艾灸血清对体外RA滑膜成纤维细胞增殖的影响

目的 探究艾灸血清对类风湿性关节炎(RA)大鼠滑膜成纤维细胞体外增殖的影响,观察艾灸对实验性RA大鼠的治疗效果。方法 将30只SD大鼠随机分为3组,即模型组、直接灸组、隔姜灸组,每组10只,将每组大鼠造RA模型。造模成功后,模型组不予以任何治疗,直接灸组、隔姜灸法分别给予直接灸法、隔姜灸法刺激RA模型大鼠的“肾俞”、“足三里”。疗程结束后,取腹主动脉血并离心取血清,用含有各组血清培养基培养RA模型滑膜成纤维细胞24 h、36 h、48 h,用CCK8试剂盒检测各组血清培养的滑膜成纤维细胞增殖情况。结果 艾灸血清培养的滑膜成纤维细胞的增殖较模型组血清培养的滑膜成纤维细胞受到抑制,其中36 h隔姜灸组抑制程度最显著。结论 艾灸治疗能显著改善大鼠RA症状,抑制RA滑膜成纤维细胞的增殖,这可能是艾灸发挥抗炎作用的有效机制之一。     

银杏内酯B对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞增殖的影响

①目的探讨银杏内酯B对胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis,CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（Fibroblast-like synovi-al cells,FLS）的影响。②方法雄性Wistar大鼠皮内注射Ⅱ型胶原,建立CIA大鼠模型,然后取其滑膜组织用胶原酶消化法进行原代培养,取3~5代的滑膜细胞。应用MTT比色法检测1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6、1×10-5mol/L的银杏内酯B作用24、48和72h后FLS的增殖水平。③结果（1×10-9~1×10-5）mol/L的银杏内酯B作用24、48和72h,均能明显抑制FLS的增殖（P〈0.05）,且具有时间、剂量依赖性。④结论银杏内酯B能明显抑制CIA大鼠FLS的增殖并呈时间、剂量依赖性改变。     

白藜芦醇对胶原诱导性关节炎大鼠成纤维样滑膜细胞增殖的影响

目的 研究白藜芦醇（Res）对胶原诱导性关节炎（CIA）大鼠成纤维样滑膜细胞（FLS）增殖的影响并探讨其可能的作用机制。方法 应用四甲基噻唑氮蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM）检测FLS的增殖水平和细胞周期分布。结果 50～400μmol/L的Res作用24、48h和25～400μmol/L的Res作用72h,均能明显抑制FLS的增殖（P＜0.05）,且具有时间剂量依赖性。细胞周期分析显示与对照组比较,Res处理组的FLS的S期细胞所占百分比例明显增加（P＜0.01）;G2/M期细胞所占百分比例明显减少（P＜0.01）,并呈剂量依赖性。结论 Res对CIA大鼠成纤维样滑膜细胞具有生长抑制作用,其抗增殖效应呈现一定的剂量、时间依赖方式。该作用可能与Res能够使FLS的细胞周期阻滞于S期有关。     

人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞培养及生物学特性研究

目的 探讨人类风湿性关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)的分离及生物学特性.方法 分别取4例RA患者膝关节滑膜组织、1例软骨瘤患者膝关节滑膜组织和1名健康人膝关节滑膜组织,采用组织块培养法培养FLS,使用相差显微镜观察细胞形态,流式细胞术(FCM)检测培养细胞的表面标志,酶联免疫吸附法定量检测RA第4代FLS细胞培养液上清液白细胞介素-1受体I型(IL-1RI)和白细胞介素1β(IL-1β)水平.结果 组织块培养法成功培养出FLS.RA患者FLS细胞4~7 d细胞数量明显增加,8~12 d细胞可以长满瓶底.第3代以后细胞均质性最好,3~7代细胞稳定且增殖活跃,8代以后增长缓慢并逐渐老化.软骨瘤患者和健康人滑膜组织培养7 d后才有散在单个FLS细胞爬出,大约16 d后FLS细胞可以长满瓶底.FCM分析RA第4代FLS CD90+细胞的百分率为99.04%,CD3+为2.73%,CD3-CD19+为0.29%,CD3-CD16+CD56+为2.81%,CD14+为5.89%,CD55+为54.17%.RA第4代FLS细胞培养上清液IL-1RI浓度为(158.63±20.32) pg /ml,IL-1β为(4.67±0.82) pg/ml. 结论 组织块培养法能有效分离RA患者FLS,FLS具有高水平表达CD90、IL-1RI和IL-1β的特性.     

