注射用重组人甲状旁腺素(1-34)在健康人体的药代动力学

目的研究注射用重组人甲状旁腺素(1-34)[rhPTH(1-34)](激素)在中国健康人体内的药代动力学特征。方法30名健康受试者随机分为10,20,40μg3个剂量组,每组10人,用免疫放射测定法(IRMA)测定人血浆中甲状旁腺激素(PTH)浓度。结果药代动力学参数:tmax分别为(32.5±9.5),(24.0±9.7)和(35.0±13.5)min;Cmax分别为(0.14±0.04),(0.20±0.05)和(0.30±0.04)ng.mL-1;t1/2分别为(47.7±12.1),(50.1±16.4)和(53.6±14.4)min;AUC(0-240)分别为(9.79±1.46),(15.42±1.66)和(32.72±3.16)ng.min.mL-1。结论单次皮下注射重组人甲状旁腺素(1-34)在低、中、高3个剂量内,Cmax和AUC呈线性增长,与剂量呈正相关;体内代谢呈线性代谢特征,与国外报道基本一致。     

重组人甲状旁腺激素1-34的纯化研究

重组人甲状旁腺激素(rhPTH(1-34))在工程菌pET(32a+)-PTH(1-34)/BL21(DE3)中以胞内可溶性融合蛋白形式高效表达。经过高压匀浆破菌处理,取上清经过亲和层析、酶切、阴离子交换层析、反相层析和阳离子交换层析进行分离纯化,得到rhPTH(1-34)原液样品纯度在98%以上,比活性达到1.05×104U/mg。     

重组人甲状旁腺素治疗骨质疏松症的研究进展

本文就重组人甲状旁腺素治疗骨质疏松症的研究概况作一综述,重点介绍重组人甲状旁腺素(1- 34)和重组人甲状旁腺素(1-84)的药理毒理和临床研究工作,为研究和开发甲状旁腺素提供参考。     

注射用重组人甲状旁腺素代谢产物PTH(1-34)的测定及其药动学

目的:注射用重组人甲状旁腺素PTH(1-84)在体内的代谢产物PTH(1-34)对骨质疏松症具有较好的疗效,本试验通过测定人血浆中PTH(1-34)浓度的变化,了解PTH(1-34)在体内的分布,对注射用重组人甲状旁腺素PTH(1-84)的药效及作用机制具有重要意义。方法:采用固相萃取法结合放射免疫分析(RIA)测定人血浆中注射用重组人甲状旁腺素代谢产物PTH(1-34)的浓度,采用DAS2.0数据处理系统进行药动学分析。结果:PTH(1-34)的线性范围为10～1 280 pg.mL-1,最低检测限为10 pg.mL-1(RSD为3.51%),采用固相萃取柱Styre Screen H2P在血浆样本萃取效率大于85%。结论:本法测定注射用重组人甲状旁腺素在血浆中的代谢产物PTH(1-34)的方法是可行的,特异性、灵敏度、精密度和准确度较高,可应用于临床样本的检测。     

重组人甲状旁腺素1-34联合钙尔奇D治疗绝经后女性骨质疏松疗效观察

目的 研究重组人甲状旁腺素1-34(recombinant human parathyroid hormone 1-34,rhPTH1-34)联合钙尔奇D治疗绝经后妇女骨质疏松的治疗效果.方法 84例绝经后骨质疏松妇女被随机分为实验组和对照组,每组均有患者42例.实验组采用rhPTH1 34)联合钙尔奇D治疗,对照组仅采用钙尔奇D治疗,疗程均为6个月.观察两组患者治疗前后骨密度变化、血清钙、磷和碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)、骨痛症状变化和治疗期间的骨折发生率.结果实验组治疗后的骨密度(T值)较治疗前增加,差异具有统计学意义(P<0.05);并且实验组治疗后的骨密度(T值)较对照组治疗后的骨密度(T值)增加,差异具有统计学意义(P<0.05).实验组和对照组治疗后ALP的浓度均高于治疗前,差异具有统计学意义(P<0.05),并且实验组治疗后ALP的浓度高于对照组治疗后,差异具有统计学意义(P<0.05).实验组的骨痛治疗有效率为66.67%;对照组为50%,实验组的有效率高于对照组,差异具有统计学意义(χ2=4.04,P<0.05).结论 rhPTH1 34联合钙尔奇D能够有效的提高绝经后女性的骨密度,减少骨质疏松的症状.     

