N-硝基精氨酸甲酯抗C6脑胶质瘤细胞增殖的研究

目的探讨一氧化氮合酶(NOS)抑制剂N-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)在C6脑胶质瘤细胞株生长中的作用.方法体外培养的C6胶质瘤细胞加入终浓度分别为50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L的L-NAME和胸腺核苷嘧啶(3H-TdR),48 h后进行细胞3H-TdR结合率的液相闪烁计数检测.结果L-NAME50 μmol/L、100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L组对C6细胞的抑制率分别为23.57%、38.38%、46.18%、52.39%;C6细胞3H-TdR结合率在100 μmol/L、150 μmol/L、200 μmol/L组有明显降低,与对照组相比差异显著(P＜0.01).结论NOS抑制剂L-NAME能抑制体外培养的C6胶质瘤细胞的增殖,并呈浓度依赖性,一氧化氮(NO)可能对C6胶质瘤有增殖刺激作用.     

塞来昔布对神经胶质瘤细胞U251增殖及凋亡的影响

目的探讨非甾体类抗炎药(NSAIDs)对神经胶质瘤细胞增殖的影响。方法选用神经胶质瘤细胞U251,分别加入0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L和80μmol/L的塞来昔布进行处理。四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测U251细胞增殖水平及抑制率,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果随塞来昔布浓度的增加,神经胶质瘤细胞U251增殖水平明显降低,增值抑制率升高。不同浓度和不同作用时间,塞来昔布对U251细胞增殖抑制率有显著性差异(P<0.05);流式细胞术细胞凋亡率检测显示,80μmol/L塞来昔布处理48 h的U251细胞凋亡率(17.86%)较0μmol/L(11.23%)增高(P<0.05)。结论塞来昔布可抑制人胶质瘤细胞U251的生长和增殖,促进U251的凋亡发生,以80μmol/L为佳。     

Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡作用的研究

目的探讨Bm-12促C6胶质瘤细胞生长及凋亡的作用。方法显微镜观察不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞生长的影响,用PBS溶液作为对照组。并用流式细胞仪检测不同浓度Bm-12对C6胶质瘤细胞凋亡的影响。结果不同浓度Bm-12加入C6胶质瘤细胞培养液后,C6胶质瘤细胞生长明显受抑制,细胞形态及数量明显发生变化,且凋亡率均较对照组显著增加(P<0.01),并呈剂量依赖性。结论 Bm-12可以抑制C6胶质瘤细胞生长,并诱导其凋亡。     

抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态学影响的研究

目的探讨不同浓度的抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态学的影响。方法体外培养C6脑胶质瘤细胞,通过光镜及电镜技术观察不同浓度的抑胶素对C6脑胶质瘤细胞形态的影响。结果倒置显微镜及图像分析议下观察各组细胞形态变化:不同浓度抑胶素处理组可见细胞大小、形态趋向一致,有的接近正常胶质细胞,并且细胞数逐渐减少,随着抑胶素浓度的增大此种改变越明显。HE染色后可见抑胶素处理组细胞肿胀,坏死,胞核为很深的蓝色或消失,细胞膜的连续性破坏。电镜结果显示应用抑胶素后肿瘤细胞出现凋亡及坏死改变,并且随着抑胶素浓度的升高而此种改变越明显。结论抑胶素能够促使C6脑胶质瘤细胞发生凋亡及坏死,同时可使肿瘤细胞的形态向正常细胞转化,提示抑胶素具有抑制脑胶质瘤细胞生长的作用。     

血卟啉甲醚声动力诱导体外C6胶质瘤细胞凋亡与蛋白Bcl-2/Bax表达

目的 探讨血卟啉甲醚声动力疗法(sonodynamic theraoy,SDT)对体外C6胶质瘤细胞的促凋亡作用及蛋白Bcl-2/Bax表达.方法 取处于对数生长期C6胶质瘤细胞接种于96孔6孔培养板上.采用噻唑蓝比色分析法(MTT)观察不同时间超声辐照后细胞存活率,筛选最佳照射时间;流式细胞仪检测24 h后对照组(control)、血卟啉甲醚组(hematoporphyrin monomethyl ether ,HMME)、单纯超声组(ultrasound)、超声联合HMME组(SDT)C6胶质瘤细胞凋亡率;Western blot 检测凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达.结果 当超声频率为1.0 MHz,声强为1.0 W/cm2 ,MTT筛选60s为最佳辐照时间.同对照组、HMME及单纯超声组比较,SDT组凋亡率明显增高(P<0. 05),同时伴有凋亡蛋白Bax,上调表达,Bcl-2下调表达.结论 血卟啉甲醚声动力诱导体外C6胶质瘤细胞凋亡,Bcl-2/Bax参与并调节凋亡过程.     

