肺炎支原体快速培养法与抗原量子点免疫层析法快速检测技术在支原体肺炎诊断中的应用

目的探究肺炎支原体抗原量子点免疫层析法快速检测技术对支原体肺炎(MP)的诊断效果。方法研究对象为2015年6月至2016年6月收入的80例支原体肺炎病人,分别采用肺炎支原体抗原量子点免疫层析法快速检测技术与肺炎支原体快速培养法进行检测。比较两种检测方法的阳性率、特异性、敏感度。结果抗原量子点免疫层析法灵敏度(91.25%)、特异度(96.25%)显著高于快速培养法的灵敏度(81.25%)、特异度(72.50%)(χ2=4.206、30.549,P<0.05)。抗原量子点免疫层析法阳性率(97.50%)与快速培养法阳性率(92.50%)比较差异无统计学意义(χ2=2.632,P>0.05)。结论抗原量子点免疫层析法在灵敏度及特异度更具优势,且检测时间短。     

量子点标记快速免疫检测技术的研究

目的自制发光材料量子点,优化量子点与抗体的偶联方案,并对制备的量子点标记抗体进行免疫检测的可行性研究。方法采用高温热分解法制备得到镉硒(CdSe)量子点,用还原型谷胱甘肽(GSH)对量子点表面改性,使用双功能聚乙二醇(PEG)交联量子点表面的GSH,得到表面PEG化的水溶性量子点,该物质稳定性好。用抗乙型肝炎表面抗原(HBsAg)抗体与量子点共价交联,采用斑点免疫反应验证HBsAg检测的可行性。结果成功制备量子点及其抗体标记物,检测HbsAg的敏感性可达1.6 ng/mL水平。结论量子点标记免疫检测呈现技术优势,有广阔的发展与应用前景。     

量子点标记物及其在免疫学与核酸检测中的应用

量子点(Quantum:Dots,QDs)是一种由Ⅱ～Ⅵ或Ⅲ～Ⅴ族元素组成的半导体纳米晶体,直径约1～20 nm,最常见直径为1～10nm的球状晶体.量子点是由金属离子Ag、Hg、Pb、Zn、Cd和In,以及非金属元素S、Se、Te和P组成的核/壳结构的半导体纳米晶体,主要形式有CdSe/ZnS和CdSe/CdS 2种,其中CdSe为内核,ZnS或CdS包被其外为外壳.     

人肺炎支原体抗原循环增强荧光免疫方法的建立

目的采用循环增强免疫荧光技术(CEIFA),建立人肺炎支原体抗原(Mp)的检测方法,并对其性能进行初步探讨。方法采用CEIFA检测Mp肺炎抗原,对Mp标准物质及54份临床标本用培养法进行测定,采用CEIFA检测Mp的灵敏度及该方法与培养法检测的符合率。结果生物素标记Mp兔多抗与亲和素偶联花青染料5的工作浓度分别为5、8μg/mL时,阳性对照与阴性对照吸光度(P/N)比值最大。检测Mp抗原灵敏度为2μg/mL。54份临床标本培养法检测阳性率为29.6%(16/54),CEIFA法的阳性率为35.2%(19/54),二者符合率为75.9%,差异无统计学意义(P0.05)。结论建立的CEIFA法检测Mp抗原具有灵敏度高、特异度强等优点。     

白细胞介素-6量子点荧光免疫层析法的建立及性能验证

目的 研发出快速检测白细胞介素(IL)-6的量子点荧光免疫层析法试剂盒.方法 通过量子点荧光材料标记IL-6抗体,研发出一种能快速定量检测IL-6浓度的量子点免疫荧光层析法试剂盒,验证其灵敏度、回收试验、精密度、特异度、稳定性及其与贝克曼化学发光IL-6检测试剂盒的相关性.结果 试剂盒线性范围为10～4000 pg/mL,试剂盒决定系数R2≥0.950;最低检出限为2 pg/mL;在低、中、高浓度范围内的回收率均值分别为95.68％、101.23％、104.45％;批内精密度的变异系数(CV)为2.21％～3.93％,批间精密度的CV为2.42％～5.36％;特异度试验中交叉反应率均小于0.1％.结论 该研究自制的试剂盒灵敏度、准确性、精密度、特异度及稳定性都较好,能够准确、快速地完成临床样品IL-6浓度的定量检测.     

