量子点对口腔鳞癌细胞活性影响的研究

目的 探讨量子点对口腔鳞癌活细胞的影响。 方法 通过MTT法检测不同浓度量子点对口腔鳞癌细胞活性的影响。 结果 在4 、8h时各实验组与空白对照组无统计学意义（P＞0.05）;在12 、16h及20h时,除量子点终浓度为20nmol/L组与空白对照组无统计学意义（P＞0.05）,其它各组与空白对照组有统计学意义（P＜0.05）。 结论 量子点浓度低于20nmol/L时,对细胞活性无明显的影响。     

量子点对口腔鳞癌细胞活性的影响

目的 探讨量子点对口腔鳞癌活细胞的影响。 方法 通过MTT法检测不同浓度量子点对口腔鳞癌细胞活性的影响。 结果 在4 、8h时各实验组与空白对照组无统计学意义（P＞0.05）;在12 、16h及20h时,除量子点终浓度为20nmol/L组与空白对照组无统计学意义（P＞0.05）,其它各组与空白对照组有统计学意义（P＜0.05）。 结论 量子点浓度低于20nmol/L时,对细胞活性无明显的影响。     

量子点标记人舌癌细胞survivin siRNA的研究

目的　研究量子点标记人舌癌Tca8113细胞survivin siRNA的方法,为后期以量子点为载体转染siRNA进行基因沉默的研究提供理论依据及技术支持。方法 表面带正电荷的水溶性量子点,通过正负电荷的吸引力与表面带负电荷的survivin siRNA结合, 在siRNA定量的基础上改变量子点的量,取三种比例进行试验,并设立阳性对照组、阴性对照组,通过琼脂糖凝胶电泳观察siRNA条带的亮度分析量子点标记siRNA的最佳比例。结果 实验组的siRNA条带亮度均比阳性对照组小,其中实验组3的siRNA条带亮度最小且与阴性对照组接近,说明该组中量子点与siRNA结合最佳。结论 量子点标记人舌癌Tca8113细胞survivin siRNA的最佳比例为1:2,且该比例在量子点的安全使用范围内。     

量子点为载体转染survivin siRNA至人舌鳞癌Tca8113细胞的研究

目的靶向survivin基因的siRNA通过量子点为载体转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,研究其对survivin基因表达的影响,为量子点在肿瘤的基因治疗方面提供实验依据。方法 Survivin siRNA通过量子点转染至人舌鳞癌Tca8113细胞中,同时设立LIPOFECTTAMINE2000脂质体为转染载体的对照组以及未转染的空白组,采用实时定量RT-PCR检测各组Tca8113细胞中survivin mRNA表达的改变情况。结果实验组用50pmolQD转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降64%,QD与siRNA的使用比例为1∶2;对照组中用100pmol lipofectamine2000脂质体转染100pmol survivin siRNA入Tca8113细胞48h后,检测到survivin siRNA mRNA表达量相对于空白组下降90%,QD与siRNA的使用比例为1∶1。结论量子点为载体转染survivin siRNA能够有效的抑制Tca8113细胞survivin mRNA的表达,量子点有望作为RNA干扰技术的新型载体。     

人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2表达

目的探讨口腔癌肿瘤细胞中c-erbB-2、bcl-2基因的表达水平及其在肿瘤形成、发展过程中的作用.方法采用荧光定量RT-PCR实验技术检测人舌鳞癌Tca8113细胞株中c-erbB-2、bcl-2基因mRNA表达水平.结果分光光度计检测纯度A260/A280均在1.8～2.0,通过基因表达扩增曲线图与看家基因GAPDH校正,得出目的基因的相对含量高.结论 bcl-2与c-erbB-2基因的表达水平在人舌鳞癌Tca8113细胞株中显著升高,可能在肿瘤形成、发展过程中起到一定的作用.     