细胞色素C对HL-60细胞凋亡作用及其与相关bcl-2、bax基因的关系

为了探讨细胞色素C在体外作用于HL-60细胞时细胞发生的变化及其相关凋亡基因的bcl-2、bax表达变化的机制，用不同浓度的细胞色素C作用于HL-60细胞24小时，然后分别用肌检测细胞色素C对HL-60细胞的抑制率；应用光学显微镜、荧光显微镜观察HL-60细胞形态的变化；用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期的变化；用DNA凝胶电泳检测HL-60细胞的凋亡；用RT—PCR检测bcl-2、bax基因的表达的变化。结果表明：在细胞色素C浓度为0—150mg／L时，细胞抑制率随着浓度的增加而增加；当细胞色素C浓度在0—37．5mg／L时，细胞凋亡率逐渐增加，可见典型的凋亡细胞和明显DNA梯形条带，同时，在该浓度范围内bcl-2表达逐渐减少，而bax表达逐渐增加；当细胞色素C浓度大于37．5mg／L时，细胞凋亡率增加不明显，但细胞出现坏死。结论：细胞色素C能诱导HL-60细胞发生凋亡，细胞色素C对细胞周期的作用是将细胞阻滞于G1期，并且细胞凋亡率、bcl-2、bax基因的表达的变化与细胞色素C浓度呈一定的量效依赖关系，细胞色素C诱导HL-60凋亡可能与bax的激活和bcl-2的抑制有关。     

C6胶质瘤荷瘤大鼠刀照射后胶质瘤细胞死亡方式实验研究

目的 采用放射线照射大鼠C6脑胶质瘤模型，分析放射线诱导胶质瘤细胞死亡方式的发生规律。方法选用24只生后5—6周雌性SD大鼠，购自安徽医科大学实验动物中心。大鼠C6胶质瘤细胞购自中科院细胞库。所有大鼠均采用立体定向法制作脑胶质瘤模型，即人脑皮质下5mm注入4m体外培养和传代后的C6细胞悬液。随机抽签法将大鼠分为9Gy照射组、12Gy照射组和模型组，每组8只。前2组分别于造模后21d行照射剂量分别为9Gy、12Gy伽玛刀治疗，模型组未给予照射。治疗后1周取大鼠肿瘤与脑组织交界处组织，采用流式细胞仪检测肿瘤细胞坏死率及凋亡率，HE染色观察组织学变化。结果纳入大鼠24只，模mm和实验组2分别有1只大鼠在麻醉意外中死亡，其余22只大鼠均进入结果分析。①肿瘤细胞坏死率及凋亡率：两剂量照射组肿瘤细胞凋亡率和坏死率均高于模型组，差异有统计学意义（P〈0．05）；9Gy照射组肿瘤细胞的凋亡率高于12Gy照射组，坏死率低于12Gy照射组，差异有统计学意义（P〈0．01）。②组织学变化：各组肿瘤与脑组织均可见肿瘤生长，伽玛刀两剂量组治疗后出现了肿瘤中心坏死，坏死区细胞稀疏，向外细胞渐增多，其间含有很多的破碎细胞，再向外则为密集的瘤细胞，并有细胞内、外的水肿和出血，同时也有不同程度的核固缩细胞，12Gy照射组较9Gy照射组坏死增加。结论伽玛刀可诱导脑胶质瘤模型大鼠肿瘤细胞凋亡和坏死，在治疗剂量范围内，随着剂量的增加肿瘤坏死有增加趋势。     

以聚氰基丙烯酸正丁酯为载体长春碱纳米粒的制备和性能评价及其对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞生长的影响

