胞生成的骨陷窝吸收面积分别为:1 344 942±164 150、824 080±37 484、597 716±14 659 (μm2/片),两药物组的骨吸收活性均受到明显抑制(P<0.05),且NSC-OST组的抑制效果更明显(P<0.05);对照组、Cs A组、OST组和NSC-OST组的荧光素酶报告基因表达量分别为29 174±1 540、9 073±824、21 661±1 430、13 434±879,两药物组均可明显抑制NFAT的转录表达,且NSC-OST组的抑制效果更好;与对照组相比,药物组均可抑制破骨特异分子NFATc1、Fos蛋白(cellular oncogene fos,c-Fos)、组织蛋白酶K (cathepsin K,CTSK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartrate-resistant acid phosphatase,TRAP)的蛋白表达(P<0.05),且NSC-OST组的效果更显著(P<0.05)。结论NSC-OST可以抑制破骨细胞的分化以及NFATc1等相关破骨特异分子的表达,且其效果优于OST。     

雌激素对体外培养破骨细胞功能的影响

目的　探讨雌激素对体外培养破骨细胞功能的影响。　方法　利用酶动力学法测定培养基中酸性磷酸酶 (ACP)和抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)活性 ;共聚焦显微镜观察破骨细胞内氢离子随雌激素浓度的变化情况 ;LeicaQuantimet 5 0 0图像分析系统对骨吸收陷窝进行图像分析 ;扫描电镜观察骨吸收陷窝变化。　结果　随着雌激素浓度的升高 ,处理组与对照组ACP和TRAP的活性分别从(1 6 9± 0 13)U/L和 (1 6 0± 0 14)U/L降低到 (1 16± 0 31)U/L和 (0 93± 0 34)U/L(均为P <0 0 1) ,骨吸收陷窝的数目与面积从 (13 2 5± 1 5 2 )个 /片和 (4 82 2 7± 2 2 5 2 3) μm2 减少到 (4 6 8± 0 2 4)个 /片与(35 6 35± 145 41) μm2 ,处理组与对照组比较差异具有显著性意义 (P <0 0 1)。破骨细胞相对荧光值经过短暂的下降后持续上升 ,在第 12 0 0s时达到最高值。　结论　雌激素能够抑制氢离子释放 ,同时能改变ACP和TRAP活性 ,因而能直接抑制破骨细胞的骨吸收功能。     

Light诱导类风湿关节炎滑膜细胞向破骨细胞转化

目的 观察Light在类风湿关节炎(RA)滑膜细胞向破骨细胞转化过程中的作用.方法 取8例RA患者滑膜组织,胶原酶消化获取滑膜细胞,每例滑膜细胞分成5份培养,第1组加入巨噬细胞集落刺激因子(MCSF)作阴性对照,第2组加入MCSF和LIGHT,第3组加入MCSF和核因子(NF)-κB受体激动剂配体(RANKL),第4组加入MCSF、LIGHT和RANKL,第5组加入LIGHT.体外培养2周后,行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,F肌动蛋白(F-actin)染色以及象牙片上骨吸收陷窝观察破骨细胞的形成和活性.结果 第1组和第5组TRAP(-),F-actin(-),象牙片上无骨吸收陷窝形成;第2组TRAP(+),F-actin(+),骨陷窝形成(+),多核破骨细胞呈圆形和椭圆形,体积较小,骨陷窝分散,体积较小;第3组TRAP(++).F-actin(++),骨陷窝形成(++),多核破骨细胞体积大,骨陷窝较多,体积大,形态不规则;第4组TRAP(+++),F-actin(+++),骨陷窝形成(++++),多核破骨细胞更多,骨陷窝大且有融合趋势.结论 Light能诱导RA滑膜细胞向破骨细胞转化,并能促进RANKL诱导滑膜细胞向破骨细胞转化的能力.     