人甲状旁腺素(1-34)对新生大鼠成骨细胞碱性磷酸酶活性影响

目的：研究外源性hPTH(1-34)对原代培养成骨细胞ALP活性影响。方法：新生大鼠头盖骨中取成骨细胞,改良Gomori氏钙钴法染色鉴定,磷酸苯二钠法测定ALP活性,RT-PCR检测ALP mRNA表达。结果：10^-8 mol.L^-1 hPTH(1-34)以48 h为一循环,在每一循环的前12 h作用于细胞时,可使成骨细胞ALP活性较对照组增加最明显,hPTH(1-34) 48 h作用组,与对照相比细胞ALP活性无显著差异。hPTH(1-34) 12 h作用组,成骨细胞ALP mRNA表达最高。结论：hPTH(1-34)刺激成骨细胞内ALP活性升高与给药方式及药物浓度有关,间歇性给药成骨细胞内ALP活性升高。     

人甲状旁腺素(1-34)的合成与聚乙二醇化修饰

目的合成人甲状旁腺素(1 34) [hPTH(1-34) ]并进行聚乙二醇化修饰。方法应用固相多肽合成方法合成并经高效液相色谱纯化得hPTH(1-34) ,Cys-hPTH(1- 34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 。Cys hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys-NH2 在水溶液(pH 7～8)中分别与平均相对分子质量为5 0 0 0的单甲氧基马来酰亚胺基聚乙二醇(mPEG50 0 0 MAL)反应,经高效液相色谱纯化得Cys(mPEG50 0 0 MAL)- hPTH(1-34)和hPTH(1-34)-Cys(mPEG50 0 0- MAL) -NH2 。结果hPTH(1-34) ,Cys(mPEG50 0 0 MAL) hPTH(1 34)和hPTH(1 34) Cys(mPEG50 0 0 MAL) NH2 的质谱和氨基酸组成分析结果均与理论值一致。hPTH(1-34) -Cys(mPEG50 0 0-MAL) NH2 保持了较好的体外活性,Cys(mPEG50 0 0- MAL) hPTH(1-34)保持了较好的体内活性。结论采用一种简便的方法成功实现了对hPTH(1-34)的N端或C端的聚乙二醇化修饰     

重组人甲状旁腺素1～34肽的组织分布和排泄研究

研究重组人甲状旁腺素1~34肽(recombinant human parathyroid hormone1~34,rhPTH1~34)在小鼠中的组织分布和在大鼠中的排泄,为国产rhPTH1~34申报临床研究提供实验依据。用Iodogen法将放射性同位素125I标记到rhPTH1~34的酪氨酸残基上,通过同位素示踪和反相高效液相色谱法(RP-HPLC)相结合的方法考察皮下给药后,125I-rhPTH1~34在小鼠中的组织分布和在大鼠中的排泄。大鼠皮下给予125I-rhPTH后,125I-rhPTH主要从尿中排出,48 h内通过尿液排出(80.33±3.92)%的放射性活性,而相同时间内通过胆汁和粪便排出的放射性活性仅为(7.12±1.52)%和(2.55±1.28)%。RP-HPLC分离结果表明在0~2 h,2~4 h和4~8 h收集的尿液中有125I-rhPTH1~34原型存在,其含量分别相当于该时段通过尿排出的放射性活性的33.62%,17.23%和16.05%;在胆汁和粪便中没有检测到125I-rhPTH1~34原型。小鼠皮下注射给予125I-rhPTH1~34后,rhPTH1-34主要分布在肾脏,并在给药后25 min达到峰值,此后随着时间的延长其在肾脏中的相对积累系数不断下降;与肾脏不同,rhPTH1-34分布到其他组织中的速度较慢,在给药后120 min相对积累系数才达到峰值;此时rhPTH1~34在各组织中的相对累积系数的的大小为:肾>胃>脾>肺>肌肉>肠>心>肝>骨>脑。rhPTH1~34主要在肾脏代谢并以原形和代谢物的形式通过尿液排出体外。     