背景：长春碱纳米粒不仅化学特性改善，药物利用度提高，而且具有特异的靶向性。目的：制备硫酸长春碱聚氰基丙烯酸正丁酯纳米粒（vinblastine sulfate poly（butyl cyanoacrylate）NP，VBL-PBCA-NP）并进行质量评价，柃测其对大鼠C6脑胶质瘤细胞的生长抑制作用。设计、时间及地点：随机对照细胞实验，于2006-10／2007-12在西北农林科技大学动物医学院细胞生物学实验窒完成。材料：以右旋糖酐为稳定剂，在pH2.0的条件下，利用乳化聚合法制备VBL-PBCA-NP。方法：取对数生长期的C6大鼠胶质瘤细胞，分别加入0．5，5，50，500，5000μg／L的VBL-PBCA-NP或硫酸长春碱，同时设阴性对照组（加入完全培养基）和空白对照组（只加入完全培养基，不含细胞）及空白纳米粒组。主要观察指标：VBL-PBCA-NP纳米粒的外观形态、粒径、包封率及载药量：C6细胞的增殖抑制率及凋亡形态。结果：VLB-PBCA-NP分布均一，稳定，平均粒径为74．4nm，粒径分布较窄，包封率为74．47％，载药量为18．62％。与硫酸长春碱原料药相比，在0.5～5000μg／L范围内，VBL-PBCA-NP能显著提高C6细胞的增殖抑制率（P〈O．05），且更容易引起C6细胞凋亡，减少细胞数量。结论：制备的VBL-PBCA-NP载药量和包封率不是很高，但对大鼠C6脑神经胶质瘤细胞有较强的生长抑制作用。     

细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡时bcl-2 fas基因的表达

目的观察细胞色素C对急性髓系白血病M2型(AML-M2)(HL-60细胞)bcl-2、fas表达的影响,探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。方法将体外培养的HL-60细胞分成六组,细胞色素C终浓度分别为0(对照组)、9.375mg/L、18.75mg/L、37.5mg/L、75mg/L、150mg/L,用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡效应,用RT-PCR、westernblotting检测以凋亡为主的HL-60细胞中bcl-2、fas的表达水平。结果流式细胞仪检测表明细胞色素C终浓度分别为0、9.375mg/L、18.75mg/L、37.5mg/L时HL-60细胞是以凋亡效应为主的,bcl-2基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而降低,fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高,当细胞色素C浓度为75mg/L、150mg/L时,HL-60细胞是以坏死效应为主的。结论细胞色素C能够下调bcl-2mRNA及其蛋白的表达,上调fasmRNA及其蛋白的表达,从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。     

人参皂甙单体Rh2对人K562白血病细胞增殖和凋亡的时效和量效分析

目的:观察人参皂甙单体Rh2对人K562细胞增殖和凋亡的影响,分析该影响的时间和剂量依赖性。方法:实验于2006-07/08在吉林医药学院临床检验系实验室完成。①取对数生长期人K562细胞制成细胞悬液,浓度1×108L-1,接种于96孔培养板内,每孔100μL,6h后加入终质量浓度分别为6.25,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L的人参皂甙单体Rh2100μL(购自吉林省宏久生物科技股份有限公司),每一浓度组均设4孔。对照孔及调零孔加100μL培养液。各孔总体积均为200μL。在加药后48h采用四甲基偶氮比色法检测各孔中细胞的抑制率。在接近于半数抑郁浓度的人参皂甙单体Rh2处理作用于细胞6,12,24,48和72h后采用四甲基偶氮唑盐比色法计算抑制率。②在倒置显微镜下观察加药与未加药孔K562细胞形态。③常规苏木精-伊红染色,检测25.0mg/L人参皂甙单体Rh2作用0,12,24和48h后K562细胞的凋亡率,并观察人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L时,培养24h后的细胞凋亡率。结果:①人参皂甙单体Rh2对K562细胞生长抑制作用:当人参皂甙单体Rh2质量浓度为6.25,12.5,25.0,50.0和100.0mg/L时,抑制率逐渐升高,呈现明显剂量依赖性。人参皂甙单体Rh2对K562细胞的半数抑制浓度为25.8mg/L,处理K562细胞6,12,24,48,72h后细胞抑制率逐渐升高,且后4个时间点明显高于处理6h时(t=11.79～50.89,P<0.01)。②人参皂甙单体Rh2对K562细胞形态的影响:细胞经人参皂甙单体Rh2作用后呈现出明显的凋亡细胞形态,细胞分散,体积缩小,胞浆浓缩,细胞核膜消失,细胞核断裂呈小块或碎片状,但细胞膜较完整并可见凋亡小体。③人参皂甙单体Rh2对K562细胞凋亡的影响:在25.0mg/L人参皂甙单体Rh2作用K562细胞0,12,24和48h后,K562细胞的凋亡率依次升高,分别为(3.8±0.5)%,(9.4±1.1)%,(23.2±2.2)%和(34.5±3.5)%(与作用0h比较,t=8.78～20.06,P<0.05～0.01)。人参皂甙单体Rh2质量浓度分别为0,12.5,25.0,50.0,100.0mg/L培养K562细胞24h,细胞凋亡率依次升高,分别为[(3.7±0.6)%,(9.4±1.3)%,(21.2±2.1)%,(28.5±2.5)%,(31.8±3.4)%,与0mg/L人参皂甙单体比较,t=9.39～18.54,P<0.01]。结论:人参皂甙单体Rh2能抑制体外培养的K562细胞增殖并诱导其凋亡,且呈时间和剂量依赖性。     

