圆斑蝰蛇毒中性磷脂酶A2对大鼠心脏的药理作用

本文研究了福建圆斑蝰蛇毒中性磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）对大鼠心脏的药理作用。实验结果显示，ＰＬＡ２使麻醉大鼠心率减慢，Ｐ－Ｒ间期延长、但ＱＲＳ波群变化较小。对离体大鼠右心房诱发正性频率作用，而对大鼠Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ心脏诱发心率减慢型心率失常。这种房室率分离现象与从整体心电图上所观察到的Ｐ－Ｒ间期延长结果相吻合，表明ＰＬＡ２影响到心脏传导系统，尤其是房室交界区。对离体Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ心脏产生     

新型抗蝰蛇毒血清对不同蝰蛇毒作用的实验研究

目的探讨新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的作用. 方法采用免疫电泳、SDS-聚丙烯酰胺电泳及动物实验等方法. 结果国产圆斑蝰蛇毒的LD50(腹腔注射)为0.306±0.003mg/kg,缅甸蝰蛇毒的LD50(腹腔注射)为0.290±0.003mg/kg.免疫电泳结果表明国产圆斑蝰蛇毒和缅甸蝰蛇毒均和新型抗蝰蛇毒血清产生明显的免疫沉淀线.体外中和实验表明抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒的中和抗体效价为2750μg/ml(约450LD50), 对缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价为2490μg/ml(约430LD50).体内保护实验表明给予0.05ml抗蝰蛇毒血清可抵御254μg(约41.5LD50)国产圆斑蝰蛇毒或116μg(约20LD50)缅甸蝰蛇毒的攻击,使小鼠全部存活. 结论新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价均较高,有较大的应用价值.     

蛇毒磷脂酶A2的研究

1　磷脂酶Ａ2 的一般性质磷脂酶Ａ2 (ＰＬＡ2 ,Ｅ Ｃ 3 1 1 4 )专一催化 3-Ｓｎ-甘油磷脂 2位酰脂键的水解反应 ,生成 1-酰基溶血磷脂和脂肪酸[1] .它广泛存在于生物体内 ,尤其富含于哺乳动物胰脏的分泌液和蛇与昆虫的毒液中 .对磷脂酶Ａ2 结构及功能的生物学研究可追溯到十九世纪末 .Ｓｌｏｔｔａ等在 1938年第 1次结晶了来自蛇毒的磷脂酶Ａ2 突触前神经毒素—响尾蛇毒素 (ｃｒｏｔｏｘ ｉｎ) .Ｄｉｊｋｓｔｒａ等在 1978年获得了第一个磷脂酶Ａ2 的晶体结构 .按照它的来源将其分为胞内ＰＬＡ2 (ｃＰＬＡ2 )和胞外ＰＬＡ2 (ｓＰＬＡ2 ) [2 …     

蛇毒磷脂酶A2的研究

1 磷脂酶A2的一般性质 磷脂酶A2(PLA2,E.C.3.1.1.4) 专一催化3-Sn-甘油磷脂2位酰脂键的水解反应,生成1-酰基溶血磷脂和脂肪酸[1].它广泛存在于生物体内,尤其富含于哺乳动物胰脏的分泌液和蛇与昆虫的毒液中.     

新型抗蝰蛇毒血清对不同喹蛇毒作用的实验研究

目的　探讨新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的作用 .方法　采用免疫电泳、SDS -聚丙烯酰胺电泳及动物实验等方法 .结果　国产圆斑蝰蛇毒的LD50 (腹腔注射 )为 0 .3 0 6± 0 .0 0 3mg/kg ,缅甸蝰蛇毒的LD50 (腹腔注射 )为 0 .2 90± 0 .0 0 3mg/kg .免疫电泳结果表明国产圆斑蝰蛇毒和缅甸蝰蛇毒均和新型抗蝰蛇毒血清产生明显的免疫沉淀线 .体外中和实验表明抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒的中和抗体效价为 2 75 0 μg/ml(约45 0LD50 ) ,对缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价为 2 490 μg/ml(约 43 0LD50 ) .体内保护实验表明给予 0 .0 5ml抗蝰蛇毒血清可抵御 2 5 4μg(约41 5LD50 )国产圆斑蝰蛇毒或 116μg(约 2 0LD50 )缅甸蝰蛇毒的攻击 ,使小鼠全部存活 .结论　新型抗蝰蛇毒血清对国产圆斑蝰蛇毒及缅甸蝰蛇毒的中和抗体效价均较高 ,有较大的应用价值 .     

