川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型细胞凋亡的影响

川芎嗪是中药川芎的提取物,化学名为四甲基吡嗪,对脑、心、肝、肺、肾等多脏器组织疾病具有抗水肿、抑制细胞凋亡、改善器官功能的作用[1,2].我们以川芎嗪针剂来治疗大鼠急性脊髓损伤(SCI)模型来观察其能否抑制大鼠SCI后神经细胞凋亡,探讨其对SCI后脊髓继发性损害的影响.     

体外循环下心内直视手术对病人认知功能的影响

目的 观察体外循环下心内直视手术对病人认知功能近期损害的情况并对相关因素进行分析。方法 在术前与术后的10～15 d用韦氏智力量表、Benton视觉保持测验对30例病人评估,病种包括法乐氏三联征及四联征矫治术各2例,房间隔缺损修补术4例,双腔右心室矫治术3例,风湿性心脏病二尖瓣置换术11例,主动脉瓣二尖瓣联合置换术8例。并对体外循环中所测数值与手术前后智商差值进行相关性分析。结果 (1)言语智商术后较术前明显下降(术前101±16,术后94±16,P<0.01),总智商亦明显下降(术前.104±16),术后100±15,P<0.01),操作智商未见下降。(2)术后领悟及总智商的差异与体外循环时的动脉流量呈正相关性(P<0.05)。(3)术后言语智商的下降与最低pH值呈正相关性(P<0.05),与.PaCO2值呈负相关性(P<0.05)。(4)Benton视觉保持测验提示手术对病人视觉记忆保持能力及视觉空间结构能力有较明显的损害。结论 亚低温对脑功能有一定保护作用,但术后近期仍有认知功能损害。体外循环下心内直视手术对大脑具广泛影响。体外循环时,动脉流量过大、氧流量过高及CO2的过度降低加重对大脑认知功能的损害。     

气动隔膜泵搏动体外循环动物模型的建立

目的 探讨用气动隔膜泵施行搏动体外循环的可行性,并观察该装置对犬肝肾功能的影响.方法 利用气动驱动装置、气动隔膜泵、膜肺及体外循环管道建立搏动体外循环回路,连续运转3d后检测搏动体外循环装置的稳定性及测定相关参数;并将20条成年健康杂种犬随机分为实验组(n=10)和对照组(n=l0),实验组施行气动隔膜泵搏动体外循环,对照组施行滚压泵平流体外循环,连续转机6h,比较两组犬肝、肾功能及细胞结构变化.结果 气动隔膜泵搏动体外循环装置性能稳定,聚氨酯隔膜能耐受高强度连续工作,影响搏动灌注效果的因素包括驱动的正负压力、搏动频率及占空比.两组犬转机后6h,尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)较转机前明显升高(P＜0.01),实验组BUN(t=1.622,P＜0.01)、Cr(t=1.599,P ＜0.01)、AST(t=1.970,P＜0.05)、ALT(t=1.363,P＜ 0.05)升高水平明显低于对照组(P＜0.05).结论 气动隔膜泵的设计符合体外循环原理;气动隔膜泵搏动体外循环方式是可行的,在较长时间的体外循环过程中,其对重要脏器功能的保护作用优于平流体外循环.     

体外循环术中持续吸入一氧化氮对人体多核粒细胞计数和呼吸爆发功能的影响

多核粒细胞(PMN)是人体重要的免疫杀伤细胞,参与人体特异性和非特异性炎症反应,体外循环术中的PMN激活可累及多脏器功能,是引起术后并发症、增加术后死亡率的重要因素之一。有效地调节PMN的功能对减少机体损伤有重要意义[1,2]。本研究拟在了解体外循环心脏手术中持续应用一氧化氮(NO)对病人全血PMN计数和呼吸爆发功能的影响。     