超声联合载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠C6细胞凋亡

目的 探讨低频超声介导载卡莫司汀脂质微泡诱导大鼠神经胶质瘤C6细胞凋亡的机制.方法 采用MTT法检测各实验组不同时间点的细胞抑制率,确定实验参数;流式细胞仪分析C6细胞的凋亡率及细胞周期;透射及扫描电镜观察C6细胞超微结构的变化.结果 超声+10%载卡莫司汀微泡组在6 h时段细胞抑制率、细胞凋亡率均最高,与其他实验组及对照组相比差异均有显著统计学意义(P<0.01).超声破坏载药微泡使增殖期(S期)细胞比例减少,电镜观察超声联合载药微泡可使C6细胞出现凋亡.结论 低频超声介导载卡莫司汀脂质超声微泡能诱导C6细胞凋亡,可能成为胶质瘤治疗的一种新方法.     

氯化三乙基锡抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖并诱导凋亡

目的探讨氯化三乙基锡对体外培养大鼠C6胶质瘤细胞的抑瘤作用。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测氯化三乙基锡对C6胶质瘤细胞的增殖抑制作用，采用普通倒置显微镜和HE染色形态学方法观察氯化三乙基锡对C6细胞增殖抑制作用。结果不同浓度的氯化三乙基锡在体外可抑制C6胶质瘤细胞的增殖，药物浓度为0．5μM、1．0μM和2．0μM时，抑制率分别为15．62％、36．16％和41．92％，存在着剂量依赖关系。氯化三乙基锡对C6胶质瘤细胞的增殖抑制率在不同浓度组与对照组之间具有显著性差异（P〈0．05），以及不同浓度组之间具有显著性差异（P〈0．01）。HE染色观察到2．0μM氯化三乙基锡作用于C6胶质瘤细胞48h后，出现细胞凋亡特有的形态学改变。结论氯化三乙基锡可抑制体外培养C6胶质瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

促红细胞生成素预防人脐静脉内皮细胞凋亡的作用

目的 建立氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡模型,探讨促红细胞生成素(EPO)对ox-LDL诱导HUVECs凋亡的影响.方法 取体外培养3～6代的HUVECs用于实验.实验分为两组:一组细胞予以不同浓度(6.25、50、100 kU/L)重组人促红细胞生成素(rhEPO)预处理24 h,再加入100 mg/L ox-LDL孵育48 h;另一组细胞加入反式或顺式LOX-1 mRNA预处理24 h,再加入 100 mg/L 的ox-LDL孵育12 h.采用存活率、凋亡率和Bcl-2/Bax比值评价细胞凋亡情况.结果 与ox-LDL组比较,随rhEPO浓度的递增,细胞存活率增高,细胞凋亡率降低,凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值增高(P均<0.05),呈剂量依赖性.反式LOX-1 mRNA(0.5 μmol/L)预处理组凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值较ox-LDL组明显增高(P<0.05);顺式LOX-1 mRNA(0.5 μmol/L)预处理组Bcl-2/Bax比值与ox-LDL组则无明显差异.结论 ox-LDL可以诱导HUVECs凋亡,并且通过LOX-1 mRNA来调节,rhEPO可增高Bcl-2/Bax比值,抑制ox-LDL诱导的HUVECs凋亡.     