降钙素对体外培养破骨细胞功能的影响

目的　观察降钙素对体外培养破骨细胞功能以及成骨细胞的骨保护素 (OPG)、细胞核因子 κB受体活化因子配基 (RANKL)的表达的影响。方法　分别用酶消化法和机械分离获得新生SD大鼠成骨细胞、破骨细胞 ,在培养液中分别加入不同浓度的降钙素 ,以抗酒石酸酸性磷酸酶 (TRAP)染色观察破骨细胞数目、形态 ,Image ProPlus图像软件分析骨片上骨吸收陷窝的数目和面积。用RT PCR方法观察成骨细胞OPG、RANKL的表达。结果　各组破骨细胞数目随着降钙素浓度增加而减少 (P <0 .0 5 )。骨片培养5天 ,吸收陷窝计数的结果显示 ,10 -14 mol/L以上浓度降钙素对破骨细胞吸收功能均有明显抑制作用 ,并呈剂量相关性。 10 -12 mol/L组陷窝面积为对照组的 49% (P <0 .0 1) ,10 -8mol/L组为对照组的 3 0 % (P <0 .0 1)。降钙素组破骨细胞OPGmRNA表达较对照组升高 ,RANKL降低 (均P <0 .0 5 )。结论　除了直接作用于破骨细胞外 ,降钙素还通过影响成骨细胞上OPG、RANKL的分泌间接调控破骨细胞功能 ,抑制骨吸收。     

蛋白酶体抑制剂MG-132阻碍破骨细胞分化成熟的研究

目的 探讨蛋白酶抑制剂MG-132对破骨细胞分化成熟过程的影响. 方法分离、培养新生兔四肢长骨破骨细胞,实验分4组:对照组、MG-132 0.001 mmol/L培养组、0.01 mmol/L培养组及0.1 mmol/L培养组.于培养第2、5、8 d取细胞玻片、皮质骨片进行HE、甲苯胺蓝、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜下观察染色阳性细胞和骨片吸收陷窝,扫描电镜下观察吸收陷窝形态. 结果 (1)与对照组(第5天:46.8±3.4,第8天:34.64±4.1)比较,MG-132 0.001 mmol/L培养组、0.01 mmol/L培养组及0.1 mmol/L培养组破骨细胞计数在培养5 d后明显降低,分别为40.4±4.6(P＜0.05)、38.4±3.9(P＜0.05)、31.9±5.6(P＜0.01);(2)破骨细胞计数与蛋白酶抑制剂MG-132浓度呈负相关(r=-0.342,P＜0.01);(3)与对照组比较,MG-132 0.01 mmol/L培养组及0.1 mmol/L培养组骨片骨陷窝计数在培养第2、5、8天时,均明显减少(P＜0.05),0.001 mmol/L培养组与对照组比较差异无统计学意义. 结论 蛋白酶抑制剂MG-132可阻碍破骨细胞的分化成熟,抑制其蚀骨作用,并呈剂量依赖性.     

葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞骨吸收功能的影响

目的 观察葡萄糖对大鼠骨髓破骨细胞骨吸收功能的影响,探讨糖尿病骨质疏松的发病机制.方法 用巨噬细胞集落刺激因子、RANKL诱导大鼠骨髓单个核细胞分化为破骨细胞,同时给予不同浓度的葡萄糖(0、5.5、15、25 mmol/L)干预,通过观察骨吸收陷窝数量和面积比及破骨细胞膜表面整合索αvβ3(CD61)表达水平分析葡萄糖对破骨细胞骨吸收功能的影响.结果 (1)高糖(25 mmoL/L)组培养7 d骨吸收陷窝数量和面积比与其他3组相比明显增多(P＜0.05或P＜0.01).(2)高糖组破骨细胞膜表面CD61表达量及平均荧光强度3 d时与其他3组相比均明显上调(P＜0.05或P＜0.01);5、7 d时与对照组(0 mmol/L)相比明显上调(P＜0.05).结论 高糖可增强破骨细胞的骨吸收功能,这可能是糖尿病骨质疏松的发病机制之一.     