区域性血流阻断动脉内介入化疗对腹腔脏器功能影响的实验研究

目的：观察区域性血流阻断动脉内介入化疗(stop-flowchemotherapy，SFC)对腹腔脏器功能的影响。对象与方法：对16头幼猪行腹腔区域性血流阻断动脉内介入化疗(SFC，MMC 0．2mg/kg)。术中、术后监测肝肾功能指标及超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)及谷胱甘肽过氧化物酶(GHS—Px)等缺血再灌注指标。结果：SFC可引起动物肝功能轻度损害，但均可在2周内恢复；对肾功能无不良影响，也不会造成明显的组织脏器缺血再灌注损伤。结论：区域性血流阻断动脉内介入化疗对腹腔脏器功能无严重损害，提示其在临床应用是安全可靠的。     

体外循环和用鱼精蛋白对补体(C_3,C_4)和C_-反应蛋白的影响

快速或过度激活补体系统往往引起组织损害、血管通透性增强以及粒细胞集聚从而有可能引起多脏器衰竭。体外循环(CPB)激活补体系统,并因此而引起灌注后综合征(post-perfusion syndrome)。文献曾有报道鱼精蛋白,尤其是肝素-鱼精蛋白复合物可激活补体系统,但尚有不同看法。Siegel等证明鱼精蛋白与C反应蛋白(CRP)相互作用并通过传统途径激活补体。     

糖皮质激素对大鼠肠屏障功能的损害

目的探讨器官移植术后早期应用大剂量糖皮质激素对肠屏障功能的影响。方法将56只Wistar大鼠随机分为免疫抑制组和阴性对照组。免疫抑制组大鼠每日腹腔注射甲泼尼龙100mg/kg,1次/d,阴性对照组每日腹腔注射生理盐水1ml。用药后,每组在全麻下按4个时间点(0、3、5、7d)无菌操作获取血液、肠系膜淋巴结、肠内容及回肠组织,分别用于检测血浆D乳酸、血浆二胺氧化酶(DAO)、肠道菌群微生态、肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡指数及某些脏器细菌培养等。结果免疫抑制组与阴性对照组比较,从用药后第3d开始,各时间点血浆D乳酸以及DAO均显著升高(P<0.01或P<0.05),肠道菌群却无明显改变(P>0.05),肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡指数显著升高(P<0.01);第7d时脏器细菌培养阳性率较阴性对照组明显升高(P<0.05)。结论甲泼尼龙能够造成大鼠肠屏障功能的损害,使肠屏障通透性升高。     

肝肠联合缺血再灌注对其它重要器官功能的致伤作用

肝肠联合移植已应用于临床。在活体原位肝、肠的热缺血再灌注损伤研究中发现,这些变化可引起动物其它重要脏器的损伤。在肝肠联合移植中,整块的移植物在再灌注早期比单一脏器移植可能对受体有更大影响。本部分实验利用大鼠门颈转流技术建立肝肠缺血再灌注模型,观察在肝肠缺血再灌注早期其它重要脏器的功能变化,并比较肝、肠分别在其中的作用。雄性Wistar大鼠75只,随机分为肠缺血组(A),肝缺血组(B)及肝肠缺血组(C)三组,每组25只,观察缺血再灌注前后肾功能(BUN)、心功能(CK-MB)、胰功能(AMY)及肺功能(PCO_2,PO_2,渗透指数)的变化与再灌注后6小时各脏器自由基的产生。结果表明,肝肠联合组引起最严重的脏器功能损伤与最大的自由基损伤(与A,B两组比P<0.01)。肠组引起的肺、心、胰功能损伤与自由基损伤大于肝组(P<0.05)。提示:肝肠缺血再灌注比单一器官缺血再灌注后能对其它重要脏器产生更严重损害。自由基产生可能是引起其它脏器功能损伤的重要机制。一定缺血时间后,肠缺血可能导致比肝缺血更严重的再灌注后重要器官功能损伤。     