抑胶素对大鼠脑胶质瘤P16蛋白表达影响的实验研究

目的 探讨不同浓度的抑胶素对大鼠脑胶质瘤p16蛋白表达的影响。方法 体外培养C6胶质瘤细胞，制作大鼠脑胶质瘤模型，通过免疫组织化学染色法检测不同浓度的抑胶素对大鼠脑胶质瘤P16蛋白表达的影响。结果 随着抑胶素浓度的增加，大鼠脑胶质瘤p16蛋白的表达也逐渐增强。结论 抑胶素能够抑制大鼠脑胶质瘤的增殖。并且具有改变肿瘤细胞增殖周期的作用。     

黄芪多糖抑制氧化应激致大鼠 软骨细胞损伤及凋亡的作用机制分析

目的 探究黄芪多糖(alp)抑制氧化应激致大鼠软骨细胞损伤及凋亡的作用机制。方法 选取SPF级雌性3周龄大鼠,分为活性氧自由基培养组(ROS组)、黄芪多糖组(ROS+alp组),另设空白对照组。ROS组取其软骨细胞,加入活性氧自由基培养; ROS+alp组在ROS组的基础上加入浓度为30 mg/L的黄芪多糖处理;空白对照组不作处理。使用CCK-8法测定不同浓度(0 mg/L、20 mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L)黄芪多糖对大鼠细胞生存率的影响;采用蛋白质印记法(Western Blot)检测大鼠软骨细胞中Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、基质金属酶蛋白3(MMP3)、MMP13、CLO2蛋白表达情况;采用Hoechst 33342染色法测定软骨细胞凋亡率。结果 alp 0mg/L时,细胞大量凋亡,生存率不到40%,随着alp的浓度的增加,大鼠软骨细胞存活率显著升高;与空白对照组相比,ROS组大鼠细胞Bcl-2、CLO2蛋白表达显著下降(P 0. 01),MMP3、MMP13、Bax蛋白表达显著上升(P 0. 01);与ROS组大鼠细胞相比,ROS+alp组大鼠细胞CLO2、Bcl-2蛋白表达显著上升(P 0. 01),MMP3、MMP13、Bax蛋白表达显著下降(P 0. 01)。Hoechst 33342染色结果显示,空白对照组软骨细胞核染色分布均匀,呈弥散均匀的低密度荧光,ROS组大鼠细胞荧光分布较为杂乱且荧光密度较高,ROS+alp组大鼠细胞分布也较为均匀,荧光密度也较低。结论在一定范围内黄芪多糖呈剂量依赖性显著降低大鼠软骨细胞内ROS水平,上调抑制凋亡因子,下调凋亡因子,减少大鼠软骨细胞的凋亡,达到缓解软骨细胞损伤的效果。     

氯化甲基汞对人SHG44胶质瘤细胞抗肿瘤活性的体外实验研究

目的探讨氯化甲基汞(MMC)对人SHG44胶质瘤细胞株的增殖、杀伤和细胞凋亡的影响,为胶质瘤治疗提供理论依据。方法体外培养SHG44胶质瘤细胞,分为空白对照组和MMC实验组(按氯化甲基汞浓度分组)。采用MTT比色法检测不同浓度MMC对体外培养SHG44细胞的增殖抑制和杀伤作用。用流式细胞仪测定MMC对SHG44细胞凋亡/坏死的影响。结果在体外1.25、2.50、5.00和10.00μmol.L-1的MMC均可抑制SHG44胶质瘤细胞的增殖,SHG44胶质瘤细胞存活率明显低于对照组(P0.05),增殖抑制作用随浓度的增加而增强。SHG44胶质瘤细胞接触2.50、5.00和10.00μmol.L-1的MMC后4、8、16和32 h的细胞存活率明显低于对照组(P0.05),细胞杀伤作用随浓度的增加和时间的延长而增强。SHG44胶质瘤细胞接触0.075、0.15、0.3和1.2μmol.L-1氯化甲基汞12 h后细胞凋亡/坏死率呈现剂量依赖性增高趋势(P0.01)。结论MMC具有杀伤SHG44胶质瘤细胞、抑制其增殖、诱导凋亡的抗肿瘤活性,有应用于胶质瘤治疗的潜在价值。     