磷脂酶A2对大鼠胰性脑病的作用

目前，对胰性脑病（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃｅｎｃｅｐｈａｌｏｐａｔｈｙ，ＰＥ）的病因认为是急性胰腺炎导致胰酶逸出、磷脂酶Ａ２（ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐｉｄｅｎｚｙｍｅＡ２，ＰＬＡ２）活化入血，通过血脑屏障而引发脑组织出血、软化和脱髓鞘改变。作者就ＰＥ动物模型...     

磷脂酶A2与炎症

外源性磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ＿２）可通过直接致炎或释放多种炎性介质、或中介其它细胞因子致炎作用等方式介导和参与炎症反应的启动与调控，这为从调控ＰＬＡ＿２活性入手改善炎性疾病的治疗提供了新途径。     

磷脂酶A2的研究进展

磷脂酶A2 是一类催化磷脂二位酰基水解的庞大酶族 ,是花生四烯酸、溶血卵磷脂等炎性介质生成的限速酶 ,参与多种急、慢性炎症过程。依据存在部位、氨基酸同源性、生化特点的不同 ,磷脂酶A2主要分为三种类型 :分泌型 (sPLA2 )、胞浆型 (cPLA2 )、非钙离子依赖型 (iPLA2 ) ,其结构的微小差别就能导致功能的明显差异。     

磷脂酶A2与急性肺损伤

急性出血坏死性胰腺炎和革兰氏阴性细菌败血症病人血清磷酯酶A_2(PLA_2 E.C.1.1.4)活性可升高10倍以上,而且PLA_2活性越高,ARDS发生率越高,预后越差。静脉滴注PLA_2可复制出典型的ARDS病变。其它如休克、皮肤急性炎症反应、慢性胶原性疾病也与PLA_2活性升高有关。PLA_2以卵磷脂、磷脂酰丝氨酸等为底     

广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2的基因克隆与序列分析

目的：研究广西眼镜王蛇毒杂合性酸性磷脂酶A2（APLA2）的基因克隆与序列分析。方法：从广西眼镜王蛇毒腺中提取总RNA，根据种属关系接近的台湾眼镜蛇毒APLA2两端非翻译区的保守序列设计引物，利用RT－PCR进行体外扩增，获得磷脂酶A2基因，克隆至pMD18-T载体，经测序筛选出APLA2－1，APLA2－2及一个新的酸性磷脂酶A2（命名为APLA2－3）。根据测序结果确定了APLA2－3基因的全序列，并由此推导编码的氨基酸序列。结果：利用Antheprot 4.3c蛋白质序列分析软件包计算它的等电点为4．885，相对分子质量为16．543kD，并预测了它的二级结构和部分理化性质，同源性比较表明，APLA2－3的1－39位氨基酸残基序列与APLA2－2相同，其同源性为64％，而40－108位氨基酸残基序列为APLA2－1相同，其同源性为69％，10位氨基酸残基序列皆不同于这两种APLA2。结论：揭示了APLA2具有基因多样性，可能与物种进化和生物活性有关，并为进一步研究PLA2的结构与功能的关系提供更多的信息。     

Effects of chlorpromazine on the enzymatic and toxic properties of the most basic phospholipase A2 fromVipera russelli snake venom

The effect of chlorpromazine on various biological activities of phospholipase A₂ VRV-PL-VIII_a fromVipera russelli snake venom was investigated. The drug inhibited the in vitro phospholipase A₂ activity of the enzyme by 55%. The ID₅₀ was found to be 1.15 µM. Increasing substrate concentration relieved the inhibition of phospholipase A₂ activity by the drug indicating probable interaction with the substrate. The drug totally quenched the fluorescence intensity of the enzyme. Chlorpromazine increased the LD₅₀ of the enzyme by 1.6 fold. The drug also inhibited hemolytic and anticoagulant potencies but failed to inhibit edema inducing activity and myotoxicity of the enzyme.     