软海绵酸胶体金免疫检测法的建立与应用

目的 建立并应用软海绵酸(OA)胶体金免疫层析检测法.方法 通过纯化抗OA单抗、制备胶体金、标记单抗、制备胶体金试剂条、样品模拟提取与加标回收检测、贝类染毒提取及检测,建立和优化金标免疫层析法.结果 选择30 nm胶体金颗粒用于单抗标记,金标单抗浓度为200 μg/mL,金标单抗包被量为2.5 μL/cm,二抗包被浓度为1.0 mg/mL,反应时间为3～5 min,对加标贝肉和染毒贝类的检测灵敏度为25 ng/mL.结论 建立了可用于OA检测的胶体金免疫层析检测法,满足规定的贝类OA含量安全阈值,为腹泻性贝毒检测与食品安全检验提供了新的技术方法.     

乙型肝炎病毒标志物的免疫层析法在社区卫生服务中的应用

目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)标志物的免疫层析法在社区卫生服务中的应用。方法对364例血清标本分别用免疫层析法、酶联免疫法(ELISA)进行HBV标志物的检测。结果两种检测方法的乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)的总符合率、阳性符合率、阴性符合率都是100%,HBeAb的总符合率、阳性符合率、阴性符合率分别为99.18%、97.86%、100%,HBcAb的总符合率、阳性符合率、阴性符合率分别为99.45%、99.10%、100%。结论社区卫生服务中对个体患者或少量患者的乙型肝炎筛查或快速诊断,用免疫层析法检测比用ELISA法检测更具优越性能。     

联合检测甲胎蛋白和癌胚抗原的胶体金免疫层析试剂的研制及性能评价

目的 建立一种新型的联合检测甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)的胶体金免疫层析法(GICA).方法 G4和C2为一对抗AFP单克隆抗体(McAb),A1和C9为另一对抗CEA McAb,G4和A1分别以直线形式平行包被于固相硝酸纤维素(NC)膜上,C2和C9分别与胶体金结合后固定于结合物垫,制备成GICA试剂条.膜上另包被2 mg/mL兔抗鼠IgG抗体,用于检测有效性.结果 利用双抗体夹心原理,建立了可同时检测血清中AFP和CEA的GICA.本法经AFP和CEA标准液测定,试剂的敏感性为AFP (30 μg/L)、CEA (10 μg/L),与血红蛋白、人白蛋白、人球蛋白等无交叉反应,稳定性试验表明试剂可以在室温保存6个月以上.86份经化学发光免疫分析仪定量测定AFP、CEA浓度的临床血清标本用于本法的对比测定,符合性良好.结论 联合检测AFP和CEA的GICA试剂具有结果 可靠、方法 简便、快速等优点,与化学发光法测定结果 符合性良好.     

检测粪便隐血的金免疫渗滤法的初步研究

目的建立以人白蛋白为靶抗原的检测人粪便隐血的金免疫渗滤法试剂,并作临床初步应用。方法应用自制的2株抗人白蛋白单克隆抗体,其中1株包被在硝酸纤维素膜上,另1株与胶体金结合,组成金免疫渗滤试剂,并用研制的试剂与商品化便隐血免疫层析法试剂对比检测69例临床粪便标本。结果本研究建立的方法检测范围为10～10 000 mg/L,与免疫层析法试剂条临床比对结果显示,69例标本中除1例本法为(+),而免疫层析法为(-)外,其余全部符合。结论本研究研制的金免疫渗滤法粪便隐血试验方法简便、结果可靠,进一步研究后可应用于临床。     