类风湿关节炎患者滑膜培养上清液IgGRF分析

类风湿关节炎患者滑膜培养上清液ＩｇＧ　ＲＦ分析于孟学，张春芳，史立，单秀霞（中国医学科学院，中国协和医科大学，协和医院，北京１００７３０）类风湿关节炎（ＲＡ）的免疫紊乱涉及到体液因子和细胞因子两个方面，而二者又密切关联，相辅相成。作者在研究细胞因子的...     

甘草养阴汤对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究甘草养阴汤对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)增殖和凋亡的影响.方法:用生理盐水(normal saline,NS)和甘草养阴汤(gancao yangyin decoction,GC)对正常SD大鼠...     

胸腺上皮细胞上清液促进85细胞增殖的研究

目的 比较不同培养条件下原代人胸腺上皮细胞生长情况,观察上清液对Ｔ细胞株８５细胞增殖及存活的效应。方法 原代胸腺上皮细胞培养、８５细胞增殖测定、台盼兰试验及ＦＡＣＳ分析。结果 含血清的培养基与含生长因子的培养基均能培养出原代胸腺上皮细胞,ＴＥＳ上清单独能促使８５细胞增殖且能提高８５细胞的存活率。结论 研究发现含血清的培养基与含生长因子的培养基培养效果无明显差异,仅剪切也能培养纯净的胸腺上皮细胞。Ｔ     

Hela培养上清液对hUVEC细胞增殖的影响

目的研究子宫颈癌细胞（Hela）的培养上清液对人脐静脉内皮细胞（hUVEC）增殖的影响。方法以Hela细胞培养上清液和DMEM培养基的等比例混合液培养的hUVEC细胞为实验组,以纯DMEM培养基培养的hUVEC细胞为对照组。MTT法检测细胞增殖情况的变化;流式细胞术检测细胞周期的改变;PCR法检测CDK和CyclinD调控基因的表达情况。结果hUVEC经Hela细胞培养上清液作用96 h后,细胞数明显增加,S期细胞的比例明显上升,CDK和CyclinD调控基因表达明显上调。结论Hela细胞培养上清液能明显促进人脐静脉内皮细胞的增殖,其机制之一可能是通过上调CDK和CyclinD调控基因来诱导更多的细胞进入S期,从而导致细胞的快速增殖。     

HL-60细胞培养上清液对人脐带血单个核细胞增殖的影响

目的白血病细胞能够通过自分泌方式分泌细胞因子而作用于自身,使细胞大量的增殖;白血病细胞所分泌的细胞因子也能作用于人脐带血（UCB）单个核细胞（MNCs）中的CD34＋/CD133＋细胞亚群使之增殖。关于HL-60细胞（急性早幼粒白血病细胞）培养上清液能否使UCB-MNCs增殖尚未见报道,本实验主要目的是观察HL-60细胞培养上清液对人UCB-MNCs增殖的影响。方法实验分为①有HL-60细胞培养上清液＋StemSpanSFEM组;②StemSpan誖SFEM组;③HL-60细胞培养上清液＋高糖（HG）-DMEM组;④HG-DMEM组;⑤HL-60细胞培养上清液＋低糖（LG）-DMEM组;⑥LG-DMEM组。收分离的人UCB-MNCs按2.5×106/瓶分别接种于6组培养液中,37℃,5%CO2,饱和湿度培养,分别于第3,第6,第9,第12天计细胞总数。结果①培养至第3天,HL-60细胞培养上清液＋StemSpanSFEM组和StemSpanSFEM组MNCs数较培养前和其余各组明显升高（均P〈0.05）,至第9天细胞数维持在较高水平;②HL-60细胞培养上清液＋StemSpanSFEM组和StemSpanSFEM组各时点上,前者MNCs数量较后者有所增加,但无统计学意义（P〉0.05）;③添加HL-60上清的高糖组和低糖组,各时点上的MNCs数均较相应的对照组升高（均P〈0.05）。结论 HL-60细胞培养上清液对人UCB-MNCs具有一定的增殖作用,其有效生物活性物质有待进一步研究。     

