头孢曲松钠对大鼠脑皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用及其机制

目的研究头孢曲松钠对大鼠脑皮质神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用及其可能的机制。方法体外培养大鼠脑皮质神经细胞,分为正常对照组、氧糖剥夺(OGD)组和头孢曲松钠(CTX)预处理组。OGD组和CTX预处理组建立OGD模型。并检测各组的细胞活性、细胞谷氨酸转运体-1(GLT-1)mRNA表达、脑源性神经营养因子(BDNF)和白介素(IL)-6含量。结果与正常对照组比较,OGD组及CTX预处理组神经细胞活性减低,GLT-1 mRNA表达显著下调,细胞培养上清液中BDNF及IL-6含量显著增加(P<0.05～0.01);与OGD组比较,CTX预处理组神经细胞活性明显增加,GLT-1 mRNA表达上调,细胞培养上清液中BDNF含量增加(均P<0.01),IL-6含量无明显改变。结论 CTX预处理通过上调GLT-1和BDNF表达保护皮质细胞OGD损伤。     

瘦素对氧糖剥夺/复糖复氧后原代神经元的影响及相关机制北大核心CSCD

目的探讨瘦素预处理对原代培养神经元氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation and reoxygenation,OGD/R)后的神经保护作用及相关机制。方法体外培养、纯化及鉴定Sprague-Dawley乳鼠皮层神经元,采用OGD/R模型,在体外模拟脑缺血/再灌注损伤。将培养7 d的神经元随机分为4组:正常组、OGD/R组、瘦素组和LY+瘦素组。采用细胞计数试剂测定细胞存活率;通过透射电镜观察各组神经元的内质网超微结构;应用细胞免疫荧光、蛋白印迹技术及RT-PCR法检测磷酸化蛋白激酶B(phsphorylated protein kinase B,p-Akt)及内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和半胱氨酸蛋白酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12,Caspase12)的表达。结果与OGD/R组比较,瘦素组细胞存活率明显升高(43.04%±1.17%vs.68.61%±1.42%,P<0.001),细胞的形态损伤与内质网肿胀明显减轻,p-Akt(0.65±0.10 vs.1.10±0.21,P<0.05)和GRP78(1.04±0.06 vs.1.57±0.19,P<0.01)表达显著增加,CHOP(1.00±0.21 vs.0.59±0.11,P<0.01)和Caspase12(1.20±0.10 vs.0.86±0.10,P<0.01)表达明显减少;与瘦素组比较,LY+瘦素组细胞存活率显著降低(68.61%±1.42%vs.51.97%±2.05%,P<0.001),细胞的形态损伤与内质网肿胀明显增加,p-Akt(1.10±0.21 vs.0.76±0.23,P<0.05)和GRP78(1.57±0.19 vs.1.19±0.18,P<0.05)表达减少,CHOP(0.59±0.11 vs.0.65±0.33,P<0.05)和Caspase12(0.86±0.10 vs.1.03±0.06,P<0.05)表达显著增加。结论瘦素对OGD/R诱导的神经元损伤具有神经保护作用,其可能机制是瘦素激活PI3K/Akt信号通路,减轻内质网应激,从而促进原代神经元存活。     

MCPG在神经元氧糖剥夺模型中的抗凋亡作用

目的通过神经元氧糖剥夺模型研究Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂α-甲基-4-羧苯基甘氨酸（MCPG）对神经元损伤的保护作用,并初步探讨其机制。方法大鼠皮层神经元原代培养2w后,采用氧糖剥夺法建立损伤模型,通过乳酸脱氢酶（LDH）活性测定及碘化丙啶（PI）/Hoechst33342双染鉴定神经元损伤程度;加入Ⅰ组代谢型谷氨酸受体拮抗剂MCPG（1mmol/L）,通过脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法（TUNEL）检测神经元凋亡情况,并采用蛋白印迹法研究凋亡相关因子caspase-3、细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/2）、磷酸化ERK1/2（p-ERK1/2）的表达变化,讨论MCPG抗凋亡作用与ERK1/2信号通路的关系。结果 MCPG能抑制ERK1/2信号通路的活化并降低凋亡相关因子caspase-3的表达,减轻氧糖剥夺造成的神经元凋亡。结论 MCPG能够通过ERK1/2信号通路减轻氧糖剥夺造成的神经元凋亡。     

