抗乙肝病毒前S(2)蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及初步应用

本文用聚合人工血清白蛋白亲和层析柱纯化的含前S(2)-HBsAg,脾内接种BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/o-Ag骨髓瘤细胞进行常规方法融合,以四种酶联法进行筛选、并经多次有限稀释亚克隆培养,最终选出3林为分泌抗前S(2)单克隆抗体的细胞株。再经亚克隆培养和多次传代与冻存,并用抑制酶联法检测其抗体,均为抗前S(2)抗体阳性。接种BALB/c小鼠腹腔后,腹水均为抗前S(2)阳性反应,且效价可高达8万。用免疫双扩散法检测免疫球蛋白类型。均为鼠IgG1型。用经硫酸铵沉淀等方法纯化的IgG酶标物,采用双抗体夹心,检测了乙肝病人血清中的前S(2)蛋白,得到了初步结果,与现有检测受体的方法相比,具有敏感,特异,重复性好等优点,结果可靠。这一方法值得在临床上推广使用。     

抗人肺腺癌单克隆抗体放射免疫显像的动物实验研究

本文介绍用单克隆抗体进行裸鼠移植瘤的放射免疫定位的实验结果。用人肺腺癌细胞株(LTEP-a_2)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0细胞融合,筛选出产生抗LTEP-a_2抗体的杂交瘤细胞,经3次亚克隆后,注入BALB/c小鼠腹腔,产生腹水。Zetaprep离子交换     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用（简报）

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB／c小鼠脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2／0融合，获得4A5，4C2，5C0．6B6四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA)，测知培养上清抗体滴度为1：16—1：128，接种同系小鼠腹腔诱生的腹水，     

淋球菌单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及临床初步应用(简报)

用淋病球菌菌体抗原免疫的BALB/c小鼠脾细胞,与骨髓瘤细胞SP2/0融合,获得4A_8、4C_2、5C_9,6B_5四个持续分泌抗淋病球菌菌体抗原单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。其产生的抗体与同抗原经酶联免疫吸附试验(ELISA),测知培养上清抗体滴度为1∶16～1     

用免疫荧光法筛选抗人μ链单克隆抗体(McAb)的研究

用人血清IgM球蛋白重链-μ链免疫的BALB/c小鼠脾细胞与鼠骨髓瘤Sp 2/0细胞在PEG作用下融合,用免疫荧光法筛选出6种分泌McAb的杂交瘤细胞,其中5株确定为抗人μ链McAb,一株未定。杂交瘤细胞经四次克隆,半年多传代,接种BALB/c鼠可稳定的产生腹水抗体。     

人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定北大核心CSCD

目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。     

人颗粒蛋白前体F片段结构域单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人颗粒蛋白前体F片段(GrnF)的单克隆抗体(mAb),并初步鉴定其生物学特性。方法通过分子生物学技术构建含人GrnF编码序列的酵母表达载体,表达并纯化酵母来源的融合人血清白蛋白(HSA)的GrnF片段HSA-GrnF。用纯化的HSA-GrnF免疫BALB/c小鼠,然后将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0进行融合,用ELISA筛选阳性克隆,并采用有限稀释法进行亚克隆;采用免疫荧光染色及Westernblot法对所获得的mAb的特异性进行鉴定,并用抗体亚类测定试剂盒检测所获得单克隆抗体亚类。结果成功获得2株可分泌特异性抗GrnF的杂交瘤细胞株(1G6及4E8),经鉴定这2株抗体重链亚类均为IgG1亚类。结论成功制备了抗人GrnF片段结构域的单克隆抗体。     

抗猪流行性腹泻病毒单克隆抗体细胞系的建立及初步应用

用提纯的猪流行性腹泻病毒抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与NS—1骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附试验间接法筛选出阳性孔经3～4次克隆化,阳性率达100％后扩大培养,液氮及超低温冰箱保存。建立了1D_8、5D_7、4B_1、2B_8、1A_4五株抗猪流行性腹泻病毒的单克隆抗体杂交瘤细胞系。接种BALB/c小鼠,10天左右收取腹水,用ELISA检测培养上清液     

