人大肠癌细胞系HR 8348和HCe 8693 K－ras基因的点突变分析

本文采用修饰引物的聚合酶链式反应（ＰＣＲ）所建立的限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ），并结合ＰＣＲ直接测序方法，首次分析了我国建株大肠癌细胞系ＨＲ８３４８和ＨＣｅ８６９３的Ｋ－ｒａｓ基因点突变。发现该两细胞系均存在ｋ－ｒａｓ第１２密码子的点突变，其方式均为ＧＧＴ→ＧＡＴ；但未发现Ｋ－ｒａｓ第１３和６１密码子的突变。     

不同肺腺癌细胞系N—ras,P53基因突变核酸测序分析

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）和ｄｓＤＮＡｃｙｃｌｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｓｙｓｔｅｍ技术对倍外培养的人肺腺癌细胞系ＬＴＥＰ－ａ２和ｈＬ中Ｎ－ｒａｓ癌基因及Ｐ５３抑癌基因外显子５、７进行核酸序列测定分析。结果表明Ｎ－ｒａｓ突变热点第１２、１３、６１密码子未见异常Ｐ５３抑癌基因第１５４密码子均发现ＧＧＣ－ＧＴＣ突变。经光盘检索（美国Ｓｉｌｖｅｒｐｌａｔｔｅｒ公     

ras基因点突变及其产物P21蛋白的表达在肺癌研究中的意义

ｒａｓ基因家族由Ｈ－ｒａｓ，Ｋ－ｒａｓ和Ｎ－ｒａｓ组成，其表达产物为Ｐ２１蛋白。ｒａｓ基因主要通过点突变激活，其突变位点是密码子１２、１３和６１。肺癌中ｒａｓ基因点突变绝大多数发生在肺腺癌，与吸烟有一定的关系。主要是Ｋ－ｒａｓ基因第１２密码子的点突点。Ｇ→Ｔ突变常见，导致甘氨酸被缬氨酸所代替。有Ｋ－ｒａｓ基因点突变的肺腺癌分化差，患者预后也差。Ｐ２１蛋白在肺癌中的表达一般随着分化的升高而升高。Ｐ２１蛋白阳性比阴性者预后差，有人认为它是一个独立的预后因素。     

不同肺腺癌细胞系N－ras、p53基因突变核酸测序分析

应用聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎＰＣＲ）和ｄｓＤＮＡｃｙｃｌｅｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇｓｙｓｔｅｍ技术对体外培养的人肺腺癌细胞系ＬＴＥｐ－ａ＿２和ｈＬＡ中Ｎ－ｒａｓ癌基因及ｐ５３抑癌基因外显子５、７进行核酸序列测定分析。结果表明Ｎ－ｒａｓ突变热点第１２、１３、６１密码子未见异常。ｐ５３抑癌基因第１５４密码子均发现ＧＧＣ→ＧＴＣ突变（Ｇｌｙ→Ｖａｌ变异）。经光盘检索（美国Ｓｉｌｖｅｒｐｌａｔｔｅｒ公司提供的ＣＯ－ＲＯＭＭＥＤＩＬＩＮＥ）分析了１９８８～１９９３年间的专题文献，尚未见肺癌ｐ５３基因第１５４密码子突变的报道。     

ras基因点突变及其产物P21蛋白的表达在肺癌研究中…

ｒａｓ基因家族由Ｈ－ｒａｓ，Ｋ－ｒａｓ组成，其表达产物为Ｐ２１蛋白，ｒａｓ基因主要通过点突变激活，左突变位点是密码子１２、１３、和６１。肺癌中ｒａｓ基因点突变绝大多数发生在肺腺癌，与吸烟有一定的关系。主要是Ｄ－ｒａｓ基因第１２密码子的点突点。Ｇ－Ｆ突变常见，导致甘氨酸被缬氨酸所代替。有Ｋ－ｒａｓ基因点突变的肺腺癌分化差，患者预后也差。Ｐ２１蛋白在肺癌中的表达一般随着分化的升高而升高。Ｐ２１蛋白阳性     