重组人甲状旁腺素1-34分子量测定方法的研究

分别采用基质辅助激光解吸离子化-飞行时间质谱法(MALDI-TOF MS)、Tricine-SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(Tricine-SDS-PAGE)和分子排阻色谱法(SEC)测定重组人甲状旁腺素1-34的相对分子质量,为制定该品种的质量标准提供依据。MALDI-TOF/MS测定基质溶液为α-氰基-4-羟基肉桂酸(a-cyano-4-hydroxy-cinnamic acid,CCA);Tricine-SDS-PAGE电泳采用Tris-tricine电极缓冲系统;SEC测定色谱柱为TSK-GELG2 000 SWXL(300mm×7.8mm,5μm);流动相为三氟乙酸-乙腈-水(0.05∶20∶80);检测波长为215nm;流速为0.5 mL.min-1。结果:质谱法测定结果准确,实验值与理论值一致,误差±1;Tricine-SDS-PAGE测定结果与理论值基本一致,误差小于10%;但SEC法测定结果与理论值偏差较大。质谱法适用于产品的质量控制。     

RP-HPLC法测定注射用重组人甲状旁腺素含量

目的:建立RP-HPLC法测定注射用重组人甲状旁腺素的含量。方法:色谱柱为Agilent Zorbax 300SB C18(150 mm×4.6 mm,3.5μm),流动相为0.2 mol.L-1硫酸盐缓冲液(pH2.3)-乙腈(75∶25),流速0.8 mL.min-1,检测波长为214 nm,柱温为40℃。结果:线性范围:在10~30μg.mL-1浓度范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9997,n=5),最低检出限为20 ng,平均回收率为99.8%(n=9)。结论:本方法准确,重复性好,可为注射用重组人甲状旁腺素质量评价提供较为可靠的分析方法。     

重组人甲状旁腺激素（1—34）在体外对UMR106细胞增殖、分化功能的影响

目的:观察重组人甲状旁腺激素(1-34)[recombinant human parathyroid hormone(1-34),rhPTH(1-34)]对成骨样细胞 UMR106细胞增殖、分化功能的影响,初步探讨其作用机理。方法:采用体外培养的 UMR106细胞,在连续或间歇2种给药方式下,以1×10~(-12)～1×10~(-7)mol·L~(-1)rhPTH(1-34)作用于细胞,选择 MTT 法考察 rhPTH(1-34)对成骨细胞分裂和增殖的影响,同时测定细胞裂解液中代表成骨细胞分化功能的碱性磷酸酶活性。结果:rhPTH(1-34)连续作用于 UMR106细胞时,能抑制增殖和分化,且浓度越高,抑制作用越强;间歇作用于 UMR106细胞时,能够促进细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的升高,并且浓度为1×10~(-10)mol·L~(-1)时,促进作用最强,而高于或低于该浓度,作用减弱。结论:rhPTH(1-34)对 UMR106细胞增殖和分化功能的影响与给药方式和药物浓度有关。连续给药时,抑制 UMR106成骨样细胞的增殖和分化,浓度越高,抑制作用越强;而间歇给药时,促进成骨样细胞的增殖和分化,其剂量反应曲线呈类似钟形曲线。     

重组人甲状旁腺素（1-84）

人甲状旁腺素（1-84）[hPTH（1-84）J，是由甲状腺主细胞分泌的含84个氨基酸残基组成的多肽类激素，分子量约为9500道尔顿。它调节钙、磷代谢的生理作用主要通过其靶器官肾、骨来完成；另外对小肠的作用需要借助维生素D3来实现。     