基因fas的表达对细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的影响

本研究观察fas基因表达的变化对细胞色素C诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响，并探讨细胞色素C诱导HL-60细胞凋亡的机制。将体外培养的HL-60细胞分成6组，细胞色素C终浓度分别为0（对照组）、9．375、18．75、37．5、75、150mg／L，用流式细胞仪检测细胞色素C对HL-60细胞的凋亡作用．用RT—PCR和Westernblot检测以凋亡为主的HL-60细胞中fas的表达水平。结果表明：细胞色素C终浓度分别为0、9．375、18．75及37。5mg／L时HL-60细胞是以凋亡效应为主，fas基因的mRNA和蛋白的表达随着细胞色素C浓度的增高而增高，当细胞色素C浓度为75mg／L、150mg／L时，HL-60细胞是以坏死效应为主。结论：细胞色素C能够上调fasmRNA及其蛋白的表达，从而可以诱导HL-60细胞的凋亡。     

氧化应激对C2C12成肌细胞增殖与凋亡的影响

目的:利用过氧化氢作为外源性活性氧来源,探讨氧化应激对C2C12成肌细胞增殖与凋亡的影响。方法:实验于2005-10/2006-01在广东省组织构建与检测重点实验室完成。C2C12成肌细胞(美国ATCC,批号CRL-1722TM);过氧化氢(汕头市光华化学药厂,批号20050519)。①C2C12细胞置于含100mg/L青霉素,100mg/L链霉素和体积分数为0.1胎牛血清的DMEM-F12培养基中常规培养。②采用四甲基偶氮唑盐法测定过氧化氢对C2C12细胞增殖的影响。取体外培养的C2C12细胞,胰酶消化后制成单细胞悬液,离心重悬,血细胞计数板进行细胞计数,细胞悬液密度为3.4×106L-1,接种至96孔板,200 μL/孔。实验共分5组:过氧化氢25,50,100,300 μmol/L浓度组、空白对照组,6个平行孔/组。各组在37℃、体积分数为0.05的CO2细胞培养箱内常规培养。待细胞融合率达80%且未出现细胞分化时,过氧化氢各浓度组分别向C2C12细胞中加入含对应浓度过氧化氢的无血清培养基,空白对照组则向C2C12细胞中加入单纯无血清培养基。各组细胞分别于过氧化氢处理0,6,12,24,36,48,60h后,每孔加入2g/L的四甲基偶氮唑盐液20μL,于酶联免疫仪570nm处检测各孔吸光度值。③过氧化氢对C2C12细胞凋亡的影响:采用Hoechst 33342/PI双染检测C2C12细胞凋亡。正常细胞核Hoechst着色为淡蓝色,形态呈圆形,内有较深的蓝色颗粒;中早期凋亡细胞核Hoechst着色呈亮蓝色,或核呈分叶,碎片状,边集;坏死或晚期凋亡的细胞核PI着红色,Hoechst因细胞膜破裂而不能着色。取体外培养的C2C12细胞,制备单细胞悬液过程同上,按1.8×107L-1密度接种至6孔板,5mL/孔。实验分组及干预措施同上,3个平行孔/组。处理36h后立即进行Hoechst33342/PI凋亡双染,荧光倒置显微镜下观察,各组随机取6个不同视野进行细胞计数,计数实验重复3次,取平均值作为细胞凋亡率。结果:①过氧化氢对C2C12细胞增殖的影响:细胞处理36h后与空白对照组比较,过氧化氢25 μmol/L浓度组平均吸光度值与之相近(0.207±0.014,0.199±0.023;t=0.677,P>0.05),即促进C2C12细胞增殖;过氧化氢50,100,300 μmol/L浓度组平均吸光度值均显著下降(0.182±0.027,0.149±0.009,0.052±0.012;t=1.990,8.251,20.004,P均<0.05),即抑制C2C12细胞增殖,且呈时效和量效关系。②过氧化氢对C2C12细胞凋亡的影响:细胞处理36h后,与空白对照组比较,过氧化氢25 μmol/L浓度组细胞凋亡率明显降低[(9.09±0.85)%,(4.61±0.67)%;t=22.95,P<0.01];过氧化氢50,100,300 μmol/L浓度组细胞凋亡率则明显提高[(33.50±5.74)%,(45.95±6.82)%,(76.47±4.66)%;t=4.35,4.68,18.02,P均<0.01],且呈时效和量效关系。结论:活性氧在C2C12成肌细胞增殖与凋亡过程中扮演重要角色,低浓度可促进C2C12细胞增殖,高浓度则能够抑制其增殖并促进凋亡,且呈时效和量效关系。提示氧化应激对成肌细胞的生长具有调节作用。     