中国人K-ras原癌基因外显子1序列分析

目的 为了解肺癌患者血液中Ｋ－ｒａｓ原癌基因突变情况。方法 采用聚合酶链式反应－测序方法对１２例肺癌患者及３１例正常人血细胞中Ｋ－ｒａｓ原癌基因外显子１进行测序分析。结果 所有４３例标本中Ｋ－ｒａｓ基因第１１位密码子均为ＣＣＴ（编码脯氨酸），和对侧链测定为ＡＧＧ，与国外测定的标准序列不同，考虑可能为人种变异，结论 中国人Ｋ－ｒａｓ原癌基因第１１位密码子ＣＣＴ，因该密码子与突变位点紧邻，这对临床基因     

膀胱癌组织中K－ras基因点突变及其基因产物P21的表达研究

为在分子生物学水平探讨膀胱癌的发生发展以及恶性程度的判别和预后评价的指标，作者应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合单链构象多态性分析（ＳＳＣＰ）和免疫组织化学方法，研究了５４例膀胱癌组织和５例正常膀胱组织的Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和其产物Ｐ２１的表达情况。结果表明：５４例膀胱癌组织中，仅有４例Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和３４例Ｐ２１蛋白阳性表达，并且浅表性肿瘤Ｐ２１阳性表达率明显低于浸润性肿瘤。提示Ｋ－ｒａｓ基因点突变在膀胱癌中发生率较低，Ｐ２１蛋白的过量表达主要是膀胱癌晚期表现，它可能与Ｈ－ｒａｓ和Ｎ－ｒａｓ基因突变有关。为肿瘤病因学研究和临床研究提供了有用的资料。     

胰腺癌的基因诊断

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ技术对２７例胰腺及其周围器官组织细针穿刺标本进行ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２密码子突变检测。结果１５例胰腺癌中１４例有ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２密码子突变。阳性率达９３．３％；而１１例慢性胰腺炎、胰腺囊肿、胆管炎、胆囊癌、壶腹癌及胃淋巴瘤均无ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２密码子突变。本研究结果证实ＰＣＲ－ＲＦＬＰ检测胰腺ｃ－Ｋｉ－ｒａｓ第１２密码子突变是诊断胰腺癌的一种快速、准确、敏感、实用的基因诊断方法。     

中国人血友病甲患者FⅧ基因突变研究

为研究血友病甲发病的分子机理，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶ＴａｑⅠ酶切分析和ＰＣＲ结合变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ），分别研究了７４名中国血友病甲患者ＦⅧ基因外显子１８、２２～２４、２６和外显子８与１４的３′端的基因突变情况，结果检测到一例基因突变，该突变位于第２４号外显子２２０９位密码子，ＣＧＡ－ＴＧＡ，导致了终止密码子的产生。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ发现２例基因突变，分别位于外显子８的３４９位密码子，ＧＡＴ－ＧＡＧ，导致Ａｓｐ３４９Ｇｌｕ和外显子１４的１６８９位密码子，ＣＧＣ－ＴＧＣ，使Ａｒｇ１６８９Ｃｙｓ。血友病甲基因突变的研究将有助于开展遗传咨询和产前诊断工作。     

结肠粘膜,腺瘤和腺癌组织中Ki—ras癌基因突变的检测

对４１例石蜡包埋，同时含在可分割的正常粘膜，癌旁腺瘤和腺的手术切除结肠标本；１０例石蜡包埋，内窥镜摘除的腺瘤标本，分别用限制性片段长度多态性，单链构象多态性和Ｓ１核酸酶保护技术对Ｋｉ－ｒａｓ癌基因第１２和第６１密码子突变进行了检测，结果发现：正常粘膜中无Ｋｉ－ｒａｓ癌基因突变“腺癌组织中有５１％（２１／４１例），癌旁腺瘤中有２２％（９／４１例）非癌旁腺癌瘤中有１０％（１／１０例）有Ｋｉ－ｒａｓ癌基     