β-人绒毛膜促性腺激素光激化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种检测人血清β-人绒毛膜促性腺激素（β-HCG）浓度的光激化学发光免疫分析方法。方法采用2株针对不同抗原表位的抗β-HCG抗体,其中一株抗体用来包被发光微粒,另一株抗体标记生物素,以双抗体夹心法检测人血清中的β-HCG浓度,并与Beckman-Coulter公司试剂（化学发光法）进行比较。结果发光微粒浓度为100μg/mL、生物素标记抗体浓度为7μg/mL时,检测范围为0~1 000 mIU/mL,灵敏度为0.16 mIU/mL,平均回收率为100.3%,批内变异系数（CV）为0.80%~3.99%,批间CV为2.25%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率低,稳定性较好,与化学发光法的符合率好（r=0.99）。结论光激化学发光免疫分析方法测定β-HCG具有较高灵敏度、精密度和准确性,与化学发光法的符合率较好,适用于临床测定。     

改良免疫层析法检测泌尿生殖道沙眼衣原体感染的评价

目的评价改良免疫层析法在泌尿生殖道沙眼衣原体(CT)感染的检测质量,探讨其临床应用价值。方法运用改良免疫层析法试剂盒(简称chemtrue-CT)对3家医院的261例性病门诊和健康体检者进行检测,同时以聚合酶链反应(PCR)试剂盒(简称PCR-CT)检测作为标准,分析chemtrue-CT的检测性能。结果chemtrue-CT阳性率21.8%,PCR-CT阳性率28.4%,PCR-CT阳性率高于chemtrue-CT(P0.01)。chemtrue-CT敏感性和特异性分别是75.7%和99.5%,总体符合率92.7%。其中男性组2种方法总符合率88.8%,阳性率差异有统计学意义(P0.01);女性组2种方法总符合率为97.4%,阳性率差异无统计学意义(P0.05);女性中高危人群和健康人群2种试剂检测总符合率分别为96.8%和98.2%。结论改良衣原体免疫层析法与PCR之间的检测差异正在缩小,尤其对女性人群的检测性能接近PCR。     

应用FITC系统建立非均衡竞争三碘甲腺原氨酸化学发光法

目的 制备抗人三碘甲腺原氨酸(T3)多克隆抗体,应用异硫氰酸荧光素(FITC)系统开发新型非均衡竞争技术,建立一种能广泛应用于临床检测总三碘甲腺原氨酸(TT3)的方法.方法 以T3-牛血清清蛋白(BSA)为抗原免疫新西兰大白兔,制备抗人T3多克隆抗体,亲和层析法纯化特异性的抗人T3多克隆抗体并连接辣根过氧化物酶(HRP).用FITC标记T3类似物,采用抗FITC抗体包被发光板,FITC-T3类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,固相抗原与T3校准品或样本中的T3非均衡竞争结合T3-HRP抗体,建立标准曲线,血清中TT3通过标准曲线计算浓度.由此建立TT3化学发光检测方法进行方法学评价并与直接用T3-牛血清γ球蛋白(BGG)包被(非FITC系统)的检测系统进行比较.将该方法应用于临床100份血清标本的检测,定量结果与德国Roche 2010电化学发光全自动免疫分析系统(Elecsys 2010)结果进行比较.结果 抗体对T3具有高度特异性,线性相关系数r>0.99,线性范围为0.1～8 ng/mL,分析灵敏度为0.1 ng/mL,精密度测试批内、批间变异系数CV<5%,检测结果优于非FITC系统的检测.对于临床血清标本的检测,其定量结果与德国Elecsys 2010定量试剂盒的结果有很好的相关性,相关系数为0.961 9,临床符合率良好.结论 该方法精密性好、灵敏度高、稳定性强,有良好的准确性,适用于临床标本的检测.     