重复高压氧预处理对氧糖剥夺神经元保护作用的研究

目的研究重复高压氧预处理(HBO-PC)对新生鼠脑皮层神经元缺血损伤的影响。方法建立体外培养皮层神经元氧糖剥夺损伤模型,分为对照组(CON)和HBO-PC组(0.35 MPa,2 h)。通过形态学观察、甲基噻唑基四唑(MTT)比色微量分析、细胞凋亡检测和乳酸脱氢酶(LDH)测定等方法观察氧糖剥夺处理所导致的神经元损伤以及HBO-PC对这种损伤的影响。结果氧糖剥夺后24 h对照组与HBO组相比,细胞活性下降、光密度值明显降低、多数神经元出现凋亡、细胞LDH释放量明显增多(P<0.05)。结论氧糖剥夺可导致神经元出现损伤,而HBO-PC对这种损伤具有保护作用。     

γ-羟基丁酸对神经细胞缺氧复氧损伤的保护作用与γ-氨基丁酸及其A受体的关系

目的探讨γ-羟基丁酸(GHBA)对大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤的保护作用与γ-氨基丁酸(GABA)和GABA受体A型α1亚型(GABAARα1)阳性神经元表达的关系。方法采用原代培养新生大鼠皮层神经元缺氧复氧损伤模型,分为缺氧前GHBA干预组、缺氧后GHBA干预组和未干预组．于复氧24h后,观察细胞存活数、GABA和GABAARα1阳性神经元的表达。结果(1)GHBA干预各组皮层神经元细胞存活数、GABA和GABAARα1阳性细胞数均高于相应未干预组(P<0．05)。(2)缺氧前GHBA干预组细胞存活数、GABA和GABAARα1阳性细胞表达数均高于相对应缺氧后干预组(P<0．05)。结论GHBA可通过上调GABA和GABAARα1阳性神经元的表达水平对缺氧复氧皮层神经元发挥保护作用。     

JNK信号转导通路在Aβ25-35诱导大鼠原代海马神经元凋亡中作用机制的研究

目的 研究Aβ25-35诱导海马神经元凋亡的机制以及JNK抑制剂SP600125的保护作用，探讨在Aβ25-35细胞毒性中JNK-c-Jun信号转导通路的可能作用机制。方法 将体外海马原代神经元培养至第7天，用β淀粉样蛋白25-35片段(Aβ25-35)和JNK抑制剂(SP600125)对细胞进行处理。用光镜进行海马原代神经元形态学观察，MTT检测不同时间点的细胞活性，以及用免疫印迹法检测不同时间点的JNK及c-Jun蛋白活性。结果 大鼠原代海马神经元经过Aβ25-35处理后，发生凋亡，细胞生存率呈时间依赖性下降，经过免疫学方法检测发现细胞在Aβ25-35处理早期出现磷酸化JNK和磷酸化c-Jun的表达增高，且这一过程可被SP600125抑制。MTT检测发现在使用SP600125后，细胞生存率上升，具有显著性差异。结论 体外原代海马神经元培养实验表明Aβ25-35在诱导原代海马神经元凋亡过程中，c-Jun氨基端激酶(JNK)及其底物转录因子c-Jun被激活。使用JNK抑制剂SP600125后，JNK和c-Jun均被抑制，且海马原代神经元的生存率明显提高，生存状态明显改善。研究表明JNK信号转导通路可能促成Aβ的细胞毒性作用。     

17-β雌二醇对大鼠海马神经元保护作用的实验研究

目的研究17-β雌二醇对大鼠海马神经元树突生长的影响及血清饥饿情况下对神经元存活率的影响。方法体外培养3d的海马神经元通过加入浓度为1nmol/L和2nmol/L的17-雌二醇,统计比较神经元树突的数目和长度;体外培养1d的海马神经元,加入17-雌二醇,培养6～7d后血清饥饿48h后进行NSE染色及MTT检测,检测神经元形态及神经元存活率。结果 17-雌二醇可显著增加存活神经元树突的长度和数量;并能够有效地抑制血清饥饿引起的细胞减少,增加其存活率。结论 17-β雌二醇对大鼠海马神经元的生长发育及存活具有保护性作用。     