MDP通过上调口腔癌细胞COX-2/PGE2表达促进其趋化和增殖

目的 研究细菌细胞壁成分MDP对口腔癌细胞Tca8113 COX-2/PGE2表达的影响.方法 RT-PCR检测NOD2、COX-2在Tca8113细胞的表达;不同浓度MDP刺激Tca8113细胞后,采用RT-qPCR、MTT、ELISA及趋化实验分别检测其对COX-2/PGE2表达、细胞增殖和细胞趋化的影响.结果 ①Tca8113细胞表达NOD2、COX-2 mRNA; MDP促进COX-2 mRNA表达;②与对照组比较,MDP刺激Tca8113后PGE2分泌、细胞增殖、趋化显著增加(P＜0.05);与MDP组比较,MDP+NS-398组PGE2分泌、细胞增殖、趋化显著降低(P＜0.05);与NS-398组比较,MDP+NS-398组细胞增殖仍然显著增强(P＜0.05).结论 MDP促进肿瘤细胞趋化和增殖.上调口腔癌细胞COX-2/PGE2表达是其作用机制之一.     

量子点对膀胱癌BIU-87细胞抗原的标记检测

目的:探讨不同的量子点免疫荧光组织化学方法对膀胱癌BIU-87细胞抗原特异性标记的效果,以优化细胞标记方法。方法:分别采用量子点免疫荧光组织化学三步法、二步法、一步法检测前列腺干细胞抗原(PSCA)在膀胱癌BIU-87细胞中的表达情况,观察并分析三种方法特异性标记的效果。结果:PSCA特异性的表达于BIU-87细胞胞质或膜,三种方法在紫外光激发下均能观察到表达部位明显的红色荧光,三步法实验技术成熟,量子点标记的链霉亲和素性质稳定,检测灵敏度高,背景清晰,但实验步骤繁琐,耗时较长,不宜用于活细胞标记;二步法实验步骤和操作时间都相对有所减少,但量子点标记的二抗性质不稳定,非特异吸附较强;一步法操作简便,省时,标记效果明显,特异性强,但是标记一抗成本较高,且对一抗的剂量要求较大。结论:三种量子点荧光标记方法均能对固定细胞表面抗原进行特异性标记,需根据不同实验需求选择合适的标记方法以达到最佳实验效果。特异性一步法量子点荧光标记在活细胞及活体靶向成像示踪中具有巨大的应用前景。     

大黄素抑制人口腔鳞癌细胞Tca8113增殖及细胞周期进程的实验研究

目的探讨大黄素对人口腔鳞癌细胞体外生长增殖及细胞周期改变的影响。方法采用2.5、5.0、10、20、40、60和80 μmol/L
大黄素分别干预体外培养的口腔鳞癌细胞Tca8113,作用24、48和72 h后,并设含0.1%二甲基亚砜的培养液作为对照组,通过
MTT检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞Tca8113的增殖作用;以FCM检测不同浓度大黄素干预对于口腔鳞癌细胞周
期的影响;结合Western blotting 方法分析大黄素干预后对口腔鳞癌细胞周期相关蛋白CDK2、Cyclin E和P21 表达水平的变
化。结果大黄素能够在72 h内明显抑制Tca8113细胞生长以及增殖行为。MTT结果显示,随作用时间从24、48到72 h,大黄素
对于Tca8113细胞的抑制效应呈明显的时间—浓度依赖关系;由细胞周期检测结果显示,大黄素作用使口腔鳞癌Tca8113细胞
周期表现为G0~G1期细胞时相阻滞;蛋白免疫印迹则表明经大黄素干预口腔鳞癌Tca8113 细胞的细胞周期相关蛋白CDK2、
Cyclin E和P21表达水平明显降低,与空白对照组相比较,具有显著的统计学差异（P<0.05）。结论大黄素能够明确抑制人口腔鳞
癌细胞Tca8113的生长增殖以及影响其细胞分裂周期,这可能与抑制细胞周期调控信号通路中分子的活化与转导有关。
     

miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞增殖与侵袭的实验研究

目的探讨miRNA-20a-BCL-2信号通路介导雷公藤红素、平阳霉素对舌鳞癌细胞(Tca8113)增殖与侵袭。方法 Tca8113细胞液于DMEM培养液中培养,作为对照组;雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组(雷公藤红素+平阳霉素)的培养方法为10%胎牛血清DMEM培养液分别含有20μg/mL的雷公藤红素、20μmol/mL的平阳霉素以及20μg/mL雷公藤红素+20μmol/mL平阳霉素。以上各组每孔设6个平行样,培养48h,培养结束后,检测Tca8113细胞活力、凋亡、侵袭情况,实时荧光逆转录法测定miRNA-20a、BCL-2 mRNA水平,酶联免疫吸附法测定MMP-9、cyc D1、VEGF蛋白水平。结果与对照组比较,雷公藤红素组、平阳霉素组、联合组增加Tca8113细胞抑制率[(72.56±0.98)%、(59.43±0.44)%、(92.44±0.16)%比(0.00±0.00)%,P0.05],Tca8113细胞凋亡率[(42.32±9.43)%、(43.09±8.21)%、(60.54±9.88)%比(29.34±8.32)%,P0.05],降低Tca8113miRNA-20a RNA水平[(1.53±0.17)、(1.52±0.20)、(0.53±0.10)比(1.97±0.25),P0.05],Tca8113 BCL-2RNA水平[(4.13±0.36)、(4.16±0.39)、(2.32±0.29)比(5.16±0.21),P0.05)],Tca8113穿膜数[(434±25)个、(458±54)个、(223±33)个比(757±19)个,P 0.05],Tca8113 MMP-9水平[(465.32±15.32)μmol/L、(469.98±43.76)μmol/L、(196.14±19.23)μmol/L比(567.98±23.76)μmol/L,P0.05],Tca8113cyc D1水平[(345.87±13.98)μmol/L、(352.87±16.98)μmol/L、(172.87±9.54)μmol/L比(578.00±15.09)μmol/L,P 0.05],Tca8113 VEGF水平[(630.87±14.87)μmol/L、(625.87±15.76)μmol/L、(245.76±32.76)μmol/L比(916.91±28.97)μmol/L,P0.05]。结论雷公藤红素联合平阳霉素能抑制miRNA-20a-BCL-2信号通路及下游细胞因子的表达,进而抑制Tca8113增殖、侵袭。     

JSH-23对人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的影响

目的 探讨JSH-23阻断NF-κB信号通路后人舌鳞癌细胞Tca8113增殖和凋亡的情况及NF-κB信号通路相关凋亡抑制基因Bcl-2的表达变化,进而为临床舌鳞癌的干预和治疗寻找新的药物提供实验依据.方法 采用体外培养人舌癌Tca8113细胞的方法,经不同浓度JSH-23作用不同时间后,用MTT法、RT-PCR及Western blot等方法检测JSH-23对Tca8113细胞增殖、凋亡的影响.采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验.结果 Tca8113细胞经JSH-23作用后,增殖受到明显抑制,20 μmol/L JSH-23作用48 h时,抑制作用最为显著,细胞生长抑制率达到60.45％.同时,Bcl-2凋亡抑制基因表达减少,与对照组相比,JSH-23作用48 h后,Bcl-2表达显著减少47.85％,差异有统计学意义（P＜0.05）;Bcl-2蛋白含量也明显减少,作用48 h后,Bcl-2蛋白表达相对光密度值分别下降50.93％ （P ＜0.01）.结论 JSH-23作为NF-κB信号通路抑制剂,可以明显抑制人舌鳞癌细胞的增殖,同时显著下调Bcl-2基因及蛋白的表达.     

siRNA对肺癌细胞株bcl-2基因表达的抑制

目的研究小干扰RNA(siRNA)对bcl-2基因表达的抑制作用。方法利用Ambion公司提供的设计软件和试剂盒,设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA,通过脂质体将合成的siRNA转入A549和NCIH460细胞株,以未转染细胞和转染bcl2的反义药物G3139为对照,经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制,RTPCR检测bcl2mRNA水平,流式细胞仪检测细胞周期的改变和bcl-2蛋白表达,反应siRNA对bcl-2表达的抑制效应。结果siRNA组与对照组细胞存活率各时间点均有显著差异(P<0.05);与反义组在24、48h也有显著差异(P<0.05),而72h无差异(P>0.05)。转染12h后,siRNA组bcl-2mRNA与对照组和反义组有显著差异(P<0.05)。转染48h后,siRNA组bcl2蛋白阳性率明显低于对照组和反义组,siRNA组和反义组细胞阻滞于S期。结论体外转录合成的siRNA可抑制A549和NCIH46细胞bcl2基因的表达,效率可达50%以上。     