重组人甲状旁腺激素1-34的氨基酸组成分析

分析重组人甲状旁腺激素 1-3 4的氨基酸组成 ,为该品种的结构鉴定提供依据。水解条件含 1%苯酚的6mol L盐酸 ,10 5℃水解 2 4h ;衍生方法异硫氰酸苯酯 (PITC)柱前衍生法 ;氨基酸测定色谱条件色谱柱为PhenomenexprodigyODS 10 0A。 (4 .6mm× 2 5cm ,5 μm) ;流动相A为 0 .1mol L醋酸钠 (pH6.5 ) -乙腈 (93 :7) ,B为水 -乙腈 (1:4) ;二元梯度洗脱 ;检测波长为 2 5 4nm ;流速为 1ml min ;柱温为 40℃。结果 :实验值与理论值一致 ,偏差小于 10 %。本法准确、可靠、重现性好 ,可用于该产品的质量控制。     

重组人凋亡素2配体治疗晚期恶性肿瘤Ⅰ期临床耐受性研究

目的观察晚期恶性肿瘤患者对重组人凋亡素2配体(rh-Apo2L,又称肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)静脉滴注后的安全性.方法rh-Apo2L皮试阴性的志愿者,接受该药静脉滴注2 h,qd,连用14 d,观察14 d;按"3+3"原则进行剂量爬坡,每组3～6例.结果入组22例,2例皮试阳性退出研究.rh-Apo2L由10递增至300 μg·kg-1·d-1共6个剂量组.除Ⅲ度全身炎性反应综合征,其余均为Ⅰ～Ⅱ度不良反应,包括发热、疲劳、乏力、皮肤黏膜改变、消化道反应、心血管系统毒性、骨髓抑制和肝肾功能损伤;所有毒性均可在停药2周内恢复;最大耐受剂量为200 μg·kg-1·d-1.结论恶性肿瘤患者采用rh-Apo2L静脉滴注后的安全性良好,推荐进行Ⅱ期临床研究.     

rhPTH（1-34）对大鼠类固醇性骨质疏松治疗作用研究

目的：观察重组人甲状旁腺激素rhPTH（1-34）对大鼠类固醇性骨质疏松的治疗作用。方法：应用皮下注射醋酸泼尼松龙注射液的方法建立类固醇性骨质疏松模型。给予皮下注射5、10、20μg·kg^-1·d^-1 rhPTH（1-34）治疗12w。观察骨组织形态,计量骨密度、骨生物力学和骨代谢相关的血尿生化指标,综合评价rhPTH（1-34）对大鼠类固醇性骨质疏松的治疗效果。结果：皮下注射醋酸泼尼松龙注射液,骨体积和成骨表面显著下降,骨吸收表面显著升高,表明形成了类固醇骨质疏松。不同剂量的rhPTH（1-34）对大鼠股骨骨密度（BMD）均有显著增加。在股骨生物力学特征方面,rhPTH（1-34）中、高剂量组的最大位移（du）显著升高,高剂量组的衰竭功（U）升高;在股骨骨形态计量学方面,不同剂量的rhPTH（1-34）对骨体积均显著升高,矿化沉积率均显著升高,肋骨宽度（O.Th）均显著下降,骨重建时间（δ）均显著缩短等;在血清和尿生化指标方面,不同剂量的rhPTH（1-34）对骨钙素（BGP）均显著升高,尿羟脯氨酸/肌苷均显著下降,中、高剂量组对尿Ca显著下降。结论：rhPTH（1-34）对大鼠类固醇性骨质疏松具有显著的治疗作用。     