罗格列酮对破骨细胞生成的影响

目的探讨罗格列酮对破骨细胞生成的影响。方法取C57BIM6小鼠骨髓内单个核细胞,用细胞核因子kappaB受体活化因子配基（RANKL）及巨噬细胞集落刺激因子（M—CSF）诱导其向破骨细胞分化,在诱导开始时即分成3组：空白对照组（G1）,0．5μmoL／L罗格列酮组（G2）,2．0μmol／L罗格列酮组（G3）,诱导结束后进行抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色、检测TRAP活性以及实时PCR检测相关基因的表达。应用单因素方差分析进行统计学分析。结果破骨细胞生成的数目在G2组[（54±5）个]、G3组[（72±5）个]均高于G1组[（32±5）个],差异有统计学意义（F=82．43,P〈0．05）,TRAP活性也高于对照组（G1：2．32±0．14,G2：2．83±0．08,G3：3．35±0．10,F=108．12,P〈0．05）;过氧化物酶增殖物激活受体-γ（PPAR-γ）、组织蛋白酶K、c-fos与c-jun基因表达也高于对照组,且随着罗格列酮的浓度升高,相关基因的表达也增高（F值分别为33．50、37．46、53．73、39．77,均P〈0．05）。结论罗格列酮可能通过促进细胞增殖而促进破骨细胞生成,这司能是罗格列酮导致骨丢失的重要原因之一。     

糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响

目的　观察糖基化终末产物 (AGEs)对破骨细胞骨吸收功能的影响。方法　用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGEs,采用甲苯胺蓝染色和图像分析评价AGE对破骨细胞形成骨吸收陷窝的影响。结果　低浓度AGEs(50～ 2 0 0 μg/ml)对骨吸收陷窝的面积和数目无明显影响 ;只有高浓度AGEs(50 0～ 1 0 0 0 μg/ml)才能促进骨吸收陷窝面积的扩大和数目增加 (P <0 .0 5)。结论　AGE可能促进破骨细胞的骨吸收功能     

RANKL诱导破骨细胞前体细胞分化成熟

目的 用核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)诱导破骨细胞前体细胞分化成熟,建立获取成熟破骨细胞的方法.方法 用破骨细胞前体细胞RAW264.7细胞为模型,RANKL诱导培养4～9 d,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色观察TRAP阳性多核细胞形成,罗丹明-鬼笔环肽荧光染色观察纤维性肌动蛋白(F-actin)环,DAPI染色观察细胞核,甲苯胺蓝染色观察牛骨片表面的吸收陷窝情况.结果 RANKL可诱导RAW264.7细胞形成TRAP染色阳性的多核细胞,形成F-actin环,骨片吸收陷窝明显.结论 RANKL可诱导RAW264.7细胞向成熟破骨细胞分化,该诱导模型可用于破骨细胞分化研究.     

氟铝及联合作用对体外培养大鼠破骨细胞数量及骨吸收功能的影响

目的 观察单纯氟、铝及氟铝联合作用对体外培养大鼠破骨细胞功能的影响,探讨其作用机制.方法 机械分离法作用于新生SD大鼠四肢长骨,于TC199培养液(含10％胎牛血清)中获得破骨细胞和骨髓基质细胞,将破骨细胞接种于96孔培养板和象牙薄切片培养,骨髓基质细胞接种于6孔培养板培养.2h后换液并染毒(氟化钠和氯化铝),分为对照组(氟化钠和氯化铝浓度均为0 mol/L)、氟组(氟化钠1.0×10-4 mol/L)、铝组(氯化铝1.0×10-5 mol/L)和氟铝联合组(氟化钠1.0×10-4 mol/L,氯化铝1.0×10-5 mol/L).培养5d后,对培养板中破骨细胞进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,光镜下检查破骨细胞数目;象牙薄切片经1％甲苯胺蓝染色,光镜下分析破骨细胞骨吸收陷窝面积.骨髓基质细胞染毒培养8h后提取总RNA,实时荧光PCR法测定骨保护素(OPG)和细胞核因子κβ受体活化因子配体(RANKL)的表达量水平.结果 ①氟、铝、氟和铝的交互作用对破骨细胞数量均有影响(F值分别为7.15、6.56、7.98,P均＜0.05),氟组、铝组及氟铝联合组破骨细胞数量[(136.9±22.99)、(135.4±23.5)、(163.0±24.4)个/孔]均高于对照组[(92.5±22.1)个/孔,P均＜0.05],氟铝联合组高于氟组和铝组(P均＜0.05).②氟组、铝组及氟铝联合组对破骨细胞骨吸收陷窝面积均有影响(F值分别为10.47、12.64、14.29,P均＜0.05),氟组、铝组及氟铝联合组骨吸收陷窝面积[(0.242±0.031)、(0.293±0.026)、(0.333±0.016)mm2/片]均高于对照组[(0.088±0.030)mm2/片,P均＜0.05],氟铝联合组高于氟组和铝组(P均＜ 0.05).③氟、铝、氟和铝的交互作用对RANKL/OPG mRNA表达量的比值均有影响(F值分别为8.15、15.38、23.59,P均＜0.05),氟组、铝组、氟铝联合组[(193.98±137.93)％、(326.11±176.78)％、(599.84±275.82)％]均高于对照组[(100.00±56.02)％,P均＜0.05],氟铝联合组高于氟组和铝组(P均＜0.05).结论 氟、铝均可引起体外培养破骨细胞数量增多,促进其分化、增强骨吸收活性,该作用可能与其上调RANKL/OPG mRNA表达量比值有关.同时,氟铝联合作用对破骨细胞活性的刺激有叠加效果.     

