低血清培养杂交瘤细胞及提高单克隆抗体产量的研究——Ⅰ、静止培养条件下的研究

单克隆抗体(McAb)在诊断，免疫纯化和治疗等领域的应用日益广泛，使得对McAb的需求量不断增加。小鼠腹水法简便易行，但腹水含有大量杂蛋白，包括小鼠正常Ig，这就给提纯工作带来了困难。所以目前多用体外培养法大量生产McAb。     

小鼠杂交瘤腹水、实体瘤及血清中单抗滴度观察

<正> 单克隆抗体(McAb)的生产常规都是将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱发其产生腹水而获得。但在制备腹水的过程中,常可见到小鼠腹腔生长成大量实体瘤而影响腹水的产生。为了能及时获得所需的McAb,我们在制备抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)McAb腹水的过程中,比较了实体瘤与相应鼠腹水和血清中所含特异性McAb的滴度。     

杂交瘤细胞在玻璃微载体培养中生物特性观察

本文报道以玻璃微载体小珠(CMB,Class microcarrier beads)作为载体培养杂交瘤细胞方法的建立。结果表明4株杂交瘤细胞在GMB培养显示GNB法上清中特异性单克隆抗体的滴度。OD值较单层培养法为高。比较培养7d后的杂交瘤细胞数,也以GMB法获得细胞数为多。各株细胞都诱生出高滴度腹水。亚类鉴定方面,GMB法培养的4株杂交瘤细胞上清内McAb所属亚类,又都保持了与单层法培养者完全相同的结果。表明杂交瘤细胞在CMB培养中,细胞迅速增殖,且保持各细胞株分泌其特异的McAb的生物特性,细胞活力旺盛,为今后体外培养杂交瘤细胞,制备McAb,提供了新的途径。     

杂交瘤细胞系在低血清和无血清培养基长期培养中抗体产生能力的丧失

本文报道了分泌特异性抗磷酰胆碱McAb(IgG_1)的鼠杂交瘤细胞系(167.4 G5.3),在不同血清浓度(10％、5％、2.5％、1.25％胎牛血清FBS)及无血清培养基OPTI—MEM中适应培养6个月以上,以观察其生长和细胞分泌抗体能力的变化。结果所有的适应细胞随着血清含量的升高,其分泌抗体能力越稳定。适应培养,虽然提高了该细胞系在低血清或无血清培养基中的生长率,但在低血清培养基中(1.25％FBS)细胞产生抗体能力丧失。在1.25％FBS条件下培养,     

BALB/c与C3H杂交一代小鼠诱生腹水产生McAb的观察

在淋巴细胞杂交瘤技术中,单克隆抗体(McAb)的制备在采用腹腔接种法时,大多采用和骨髓瘤细胞同种系的小鼠进行腹腔注射杂交瘤细胞,由此引起的腹水每只小鼠可达3～5 ml,并含有大量的McAb。而应用杂交小鼠诱生腹水产生McAb的报道却很少。BALB/c纯系小鼠是此项技术中最常用的动物。此种小鼠毛色白,性情温顺,体质娇弱,抵抗力低。1992年初,北京实验动物中鼠痘病毒流行,致使BALB/c小鼠大批死亡,有的实验动物室甚至绝种,影响了研究工作的进行。我院饲养的BALB/c小鼠当时亦供不应求.C3H纯系小鼠为毛色油     

单克隆抗体纯化技术的探讨

自Kohler等建立杂交瘤技术以来,单克隆抗体(McAb)研究日益深入。含McAb的细胞培养上清、腹水及血清含中有大量杂蛋白和其它大分子物质,使McAb的实验研究和临床应用受到一定限制。近年来、McAb纯化的研究倍受重视,取得了进展。本文试以小鼠McAb的纯化为主,综述如下。     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体(McAb)的研究

用人血清IgM球蛋白重链-μ链免疫的BALB/c小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤Sp 2/0细胞在PEG作用下融合,用免疫荧光法筛选出6种分泌McAb的杂交瘤细胞,其中5株确定为抗人μ链McAb,一株未定。杂交瘤细胞经四次克隆,半年多传代,接种BALB/c鼠可稳定的产生腹水抗体。     