MicroRNA-126对类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞增殖、侵袭、凋亡的作用及其机制研究

目的 探究microRNA-126(miR-126)通过靶向Dickkopf-1(DKK1)参与类风湿性关节炎滑膜成纤维细胞（RASFs）增殖、侵袭、凋亡的机制研究。方法 选取2018年6月—2019年9月在武汉市第一医院就诊的25例类风湿性关节炎（RA）患者的滑膜组织（RA组）,同时收集在该院同期接受膝关节十字韧带断裂重建手术的21例非类风湿关节炎患者的滑膜组织作为健康组,检测其miR-126和DKK1蛋白。利用RA组织构建原代RASFs,通过双萤光素酶报告验证miR-126与DKK1的靶向关系。将RASFs分为对照组、miR-126组、DKK1组、miR-126+DKK1组。采用CCK-8、Transwell及流式细胞术检测过表达miR-126和/或DKK1对RASFs增殖、侵袭和凋亡的影响。结果 RA组滑膜组织miR-126相对表达量低于健康组（P <0.05）,而DKK1蛋白相对表达量高于健康组（P <0.05）。miR-126 mimic与DKK1 Wt共转染后的相对萤光素酶活性低于miR-126 NC质粒与DKK1 Wt共转染（P <0.05）,证明miR...     

人皮肤成纤维细胞原代培养方法的改良

目的：改良人皮肤成纤维细胞培养方法。方法：采用培齐后组织块消化法(简称改良法)培养成纤维细胞，以组织块贴瓶法(简称贴瓶法)作为对照。结果：改良法成功率为100％，43d左右成纤维细胞增殖形成单层并进行第1次传代；贴瓶法成功率为66．7％，47d左右成纤维细胞增殖形成单层并进行第1次传代结论：改良法是一种可行的成纤维细胞培养方法。     

大鼠肝细胞的分离及BRL细胞培养上清对原代肝细胞增殖的影响

目的 :研究大鼠肝细胞分离的方法及正常大鼠肝细胞来源的BRL细胞培养上清对原代大鼠肝细胞贴壁和增殖的影响。方法 :采用体外胶原酶 2步灌注法分离大鼠肝细胞 ,台盼兰染色法计算细胞数及细胞活率。以四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测不同浓度的BRL细胞培养上清及含体积分数 15 %胎牛血清的普通培养液对肝细胞贴壁和增殖的影响。结果 :平均每只大鼠可获 2× 10 8个肝细胞 ,平均活力 94 .3%。用普通培养液培养肝细胞 ,肝细胞贴壁率低 ;BRL细胞培养上清能明显促进肝细胞的贴壁和生长 ,且有量效关系 (P <0 .0 5 )。结论 :用本法分离的大鼠肝细胞有较高的获取率和活力 ,BRL细胞培养上清能促进正常大鼠肝细胞的贴壁及增殖     