米酒对兔股骨头成骨细胞 破骨细胞及骨内压影响的动态观察

目的观察米酒对兔股骨头成骨细胞、破骨细胞及骨内压的影响。方法将64只兔按随机数字表法分为实验组和对照组各32只。实验组采用插胃管方式给兔灌米酒,3次/周,剂量10 ml/(kg·d)。对照组采用同样方式灌等量生理盐水,灌胃前、灌胃1、3、6个月时间点分别在实验组、对照组中随机选取兔各8只,测量兔左后肢股骨头骨内压。空气栓塞法处死兔,取右后肢股骨头作为标本,经固定、脱钙、脱水、包埋等步骤,切成5μm厚的切片,行HE染色,光镜下计算成骨细胞、破骨细胞的数量。结果灌胃前、灌胃后1个月,两组成骨细胞、破骨细胞数量及骨内压相比较,差异均无统计学意义(P 0. 05)。灌胃后3个月、6个月,实验组成骨细胞数量较对照组少(P 0. 05),破骨细胞数量较对照组多(P 0. 05),骨内压较对照组高,差异均有统计学意义(P 0. 05)。结论长期灌服米酒( 3个月)可使兔股骨头成骨细胞数量减少,破骨细胞数量增多,骨内压上升。     

不同培养方法骨髓破骨细胞样细胞分化及活性的实验观察

目的研究不同骨髓细胞培养方法对大鼠破骨细胞样细胞(OLC)诱导分化及活性的影响。方法大鼠骨髓细胞以巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)作用后与核因子!B受体活化因子配体(RANKL)协同诱导OLC分化,采用全骨髓细胞(A组)及密度梯度离心后骨髓单个核细胞(B组)两种培养方法,通过倒置相差显微镜及细胞染色观察两组OLC分化数量的差异,通过骨吸收陷窝分析及OLC膜表面整合素#3(CD61)表达量比较两组OLC活性的差异。结果B组培养5、7d抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色阳性多核OLC数量及TRAP活性均高于A组,骨吸收陷窝计数亦较A组为多,差异均有统计学意义(P<0.01,P<0.05);陷窝面积比培养早期两组比较差异无统计学意义,7d时B组大于A组,差异有统计学意义(P<0.01);OLC膜表面CD61表达量及平均荧光强度0及3d时B组均较A组明显增高,随培养时间延长组间比较差异无统计学意义。结论低转速、短时间密度梯度离心后骨髓细胞培养诱导OLC分化获得的细胞数量较多且不影响其活性,是一种简便有效的OLC培养方法。     