重型急性胰腺炎大鼠胰外器官损伤与大承气汤和活血清胰汤的保护作用

目的:建立并观察重型急性胰腺炎(SAP)引发器官损害的动物模型以及中药对SAP所致胰外脏器损害的保护作用.方法:采用5%牛磺胆酸钠胰胆管逆行注射建立大鼠SAP模型,观察大承气汤、活血清胰汤和善得定分别对SAP大鼠肺毛细血管通透性;血浆、腹水、肺及肾组织中血小板活化因子(PAF)含量和多形核白细胞(PMN)-弹性蛋白酶的相对活性以及腹内脏器微循环和肺、肾等组织病理损害的影响.结果:比较各项观察指标,SAP模型组显著高于对照组(P＜0.01),各治疗组高于对照组但显著低于SAP模型组(P＜0.05);组织病理学证实SAP伴有胰外脏器损伤,经治疗可得到改善.结论:SAP可以造成肺微血管内皮损伤,同时各脏器微循环组织灌流量均减少,并可通过血小板活化因子的释放介导胰外脏器的损害,而大承气汤、活血清胰汤和善得定对SAP时胰腺和胰外脏器损害具有保护作用.     

干扰素调节因子-1下调胰岛细胞中细胞因子诱生性蛋白-10的表达

干扰素(INF) γ与白介素(IL) 1 β和肿瘤坏死因子(TNF) α一起协同激活一氧化氮合酶(iNOS)同源物的基因表达,诱发细胞凋亡,损害胰岛的葡萄糖刺激性胰岛素释放(GSIR) ,该作用是胰腺炎模型、I型糖尿病和胰岛同种移植排斥中胰岛功能不良的重要机制。设想转录因子干扰素调节因子(IRF) 1在细胞因子诱发性胰岛损害和对趋化因子的细胞因子诱发性基因表达中均起重要的调节作用。实验论证:( 1 )IRF 1基因丢失可保护胰岛免受细胞因子诱发性功能不良和细胞凋亡的损害,且增加与宿主炎性细胞相宜的炎性趋化因子表达;( 2 )比较细胞因子治疗对…     

Identification of unique gene expression patterns within different lesional sites of keloids

Keloid disease is a significant clinical problem, especially in black populations, with an estimated incidence of 4–16%. Keloids are fibroproliferative dermal tumors developing as a result of deregulated wound healing. The dynamic nature of keloids is illustrated by clinical regression in the center, while the margin remains active growing into the surrounding healthy skin. Therefore, the gene expression profiles of fibroblasts from different sites of the keloids were characterized using Affymetrix microarrays covering the whole human genome. This study revealed 105 genes that were differentially regulated (79 genes were up‐regulated and 26 down‐regulated) in a unique gene expression profile in different sites of keloids where progression or regression of the process was in progress. The apoptosis inhibitor AVEN was found to be up‐regulated at the active margin of keloids, while apoptosis‐inducing genes such as ADAM12 and genes inducing extracellular matrix (ECM) degradation such as matrix metalloproteinase‐19 were up‐regulated in the regressing keloid center. We identified genes previously not described in the development of keloids. Activating proapoptotic genes or inhibiting ECM‐inducing genes as INHBA or monocyte chemoattractant protein‐1 might be possible target genes for new treatment strategies for keloid disease.     

Cyclins/CDKs在Fas介导细胞凋亡过程中的变化及其机制

目的 探讨Cyclins/CDKs在Fas介导的细胞凋亡过程中的作用机制.方法 以白血病细胞株(Molt-4和Jurkat细胞株)和健康人的外周血淋巴细胞为载体,用人重组Fas配体诱导稳定而又典型的细胞周期特异性凋亡模型;用Cyclin/DNA双参数流式细胞术检测Cyclins的表达;用Western blot法检测CDK1和CDK2的磷酸化位点以及进一步确认Cyclins的表达.结果 研究rhFasL诱导Jurkat、Molt-4细胞和进入细胞周期的PBL凋亡时,G1期的Cyclin D3在发生凋亡效应前明显升高、发生凋亡效应后明显下降,而Cyclin E则先明显下降后升高,Cyclin A和B1无明显变化;CDK2 Thr-160位点的磷酸化水平在发生凋亡效应前后均明显下降,CDK1 Thr-161、Tyr-15位点的磷酸化水平在发生凋亡效应后稍有下降;G0期淋巴细胞则不能被诱导出明显的细胞凋亡.结论 Fas介导的细胞凋亡的发生与细胞是否通过限制点进入细胞周期有关,细胞凋亡发生于晚G1期时G1期Cyclin E的表达下降以至不能磷酸化或者磷酸化CDK2不全,在检测点的监督下DNA受损的细胞不能通过G1/S交界进入S期而发生细胞凋亡.在凋亡发生后期Cyclins/CDK的变化与细胞被阻滞在G1期有关.     