急性髓细胞白血病H—ras基因点突变及临床相关性研究

为了解急性髓细胞白血病（ＡＭＬ）Ｈ－ｒａｓ基因点突变的情况，应用聚合酶链反应和限制性酶切图谱分析技术，对５５例初诊ＡＭＬ患者进行了检测，发现１６例（２９．１％）存在Ｈ－ｒａｓ基因点突变，此突变与ＡＭＬ的发生及某些临床指标有一定关系。Ｈ－ｒａｓ基因突变可望成为ＡＭＬ诊断分型、指导治疗及判断预后的一项有价值的指标。     

肝癌组织中N—ras基因突变和p53蛋白表达

目的：研究Ｎ－ｒａｓ和ｐ５３基因与肝癌发生，发展的关系。方法：应用多聚酶链反应－单链构象多态性分析法（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）和免疫组化法，检测２９例肝癌中的Ｎ－ｒａｓ基因突变和ｐ５３蛋白的表达。结果，１３例肝癌ｐ５３蛋白阳性（４４．８％），表明广西地区肝癌中曾普遍存在ｐ５３基因的突变，肝癌及癌旁组织中Ｎ－ｒａｓ基因在第２～３７密码子间的突变率分别为７９．３１％和８０．７７％，２２例有２个以上突变位点（     

膀胱癌组织中K—ras基因点突变及其基因产物P21的表达研究

为在分子生物学水平探讨膀胱癌的发生发 以及恶性程度的判别和预后评价的指标，作者应用聚合酶链反应结合单链构象多态性分析和免疫组织化学方法，研究了５４例膀胱癌组织和５例正常膀胱组织的Ｋ－ｒａｓ基因第１２位密码子点突变和其六物Ｐ２１的表达情况。     

PCR—SSP快速检测胰腺癌Ki—ras基因点突变

为判定有Ｋｉ－ｒａｓ基因突变及突变方式，我们采用针对Ｋｉ－ｒａｓ基因点突变方式 顺序特异性引物，对冰冻胰腺癌组织进行聚合酶链反应。产物借助常规电泳即可判定有无Ｋｉ－ｒａｓ基因突变及突变方式，无需酶切，杂交，放射性及非放射性显影。     

p16基因突变及蛋白表达异常与人胰腺癌关系的研究

目的：研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达异常在人胰腺癌发生及侵润转移中的作用。方法：应用ＰＣＲ、ＰＣＲ－ＳＳＣＰ、ＤＮＡ测序及免疫组织化学技术,对３５例人胰腺癌的ｐ１６基因第２外显子进行了检测,研究ｐ１６基因的突变及蛋白表达情况。结果：１２例在ｐ１６基因第２外显子部分存在至少５２２ｂｐ的纯合缺失。７例存在２个点突变（突变位点均相同）：其一为第１２６密码子碱基ＧＴＣ→ＡＡＴ的错义突变,氨基酸由缬氨酸（Ｖａｌ）变成了天冬酰胺（Ａｓｎ）;另一为第１２７密码子ＧＣＡ→ＧＣＧ的同义突变。缺失及突变共占５４．３％（１９／３５）。Ｐ１６蛋白三维结构模拟提示,Ｖａｌ１２６Ａｓｎ对蛋白空间结构有一定影响,从而影响Ｐ１６蛋白的功能。１２例缺失标本呈现Ｐ１６蛋白表达阴性,９例标本（其中７例点突变）出现Ｐ１６蛋白表达下降,共占６０％（２１     

p53基因第7外显子点突变与乳腺癌的关系

目的：研究ｐ５３基因点突变与乳腺癌发生发展关系。该当：应用多聚酶链反应－限制性片段长度多态性（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）检测７５例人乳腺癌标本ｐ５３基因第７外显子内２４８，２４９位密码子的点突变，结果：７５例乳腺癌标本ｐ５３基因第７外显子全长序列ＣＲ扩增产物经限制性内切酶ＭｓｐＩ酶切后，发现２例为突变型，用ＨａｅⅡ酶切后未发现有突变，结论：上述结果揭示ｐ５３基因第７外显子内２４８位密码子的突变为乳腺癌ｐ５     