抗人血清型IgA单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立和鉴定

本文使用从IgA骨髓瘤患者血清中提出的IgA,免疫BALB/c小鼠,采用常规细胞融合的方法,获得4株针对IgA的单克隆抗体杂交瘤细胞系。抗体效价培养上清为10~(-2),诱生腹水ELISA测定为10~(-1)～10~(-6),冻存6个月后复苏,腹水效价仍保持10~(-1)～10~(-6)。染色体分析为102,基本上是Sp2/0骨髓瘤细胞染色数68和小鼠脾细胞42之和,说明为杂交瘤细胞。专一鉴定:本McAb经ELISA测定证明,仅与IgA起反应,小鼠亚类测定证明为IgG_1本McAb与     

抗人CT抑制物单克隆抗体的制备及应用

作者以CT抑制物免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与Sp2/0骨髓瘤细胞在50％PEG(Mr2000)的介导下融合,获得三株分泌抗人CT抑制物McAb的杂交瘤细胞系(A2、F7、G10)。用ELISA测定杂交瘤细胞培养上清及其所诱生的小鼠腹水,特异性抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)及10~(-4)～10~(-6)。抗原阻断试验及取代试验结果表明,这些McAb     

用基因工程表达的HBcAg制备抗-HBcAg单克隆抗体及其初步应用

用基因工程表达的NBcAg免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0融合,以ELISA抑制法检测抗体,获得28株分泌抗-HBc McAb的杂交瘤细胞系。对其中7株进行了克隆化,培养上清抗体滴度1:320～1:2560,免疫小鼠腹水和血清滴度1:10万～1:80万。Ig类型测定2株IgG1、2株IgG2a、1株IgG3、2株IgM。杂交瘤细胞系在体外连续传代培养6个月及液氮冻存的细胞系经复苏后仍能稳定地分泌McAb。得到的McAb只与HBcAg反应且能被HBcAg特异阻断,证明其特异性高。用ELISA间接法测定了McAb的相对亲和力,从50％最大结合的浓度分析结果,7株McAb的相对亲和力为2E6>2F5>2B11>2C10>1A7>1B7>1H7,浓度范围为0.6～10μg/ml。2E6和2C10 2株McAb与HRP结合,用ELISA双抗休夹心法筛选出2F5、2B111和H7 3株McAb适合作为包被抗体。2F5与2E6-HRP配对,建立了快速McAb-ELIS抑制法测定患者血清中抗-HBc。用本法测定了222份临床患者血清标本,结果与“华美”试剂盒测定结果基本一致。     

两株抗小鼠胰腺癌McAb特性的初步研究

本文报告用盐析,DEAE纤维素层析或亲和层析法纯化2B6、2B102株抗小鼠胰腺癌McAb杂交瘤培养上清及其小鼠腹水中的McAb,并经SDS-PAGE鉴定,FITC标记后,用直接荧光免疫法分析其在35例人类各     

天津地区抗霍乱弧菌单克隆抗体(McAb)细胞系的建立及其应用的研究

应用天津市防病中心保存的EL-Tor霍乱弧菌小川型和稻叶型菌体抗原,混合免疫BALB/c小鼠,小鼠免疫脾细胞与骨髓瘤细胞Sp 2/0-Ag 14融合,采用ELISA法筛选抗霍乱弧菌McAb阳性孔,细胞融合率为328/384(85.2％);经过三次克隆化后筛选出9株分泌抗霍乱弧菌菌体抗原的McAb杂交瘤细胞系。取其中两株细胞进行分析研究;培养上清抗体效价在     

ABO血型McAb取代常规人血清血型试剂的可行性探讨

为了获得可用于大量细胞培养生产血型单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株,本文在7次细胞融合中,建立了35种分泌抗A、抗B McAb的细胞株,并对其细胞培养上清抗体效价≥1:128的6种McAb进行特性分析和临床验证,实验结果表明,这些细胞具有工业生产血型 McAb的潜力,本文对所得McAb替代现用人血清血型试剂的可行性进行探讨。     

