软骨素酶ABC去除化学去细胞神经中硫酸软骨素蛋白多糖

目的:观察软骨素酶ABC(ChABC)是否能降解化学去细胞神经(CEAN)中的硫酸软骨素蛋白多糖(CSPG)。方法:取SD大鼠的坐骨神经,按化学法制备去细胞神经,ChABC浸泡16h,行HE染色、CSPG及基底膜素层粘连蛋白(LN)免疫组化染色,观察去细胞神经的结构及成分变化。Wistar大鼠15只,切除左坐骨神经5mm,随机分为A、B、C 3组各5只,分别采用自体神经、CEAN、经ChABC处理的CEAN修复缺损,术后15d测量各组神经纤维生长情况。结果:ChABC处理去细胞神经后,CSPG免疫组化染色示CSPG表达显著降低;HE染色显示结构无明显变化;LN免疫组化染色无明显变化。术后2周A组神经再生距离长于B、C组(P<0.05),C组优于B组(P<0.05)。结论:ChABC可降低化学去细胞神经中的CSPG,有利于促进神经再生。     

硫酸软骨素酶ABC联合超短波治疗对脊髓损伤大鼠的功能恢复及胶质瘢痕形成的影响

目的:本研究旨在观察超短波联合硫酸软骨素酶ABC(ChABC)治疗对脊髓损伤术后功能恢复及与损伤后胶质瘢痕形成有关的因子如:胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、硫酸软骨素蛋白聚糖(CSPGs)的影响。方法:42只8周龄SD大鼠随机分成3组,每组14只:对照组(包括8只单纯损伤组和6只损伤后注射PBS溶液组)、ChABC组、ChABC联合超短波治疗组。大鼠脊髓损伤后1d及1周、2周、3周、4周做BBB神经行为学评分,应用免疫组织化学SABC法染色,分别于术后2周、4周检测脊髓组织中GFAP、CSPGs表达的平均光密度值差异。结果:BBB评分比较:术后1周到4周,联合治疗组在各时间点的BBB评分均高于对照组(P0.01,0.05),而ChABC组仅在术后第4周明显高于对照组(P0.01);2个治疗组间比较差异均无统计学意义。GFAP、CSPGs免疫组化分析:与对照组相比,术后2周ChABC组和联合组的GFAP、CSPGs平均光密度度值均明显降低(P0.01)。术后4周时,ChABC组和联合组的GFAP、CSPGs平均光密度度值与对照组相比差异均无统计学意义(P0.05)。结论:ChABC联合超短波治疗能更好的促进脊髓损伤后的神经功能的恢复,并可在2周时抑制胶质瘢痕形成,但作用不持久,具体机制有待进一步研究。     

缺血预处理程序中心肌环磷酸腺苷含量及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性的变化

目的:制备大鼠在体缺血再灌注模型,观察缺血预处理程序中心肌环磷酸腺苷含量及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性的变化。方法:实验于2005-03/2006-10在解放军沈阳军区总医院医学实验动物中心和全军心血管研究所实验室完成。实验分组:选用健康雌性SD大鼠36只,根据预适应程序分为第1,2,3次缺血,第1,2,3次再灌注,每一时间点6只大鼠。实验过程:用手术套管法造成左冠状动脉主干缺血及再灌注。所有实验动物在实验程序结束后,取出心脏迅速置液氮保存备用。实验评估:用放射免疫法测环磷酸腺苷水平,生化法测环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性变化。结果:36只大鼠均进入结果分析。①环磷酸腺苷含量:第1次再灌注组低于第1次缺血组[(0.325±0.015),(0.395±0.024)pmol/g,t=6.06,P<0.001],第2次再灌注组低于第2次缺血组[(0.523±0.017),(0.708±0.067)pmol/g,t=6.56,P<0.001],第3次再灌注组低于第3次缺血组[(0.567±0.031),(0.712±0.038)pmol/g,t=7.24,P<0.001]。②环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性:第1次再灌注组低于第1次缺血组[(10.115±1.000),(16.351±0.849)pkat/g,t=11.12,P<0.001],第2次再灌注组低于第2次缺血组[(11.877±2.213),(14.869±0.619)pkat/g,t=3.31,P<0.01],第3次再灌注组低于第3次缺血组[(11.745±0.987),(14.766±0.329)pkat/g,t=7.09,P<0.001]。③缺血预处理程序中心肌环磷酸腺苷含量及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶活性随缺血及再灌注呈周期性波动。在5min缺血预处理时表现为明显增高,而在间隔的再灌注程序中恰呈相反改变,有明显下降的趋势。结论:环磷酸腺苷及环磷酸腺苷依赖蛋白激酶的周期性波动变化可能是激发心肌缺血预处理的机制之一,环磷酸腺苷可能在预处理保护作用中起一些作用。     

硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球的制备及其体外性质

背景:硫酸软骨素酶ABC能够分解脊髓损伤局部持续产生的硫酸软骨素蛋白多糖,从而促进轴突的生长,但该酶性质不稳定,需要多次局部用药.目的:制备硫酸软骨素酶ABC-聚乳酸-聚乙醇酸共聚物缓释微球,观察其体外释药特性.设计、时间及地点:重复测量设计,于2006-03/2007-01在中国科学院成都有机所和四川大学华西医学中心药理实验室完成.材料:聚乳酸-聚乙醇酸共聚物、硫酸软骨素酶ABC、CH2Cl2、硫酸软骨素B.方法:复乳法制备硫酸软骨素酶ABC缓释微球,并以生理盐水为体外释药介质.主要观察指标:扫描电镜下观察硫酸软骨素酶ABC缓释微球的形态.应用Malvern激光粒度分布测试仪测定其粒径分布并自动计算微球的平均粒径和径距.采用酶解分光光度测定硫酸软骨素酶ABC含量,并计算载药量与包封率.于0.5,1,1.5,2,3,4,6,8,10,12,14,16,18,21 d取样,绘制体外释药曲线.结果:硫酸软骨素酶ABC缓释微球形态均匀.其平均粒径5.538 ì m,径距1.479,呈正态分布.平均载药量(15.554±0.90)×10 3%,甲均包封率(53.88±1,45)%,硫酸软骨素酶ABC微球在3周内的体外累积释药分数为O.851 4,释药平稳,其最佳体外释药拟合方程为Weibull方程:Inln(1/1-Y)=0.739 61nX-1.617,R2=0.993 3.结论:所制备的硫酸软骨素酶ABC微球形态均匀.粒径分布窄,再分散性好,3周内能维持有效的药物浓度.     

胃腺癌细胞环磷酸腺苷和环磷酸鸟苷含量的变化

细胞信号传导过程异常可导致细胞增殖、转化和肿瘤的发生。深入探讨受体水平后信号传导通路与肿瘤的关系，对于肿瘤的早期诊断和治疗具有深远的理论价值和实际的临床意义。胃腺癌细胞环磷酸腺苷（cAMP）和环磷酸鸟苷（cGMP）是细胞内重要的第二信使物质，广泛参与细胞内多种的生理、生化反应和细胞功能的调节。本文检测了培养的胃腺癌细胞和正常胃黏膜细胞内cAMP和cGMP含量，并比较了两者间的差异。     

聚碳酸亚丙酯/壳聚糖纳米纤维复合三维多孔支架的构建与性能

背景:聚碳酸亚丙酯(PPC)具有良好的力学性能和生物相容性,但是也存在合成高分子的共性不足即缺乏生物活性.壳聚糖纳米纤维具有优异的生物活性,但力学性能较差,很难保持稳定的高强度三维结构.目的:将壳聚糖纳米纤维与聚碳酸亚丙酯复合,制备具有优异生物活性和良好力学性能的三维多孔组织工程支架.方法:用溶液浇铸/粒子沥滤法制备PPC多孔支架,再用相分离法原位复合三维壳聚糖纳米纤维制备聚碳酸亚丙酯,壳聚糖纳米纤维复合三维多孔支架(PPC/CSNF).用扫描电子显微镜观察PPC及PPC,CSNF多孔支架微观形态,并测定其压缩模量、孔隙率.用扫描电子显微镜观察PPC/CSNF多孔支架在新西兰大白兔大腿皮下埋植1,2个月后的细胞生长情况.结果:PPC多孔支架孔径分布为200-500 μm且孔连通性好,PPC/CSNF多孔支架中的壳聚糖纳米纤维分布均匀其直径在50～500 nm之间;各种质量浓度的支架孔隙率均为90%以上;各种支架的压缩模量随着PPC浓度的增加而增加,最高可达约15 MPa;体内埋植的实验结果表明PPC/CSNF多孔支架具有良好的生物活性,可促进骨髓基质干细胞向软骨细胞分化.结果提示溶液浇铸/粒子沥滤法与低温相分离法相结合成功制备了力学性能与生物活性优异的PPC/CSNF多孔支架.该支架可促进新西兰大白兔的骨髓基质干细胞向软骨细胞分化.     