半导体量子点在细胞标记领域的应用进展

量子点作为一种新型荧光标记物近来已在生物学科研中广泛应用。为了弄清移植细胞进入体内后的转归及其发生反应的机制,必须对进入生物体内细胞进行监控,过去主要依靠有机荧光染料、同位素和生物分子来达到这一目的。但是有机染料和同位素都有着这样或那样的缺陷,相对限制了它们在生物活体中的应用。新的标记物的出现和应用解了关于这方面的燃眉之急。     

芦荟大黄素在体外诱导人舌癌及肺癌肿瘤细胞凋亡的初步研究

目的探讨芦荟大黄素在体外对人舌癌细胞株Tea8113及肺癌细胞株YTMLC肿瘤细胞的生长抑制作用及诱导凋亡的作用，并初步探讨其机理，为进一步明确芦荟的药理作用及扩展芦荟的临床应用提供实验依据．方法将不同浓度的芦荟大黄素作用了舌癌和肺癌肿瘤细胞，应用MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用；应用免疫荧光、DNALadder、流式细胞仪及透射电镜检测细胞凋亡；     

利用T7噬菌体展示技术构建人舌鳞癌细胞多肽文库

目的:本研究拟构建人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为进一步筛选和鉴定与舌鳞癌相关的蛋白或多肽打下基础.方法:人舌癌细胞株Tca8113,QiaGen法提取细胞mRNA,逆转录合成双链cDNA后与T7Select 10-3载体连接,体外包装并扩增得到1-7噬菌体展示多肽文库.结果:构建了人舌鳞癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,原始文库重组滴度为鳞癌1.7×106 pfu,扩增后滴度为3×1010 pfu/mL.随机从文库中抽取10个克隆PCR扩增插入片断,电泳结果显示构建的文库中均有插入片段,文库插入率高达100%.所构建的文库插入片断大小在(0.4～1.0)kbp之间.结论:成功构建了人舌癌细胞株Tca8113的T7噬菌体展示多肽文库,为下一步筛选和鉴定与舌癌相关的蛋白或多肽奠定了基础.     

bcl-2蛋白在口腔扁平苔藓和口腔鳞状细胞癌中的表达

目的:探讨bcl-2在口腔扁平苔藓(OLP)和口腔鳞状细胞癌(OSCC)的表达及意义。方法:运用免疫组化SP法研究bcl-2在糜烂型、非糜烂型OLP,高、中、低分化OSCC中的表达。结果:bcl-2在正常口腔粘膜(NOM)上皮的表达较OLP明显增强,差异具有统计学意义。bcl-2在高、中、低分化OSCC中的表达差异明显,OSCC分化越低,bcl-2表达则越强;分化越高,表达越弱。结论:bcl-2在OLP上皮层中表达较正常口腔粘膜(NOM)上皮明显减少,可能与OLP上皮细胞凋亡增加、上皮变薄有关。bcl-2在高、中、低分化OSCC中的表达具有明显差别,可能与OSCC的分化的程度有关。     

阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其分子机制的研究

【目的】观察阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡及其过程中某些凋亡相关分子表达的变化,探讨其诱导凋亡作用的分子机制。【方法】采用MTT法检测阿霉素对Tca8113细胞的增殖作用;以光镜、荧光纤维镜、流式细胞仪和Annexin V-FITC标记法检测细胞凋亡;以蛋白印迹法分析阿霉素对Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达的影响。【结果】阿霉素以剂量依赖方式抑制Tca8113细胞增殖;光镜及荧光显微镜下可见明显凋亡细胞;流式细胞仪检测显示细胞停滞于G1或S期,有明显凋亡峰出现;Annexin V-FITC标记法定量检测证实阿霉素可诱导细胞凋亡发生;蛋白印迹检测表明阿霉素可使Bax表达升高,Bcl-2和Survivin表达下降。【结论】阿霉素可显著抑制Tca8113细胞增殖,可通过调节Bcl-2、Bax和Survivin蛋白表达来实现致凋亡作用。     