H2S对缺血再灌注神经元的保护作用及机制

目的研究H2S对缺血再灌注损伤后神经元存活信号转导通路ERK1／2／P^90RSK的影响。方法将培养7d的海马神经元随机分为5组：正常培养组（C组）、缺血再灌注组（I/R组）、缺血再灌注＋NaHS组fNaHS组）、缺血再灌注＋NaHS＋U-0126（ERK抑制剂1组（U组）、缺血再灌注＋NaHS＋Rapamycin（RS6K抑制剂）组（R组）。C组神经元按正常培养方法培养。NaHS组神经元在神经元进行缺血再灌注时加入NaHS使其终浓度为150μmol／L。U组和R组在加入150μmol／LNaHS的同时分别加入U-012610μmol／L或Rapamycin 10nmol/L.各组行细胞存活力、神经元凋亡、cAMP、磷酸化ERK1／2（PERK1／2）和磷酸化P^90RSK（PP^90RSK]蛋白表达的检测。结果NaHS显著增加了cAMP的浓度（与FR组比较，P〈0.01）、PERK1／2蛋白（与FR组比较，P〈0.05）和PP^90rks蛋白（与I/R组比较，P〈0.05）表达，同时增加了神经元存活率（与I/R组比较，P〈0．05）、降低了神经元凋亡率（与隙组比较，P〈0．05）；U-0126抑制了PERK1／2蛋白（与NaHS组比较，P〈0.05）和PP^90RSK蛋白（与NaHS组比较，P〈0.05）表达同时使神经元存活率降低（与NaHS组比较，P〈0.05）、神经元凋亡率升高（与NaHS组比较，P〈0.05）；Rapamycin抑制了PP^90RSK蛋白（与NaHS组比较，P〈0.05）表达同时使神经元存活率降低（与NaHS组比较，P〈0．05）、神经元凋亡率升高（与NaHS组比较，P〈0．051而不影响PERK1／2的表达（与NaHS组比较，P〉0.05）。结论H2S通过cAMP激活了ERK1／2／P^90RKS信号通路，在海马神经元缺血再灌注时抑制了神经元的凋亡，保护了神经元。     

缺氧-复氧对大鼠海马培养神经元Bcl-2、Bax表达和神经元凋亡的影响

目的 观察缺氧-复氧对体外培养海马神经元Bcl-2和Bax表达和神经元凋亡的影响。方法 取培养12d的海马神经元，置于恒温(36℃)密闭容器内，连续充以无氧气体[90％(体积分数)N2、10％(体积分数)CO2]，在缺氧条件下继续培养4h后，再于常氧培养箱内复氧培养24h和72h。于不同时间观察神经元存活数，并分别用抗Bcl-2和Bax抗血清进行免疫组织化学染色，观察缺氧-复氧后大鼠海马培养神经元Bcl-2和Bax表达。并用原位末端标记(TUNEL)法和流式细胞术分别检测缺氧-复氧对体外培养海马神经元凋亡的影响。结果 缺氧-复氧后24～72h,海马神经元对Bcl-2的表达逐渐减弱，对Bax的表达逐渐增强，对Bax／Bcl-2比值逐渐增大，凋亡神经元百分率逐渐增多。结论 缺氧-复氧后24～72h神经元凋亡的发生与神经元Bcl-2表达逐渐减弱，Bax表达逐渐增强，Bax／Bcl-2比值逐渐增大有关。     

Meth对大鼠SCI后神经细胞凋亡及wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 探讨甲基强的松龙(methylprednisolone,Meth)对大鼠脊髓损伤(spinal cord injury, SCI)后神经细胞凋亡及wnt/β-catenin 信号通路的影响。方法 将60只SD成年大鼠随机分为3组,即假手术(Sham)组、甲基强的松龙(Meth)组和生理盐水(Saline)组,每组各20只; 假手术组仅需切开椎板不损伤脊髓,甲基强的松龙组和生理盐水组采用改良Allens法制作大鼠脊髓损伤模型后立即从尾静脉注射大剂量MP治疗,并在术后第1、2 d相同的时间点分别注射1次; 采用尼氏染色(Nissl)观察组织形态变化; 采用免疫荧光观察蛋白caspase-3表达水平; 采用Western Blot检测各组wnt/β-catenin信号通路蛋白GSK-3β和β-catenin的表达水平。结果 甲强的松龙组(Meth)第7 d SCI较生理盐水组明显减轻(P<0.01); Meth组抑制凋亡蛋白caspase-3表达水平明显下调(P<0.01); 大鼠急性脊髓损伤(SCI)后第3、7 d,甲基强的松龙组呈现抑制蛋白GSK-3β表达(P<0.05),而蛋白β-catenin表达则明显上调(P<0.05)。结论 大鼠急性脊髓损伤后MP可能通过激活wnt/β-catenin信号通路来促进大鼠运动功能恢复以及抑制急性脊髓损伤神经细胞的凋亡。     