党参总皂苷抗缺氧缺糖再给氧诱导大鼠皮质神经细胞凋亡的作用

目的:以原代培养的胚胎大鼠大脑皮质神经细胞进行缺氧缺糖再给氧处理,观察党参总皂苷对神经细胞凋亡的抑制作用。方法:胚胎大鼠大脑皮质神经细胞原代培养,含连二亚硫酸钠的无糖Earle's液进行缺氧缺糖处理造模,MTT法测定细胞存活率,Hoechst33342和PI原位双染法荧光显微镜观察细胞形态学变化和坏死、凋亡细胞百分率,APO-BRDU法流式细胞术检测凋亡细胞百分率,Fluo-3法流式细胞术检测细胞内Ca2+浓度,评价药效。结果:细胞存活率:与模型组犤(19.69±5.80)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组39.21±12.21)%,0.052mg/L组犤(犦犤(37.91±4.67)%犦能显著提高细胞存活率(P<0.001);细胞坏死率:与模型组犤(44.99±12.81)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(15.66±4.67)%犦,0.052mg/L组犤(23.98±4.04)%犦和0.0052mg/L组犤(20.50±5.19)%犦能显著降低细胞坏死率P<0.001);原位双染法细胞凋亡(率:与模型组犤(17.44±4.82)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(10.58±2.04)%犦,0.052mg/L组犤(11.61±2.35)%犦能显著降低细胞凋亡率(P<0.05);流式细胞术检测细胞凋亡率:与模型组犤(8.55±3.84)%犦比较党参总皂苷0.52mg/L组犤(3.85±1.92)%犦,0.0052mg/L组犤(3.45±2.22)%犦能显著降低细胞凋亡率P<0.05);(细胞内Ca2+平均荧光值,与模型组(47.     

穿膜肽-凋亡蛋白融合蛋白导入人脐静脉内皮细胞和人肺腺癌Anip973细胞的生物学特性

目的:在大肠杆菌内表达穿膜肽与凋亡蛋白的融合蛋白,观察其诱导肺腺癌Anip973细胞凋亡的活性,并了解其是否有剂量依赖性。方法:实验于2005-08/2006-01在哈尔滨医科大学生物化学与分子生物学教研室完成。①在大肠杆菌中表达穿膜肽-凋亡蛋白并用IDA-Ni2 亲和层析纯化。②细胞增殖抑制实验:取对数生长期人脐静脉内皮细胞和Anip973细胞接种于96孔培养板中,培养12h后加入终浓度分别为0,10,20,30,40,50mg/L融合蛋白培养48h,弃上清,每孔中加入四甲基偶氮唑盐溶液穴5g/L雪20μL,继续孵育4h,检测吸光度,计算肿瘤生长抑制率。③取对数生长期人脐静脉内皮细胞、Anip973细胞,每种细胞分成两组:给药组加入终浓度为30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白,对照组加入相同体积的磷酸盐缓冲液,继续培养48h。苏木精-伊红染色,光镜下观察细胞形态;溴乙啶/丫啶橙荧光染色观察细胞凋亡率。结果:①细胞增殖抑制实验结果表明浓度为10～50mg/L穿膜肽-凋亡蛋白对人脐静脉内皮细胞没有明显抑制作用,对Anip973细胞呈剂量依赖性抑制作用,半数抑制浓度为27mg/L。②30mg/L穿膜肽-凋亡蛋白作用48h后,人脐静脉内皮细胞形态没有显著改变,对照组和给药组的凋亡率分别为穴2.9±0.4雪%和穴3.1±0.6雪%,没有显著差异(P>0.05);Anip973细胞可见到细胞皱缩,染色质浓缩和出现凋亡小体等凋亡特征性形态变化,给药组和对照组凋亡率分别为穴36.8±1.7雪%和穴6.7±0.5雪%,差异显著(P<0.01)。结论:穿膜肽-凋亡蛋白能诱导肿瘤细胞凋亡,这种作用呈剂量依赖性,而对正常细胞没有毒性作用。