抗血小板膜糖蛋白Ib单克隆抗体的制备、鉴定及其功能的初步研究

目的:制备抗人血小板膜糖蛋白Ib(GPIb)单克隆抗体(mAb),并进行生化鉴定与初步探讨其临床应用.方法:采用血小板免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞融合.经间接ELISA法筛选和克隆化培养,获得1株抗人GPIb mAb的杂交瘤细胞,纯化其腹水获得mAb;免疫双扩散鉴定其抗体亚类;流式细胞术和免疫放射法鉴定...     

胃癌单克隆抗体的研制及其对胃癌活检组织印片细胞的免疫细胞化学反应性

用体外培养的人胃癌细胞脾内免疫BALB/c小鼠,将致敏脾细胞和小鼠SP2/0细胞融合,获得小鼠杂交瘤细胞。用间接免疫荧光法初筛,将初筛克隆扩增后,用正常组织及新鲜肿瘤组织冰冻切片做免疫组化染色,测定其抗体的反应性。然后用有限稀释法克隆3～5     

抗α-苦瓜素单克隆抗体的制备与鉴定

用α-苦瓜素(α-MMC)免疫小鼠(BALB/c),分离免疫脾细胞,采用聚乙二醇(PEG)法将免疫脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,筛选出分泌抗α-MMC素的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株;采用小鼠体内诱生法制备腹水,Mabselect亲和层析纯化McAb,所得McAb经亚类鉴定为IgG2b亚类,通过间接酶联免疫吸附试验(ELISA)和Western blot检测,所得McAb与α-MMC特异反应,与相同来源的MAP30无交叉反应,为深入研究α-MMC的结构与功能提供了检测手段。     

一种针对多种上皮样细胞系的单克隆抗体

用人卵巢粘液囊腺癌细胞系细胞制备抗原,给BALB/c小鼠脾内注射后,取其脾细胞与Sp2/0瘤细胞融合,HAT选择培养基培养21d,以免疫荧光法检测,经3次亚克隆培养,获1株能稳定分泌单克隆抗体的杂交     

抗血吸虫、肺吸虫、华支睾吸虫共同抗原决定簇的单克隆抗体

<正> 用日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)免疫BALB/c 小鼠,取其脾细胞与 SP2/0骨髓瘤细胞按 Kennett 方法作细胞融合,用有限稀释法克隆化2～3次后,建立一株分泌特异性抗体的杂交瘤细胞(A6-B6),其培养上清经浓缩后作免疫球蛋白亚类签定为 IgM,杂交瘤诱生的小鼠腹水经 SEA 免疫     

口蹄疫病毒非结构蛋白3D单克隆抗体的制备及鉴定

目的:制备并鉴定口蹄疫病毒(FMDV)非结构蛋白3D的单克隆抗体(mAb).方法:以纯化的原核表达3D蛋白免疫BALB/c小鼠, 取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合, 杂交瘤细胞经间接ELISA法筛选, 有限稀释法克隆, 直至所克隆的细胞能够100%的分泌抗体, 用Western blot以及间接免疫荧光法对mAbs的特异性等进行鉴定.结果:免疫的BALB/c小鼠经过多次融合筛选, 共获得5株抗pET28a-3D的mAb, 其亚类鉴定3株为IgG1 , 2株为IgG2b, 初步判定所得5株mAb识别2个不同表位.Western blot显示这些mAbs与重组3D蛋白和FMDV O/China99感染的BHK-21细胞中的3D抗原均特异性结合, 免疫荧光结果显示这5株mAb能够特异结合FMDV感染细胞中的3D蛋白.结论:成功获得了能识别自然3D蛋白的特异性mAb , 为进一步研究3D蛋白的结构和功能以及诊断方法奠定基础.     

