蚕蚀性角膜溃疡患者外周血淋巴细胞免疫表型和T细胞活化的研究

目的：观察蚕蚀性角膜溃疡患者外周血淋巴细胞免疫表到和T细胞活化的变化,进一步探讨本病患者的免疫功能。方法：用流式细胞术检测8例活动性蚕蚀性角膜溃病患者外周血淋巴细胞对项免疫表型变化,用植物凝集素和沸被醉酯作为刺激剂,以HLA－DR,CD69、CD71、CD25的表达为T细胞活化的指标,用流式细胞术分析。结果：蚕蚀性角膜溃疡患者外周血CD4、CD5、CD8、CD10、CD11b、CD15、CD16、CD19、CD23、CD25、CD41、CD69、HLA-DP、HLADR抗原表达阳性淋巴细胞以及HLA－DR、CD69、CD71、CD25在CD3和CD8细胞的表达均明显高于正常对照组。结论：蚕蚀性角膜溃疡患者具有增强的细胞免疫和体液免疫,外周血T细胞及其亚群出现异常活化,反映患者体内存在自身免疫反应而支持该病发病之自身免疫学说。     

T淋巴细胞在不同类型白血病患者外周血中的变化

目的通过对不同类型白血病患者外周血T淋巴细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)的检测以评价不同类型白血病患者的细胞免疫功能。方法采用流式细胞术检测200例不同类型白血病患者和52例健康志愿者外周血T细胞亚群的水平。结果与正常对照组相比,急性白血病和慢性白血病患者的CD4+/CD8+比值都是下调的(P<0.05);急性白血病患者(包括急淋和急粒)的CD3+、CD8+细胞水平是上升的,且急淋患者还伴随着CD4+细胞的降低(P<0.05);慢性白血病患者的CD3+、CD4+细胞水平是下调的,其中慢淋患者的CD3+细胞下调更为显著,而慢粒患者则是以CD8+细胞增高为主(P<0.05)。结论不同类型白血病患者外周血T淋巴细胞均存在免疫异常,且具有不同异常方式,对指导治疗及疗效观察有一定的临床意义。     

流式细胞术检测肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群研究

目的 探讨肿瘤患者T淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法 采用流式细胞术检测27例肿瘤患者和25例正常对照组的T淋巴细胞亚群。结果 肿瘤患者CD3^＋T细胞、CD4^＋T细胞和CD4^＋／CD8^＋比值明显低于对照组并有统计学意义，而CD8^＋T细胞显著高于对照组（P〈0．01）。结论 肿瘤患者的免疫功能下降。流式细胞术对肿瘤患者的免疫功能的检测具有快速、敏感、准确的特点，对于评价疗效、判断预后具有重要价值。     

山奈酚对小鼠T淋巴细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响

目的:研究山奈酚(KA)对小鼠T细胞体外活化、增殖和细胞周期的影响,并对其免疫调节作用进行初步探讨.方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激,以不同终浓度的KA与T细胞共培养.流式细胞术结合双色荧光抗体染色,检测T细胞早期活化抗原CD69的表达;MTT法检测KA对T细胞增殖的影响;用碘化丙锭(PI)染色分析T细胞的细胞周期.结果:终浓度为10、20和40 μmol/L的KA可以显著抑制ConA刺激的T细胞CD69的表达,由ConA组的(39.11±1.17)%,分别降低为(30.64±0.23)%、(27.95±0.04)%和(5.63±0.37)%(P<0.05);MTT法结果显示,KA对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖,具有明显的抑制作用(P<0.05),且呈剂量依赖性;PI染色结果显示,随着KA浓度的增加,均能明显阻止淋巴细胞进入S期和G2/M期.结论:KA可显著抑制ConA刺激下的小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖;它能抑制T淋巴细胞进入细胞分裂期.     

丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化特点

目的观察丙型肝炎患者外周血淋巴细胞亚群变化特点。方法对219例丙型肝炎患者和66例健康对照者分别采用流式细胞术(FCM)检测外周血CD45+淋巴细胞,T淋巴细胞(CD45+CD3+、CD45+CD3+CD4+、CD45+CD3+CD8+),B淋巴细胞(CD45+CD3-CD19+),NK细胞(CD45+CD3-CD16+56+)百分比和细胞绝对计数。结果在丙型肝炎病毒(HCV)慢性感染到肝硬化失代偿过程中,淋巴细胞亚群绝对计数出现逐渐下降趋势。慢性丙型肝炎组较健康对照组CD4+T细胞、CD8+T细胞、NK细胞绝对计数明显降低(P0.05)。丙型肝炎肝硬化在早期组和失代偿期组淋巴细胞各亚群计数均较慢性丙型肝炎组明显降低(P0.01),而失代偿期组明显低于早期组(P0.01)。B淋巴细胞百分比以及CD4/CD8比值在慢性感染到肝硬化失代偿过程中出现升高趋势,并在丙型肝炎肝硬化早期和失代偿期时变化明显(P0.01,P0.05),NK淋巴细胞百分比出现明显降低趋势(P0.01)。结论 HCV感染慢性化至肝硬化早期和失代偿期的过程中,外周血CD8+T细胞、CD4+T细胞、NK细胞减少;B细胞百分比、CD4/CD8比值升高。     

狼疮性肾炎患者外周血淋巴细胞亚群及活化状态的研究

目的探讨狼疮性肾炎(LN)患者淋巴细胞亚群的变化及所处的不同状态在LN发病机制中的作用。方法采用双标染色技术结合流式细胞术,对32例LN进行研究。结果①LN患者CD3＋CD4＋细胞的百分率明显下降,CD3＋CD8＋细胞的百分率明显增高,CD3＋CD4＋/CD3＋CD8＋的比例∨1(与对照组相比较,P∨0.05)。②LN患者CD45RA＋细胞、CD4＋CD45RA＋细胞、CD4＋CD45RO＋细胞和CD4＋HLA-DR＋细胞的百分率下降(与对照组相比较,P∨0.05或P∨0.001), HLA-DR＋细胞、CD3＋HLA-DR＋细胞、CD19＋HLA-DR＋细胞和CD19＋CD43＋细胞的百分率明显增高(与对照组相比较,P∨0.05或P∨0.01)。结论LN患者免疫功能的紊乱与淋巴细胞活化状态及其亚群之间的平衡失调密切相关。     

T淋巴细胞活化在严重发热伴血小板减少综合征疾病发展中的作用

目的 探讨严重发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSv)感染过程中,外周血T淋巴细胞活化对血液细胞、组织损伤和疾病发展的影响.方法 应用流式细胞术,动态定量监测严重发热伴血小板减少综合征(SFTS)患者外周血中T淋巴细胞表面CD69、HLA-DR、CD28和CTLA-4等表达水平,分析其细胞表面分子变化与血清酶学以及白细胞和血小板异常的关系.结果 SFTS患者T细胞活化分子CD69和HLA-DR在整个病程中表达水平明显增加(P＜0.05);CD4+细胞表面CD28的表达在SFTSV感染早期明显减低,但随病程发展而逐渐回升至正常范围,而T细胞表面CTLA-4的高表达则出现在感染后的中晚期.SFTS患者病程中,血清ALT、AST和LDH、CK等均明显高于正常范围,并伴随着T细胞表面CD69、HLA-DR等活化分子下调和CTLA-4表达水平上调而逐步恢复正常;白细胞和血小板计数的最低值出现在病程初期,伴随着T细胞表面CD69、HLA-DR等活化分子下调和CTLA-4表达增加逐渐回升至正常范围.结论 T淋巴细胞的过度活化可能是组织损伤的主要因素之一,而CTLA-4高表达,则可能是对机体T淋巴细胞过度活化的一种负反馈调节,在SFSTV感染者的免疫应答调节中发挥重要作用.     