枸杞多糖对小鼠海马神经元癫间模型的保护作用和可能的作用机制研究

目的 研究枸杞多糖对小鼠海马神经元癫间模型的保护作用和潜在作用机制。方法 采用无Mg²⁺培养液建立癫间细胞模型,分为对照组(细胞用含Mg²⁺溶液的Neurobasal-A培养液培养)、模型组(细胞用无Mg²⁺细胞外液培养)、枸杞多糖低剂量组(25 mg·L^-1)、中剂量组(50 mg·L^-1)和高剂量组(100 mg·L^-1)。MTT法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡;分光光度法检测超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、乳酸脱氢酶(LDH)含量;RT-qPCR检测TNF-α、IL-1β、COX-2 mRNA及BDNF mRNA表达水平;Western blot检测caspase-3、cleaved-caspase-3蛋白及酪氨酸激酶受体B(TrkB)、BDNF蛋白表达水平。结果 与对照组比较,模型组细胞存活率和SOD活性降低;凋亡率、MDA和LDH含量增加;TNF-α、IL-1β、COX-2 mRNA表达水平、BDNF mRNA和蛋白表达水...     

心肌营养素-1对超氧化损伤神经元的保护作用

目的在体外培养神经元凋亡损伤模型,观察重组腺病毒-心肌营养素1(Adv-CT1)对损伤神经元存活的保护作用,了解CT-1对神经元的作用和机制,为神经损伤提供新的治疗措施。方法诱导大鼠神经干细胞(NSCs)分化为神经元,建立超氧化诱导神经元凋亡损伤模型,以Adv-CT1转染神经元,应用免疫组化、流式细胞仪凋亡检测等技术,观察CT-1对神经元生长存活的作用以及CT-1和caspase-3基因在损伤神经元表达的变化。结果分离培养NSCs,应用无血清小剂量碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)神经元培养基诱导NSCs定向分化培养神经元;在神经元凋亡模型中转染Adv-CT1,免疫组化显示神经元中CT-1表达增高(P<0.05,或P<0.01),caspase-3表达降低(P<0.05);流式细胞检测显示CT-1可减少损伤神经元凋亡比例(P<0.01,或P<0.05),促进细胞存活。结论Adv-CT1转染到凋亡神经元后,CT-1表达增加,caspase-3表达降低,提示Adv-CT1对损伤神经元有保护作用,是CT-1通过减少神经元凋亡基因caspase-3表达,抑制凋亡发生,从而促进神经元存活。     

补体分子调控TGFβ1/smad通路减少蛛网膜下腔出血后神经元凋亡的作用及机制

目的 探讨补体分子对蛛网膜下腔出血（SAH）后神经元凋亡的影响及可能的机制。方法 将90只大鼠随机分为假手术组、SAH模型组、SAH模型+补体分子组,每组30只。采用枕大池单次注射自体血的方法建立SAH模型,SAH后24 h采用Garcia评分和平衡木试验评分评定神经功能缺损程度。成功建模24 h后,称取脑组织湿质量和干质量,计算脑组织含水率。绘制伊文思蓝标准曲线,评估血-脑屏障通透性。采用免疫荧光染色观察各组小胶质细胞活化情况,蛋白质免疫印迹法（WB）检测各组补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达情况,TUNEL法检测神经元凋亡情况。结果 与假手术组相比,SAH模型组大鼠的Garcia评分和平衡木试验评分均降低,脑组织含水率和血-脑屏障通透性均增加,小胶质细胞活化程度增强,补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达水平升高,神经元凋亡率增加（P<0.05）。与SAH模型组相比,SAH模型+补体分子组大鼠的Garcia评分和平衡木试验评分均升高,脑组织含水率和血-脑屏障通透性均降低,小胶质细胞活化程度减弱,补体C3、TGFβ1/smad蛋白的表达水平降低,神经元凋亡率减少（P&l...     