ABO血型抗原检测胶体金试剂条的研制及应用

目的应用胶体金免疫层析技术,研制1种ABO血型抗原检测胶体金试剂条。方法对试剂条在研制过程中牵涉到的各项工艺参数进行优化,包括:标记抗体用量与包被NC膜抗体浓度筛选,加样量及反应时间确定等,并对500例常规全血标本进行检测,评估试剂条的临床准确性。结果确定标记抗体浓度为24μg/m L、抗-A包被浓度为1.2 mg/m L、抗-B包被浓度为1.0 mg/m L,加样量为10-20μL、反应时间5-15 min,临床准确率100%。结论试条具有操作简单,携带方便,准确性高,无需仪器辅助等特点,检测样本不局限于人类新鲜全血,还可以是凝块血、血渍,将来甚至可以检测唾液、尿液的ABO血型,适合流动采血点、法医学现场检验和医院检验科室的血型初筛。     

应用FITC系统建立非均衡竞争孕酮(P)化学发光法

目的 建立可以广泛应用于孕酮(P)检测的方法.方法 制备辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗人多克隆抗体及异硫氰酸荧光素(FITC)标记孕酮类似物.以抗FITC抗体包被发光板,FITC-P类似物与抗FITC抗体结合形成固相抗原,并与血清中的P竞争结合抗P抗体-HRP,建立化学发光血清P检测系统(FITC系统),进行方法学评价,并与P-牛血清白蛋白直接包被系统(非FITC系统)和罗氏Elecsys2010系统进行比较.结果 FITC系统检测线性范围为0.1～60 ng/mL,灵敏度为0.1 ng/mL;批内变异系数小于5%优于非FITC系统;与Elecsys2010系统检测结果有良好的相关性(r= 0.961 9).结论 应用FITC系统建立的非均衡竞争P 化学发光免疫分析系统灵敏度高、特异性强,可用于临床标本的检测.     

幽门螺杆菌IgG抗体免疫层析分型方法的建立

目的建立1种检测血清中抗幽门螺杆菌(Hp)抗体的胶体金免疫层析(GICA)方法。方法采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记SPA,将Hp重组抗原VacA、CagA和UreaA、UreaB抗原包被于硝酸纤维素膜NC上,制成免疫层析检测试纸条.血清中的抗Hp抗体与测试条上金标记物结合后沿着硝酸纤维素膜移动,与膜上的固相抗原结合形成肉眼可见的酒红色线条。结果用GICA与免疫印迹试剂盒对比检测了180份血清标本中抗Hp抗体,显示本方法检测敏感度、特异度分别为95.4%和96.3%,两法总符合率为96.1%。结论用这种免疫层析GICA分型方法检测血清中抗Hp抗体,灵敏度高、特异性强、简便快速,有着广泛临床应用前景。     

ELISA法和荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌抗原的应用价值

目的评价双抗体夹心ELISA法和荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌Mp1p抗原的临床应用价值。方法用ELISA法和荧光免疫层析法检测335例住院患者血清中的马尔尼菲蓝状菌抗原,比较2种方法检测结果与血培养结果的一致性。结果以血培养结果为金标准,ELISA与荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌抗原的敏感性分别为75.0%和78.1%,特异性均为100%,准确度分别为97.6%和97.9%,Kappa值分别为0.844和0.866。结论双抗体夹心ELISA法和荧光免疫层析法检测马尔尼菲蓝状菌抗原快速、简便,结果可靠,适用于临床急性期马尔尼菲蓝状菌感染的辅助诊断。     