多发性硬化患者外周血淋巴细胞CD56的表达

目的 探讨CD56^ 淋巴细胞在多发性硬化（MS）的变化。方法 流式细胞仪测定32例复发缓解型MS患者（复发发期23例,缓解期9例）及13例复发期MS患者予糖皮质激素治疗后外周血淋巴细胞CD56表达的阳性百分率。结果 复发期和缓解期MS患者CD56的表达均高于对照组,15例复发期MS患者CD56的阳性百分率与血脑屏障受损呈正相关,复发期MS患者CD56的水平与距发作时间、整个病程、EDSS伤残评分无关。缓解期MS CD56的水平与病程无关,激素对CD56的表达我影响。结论 CD56^ 淋巴细胞涉及MS的发病机制。     

CFSE标记分析小鼠胸腺及末梢T淋巴细胞的活化分裂

Ｔ细胞表面受体 (ＴＣＲ)识别抗原提呈细胞(ＡＰＣ)提呈的抗原肽 ＭＨＣ分子复合物 ,产生第一信号 ,Ｔ细胞及ＡＰＣ表面的协同刺激分子与配体的结合产生第二信号 ,双信号使Ｔ细胞活化、增殖及分化 ,双信号的强度及信号持续时间决定细胞的活化及进行增值的程度〔1〕。我们采用ＣＦＳＥ(5 ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏ ｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌｅｓｔｅｒ)标记细胞 ,结合流式细胞仪分析的方法 ,分析了小鼠外周Ｔ淋巴细胞在不同刺激下的分裂情况 ,并与其胸腺Ｔ细胞进行了比较 ,结果报告如下 :材料与方法动…     

淫羊藿甙对小鼠T淋巴细胞体外活化和增殖的影响

目的研究淫羊藿甙(ICA)对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T淋巴细胞体外早期活化和增殖的影响。方法以MTT法检测T细胞药物毒性;利用流式细胞术(FCM)结合双色荧光抗体染色技术检测早期活化标志CD69分子的表达;运用流式细胞术结合活体染料羧基荧光素乙酰乙酸(CFDA-SE)染色技术和荧光抗体染色技术检测T细胞增殖。结果ICA在终浓度0.3、1.5、3.0μmol·L-1时对于CD69的表达以及淋巴细胞48和72h增殖,均有明显的抑制作用(P<0.01)。结论ICA能抑制ConA刺激的小鼠T淋巴细胞的早期活化和增殖,并呈剂量依赖性,即在最高浓度3.0μmol·L-1时抑制率最强。     

Cell-type specific response of peripheral blood lymphocytes to methotrexate in the treatment of rheumatoid arthritis

The mode of action of methotrexate in the treatment of rheumatoid arthritis is still questionable. Although in vitro results suggest an immunosuppressive effect of methotrexate, several clinical studies have failed to confirm these effects in patients treated with oral low-dose methotrexate. With respect to the highly variable bioavailability of methotrexate, we investigated the effects of an intravenous administration of 15 mg methotrexate per week on peripheral blood lymphocyte subsets in eight patients with rheumatoid arthritis. Methotrexate after 12 weeks significantly (P<0.01) reduced total peripheral blood lymphocytes and led to a pronounced redistribution of lymphocyte subsets with a preferred reductive effect on B-lymphocytes (P<0.005) and T-lymphocytes (P<0.05). Natural killer cells and killer cell-like T cells, on the other hand, were unaffected by the treatment. Our results suggest a cell-type specific effect of intravenously administered low-dose methotrexate on peripheral blood lymphocytes. This effect, in our opinion, may contribute to the mode of action of methotrexate as an immunosuppressive drug in the treatment of rheumatoid arthritis.Abbreviations NSAID nonsteroidal anti-inflammatory drug - DMARD disease-modifying antirheumatic drug - MTX methotrexate - RF rheumatoid factor - CRP C-reactive protein - BSR blood sedimentation rate - NK cells natural killer cells - VAS visual analog scale Correspondence to: T.C. Wascher     