纳米荧光量子点对组织标本抗原的标记检测

目的:观察量子点纳米荧光材料对组织标本抗原特异性标记的效果。方法:分别对胃腺癌组织标本和膀胱癌组织标本中的肿瘤标志物进行量子点荧光标记,观察标记效果,并在实验后1个月内连续观察荧光标记的稳定性,于实验后当天、10d和30d对荧光强度分4个等级进行评价。结果:在蓝光激发下,阳性标记位点发出橙红色荧光,与组织自发绿色荧光对比明显。持续观察30d,阳性标记位点荧光强度逐渐减弱,97.7%的阳性表达标本的荧光强度在10d内保持稳定,标记30d后荧光强度明显减弱,93%的阳性表达标本的荧光仍在可见范围,但对抗原位点的标识已比较模糊。结论:量子点独特的荧光效应能与传统检测方法有效结合,实现对组织标本敏感、长期的标记。作为一种新的检测手段,量子点荧光具有广阔的应用前景。     

CdSe量子点标记大鼠肌源性干细胞

目的:探讨量子点标记大鼠肌源性干细胞的可行性。方法:采用胶原酶、dispase和胰酶消化分离新生SD大鼠腓肠肌,差速贴壁法获取PP6细胞,倒置显微镜下观察细胞的形态并应用免疫组化法对其鉴定;应用ZnS包被的CdSe量子点对固定后细胞进行标记,荧光显微镜下观察。结果:通过差速贴壁法获取的PP6细胞经过免疫方法鉴定,证实为肌源性干细胞;量子点标记后的细胞在荧光显微镜下呈现橘红色荧光。结论:量子点标记肌源性干细胞具有可行性,为今后活体示踪研究打下了基础。     

Toll样受体2对口腔癌Tca8113细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨Toll样受体2(TLR2)在人舌鳞癌细胞Tca8113的表达情况及其对肿瘤细胞增殖和凋亡的影响。方法通过流式细胞术检测人舌癌Tca8113细胞中TLR2的表达情况;实验细胞分为实验组(加入TLR2阻断剂)及对照组(加入IgG抗体),实验组及对照组细胞培养24 h及48 h后,应用MTT及Western blot方法检测其增殖及凋亡情况,采用SPSS13.0统计软件对数据进行方差分析及t检验。结果流式细胞检测Tca8113细胞可见TLR2的表达;实验组经TLR2阻断24 h、48 h后其增殖较之对照组明显增加(P<0.05),但24 h与48 h比较,其增殖的变化不明显(P>0.05);同时经Western blot检测抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显增加(P<0.05)。结论人舌鳞癌细胞Tca8113细胞表达TLR2受体并对肿瘤细胞呈现明显的抑制作用。     

耐药肺癌细胞caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA的异常表达

目的探讨肺癌细胞耐药性与凋亡蛋白caspase8、bcl-2、细胞色素C及bcl-2 mRNA异常表达的关系。方法培养肺癌A 549耐药株(A 549R)和敏感株(A 549S),采用逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)对两株细胞bcl-2 mRNA进行扩增并作琼脂糖电泳,设-βactin为内对照比较其表达水平;W estern B lot法检测caspase8、bcl-2、细胞色素C蛋白表达并比较两株细胞中上述蛋白质表达水平。结果A 549S凋亡启动蛋白caspase8及细胞色素C的表达高于A 549R(P<0.05),而bcl-2蛋白表达低于后者(P<0.05);bcl-2 mRNA表达相对丰度分别为:A 549S 8.74±1.81,A 549R 10.29±2.92,差异无统计学意义(P>0.05)。结论bcl-2的过度表达可能使caspase8和细胞色素C蛋白表达降低从而造成细胞耐药,但bcl-2的这种过度表达可能是在转录或其后的过程而非基因水平发生。