靶肌肉注射环磷酸腺苷对周围神经再生的作用

目的:观察靶肌肉注射外源性环磷酸腺苷对大鼠坐骨神经再生的治疗作用。方法:实验于2004-10/2005-03在华中科技大学同济医学院协和医院骨科实验室完成。选择健康雄性Wistar大鼠48只,制备大鼠左侧坐骨神经挤压伤模型。实验动物随机数字表法分为3组,每组16只,高剂量组:腓肠肌内注射0.2mL环磷酸腺苷1mg。低剂量组:腓肠肌内注射注射0.2mL环磷酸腺苷0.1mg。对照组:腓肠肌内注射0.2mL生理盐水。术后每日给药1次,共4周。术后4,8周时检测左侧小腿三头肌湿质量。术后8周时检测坐骨神经运动神经传导速度、小腿三头肌复合肌肉动作电位波幅、潜伏期及形态学观察神经再生情况。结果:纳入动物48只,均进入结果分析。①术后4,8周时高剂量组和低剂量组大鼠左小腿三头肌湿质量显著高于对照组[术后4周分别为(1.70±0.58),(1.26±0.71),(0.91±0.24)g;术后8周分别为(2.26±0.62),(1.65±0.16),(1.24±0.37)g],且高剂量组明显高于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01)。②术后8周高剂量组和低剂量组坐骨神经运动神经传导速度、小腿三头肌复合肌肉动作电位波幅、潜伏期及有髓神经纤维计数、髓鞘厚度、轴突直径均高于对照组[运动神经传导速度分别为(33.54±2.65),(26.96±4.12),(19.83±2.74)m/s;复合肌肉动作电位波幅分别为(2.435±1.257),(1.867±0.566),(1.218±0.647)mV;复合肌肉动作电位潜伏期分别为(2.946±0.658),(4.537±0.932),(5.825±1.043)ms;有髓神经纤维计数分别为(1693±201),(1357±185),(876±124)个;髓鞘厚度分别为(1.149±0.138),(0.924±0.086),(0.633±0.105)μm;轴突直径分别为(1.045±0.150),(0.794±0.095),(0.512±0.138)μm],且高剂量组显著高于低剂量组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:靶肌肉注射环磷酸腺苷可促进周围神再生,高剂量环磷酸腺苷对神经再生具有更好的促进作用。     

氧自由基对生殖细胞三磷酸腺苷酶和生长抑素的影响

背景：有关细胞自由基的研究,主要集中在动物体内细胞自由基的产生与清除方面。目的：观察氧自由基对体外培养的睾丸生殖细胞三磷酸腺苷酶（ATPase）和生长抑素含量的影响。方法：体外分离、纯化小鼠睾丸生殖细胞,培养24h后,将其分为2组,实验组添加黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶建立氧自由基损伤模型;对照添加生理盐水。继续培养24,48h,采用酶组化及免疫组化染色观察各组ATPase和生长抑素表达变化。采用LUZEX-F图像分析仪分别测定其灰度值;用酶联免疫检测仪测定492nm波长的吸光度值。结果与结论：给药后24,48h,实验组ATPase、生长抑素灰度值显著高于对照组（P〈0.01）,吸光度值显著低于对照组（P〈0.01）。提示氧自由基可降低ATPase和生长抑素含量,影响生殖细胞在体外培养过程中的生长与增殖。     

氧自由基对生殖细胞三磷酸腺苷酶和生长抑素的影响

背景:有关细胞自由基的研究,主要集中在动物体内细胞自由基的产生与清除方面.目的:观察氧自由基对体外培养的睾丸生殖细胞三磷酸腺苷酶(ATPase)和生长抑素含量的影响.方法:体外分离、纯化小鼠睾丸生殖细胞,培养24 h 后,将其分为2 组,实验组添加黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶建立氧自由基损伤模型;对照添加生理盐水.继续培养24,48 h,采用酶组化及免疫组化染色观察各组ATPase 和生长抑素表达变化.采用LUZEX-F 图像分析仪分别测定其灰度值;用酶联免疫检测仪测定492 nm 波长的吸光度值.结果与结论:给药后24,48 h,实验组ATPase、生长抑素灰度值显著高于对照组(P ＜ 0.01),吸光度值显著低于对照组(P ＜ 0.01).提示氧自由基可降低ATPase 和生长抑素含量,影响生殖细胞在体外培养过程中的生长与增殖.     