人外周血T淋巴细胞表型改变与衰老相关性研究

目的：探讨人T淋巴细胞表型随年龄变化的规律，寻找敏感的免疫衰老生物标志。方法：取年轻组(20—35岁)和年老组(50—75岁)志愿者的新鲜肝素抗凝静脉血，进行三色或四色直接免疫荧光染色，获取有核细胞后以流式细胞仪分析T细胞亚群的表型。结果：2个年龄组的总T细胞(CD3^ )、辅助T细胞(CD4^ )以及细胞毒T细胞(CD8^ )亚群的相对百分率没有明显差别，但年老组T细胞上CD3分子的密度(MFI)明显下降；粘附分子CD44与CD62L在3群T细胞上阳性率的差别均无统计意义；而2组间总T细胞、辅助T细胞以及细胞毒T细胞亚群的CD95阳性率都有显著差别，表现为随年龄增加，CD95表达率上升。结论：在所研究的年龄组间，T细胞及其亚群的相对数量没有显著改变，而CD3表达密度随年龄增加而下调；T细胞的凋亡诱导分子CD95阳性率随年龄增加而上升，提示CD95可能是评价免疫衰老的潜在生物标志。     

杂色曲霉素诱导体外培养人外周血淋巴细胞凋亡的研究

目的：研究我国肿瘤高发区饮食污染霉菌毒素－杂色曲霉素（ＳＴ）对人免疫机能的可能影响。方法：流式细胞术（ＦＣＭ）、形态学观察及ＤＮＡ电泳。结果：ＳＴ可诱导体外培养的人外周血淋巴细胞发生凋亡,并且在一定时间（２￣４８ｈ）及剂量（０．１２５￣２．０ｍｇ／Ｌ）范围内呈正相关关系。光镜及透射电镜观察均发现了凋亡细胞典型的形态学变化,如核染色质凝集边集,凋亡小体形成等;ＤＮＡ琼脂糖凝胶电泳也出现特征性的ＤＮＡ     

Administration to mouse of endotoxin from gram-negative bacteria leads to activation and apoptosis of T lymphocytes

Lipopolysaccharide (LPS) from gramnegative bacteria is a well-known T cell-independent B lymphocyte mitogen and macrophage/monocyte activator. While the conventional view holds that LPS is ignored by T cells, we report here that administration of LPS to mice activates all B cells, but also engages most CD4 and CD8 T cells, as measured by the expression of the activation markers CD69 and CD25 and by size increase. T cells recruited in endotoxin-treated mice showed, following in vitro stimulation by concanavalin A, altered patterns of cytokine production. In vivo, massive T cell apoptosis was evidenced in the days following LPS exposure. The present observation may contribute novel insights into the mechanisms of endotoxin shock and of the immunological consequences of gram-negative infections.     

槲皮素对小鼠T细胞体外活化的抑制作用

目的:通过分析槲皮素对淋巴细胞早期活化标记物CD69表达的影响,探讨其对T淋巴细胞体外活化抑制作用的机制。方法:分离小鼠淋巴结细胞,加入多克隆刺激剂及槲皮素共同培养,分别于2、6、24h收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞仪对T细胞的CD69分子表达情况进行分析并计算抑制率。结果:槲皮素(终浓度10μmol/L)对未受刺激的T细胞CD69表达百分率无明显影响,而经佛波醇酯(PDB)及刀豆蛋白A(ConA)活化同时加入槲皮素的T细胞CD69表达百分率在2h、6h及24h均显著下降(P＜0.01)。槲皮素对PDB的抑制率随作用时间延长而明显下降,对ConA的抑制率平缓而持久。结论:槲皮素对PDB、ConA活化的T淋巴细胞均显示明显的抑制效应,表明该药可能作用于T细胞活化信号传递通路蛋白激酶Cθ或其下游部位,并且,这种抑制效应表现出一定的可逆性。     

Activated T and B lymphocytes in peripheral blood of patients with Chagas' disease