中国人β地中海贫血的分子基础及产前诊断

β地中海贫血是一组高度异质性的遗传性血液病。中国人中已发现２１种β地贫基因，其突变类型包括碱基替代、小的缺失和插入。我国南方常见的类型是密码子（ＣＤ）４１－４２（－ＴＣＴＴ）移码突变，ＩＶＳ２ｎｔ６５４（Ｃ→Ｔ）突变，ＣＤ１７（Ａ→Ｔ）突变，ＴＡＴＡ盒ｎｔ－２８（Ａ→Ｇ）突变和ＣＤ７１－７２（＋Ａ）移码突变，其基因频率分别为４１．６％、２１．８％、１８．０％和８．０％及３．９％。     

PCR—SSP快速检测胰腺癌Ki－ras基因点突变

ＰＣＲ—ＳＳＰ快速检测胰腺癌Ｋｉ－ｒａｓ基因点突变戴存才刘训良杜竞辉ＰＣＲ—ＳＳＰ快速检测胰腺癌Ｋｉ－ｒａｓ基因点突变@戴存才@刘训良@杜竞辉...     

膀胱移行细胞癌P21,P185,p53蛋白表达及ras,p53基因突变的检测

为探讨基因的改变在膀胱移行细胞癌发生过程中的意义，应用免疫组织化学及聚合酶链反应－限制性片段长度多肽性法，检测１５０例膀胱移行细胞癌Ｐ２１、Ｐ１８５、ｐ５３蛋白表达以及５０例ｒａｓ、ｐ５３基因突变。结果表明：膀胱移行细胞癌Ｐ２１、Ｐ１８５、ｐ５３蛋白表达阳性率分别为５９．３％（８９例）、５５．３％（８３例）、２９．３％（４４例）。Ｐ２１、ｐ１８５蛋白表达阳性率与膀胱移行细胞癌分级呈负相关（Ｐ＜０．０５），ｐ５３蛋白表达与膀胱移行细胞癌分级呈正相关（Ｐ＜０．０１）。Ｐ２１、ｐ５３蛋白表达阳性率与预后呈显著相关，Ｐ２１与预后呈负相关。７３例膀胱移行细胞癌存在两种以上蛋白共同表达。膀胱移行细胞癌Ｈａ－ｒａｓ癌基因第１２位密码子突变１６例（３２％），ｐ５３基因突变９例（１８％），均为２４８位点突变。Ｈａ－ｒａｓ第１２位点突变随病理分级增高而增高，与膀胱移行细胞癌分级显著相关（Ｐ＜０．０５）。ｒａｓ基因、ｐ５３基因突变与预后显著相关（Ｐ＜０．０５）。ｒａｓ基因、ｐ５３基因突变患者死亡率高于无突变患者。４例膀胱移行细胞癌存在ｒａｓ基因及ｐ５３基因共同突变。     

先天性巨结肠RET基因的突变

酪氨酸激酶受体基因（ｒｅｃｅｐｔｏｒｔｙｒｏｓｉｎｅｋｉｎａｓｅｇｅｎｅ，ＲＥＴ基因）被定位于染色体１０ｑ１１．２上，其突变可导致３种多发性内分泌瘤综合征和先天性巨结肠的发生。为了探讨ＲＥＴ基因突变在先天性巨结肠发病中的作用，采用多聚酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）及单链ＤＮＡ构象多态性分析（ｓｉｎｇｌｅ－ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡｃｏｎｆｏｒｍａｔｉｏｎａｌｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＳＣＰ）的方法，对３４例散发先天性巨结肠基因组ＤＮＡ进行ＲＥＴ基因第６外显子突变筛查，并对电泳条带变异的ＰＣＲ产物进行了直接核苷酸序列分析。发现１例为ＧＡＣＴＣＡＧＡＣ→ＧＡＡＴＣＡＡＡＣ碱基突变，导致两个氨基酸发生改变。表明ＲＥＴ基因突变与先天性巨结肠发病有关。