巴戟天含药血清对成骨-破骨细胞共育体系原癌基因、核心结合因子1mRNA表达的影响

目的观察不同浓度巴戟天含药血清对体外培养成骨-破骨细胞共育体系中原癌基因(C-FOS)、核心结合因子(Cbfa)1 mRNA表达的影响。方法提取24 h内新生SD乳鼠颅盖骨分离培养成骨细胞,采用5周龄SD大鼠双侧股骨、胫骨的骨髓基质细胞,加入集落细胞刺激因子(M-CSF)和细胞核因子κB受体活化因子配体(RANKL)诱导培养破骨细胞。采用碱性磷酸酶(ALP)染色鉴定成骨细胞,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、骨吸收陷窝甲苯胺蓝染色、电镜扫描等鉴定破骨细胞,体外建立成骨-破骨细胞共育体系,设置低、中、高三种浓度巴戟天含药血清组和不含药血清组,干预3 d后提取各组总RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定各组C-FOS、Cbfa1 mRNA表达量。结果不同浓度巴戟天含药大鼠血清对成骨-破骨细胞共育体系C-FOS有抑制作用,对Cbfa1 mRNA的表达有促进作用。高浓度含药血清组两者的表达差异显著(P<0.05,P<0.000 1)。结论巴戟天含药血清可抑制成骨-破骨细胞共育体系C-FOS的表达,促进Cbfa1 mRNA的表达,从而达到降低破骨细胞分化成熟及骨吸收活性,促进骨形成。     

IGF-Ⅰ对破骨细胞骨吸收的促进作用依赖于成骨细胞的协同

目的 探讨胰岛素样生长因子Ⅰ (IGF-Ⅰ)对破骨细胞骨吸收的促进作用是否需要成骨细胞的协同.方法 体外培养MC3T3小鼠成骨细胞及NF-κB受体的配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)诱导分化成熟的破骨细胞,分别给予重组人胰岛素样生长因子Ⅰ(rhIGF-Ⅰ)进行干预,Western印迹检测IGF-Ⅰ受体的活化情况.以0、10 ng/ml的rhIGF-Ⅰ直接干预破骨细胞或与成骨细胞在Transwell双层培养板中共培养的破骨细胞,MTT法测定破骨细胞增殖;流式细胞仪检测破骨细胞凋亡率;实时PCR检测组织蛋白酶K基因的表达.将不同方式干预的破骨细胞接种在骨磨片上,光镜观察骨吸收陷窝的形成.结果 在成骨细胞、破骨细胞表面均检测到可被IGF-Ⅰ激活的IGF-Ⅰ受体.仅在成骨细胞、破骨细胞共培养时rhIGF-Ⅰ能够促进破骨细胞活细胞的增殖(P＜0.05);抑制破骨细胞的凋亡(P＜0.05);上调组织蛋白酶K基因的表达(P＜0.05);增加骨吸收陷窝的数量及面积.IGF-Ⅰ对单独培养的破骨细胞则作用不明显.结论 IGF-Ⅰ对破骨细胞骨吸收的促进作用需要成骨细胞的协同.     

类风湿关节炎滑膜细胞向破骨细胞分化实验研究

目的观察类风湿关节炎(RA)滑膜组织中破骨细胞来源以及核因子κB受体活化子配体(RANKL)在诱导破骨细胞分化过程中的作用。方法取6例RA和6名正常关节的滑膜组织,用胶原酶消化法获得滑膜细胞,通过免疫磁珠法分选获得CD68+/-滑膜细胞。用外源性RANKL16μg/L、巨细胞集落刺激因子(M-CSF)25μg/L及地塞米松醋酸酯1×10-8mol/L诱导各组滑膜细胞分化。通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色、降钙素受体(CTR)免疫荧光检测、骨吸收陷窝形成方法鉴定破骨细胞。并在RA滑膜CD68+细胞中加入0~8ng/ml梯度浓度的RANKL,观察不同浓度RANKL对RA滑膜CD68+细胞分化的影响。结果RA滑膜CD68+细胞在RANKL诱导14d后,RA滑膜CD68+细胞组出现CTR阳性、TRAP染色阳性细胞并有骨吸收陷窝形成。RA滑膜CD68+细胞在体外经RANKL诱导后分化形成的破骨细胞功能与RANKL剂量有关。结论RA滑膜组织中前体破骨细胞来源于滑膜CD68+细胞,在体外RANKL诱导下可以分化为成熟破骨细胞。RANKL体外诱导剂量影响RA滑膜CD68+细胞分化功能。     

糖基化终末产物对破骨细胞骨吸收功能的影响祆

目的观察糖基化终末产物(AGEs)对破骨细胞骨吸收功能的影响.方法用人血清白蛋白和葡萄糖恒温孵育制备人AGEs,采用甲苯胺蓝染色和图像分析评价AGE对破骨细胞形成骨吸收陷窝的影响.结果低浓度AGEs(50～200 μg/ml)对骨吸收陷窝的面积和数目无明显影响;只有高浓度AGEs(500～1000 μg/ml)才能促进骨吸收陷窝面积的扩大和数目增加(P＜0.05).结论 AGE可能促进破骨细胞的骨吸收功能.     