AIF与凋亡的关系及其相关的结直肠癌治疗研究

许多促凋亡信号转导分子作用于线粒体,引发线粒体外膜通透性的改变,从而引发潜在的促凋亡蛋白的释放.其中较为重要的一个为凋亡诱导因子(AIF).当收到致命信号后,由线粒体释放,并迅速从细胞质移位到细胞核里结合DNA并引起不依赖天冬半胱氨酸蛋白激酶(Caspase)的染色质凝集,从而导致细胞凋亡.AIF已逐步被发现在一些恶性癌细胞(如结直肠癌细胞)中具有重要作用,特别是它在细胞凋亡中的调控作用.最近一些研究成果表明,通过影响AIF释放或表达来诱导细胞凋亡已成为结直肠癌治疗的新的研究方向.     

AIF与凋亡的关系及其相关的结直肠癌治疗研究

许多促凋亡信号转导分子作用于线粒体,引发线粒体外膜通透性的改变,从而引发潜在的促凋亡蛋白的释放.其中较为重要的一个为凋亡诱导因子(AIF).当收到致命信号后,由线粒体释放,并迅速从细胞质移位到细胞核里结合DNA并引起不依赖天冬半胱氨酸蛋白激酶(Caspase)的染色质凝集,从而导致细胞凋亡.AIF已逐步被发现在一些恶性癌细胞(如结直肠癌细胞)中具有重要作用,特别是它在细胞凋亡中的调控作用.最近一些研究成果表明,通过影响AIF释放或表达来诱导细胞凋亡已成为结直肠癌治疗的新的研究方向.     

Modification of gene products involved in resistance to apoptosis in metastatic colon cancer cells: roles of Fas, Apaf-1, NFkappaB, IAPs, Smac/DIABLO, and AIF

BACKGROUND: Colon cancer becomes resistant to apoptosis as it acquires metastatic potential. SW480 and SW620 colon cancer cells were established from the same patient at different stages of tumor progression. The stage III colorectal cancer cell line (SW620) is more resistant to apoptosis. In the present report, we investigated the apoptotic gene products that might account for colon cancer evasion of immune attack and chemoradioresistance-induced apoptosis. METHODS: SW480 and SW620 cells were used for this experiment. Type 1 apoptosis was induced by CH-11. Type 2 apoptosis was induced by cisplatin and ionizing radiation. Apoptosis was determined by caspase-3 activity and terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nick end labeling. Gene products Fas, TRAIL, c-FLIP, Bid, BAX, Bcl-2, Bcl-xL, Apaf-1, nuclear factor-kappa B, Smac/DIABLO, apoptosis inducing factor, and the inhibitors of apoptosis were investigated by immunocytochemistry and Western blot analyses. RESULTS: SW620 cell lines were more resistant to both Type 1 and Type 2 apoptosis induced by CH-11, cisplatin, and ionizing radiation, respectively. Examination of the extrinsic pathway demonstrated Fas receptor to be down-regulated in SW620. Apaf-1 was decreased in SW620 cells; while other members of the mitochondrial pathway including Bax, Bid, Bcl-xL, and Bcl-2 demonstrated minimal alterations of protein levels in both cell lines. Survivin and XIAP protein levels were increased in SW620 cells, which correlated with nuclear expression of nuclear factor-kappa B in SW620 cells but not SW480. Mitochondrial-released factors including Smac/DIABLO and apoptosis inducing factor were increased in SW480 cells. CONCLUSIONS: SW620 cells have acquired genetic defects both in the intrinsic and extrinsic pathways of apoptosis, which may explain in part the ability of colon cancer cells to escape the immune system and to become chemoradioresistant. These genes may be potential targets for chemoradiosensitization in advanced colorectal cancer.     