仙人掌对体外培养成纤维细胞生长增殖的影响

目的：观察仙人掌对体外培养成纤维细胞增殖的影响及其量-效关系。方法：以小鼠成纤维细胞株（NIH3T3）为研究对象,采用四氮唑盐（MTT）比色法测定仙人掌对成纤维细胞增生的影响（以OD值反映细胞活性）,采用免疫细胞化学染色法检测成纤维细胞的增殖细胞核抗原（PCNA）的表达。结果：在一定浓度范围内（0.0625～0.5mg/mL）,仙人掌能明显促进体外培养的成纤维细胞生长增殖,同时促进PCNA蛋白的表达,并随着仙人掌浓度的增加,成纤维细胞数量和PCNA蛋白的表达均不断增加,在0.5mg/mL浓度时达到高峰,呈现明显的剂量-效应关系（r分别为0.761,0.783;P均＆lt;0.01）。结论：在一定浓度范围内,仙人掌具有促进体外培养成纤维细胞增殖的作用,并表现为明显的量-效关系。     

松花粉对人肺成纤维细胞增殖活性影响的实验研究

目的 :研究松花粉对人肺成纤维细胞增殖的影响 ,探讨中药松花粉可能的作用机理。方法 :松花粉作用于人肺成纤维细胞不同时间后观察细胞生长速度 ,应用台盼蓝对细胞进行染色 ,测定细胞死亡率。松花粉浓度分别为 10 0、2 0 0、40 0、80 0mg·L-1,以未经松花粉处理的细胞为对照。结果 :松花粉作用于人肺成纤维细胞能够明显促进细胞群体倍增水平 ,降低死亡细胞数目 ,且呈剂量依赖关系。结论 :松花粉可通过促进细胞生长而影响细胞增殖。     

黑色素细胞培养上清液对增生性瘢痕成纤维细胞的生物学效应

目的　观察正常的黑色素细胞 ( MC)对增生性瘢痕成纤维细胞 ( HSFib)的生物学效应 .方法　收集 MC的上清液按不同的浓度加入培养的 HSFib中 ,MTT法测定细胞的增殖率 ,3H- Td R参入法测定细胞 DNA合成率 .结果　加入MC上清液的 HSFib,培养 48h后 ,较正常对照组 ,实验组细胞增殖明显 ( P<0 .0 5 ) .DNA合成率各实验组 (除 MC1组外 )与对照组相差显著 ( P<0 .0 1) ,但高浓度组 ( 75 % )的合成率有下降趋势 .结论　 MC细胞可能分泌活性物质促进 HSFib细胞 DNA合成及殖增 ,可能与烧伤后瘢痕形成及色素形成有关     

活化的肝星状细胞对肝癌细胞增殖与侵袭的影响

目的 探讨活化的肝星状细胞（HSC）对肝癌细胞（CBRH7919）增殖与侵袭的影响及其可能机制.方法 采用Optiprep法分离HSC并进行鉴定、传代.建立肝星状细胞与肝癌细胞共培养体系.MTT法检测肝星状细胞对肝癌细胞增殖的影响.Transwell小室侵袭实验检测肝星状细胞对肝癌细胞侵袭能力的影响.Western blot法检测肝癌细胞基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和核因子-κB（NF-κB）蛋白的表达.结果 成功分离、培养并鉴定为肝星状细胞.肝星状细胞能明显促进肝癌细胞增殖与侵袭（增殖：0.571 ±0.024 vs 0.803 ±0.048,1.271 ±0.044,1.973±0.036;侵袭：25.2±1.9 vs35.8±3.3,44.4±2.7,53.9±3.6）,差异有统计学意义（P＜0.05）.肝星状细胞明显提高肝癌细胞MMP-2（1.32±0.22 vs 2.46±0.39）和NF-κB（0.85 ±0.09 vs 1.44 ±0.21）的表达.结论 肝星状细胞能显著促进肝癌细胞的增殖和侵袭,可能与肝星状细胞促进肝癌细胞MMP-2及NF-κB表达增强有关.     