Whole blood preparations from patients with either the indeterminate(asymptomatic) or cardiac clinical forms of chronic Trypanosomacruzl infection were analyzed by flow cytometry using double-labelingto identify subsets of circulating lymphocytes. Several significantdifferences were demonstrated between the blood lymphocyte profilesof chagaslc patients and non-chagaslc controls. Clear increasein the percentages and actual numbers of double-positive cellsof the phenotype CD3⁺/HLA-DR⁺, as well as decrease in the percentageof CD45RA⁺/CD4⁺ and CD45RA⁺/CD8⁺ T cells, Indicate greater numbersof activated T cells circulating in the blood of infected patients.Consistent parallel increases were seen also in the B lymphocytesubset which stained double-positive for CD19/CD5. There wereno significant differences in the circulation of these chronicchagaslc patients in the CD4:CD8 ratios. Also, no substantivephenotyplc differences were observed in the lymphocyte populationsbetween the two ends of the clinical spectrum (Indeterminateversus cardiac) in chronic human Chagas' disease. These observationsdemonstrate that increased levels of activated T cells and CD5⁺B cells are present in the circulation of people with chronicChagas' disease. These are cell phenotypes that have been associatedin other conditions with autoimmune, polyclonal, and hyperlmmuneresponses. The specificities of these activated cells and theroles they may play in resistance or pathogenesis during chronicChagas' disease need now to be determined.     

类风湿性关节炎患者外周血TH17细胞测定

目的 探讨新的效应T细胞TH17在类风湿性关节炎(RA)患者外周血的分布及意义.方法 选取PHA或PMA+Ion作为刺激剂,建立流式细胞术胞内细胞因子染色的方法,应用该方法检测了35例活动期、30例稳定期RA患者及正常人外周血TH17和TH1细胞百分率.结果 PlVIA+Ion联合刺激的效果优于PHA.RA患者及正常人T细胞经PMA+Ion刺激后,CD3+CD8-T细胞IL-17表达水平较相应未刺激组显著增加(P<0.05).而不论是否加刺激剂,活动期RA患者外周血CD3+CD8-IL-17+细胞明显多于稳定期,二者均多于正常对照组(P<0.05).RA患者外周血TH1细胞呈现与T<,H>17细胞类似的分布特点.结论 活动期RA患者外周血存在TH17细胞的分布异常,T1H17细胞可作为评价RA患者细胞免疫功能状态的新指标.     

类风湿性关节炎患者2H4+T淋巴细胞亚群的流式细胞仪分析

了解类风湿性关节炎患者免疫功能的异常变化，探讨其发病机制。方法，使用间接免疫荧光和直接免疫荧光方法对１１例ＲＡ患者和１２例健康人的外周血Ｔ淋巴细胞进行了研究。结果：ＲＡ患者与对照组比较ＣＤ３＾＋Ｔ细胞和ＣＤ＾＋４Ｔ细胞地明显变化，ＣＤ８＾＋Ｔ细胞明显减少，     

放线菌酮对小鼠T细胞活化影响的血清免疫药理评价

目的:利用淋巴细胞的早期活化标记物CD69的表达,探讨CHX对T淋巴细胞体外活化的影响。方法:分离小鼠淋巴结细胞,分别与放线菌酮(CHX)、CHX血清预孵1h,加入多克隆刺激剂继续培养,总计培养24h后收获细胞,进行双色免疫荧光标记,以流式细胞术对T细胞的CD69分子表达情况进行分析。结果:在CHX(终浓度10μmol/L)、CHX血清作用下,ConA活化的T细胞CD69表达百分率依次为(12.33±4.75)%、(20.39±6.32)%,与相应对照[分别为(64.67±3.00)%、(64.35±10.13)%]比较均有显著差异(P＜0.01);相应的,药物作用下PDB活化的T细胞CD69表达的百分率依次为(13.07±11.05)%、(6.10±4.91)%,与相应对照[分别为(84.79±6.87)%、(79.68±4.17)%]比较均有显著差异(P＜0.01)。结论:CHX(10μmol/L)、5%的CHX血清对ConA、PDB活化的T淋巴细胞均显示了强烈的抑制效应,证明T细胞活化过程中CD69的表达存在蛋白质的从头合成,对"CD69表达中CD69分子可能储存于细胞浆及其表达的发生并不需要蛋白质的从头合成"这一观点提出质疑。