无蛋白培养中杂交瘤细胞的生长与单克隆抗体分泌

目的：建立应用无蛋白培养基大量制备单克隆抗体（McAb)的生产方法。方法：本实验以3株猪瘟病毒特异单抗杂交瘤细胞为研究对象，通过与常规的有血清培养法比较，研究了无蛋白培养基中杂交瘤的细胞生长特性、抗体分泌效率、活性和纯度。结果：无蛋白培养基中单抗的产量与效价比有血清培养的单抗高2－4倍，而且单抗的纯度显著提高。结论：无蛋白培养基可完全取代常规的有血清培养基，用于生产高滴度、高纯度单克隆抗体。     

抗三碘甲腺原氨酸单克隆抗体的研究

用半抗原物质三碘甲腺原氨酸酯化联结法,制备T_3甲酯—BSA抗原,免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与FO骨髓瘤细胞融合,融合率为80.2％,阳性率为20.9％。获得稳定分泌抗T_3 McAb的杂交瘤细胞6株。杂交瘤细胞染色体众数2n=92～96,并含有1～2条标记染色体。通过对McAb特性分析发现:其分别属于IgG_1和IgG_(2a)亚类,其中E10株McAb与甲状腺素(T4)交叉反应率仅为0.14％,亲和常数K值为3.751×10~(11) L/M。杂交瘤细胞培养液滴度为1:900,小鼠腹水滴度为1:3×10~5,可直接取代商品药盒中抗T_3多克隆抗体,显示出灵敏度增高,可测范围增大,反应到达平衡时间缩短,抗体性能稳定等优点。     

用无血清培基培养杂交瘤细胞的初步报告

在杂交瘤细胞的研究中,培养基中的血清常会干扰单克隆抗体(McAb)的测定,由于血清所含成份复杂,动物个体差异较大,故使用前还须进行严格的筛选。血清还经常是污染的来源。为避免这些缺点,很多学者致力于研究用无血清培养基(serum free medium SFM)取代含血清的完全培养基(complete medium CM)进行细胞特别是杂交瘤细胞的培养。     

一种可供以实验室规模生产单抗替代腹水肿瘤的振荡气泡室

单抗的制备一般采用体内法,即在小鼠腹腔内培养作为腹水肿瘤的杂交瘤。这种方法简单、有效,而且最终产物的浓度高,产生的单抗浓度约为20 mg/ml,可满足要求各种McAb的量相对较少的普通实验室。体外产生McAb有组织培养法(在转瓶中使杂交瘤     

32株分泌抗HBsAg单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

<正> 取纯化HBsAg免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与SP2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,选原始抗体阳性孔细胞进行多次克隆化。两次融合试验共得32株分泌抗HBsAg-McAb的杂交瘤细胞株。其培液上清的PHA效价为1:32～1:1,024,对流(CEP)效价为1:2～1:16。诱生小鼠腹水的PHA效价,25/32株为10~(-4) ～10~(-5),7/32株>10~(-6),其中8/32株ELISA法效价可达10~(-7)。CEP和AGD效价最高分别达1:6,400和1:3,200。 选出21株分泌抗体能力较强者进行冻存,并对其纯度和特异性进行鉴定。结果证明,21株杂交瘤分泌的McAb均属小鼠IgG_1亚类,能较好地中和乙肝患者血清中的HBsAg。与人白蛋白或正常人血清进行CEP或AGD试验,均无沉淀线出现。说明这些McAb具有良好的纯度和专一性。     

抗慢性B淋巴细胞白血病患者IgM单抗相对亲和力的分析

本文采用间接ELISA法检测了11株抗B-CLL患者IgM腹水和杂交瘤上清McAb的相对亲和力。结果提示,各株McAb结合抗原的相对亲和力不同。根据50％最大结合浓度分为两组。其中4株杂交瘤上清McAb与纯化腹水McAb测得结果基本吻合。实验结果为合理地选用这些单抗提供了重要依据。     

用BALB/c F_1小鼠诱生单克隆抗体

<正> 小鼠单克隆抗体(McAb)现已成为临床免疫检验和免疫学研究的重要试剂,其来源多用杂交瘤细胞接种BALB╱c小鼠,诱生含相应抗体的腹水。但BALB/c小鼠为近交系,繁殖性能差,生长缓慢,饲养难度高,以致相应的售价也较贵。为能增加McAb