他克莫司对肝癌细胞增殖、凋亡及其对5-氟尿嘧啶敏感性的影响

目的探讨他克莫司(FK506)对肝癌细胞增殖、凋亡及其对5-氟尿嘧啶(5-Fu)敏感性的影响及其机制。方法体外培养人肝癌细胞株SMMC-7721,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测FK506对细胞增殖的影响;应用流式细胞术分析FK506、5-Fu及联合FK506和5-Fu对SMMC-7721细胞周期和凋亡的影响。结果FK506(10、100、1000μg/L)对肝癌SMMC-7721细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),但作用24h后各组凋亡率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);5-Fu(50、75、100、200mg/L)作用24h后,其诱导细胞凋亡率呈浓度依赖关系,分别为13.2%、15.3%、21.7%和35.9%,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.001);随着5-Fu用药浓度的增加,S期细胞比例和细胞增殖指数也增加;FK506预处理增强了5-Fu诱导SMMC-7721细胞凋亡的作用,24h细胞凋亡率分别为27.6%、32.0%和39.0%。结论FK506能够显著抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖,并能增强该细胞系对5-Fu的敏感性,这一作用可能与FK506和5-Fu协同诱导凋亡和G0/G1期停滞有关。     

曲安奈德、干扰素α-2b和维拉帕米治疗增殖瘢痕的作用机制比较

目的 比较曲安奈德、干扰素α-2b和维拉帕米局部注射对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕增殖、凋亡和TGF-β1表达的影响. 方法 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩各6例,局部注射曲安奈德(40 mg/ml)、干扰素α-2b(150万U/ml)和维拉帕米(2.5 mg/ml)后7 d,切取标本,采用免疫组织化学、末端脱氧核苷酸介导的生物素化的脱氧尿嘧啶DNA切口末端标记方法,检测细胞增殖核抗原和TGF-β1的表达及细胞发生的凋亡情况,并以未注射药物的瘢痕疙瘩和增生性瘢痕以及健康皮肤为对照. 结果 ①曲安奈德可抑制瘢痕疙瘩和增生性瘢痕细胞增殖和诱导细胞凋亡,同时抑制细胞TGF-β1表达从而抑制瘢痕的增殖增生;②干扰素α-2b可通过抑制瘢痕疙瘩、增生性瘢痕细胞的增殖和TGF-β1表达而抑制瘢痕的增殖增生,但其不能诱导细胞凋亡;③维拉帕米可通过抑制瘢痕疙瘩、增生性瘢痕细胞的增殖和诱导细胞凋亡而抑制瘢痕的增殖,同时抑制细胞TGF-β1表达,其诱导细胞凋亡的作用妹强于曲安奈德,但抑制TGF-β1表达作用弱于曲安奈德和干扰素α-2b. 结论 曲安奈德、干扰素α-2b和维拉帕米局部注射后,对瘢痕疙瘩和增生性瘢痕在临床上虽均有效,但作用机制不尽相同.     

FasL-transfected endothelial cells decrease the proliferative response of allogeneic PBL

Graft endothelium has a key role in organ transplantation because it regulates graft infiltration by allogeneic activated T cells. Overexpression of death molecules that could induce apoptosis of alloreactive T cells might be an alternative to the immunosuppressive treatment currently used in graft transplantation. Several studies have shown that immune-privileged sites express Fas ligand (FasL) and induce apoptosis of activated T-cells. We propose that endothelial cells engineered to express FasL could inhibit alloreactive T cell-proliferation by inducing apoptosis. An expression vector was constructed with human FasL cDNA and used to transfect an endothelial cell line (ECV304 cells). We demonstrated that FasL-transfected ECV304 cells were effective in inducing apoptosis of Jurkat T cell lymphoma as an agonist anti-Fas antibody. Using a mixed lymphocyte-endothelial cell culture model we observed that FasL-transfected ECV304 cells which conserved their two principal costimulatory pathways inhibited alloreactive T cell-proliferation by inducing activated T-cell apoptosis. These results suggest that endothelial cells could be interesting candidates to convey a death signal and induce hyporesponsiveness of alloreactive T cells during organ transplantation.     