重组人甲状旁腺激素1-34多次皮下注射给药的人体药动学特征

目的研究健康志愿者多次皮下注射重组人甲状旁腺激素1-34[(rhPTH(1-34)]后体内的药动学特征。方法8名健康志愿者多次皮下注射rhPTH(1-34)后,采用放射免疫法测定血浆中rhPTH(1-34)浓度,评估它的药动学特性。结果rhPTH(1-34)的主要药动学参数如下:d 1,AUC0→t为(17103.3±2243.3)ng.min.L-1,AUC0→∞为(20471.3±2444.6)ng.min.L-1,ρmax为(171.2±34.2)ng.L-1,tmax为(38.1±15.1)min,t12为(55.7±3.9)min;d 7,AUC0→t为(17759.6±3781.5)ng.min.L-1,AUC0→∞为(20698.4±3374.6)ng.min.L-1,ρmax为(184.6±36.8)ng.L-1,tmax为(35.0±16.0)min,t12为(51.6±7.6)min,蓄积系数R为1.02±0.18。结论多次皮下注射rhPTH(1-34)后,与单次给药相比它在人体内的吸收、消除不随连续给药变化,药物在体内没有蓄积作用。rhPTH(1-34)的安全耐受性良好。性别对药动学参数没有影响。     

放射免疫分析法测定重组人甲状旁腺素(1-84)的血药浓度及其药动学研究

目的:建立测定注射用重组人甲状旁腺素(rhPTH)(1-84)血药浓度的方法并对其药动学进行研究,为rhPTH(1-84)Ⅰ期临床试验提供准确的测定方法。方法:采用放射免疫分析(RIA)法,以甲状腺素放射免疫试剂盒(ELISA-rhPTH)测定rhPTH(1-84)血药浓度。结果:rhPTH(1-84)血药浓度在24～520pg/ml范围内线性关系良好(r=0.9989),最低定量限为10pg/ml;血浆提取回收率为86.7%～92.8%;日内RSD<7%,日间RSD<9%;血浆样本-80℃贮存80d稳定性良好。患者皮下注射2.0μg/kgrhPTH(1-84)后的主要药动学参数分别为:tmax(0.63±0.28)h、cmax(146.55±46.35)pg/ml,AUC0-10h(532.36±132.54)pg/ml。结论:本法特异性好、灵敏度高、操作简便。     

重组人甲状旁腺素类似物PTH（1-34）在大鼠体内药动学研究

目的：研究大鼠scPTH（1-34）的药动学特征。方法：用125I标记PTH（1-34）示踪法对大鼠scPTH（1-34）后的血清药物浓度进行了测定,并用3P97程序拟和分析并计算药动学参数,采用超滤离心的方法进行药物与血浆蛋白结合率的研究。结果：大鼠scPTH（1-34）10、20和40μg/kg后,药物消除符合一房室模型。平均t1/2ke为（0.92±0.04）h;平均CL为（0.56±0.05）L/（kg.h）;Cmax和AUC0-8h均与剂量呈线性正相关,不同剂量药物与血浆蛋白平均结合率为13.4%。结论：大鼠scPTH（1-34）后,药物消除符合线性动力学特征。     

透明质酸温敏水凝胶介导的重组人甲状旁腺激素(1-34)可控释放与细胞生物学研究

促成骨剂重组人甲状旁腺激素(1-34)[PTH (1-34)]的半衰期短和生物利用率低。本研究制备了一种可生物降解的透明质酸-聚N-异丙基丙烯酰胺温敏水凝胶(AHA-g-PNIPAAm),并探究其作为药物载体对PTH (1-34)释放和细胞行为的影响。采用核磁共振氢谱和红外光谱对AHA-g-PNIPAAm的结构进行确证;利用物理溶胀法制备载药温敏水凝胶,并进行稳定性考察;采用扫描电镜观察水凝胶的形貌;采用紫外分光光度法考察水凝胶的最低临界转变温度和体外药物释放行为;四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法(MTT法)研究载药温敏水凝胶对小鼠单核巨噬细胞RAW264.7和小鼠颅骨前成骨细胞MC3T3-E1细胞的毒性与增殖作用;抗酒石酸酸性磷酸酶检测法考察载药水凝胶对RAW264.7分化的影响。结果显示,制备的载PTH (1-34)温敏水凝胶呈现规整的三维蜂窝状结构,具有良好的稳定性、温敏性和药物缓控释性能,可有效促进MC3T3-E1细胞的增殖,抑制RAW264.7向破骨细胞的分化。