内毒素休克中红细胞膜的损伤及与磷脂酶A2的关系

本文研究了内毒素休克中兔红细胞膜磷脂酶Ａ２活性、膜磷脂主要组分ＰＣ、ＰＥ、ＰＳ含量及膜流动的变化，以探讨内毒素休克时磷脂酶Ａ２与膜损伤的关系及磷脂酶Ａ２抑制剂对细胞的保护效应。     

Effects of K-free solution on tension development and Na content in vascular smooth muscles isolated from guinea-pig,rat and rabbit

The effects of K-free solution on tension development and cellular Na content were investigated in aortic strips isolated from guinea-pig, rat and rabbit and in rabbit ear artery. Experiments were conducted in the presence of phentolamine (5×10^–7 to 10^–6 M) in order to eliminate the possible influence of endogenous catecholamine. K-free solution produced contractions and increased cellular Na content in these vascular smooth muscle preparations. The rate of increase in K-free contraction of rabbit aorta and ear artery was much slower than that of guinea-pig and rat aortae. The rate of accumulation of Na in rabbit arterial smooth muscle preparations was also much slower than that in guinea-pig and rat aortae. When the relationship between tension development and cellular Na content was compared in these arteries, it was found that an increase in cellular Na produced a greater increase in tension in guinea-pig and rat aortae than in rabbit aorta and ear artery. It is suggested that the slow and small responses of rabbit arterial smooth muscles to K-free solution might be due to a slow accumulation of Na and to a smaller role of transmembrane Na gradient in the regulation of cellular Ca.     

蛇血清分泌型磷脂酶A_2抑制剂防治人炎症的生物信息学分析

目的比较人和蛇毒分泌型磷脂酶A2(sPLA2)结构相似性,分析蛇血清磷脂酶A2抑制剂(PLI)对sPLA2特异性抑制的结构与功能关系,评价蛇血清PLI对人炎症的抑制作用。方法用Clustal W2对人和五步蛇sPLA2氨基酸序列进行多重序列比对。用Swiss-model对各种sPLA2的空间结构进行同源建模预测,并用Chimera软件对人和蛇毒sPLA2空间结构进行三维比对。结果人和五步蛇sPLA2一级序列同源性有40%左右,空间结构几乎相似。各种PLI具有相同的空间结构特征和保守的sPLA2结合区。结论理论上推断蛇血PLI可有效抑制人sPLA2活性,减少sPLA2介导的炎症发生。     

地塞米松对内毒素急性肺损伤磷脂酶A2活性变化的影响

实验采用绵羊慢性肺淋巴瘘－内毒素急性肺损伤模型，检测了肺组织磷脂酶Ａ２（ＰＬＡ２）活性及有关指标改变，并观察了地塞米松（Ｄｅｘ）对ＰＬＡ２活性变化的影响。结果发现，内毒素致伤后肺组织ＰＬＡ２活性及血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）、前列环素（６－Ｋｅｏｔｏ－ＰＧＦ１ａ）水平明显升高（Ｐ＜０．０１），致伤后２、４、６ｈＰＬＡ２活性分别为致伤前的１．９、２．８和３．３倍，肺动脉压（Ｐｐａ）和肺淋巴流量明显升高。应     

载脂蛋白（a）对血管平滑肌细胞增殖及其信号通路的影响

目的： 探讨载脂蛋白（a）［apo（a）］对血管平滑肌细胞增殖的影响及其机制。方法：原代培养血管平滑肌细胞并给予传代以进行实验，并采用α-actin抗体进行免疫组化细胞鉴定；分别给予apo（a）、apo（a）+整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609及单独LM609干预细胞，采用细胞计数和MTT实验观察细胞增殖情况，采用Western blotting分析相关信号蛋白的变化。结果：所用实验细胞经鉴定均为血管平滑肌细胞；apo（a）能促进血管平滑肌细胞增殖，但这一作用能被整合素αⅤβ3单克隆抗体LM609所对抗，单独的LM609干预对细胞生长并无影响；Western blotting显示apo（a）能促进黏附斑激酶（FAK）磷酸化，并使总的转化生长因子β1（TGF-β1）及其磷酸化形式均表达减少，而LM609能对抗apo（a）的这些作用。结论：Apo（a）促进血管平滑肌细胞增殖的作用是通过整合素αⅤβ3介导的， 以致FAK活化，进而TGF-β1表达及磷酸化均减少。     