人大细胞肺癌单克隆抗体的制备及其碘化后的免疫活性

为进一步扩大肿瘤放射免疫显像和放射免疫治疗的研究和应用,制备了抗人大细胞肺癌单克隆抗体。用人大细胞肺癌细胞(PLA-801)免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞(Sp2/0)融合,筛选出四株分泌抗体性能稳定的杂交瘤,在BALB/c小鼠中产生含抗体丰富     

抗人肝癌细胞单克隆抗体的研究

以新建立的人肝细胞癌细胞株PUMC-H1及PUMC-H3免疫BALB/c小鼠,利用小鼠B细胞杂交瘤技术,进行融合、克隆及亚克隆,采用酶标、免疫荧光及放免法(以酶标为主,包括新建立的一种检测抗细胞抗原单克隆抗体的ELISA法),筛选出一批抗人肝癌细胞单     

一株抗双链DNA单克隆抗体的制备及其特性研究

制备抗双链DNA(dsDNA)单克隆抗体并对其生物学特性进行初步研究。以活化淋巴细胞的DNA为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴细胞杂交瘤技术制备单克隆抗体;用体内诱生法制备腹水,以间接酶链反应吸附试验(ELISA)法分析抗体的亚类、特异性和亲和力;用免疫荧光法检测抗体的荧光核型;用考马斯亮蓝法检测注入杂交瘤细胞的小鼠的尿蛋白含量。结果显示,成功获得了1株持续稳定分泌抗dsDNA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6C2;该细胞株所分泌的抗体亚类为小鼠IgG2a,能特异性结合dsDNA,亲和力常数为2.67×10~8mol/L,免疫荧光核型为均质型;将6C2细胞注入正常BALB/c小鼠腹腔后,小鼠的尿蛋白含量较对照组明显增高。结果表明,抗dsDNA单克隆抗体6C2是致病性抗体,对于进一步研究抗dsDNA抗体的致病机制具有重要的价值。     

应用于胶体金免疫层析的MDMA单克隆抗体的制备与鉴定

目的:制备高特异性的抗3-4亚甲二氧基甲基苯丙胺(MDMA)单克隆抗体,用于建立快速检测MDMA的胶体金免疫层析方法。方法:用MDMA人工抗原免疫BALB/c小鼠,将小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,经亚克隆筛选得到稳定分泌抗MDMA单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备腹水,辛酸-饱和硫酸铵法纯化得到抗MDMA单克隆抗体(m Ab),并用胶体金免疫层析筛选出适用的抗MDMA单克隆抗体(m Ab),并对其进行特异性、纯度、亚类的鉴定分析。结果:经多次亚克隆后筛选得到4C10、4D10、7D11、8D4 4株分泌抗MDMA单克隆抗体的杂交瘤细胞株。其中细胞株8D4分泌的抗体适用于胶体金免疫层析。结论:成功筛选出能稳定分泌m Ab的细胞株,为MDMA快速检测试剂的研制提供了关键材料。     

抗CRP杂交瘤单克隆抗体的制备及研究

应用杂交瘤技术融合Sp2/0瘤细胞与CRP免疫的BALB/c小鼠脾细胞,经选择培养和细胞克隆,建立了4株抗CRP特异性单克隆抗体分泌细胞株242B3、242C4、263A5与263B5,其染色体均在Zn=62～67间,抗体Ig鉴定分别为IgG2a、IgG2a、IgG2b和IgG2b腹水抗体效价为1～3×10~(-5)。     

抗人心肌球蛋白单克隆抗体的制备及其生物学特性初步研究

作者以人心肌球蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合,获得2株(2F1和1F6)分泌抗人心肌单克隆抗体的杂交瘤细胞系。经ELISA检测细胞培养液上清和小鼠诱导的腹水,其抗体效价分别为10~(-2)～10~(-3)和10~(-5)～10~(-6)。抗原区带测定结果,细胞培养液上清及小鼠腹水中的特异性抗体均能与分子量为65 000的蛋白质结合,经酶联二抗及底物处理,呈一条明显的显色带,阴性对照无显色带。抗原阻断