甲胎蛋白与CA 19-9双标记时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立钐(Sm3+)标记抗甲胎蛋白(AFP)单克隆抗体(单抗)和铕(Eu3+)标记抗糖类抗原19-9(CA19-9)单抗的双标记时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)法。方法将抗AFP单抗与抗CA19-9单抗混合包被96孔板作为捕获抗体,用Sm3+标记抗AFP单抗、Eu3+标记抗CA19-9单抗作为检测抗体,建立同步检测AFP/CA19-9的TrFIA法。结果建立的TrFIA法检测AFP/CA19-9的灵敏度分别为0.3 ng/mL和2.5 U/mL。AFP分析内和分析间变异系数(CV)分别为2.6%～5.9%和4.3%～8.1%,CA19-9分析内和分析间CV分别为4.9%～5.6%和5.0%～6.3%。分别用建立的TrFIA法与Perkin-Elmer公司解离增强镧系荧光免疫分析(DELFIA)法同时测定血清样本,两法AFP与CA19-9的相关系数分别为0.99与0.98。结论建立的同步检测AFP与CA19-9的TrFIA法灵敏、简便、准确,有助于消化道肿瘤和睾丸癌等的辅助诊断。     

量子点标记技术同步检测抗弓形虫IgG和IgM抗体的实验研究

目的建立抗弓形虫(TOX)IgG和IgM抗体同步检测体系。方法分别用不同发射波长的量子点标记羊抗人IgG、羊抗人IgM作为检测抗体,以免疫磁珠作为固相载体,建立抗弓形虫IgG和IgM抗体同步检测体系,并对该检测体系进行了优化;同时检测280份临床血清标本,并与进口酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒进行方法学比较。结果 TOX抗原的最适固化浓度为50μg/mL,固化效率在35%～55%之间。抗TOX IgG、IgM抗体检测结果与进口ELISA试剂盒相比符合率分别为96.4%,97.1%,本体系同时检测两种抗体的阳性检测率达8.2%。结论成功建立了抗TOX IgG和IgM抗体同步检测体系,该体系操作简便快速,灵敏度高,具有有良好的临床应用价值。     

双抗体夹心ELISA检测肺炎支原体抗原方法的建立

目的　建立检测肺炎支原体(MP)抗原的双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA),并探讨其临床应用的可行性。方法　采用不同株MP单抗,用双抗体夹心ELISA检测MP抗原,优化该方法检测MP抗原的最佳实验条件。对MP标准株及147份临床标本进行测定,观察双抗体夹心ELISA的敏感性和特异性及该方法与聚合酶链反应(PCR)检测的符合率。结果　包被单抗量为20μg/ml,酶标记单抗1∶200稀释时,阳性对照与阴性对照吸光度之比(P/N值)最大,检测MP抗原敏感度达2μg/ml,和其他支原体没有交叉反应; 147份临床标本PCR检测阳性率13. 6% (20 /147),双抗体夹心ELISA检测阳性率12. 2% ( 18 /147 ),两者符合率达95. 9%。结论　建立的双抗体夹心ELISA检测MP抗原具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。     

16通道无标记型糖化血红蛋白检测免疫传感器的构建

目的构建1种检测糖化血红蛋白(HbA1c)的无标记电化学免疫传感器。方法通过HbA1c抗体修饰16通道丝网印刷碳电极(16-SPCE),制备特异检测HbA1c的无标记电化学免疫传感器。采用循环伏安法测定16-SPCE电化学免疫传感器检测HbA1c的电信号,优化检测条件(HbA1c抗体最佳包被浓度、HbA1c抗原最佳孵育时间、电极的电化学特性、不同修饰电极的性能),同时进行初步方法学评价。结果 HbA1c抗体最佳包被浓度为50μg/mL,HbA1c抗原最佳孵育时间为60 min。构建的16-SPCE电化学免疫传感器检测HbA1c的线性范围为1～50μg/mL,线性方程为Y=0.199X+10.468(r=0.955),检测限为0.88μg/mL。50μg/mL牛血清白蛋白(BSA)、50μg/m L前列腺特异性抗原(PSA)和50μg/m L葡萄糖对16-SPCE电化学免疫传感器检测Hb A1c无干扰。制备的免疫电极在4℃能稳定放置5 d。采用16-SPCE电化学免疫传感器检测模拟血清样本中的HbA1c,各浓度的电流响应值能明显区分,且检测结果的重复性较好。结论构建的16-SPCE电化学免疫传感器具有良好的电化学响应能力、线性范围、抗干扰能力等。