Kinetics of Insulin Secretion in Chronic Pancreatitis and Mild Maturity Onset Diabetes (Evidence for "Gut Hormone" Action Beyond Glucoreceptor and Cyclic Adenosine Monophosphate Mediated Insulin Release)

We studied insulin responses to glucose with and without cholecystokinin-pancreozymin and aminophyllin infusions in normal, chronic pancreatitic and genetic (maturity-onset) diabetic subjects. Glucose was given alone as separate 5 and 10 g boluses followed by infusion at 250 mg/min. and 500 mg/min., respectively. Chronic pancreatitis patients and genetic diabetic patients had decreased Imax values, indicating a decreased insulin reserve. Sensitivity to glucose was normal in pancreatitic subjects, but the diabetic subjects had a raised G50 value, compatible with glucoreceptor dysfunction. Infusions of aminophyllin enhanced insulin responses (Imax) to glucose injection in normal subjects and to a lesser degree in pancreatitic subjects, but decreased sensitivity to glucose (increase in G50) in both groups. Although the Imax value in pancreatitic subjects was significantly lower than in the control subjects during the glucose plus aminophyllin infusion, the blood glucose concentration in the pancreatitic subjects was nonetheless decreased. This suggests that pancreatitic subjects have increased endogenous insulin sensitivity. Aminophyllin had no effect in diabetic subjects. Crude cholecystokinin-pancreozymin changed the shape of the glucose/insulin dose response curve in normal, pancreatitic and diabetic subjects. These findings further suggest that the defect in insulin secretion in pancreatitic subjects is partly situated at the cyclic adenosine monophosphate stage of insulin release. Crude cholecystokin-pan-creozymin seems to affect insulin release at a point beyond the cyclic adenosine monophosphate stage.     

电针对骶上脊髓损伤后逼尿肌亢进大鼠逼尿肌中环腺苷酸和蛋白激酶A含量及肌球蛋白轻链激酶磷酸化的影响

目的 探讨电针改善骶上脊髓损伤休克期后逼尿肌反射亢进的可能机制.方法 60只雌性Sprague-Dawley大鼠按随机数字表抽取12只作为空白组,12只作为假手术组,剩余36只采用改良T10脊髓横断法制作神经源性膀胱模型,从符合要求的模型大鼠中二次随机抽取12只作为模型组,12只作为电针组.造模术后第19天取次髎、中极...     

二丁酰环磷腺苷钙联合生脉、黄芪注射液治疗慢性心力衰竭的临床效果

目的观察二丁酰环磷腺苷钙联合生脉、黄芪注射液治疗慢性心力衰竭(chronic heart failure,CHF)的临床效果。方法将80例CHF随机分为研究组和对照组,每组40例。对照组予强心、利尿等常规抗心力衰竭治疗,研究组在常规治疗基础上予二丁酰环磷腺苷钙联合生脉、黄芪注射液治疗。疗程均为2周,疗程结束后比较两组疗效。结果研究组、对照组治疗后心功能均有所改善,总有效率分别为95.0%、80.0%,差异有统计学意义(P0.05);6 min步行试验总有效率分别为87.5%、75.0%,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后两组N末端B型利钠肽前体(NT-pro BNP)水平均有所下降(P0.01),研究组较对照组下降更为明显(P0.05);两组左心室舒张末内径(LVEDD)较治疗前均缩小(P0.05),左心室射血分数(LVEF)、心输出量(CO)均较治疗前提高(P0.05),研究组上述指标改善优于对照组(P0.01)。两组治疗中均未发现明显不良反应。结论二丁酰环磷腺苷钙联合生脉、黄芪注射液治疗CHF能更好地改善心功能,提高患者的生活质量。