过量氟对破骨细胞的影响及机制

目的探讨过量氟对破骨细胞(OC)的影响及其机制.方法对经饮水投氟20周的大鼠胫骨进行常规组织切片,并对其进行HE和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色,观察在氟的作用下,胫骨上端破骨细胞的变化,同时应用Western blot方法观察染氟大鼠股骨干骺端基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;体外培养OC,观察氟对OC骨吸收陷窝的影响,应用组织化学方法观察染氟时OC分泌的TRAP的变化,应用免疫组织化学和原位杂交方法观察氟对OC分泌的MMP-9的影响;体外培养成骨细胞(OB),应用RT-PCR方法探讨氟对OB分泌的骨保护蛋白配体(OPGL)和巨噬细胞-克隆刺激因子(M-CSF)的影响.结果 HE染色显示过量氟造成骨转换增高,破骨性骨吸收增强;染氟大鼠胫骨TRAP表达增加,但与常食对照组比较尚未达到统计学差异显著.Western blot结果显示,常食加氟组、偏食对照组及偏食加氟组股骨干骺端MMP-9的蛋白质表达增强,与常食对照组比较差异显著.在不同浓度氟化物干预体外培养OC的实验中,随染氟剂量的增加,骨吸收陷窝数及陷窝面积逐渐增加,与对照组比较差异显著;培养的OC染氟后,TRAP和MMP-9的蛋白质表达均增加,其中2.0,4.0mg/L染氟组MMP-9的蛋白质表达与对照组比较差异显著;原位杂交方法发现氟使培养的OC MMP-9 mRNA表达明显增高,其中1.0,2.0,4.0mg/L染氟组MMP-9mRNA表达与对照组比较有显著差异.应用RT-PCR方法,观察到氟可上调OBOPGLmRNA和M-CSFmRNA的表达.结论在氟骨症的发生发展中,OC功能活跃和破骨性骨吸收增强起着重要的作用.氟可通过增强OCTRAP和MMP-9的表达提高OC的活性.过量氟可能通过上调OB分泌的OPGL mRNA、M-CSFmRNA的表达发挥促进OC的增生,分化和活化.     

破骨细胞和骨保护素/细胞核因子-κB受体活化因子配体系统在银屑病关节炎骨质破坏中的作用

目的 探讨银屑病关节炎( PsA)患者体内破骨细胞和骨保护素/细胞核因子-κB受体活化因子配体(OPG/RANKL)系统的水平与骨质破坏的关系.方法 分离41例PsA患者、20例骨关节炎患者及24名健康对照者的外周血单个核细胞诱导生成破骨细胞,采用耐酒石酸酸性磷酸酶染色法进行鉴定.运用酶联免疫吸附试验( ELISA)法测定3组患者血清中的骨保护素和RANKL的水平,同时收集PsA患者的临床实验室资料.采用单因素方差分析和直线回归分析进行统计学处理.结果 PsA组的破骨细胞数目[(17.7±4.8)个,视野]明显多于骨关节炎组[(6.5±1.6)个,视野]和健康对照组[(6.4±1.6)个,视野],差异有统计学意义(P＜0.05).PsA组的RANKL水平[(178±38) pg/ml]明显高于骨关节炎组[( 32±4) pg/ml]和健康对照组[(67±17) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.05).与无骨质破坏的PsA组相比较,破骨细胞和RANKL的水平在有骨质破坏的PsA组中明显增高[(17.6±0.9)个／视野与(7.9±1.3)个／视野和(199±72) pg/ml与(128±44) pg/ml],差异有统计学意义(P＜0.01).PsA患者的影像学评分和破骨细胞、RANKL的水平呈正相关(r=0.83,0.76;P＜0.05).结论 PsA患者外周血中的破骨细胞数目和RANKL水平显著升高,PsA患者体内的破骨细胞和RANKL水平升高与骨质破坏相关密切,提示破骨细胞及RANKL水平的变化可以反映骨质破坏的严重程度.