17β-雌二醇对缺氧缺血大脑的保护作用及机制

１７β－雌二醇能发挥对缺氧缺血大脑的神经保护作用，主要是通过增加葡萄糖转运蛋白－１的表达、抑制Ｎ－甲基－Ｄ－天门冬氨酸受体、抗氧化作用、抑制钙离子超载等机制，但是１７β－雌二醇发挥神经保护作用的剂量范围及作用方式尚有待进一步的研究。     

MPP~+重新启动多巴胺能神经元细胞周期的作用及机制

目的研究1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)重新启动多巴胺能神经元细胞周期的作用及机制。方法使用MPP+处理神经元样分化的PC12细胞,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活力,流式细胞仪检测早期凋亡细胞和细胞周期分布,免疫细胞化学检测ERK/MAPK通路活化水平。结果经MPP+处理后,细胞活力呈浓度依赖性下降,经25、50、75、100、150 mmol/L MPP+处理24 h后细胞存活率分别下降至对照组的(97.32±2.41)%(、67.69±3.03)%、(56.00±3.12)%、(47.23±2.55)%、(40.00±2.46)%,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.01)。经75 mmol/L MPP+处理后出现早期凋亡细胞,随处理时间延长,细胞凋亡率逐渐增加,其处理4、8、16和24 h后细胞凋亡率分别为(7.26±3.43)%、(8.34±3.55)%(、20.04±2.64)%和(28.46±2.35)%(P<0.01)。同时细胞周期中G0/G1期细胞减少,S期和G2/M期细胞增多(P<0.01),细胞内ERK1/2通路活化。结论MPP+可通过活化ERK1/2通路重新启动多巴胺神经元的细胞周期,并诱导多巴胺能神经元凋亡。     

敲低miR-103b对氧葡萄糖剥夺/复氧诱导的神经元损伤的保护作用研究

目的 神经元损伤是脑梗死(cerebral infarction,CI)疾病发生发展的关键因素.微小RNA(miRNAs)在神经功能恢复中起主要作用.本研究旨在探讨miR-103b对人皮质神经元细胞(human cortical neuron,HCN)细胞增殖和凋亡的调节作用和机制.方法 HCN暴露于氧葡萄糖剥夺/复氧...     

β-淀粉样蛋白对海马神经元钙离子浓度的影响及其机制研究

目的　观察β-淀粉样蛋白 (Aβ1 -40 )对海马神经元内钙离子浓度的影响及尼莫地平的拮抗作用。方法　采用大鼠海马神经元的原代培养技术 ,分别用 MTT法和激光扫描共聚焦显微镜结合 Fluo-3 /AM标记观察神经元存活率和细胞内游离钙离子浓度变化。结果　 Aβ1 -40在较高浓度 (1μmol/L和 1 0μmol/L )下 ,对神经元存活率和 [Ca2 + ]i 的影响与对照组相比 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 ) ;5 μmol/L尼莫地平可部分降低Aβ1 -40引起的 [Ca2 + ]i 升高。结论　 Aβ1 -40可引起培养海马神经元存活率下降及胞内钙离子浓度升高 ,尼莫地平有部分拮抗作用。     

氢气预处理对乳鼠海马神经元细胞缺氧/复氧损伤后细胞活力的影响

目的探讨氢气对乳鼠海马神经元细胞缺氧/复氧损伤后细胞活力的影响。方法原代培养的SD乳鼠海马神经元细胞,随机分成对照组,缺氧/复氧组和氢气预处理组。对照组常规培养;缺氧/复氧组在100%N2中培养15min后复氧30min;氢气预处理组在2%H2+98%N2中培养15min后复氧30min。采用MTT法检测乳鼠海马神经元细胞活力。结果氢气预处理能够增强细胞活力(P<0.05)。结论氢气预处理对海马神经元细胞缺氧/复氧损伤具有保护作用,可能与提高细胞活力有关。     

头孢曲松钠对大鼠局灶性脑缺血损害保护作用机制研究

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血模型中头孢曲松钠保护作用机制.方法 制备Wistar大鼠局灶性脑缺血模型,随机分为假手术组(S组)、脑缺血组(M组)、头孢曲松钠组(C组),C组为缺血90min时给予头孢曲松钠200mg/kg;在缺血后24h测定谷氨酸转运体-l(GLT-1) mRNA表达、超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MAD)含量以及钙神经素(calcineurin,CaN)和钙激活中性蛋白酶(calpain)活性.结果 M组、C组较S组GLT-1 mRNA表达相对量减少,SOD活性降低,MAD含量增加,CaN和calpain活性升高;C组较M组大鼠GLT-1 mRNA表达量明显增加,SOD活性升高,MAD含量减少,CaN和calpain活性降低(P＜0.01).结论 头孢曲松钠通过增加GLT-1表达、减轻氧自由基损伤作用以及降低钙超载激活的蛋白水解酶CaN、calpain活性等多种机制保护缺血脑组织,发挥神经保护作用.