麝香保心丸对血管平滑肌细胞表型转化的影响

目的: 观察麝香保心丸(SXBXW)对血管平滑肌细胞表型转化的影响。方法: 以血管平滑肌细胞系RASMC P8为模型,设对照组,SXBXW 0.25、0.5、1.0和2.0 g/L组,经不同浓度的SXBXW作用后,用流式细胞术测定RASMC P8细胞的收缩型特异性分子标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和平滑肌肌球蛋白重链(SM-MHC)表达的变化。结果: 与对照组相比,经SXBXW处理后,α-SMA和SM-MHC的阴性细胞百分比降低,阳性细胞百分比增加。结论: SXBXW能促使血管平滑肌细胞的表型从合成型向收缩型转化。     

肺炎衣原体感染对血管平滑肌细胞黏附和迁移的影响

目的:观察肺炎衣原体(C.pn)感染对血管平滑肌细胞(VSMCs)黏附和迁移的影响。方法:C.pn在人喉癌细胞系HEp-2细胞中增殖培养后感染大鼠VSMCs,吖啶橙(AO)荧光染色观察细胞内C.pn包涵体的形态特点;聚合酶链反应(PCR)检测C.pn特异性DNA片段;细胞黏附实验观察C.pn感染对VSMCs黏附能力的影响;wound-healing assay和Transwell assay检测C.pn感染VSMCs后细胞迁移能力的改变。结果:C.pn感染VSMCs后,少数细胞内出现空泡状结构即包涵体,但在多数细胞内以点状感染灶形式存在,包涵体较大,但数量较少。利用PCR可在感染的VSMCs内检测到437 bp的C.pn特异性DNA片段。细胞黏附实验结果显示,C.pn感染VSMCs 2 h后,细胞黏附能力明显增强,其吸光度值明显高于正常对照组(P0.01),细胞黏附率为134.38%。Wound-healing assay结果显示,C.pn感染VSMCs 24 h后,细胞向划痕中央迁移的距离明显大于正常对照组(P0.05)。Transwell assay结果显示,C.pn感染VSMCs 24 h后,C.pn感染组的细胞迁移数明显多于正常对照组(P0.01)。结论:C.pn感染能够显著增强VSMCs的黏附和迁移能力。     

人组织激肽释放酶基因重组腺病毒转染对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:探讨重组腺病毒介导的人组织激肽释放酶(hKLK1)基因转移对血小板源性生长因子-BB(PDGF-BB)诱导下的自发性高血压大鼠(SHR)血管平滑肌细胞(VSMCSHR)增殖和迁移的影响。方法:自行构建双顺反子重组腺病毒载体,携带强绿色荧光蛋白(EGFP)标志基因和目的基因hKLK1;用细胞计数法和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞生长周期;蛋白免疫印迹法(Western blotting)测定细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1的表达。采用改良Boyden微孔膜双槽法测定VSMCSHR迁移。结果:(1)hKLK1基因转移呈感染复数依赖性(20-100MOI)抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR生长,100MOI时抑制率为39.3%;呈时间依赖性抑制VSMCSHR生长,第5d时达高峰,抑制率为35.2%。(2)hKLK1基因转移可显著抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,峰值抑制率为30.2%(P0.01);细胞周期阻滞于G0/G1期的VSMCSHR明显增多,最大阻滞率为36.4%(P0.01),而缓激肽B2受体特异性阻断剂Hoe140逆转了hKLK的抑制作用。(3)hKLK1基因转移明显上调PDGF-BB诱导VSMCSHR的p27Kip1、p21Cip1表达,Hoe140明显降低p27Kip1、p21Cip1表达。(4)hKLK1基因转移可明显抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR细胞迁移,抑制率为34.6%,且Hoe140不影响该抑制作用。结论:hKLK1基因转移可抑制PDGF-BB诱导的VSMCSHR增殖,主要由缓激肽B2受体介导的,通过上调细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白p27Kip1、p21Cip1表达的途径。而hKLK1基因转移抑制VSMCSHR迁移效应可能不通过B2受体。