二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的实验研究

目的 探讨二氢青蒿素联合吉西他宾治疗胰腺癌的作用及其机制.方法 培养胰腺癌细胞株BxPC-3和Panc-1,通过MTT法检测二氢青蒿素联合吉西他宾对胰腺癌细胞生长的抑制作用;通过Annexin V-FITC/PI染色流式细胞术和激光共聚焦显微镜检测细胞凋亡情况;通过EMSA检测NF-κB与DNA结合活性的改变;通过Western blot法检测细胞中NF-κB/P65和NF-κB下游增殖、凋亡相关蛋白的表达情况.裸鼠皮下注射BxPC-3细胞建立胰腺癌裸鼠移植瘤,监测给药后肿瘤体积的变化,TUNEL染色检测肿瘤细胞凋亡情况.结果 二氢青蒿素联合吉西他宾对BxPC-3和Panc-1两株细胞的增殖抑制率可达(81.1±3.9)%和(76.5±3.3)%;凋亡率可达(53.6±3.8)%和(48.3±4.3)%,与吉西他宾组[(24.8±2.9)%和(21.8±3.5)%]相比,差异有统计学意义(P<0.01).在裸鼠体内,各治疗组均可抑制胰腺癌裸鼠移植瘤的生长;联合组肿瘤的体积和增殖凋亡指数分别为(262±37)mm~3和(50±4)%,与吉西他宾组[(384±56)mm~3和(25±3)%]相比,差异有统计学意义(P<0.05).EMSA和Western blot结果显示,二氢青蒿素能抑制胰腺癌细胞NF-κB与DNA结合活性,联合组较吉西他宾组NF-κB活性有显著的降低;二氢青蒿素下调BxPC-3和Pane-1细胞核P65的表达,联合组较对照组显著下调NF-κB靶基因蛋白Cyclin D1、Bcl-xL、Bel-2的表达,上调Bax的表达,降低Bel-2/Bax的比例,进一步增加Caspase-3的活化.结论 二氢青蒿素抑制吉西他宾所诱导激活的NF-κB的活性,下调NF-κB下游靶基因蛋白的表达可能是其增敏吉西他宾抗胰腺癌作用的分子机制.     

姜黄素对前列腺癌细胞核转录因子抑制蛋白表达的影响

目的观察姜黄素对前列腺癌细胞核转录因子抑制蛋白(IkBα)表达的影响,探讨姜黄素抑制前列腺癌细胞增殖的作用机制。方法分别用10、25、50、75和100μmol/L 浓度的姜黄素对雄激素依赖性及雄激素非依赖性前列腺癌细胞株 LNCaP 和 PC3进行干预,5、12和24 h 后采用噻唑蓝(MTT)比色法观察细胞增殖情况;采用流式细胞术测定24 h 后细胞周期变化;5 h 后 Western 印迹法检测细胞中 IkBα的表达。结果姜黄素显著抑制 LNCaP 及 PC3细胞的生长,呈剂量和时间依赖性;姜黄素将两种前列腺癌细胞阻滞于 G_2、M 期[LNCaP 与 PC3细胞,空白对照分别为(11.4±1.3)%与(17.3±1.7)%,100μmol/L 姜黄素作用后分别为(27.3±2.8)%与(33.4±4.0)%],从而诱导肿瘤细胞凋亡;姜黄素作用于 LNCaP 细胞后,细胞中 IkBα表达无变化(F=0.129,P>0.05);但作用于 PC3细胞后,细胞中 IkBα的表达明显增强,呈现出显著的剂量依赖性(F=31.618,P<0.05)。结论姜黄素通过活化 IkBα在 PC3细胞中的表达发挥抑制 PC3细胞增殖的作用。对于 LNCaP 细胞,姜黄素可能通过抗氧化、抑制细胞内代谢产物形成等方式抑制 LNCaP 细胞增殖。