The role of calcineurin in the lung fibroblasts proliferation and collagen synthesis induced by basic fibroblast growth factor

Objective To investigate the role of calcineurin (CaN) in the lung fibroblast proliferation and collagen synthesis induced by basic fibroblast growth factor (bFGF).Methods We used Western blot and immunohistochemical methods for investigating the content and distribution of calcineurin in the lung tissue. Calcineurin activity in different tissues was measured using 32P-labelled substrate. In the primary culture of lung fibroblasts, 3H-thymidine (3H-TdR) and 3H-proline incorporation methods were used to study the effect of cyclosporin A (CsA), an inhibitor of calcineurin, on the lung fibroblast DMA and collagen synthesis stimulated by bFGF.Results We found that calcineurin was expressed in lung tissue and has phosphatase activity (7.1±2.0 pmol Pi/mg pr/min). CsA (10~(-8)-10~(-6) mol/L) inhibited lung fibroblast 3H-TdR incorporation induced by bFGF in a dose-dependent manner, with the inhibitory rates by 20% , 46% and 66% (P< 0.01). CsA (10~(-7) -10~(-6) mol/L) inhibited 3H-proline incorporation in lung     

富血小板血浆对人牙龈成纤维细胞增殖和迁移的影响

目的:体外研究不同浓度的机采富血小板血浆(PRP)对人牙龈成纤维细胞(HGFs)的增殖和迁移的影响?方法:不同浓度PRP(1%?5%?10%?20%?30%?50%),加入到原代培养的人牙龈成纤维细胞,无血清培养液为阴性对照,10%新生小牛血清为阳性对照,培养时间为3?5?7天,四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定细胞增殖效果,Transwell系统测定细胞迁移效果?结果:PRP有明显促进增殖作用,不同浓度PRP与阴性对照组均有明显差异(P < 0.01),且随着时间递增,增殖效果也明显增强(P < 0.01)?在细胞迁移效果中,各浓度组均比阴性对照组效果好?结论:PRP对HGFs功能有明显促进效果,在一定浓度范围有浓度依赖性?     

大鼠Tenon''''s囊成纤维细胞体外培养及生长特性的研究

目的 探讨建立体外大鼠Tenon’s囊成纤维细胞的培养方法，并对体外培养的Tenon’s囊成纤维细胞的生长特性进行观察。方法 选用健康年幼的SD大鼠40只，采用断颈法将其处死，摘除眼球，无菌条件下，分离剪下Tenon’s囊组织，采用植块法对Tenon’s囊成纤维细胞进行体外培养；通过细胞形态学观察和细胞免疫组化染色技术对其细胞性质进行鉴定；通过细胞记数和MTT法对其生长特性进行研究。结果 原代培养的大鼠Tenon’s囊组织块接种后，约48h即可见细胞由组织块中爬出，培养8～10d，细胞汇合程度大约可达70％左右；培养14～16d，细胞完全汇合；在细胞汇合程度达到70％-80％时，可以进行细胞传代，传代细胞接种后4—5h大部分细胞贴壁，10-12d左右传代细胞完全汇合。光镜下观察，可见Tenon’s囊成纤维细胞，在汇合程度低时细胞呈细长梭形外观，汇合程度高时细胞可呈多边形改变。免疫组化染色可见Tenon’s囊成纤维细胞角蛋白染色阴性，波蛋白染色阳性。细胞生长曲线显示，在2—8d细胞处于对数生长期。结论 体外成功地培养了大鼠Tenon’S囊成纤维细胞，这不仅为青光眼滤过泡瘢痕化防治的基础研究提供了一种新的细胞来源，同时为抗结膜瘢痕化药物的研究和开发提供了一种新的简便实用的细胞来源途径。     

Effect of tongbiling on the synoviocyte function in adjuvant arthritis rats

Objective: To study the effect of Tongbiling (TBL) on the proliferation of synovial fibroblast and interleukin-1 (IL-1), tumor necrosis factor-α (TNF-α) and prostaglandin E₂(PGE₂) secreted by synoviocytes in adjuvant arthritis (AA) rats.Methods: Synovial fibroblast was derived from culture of tissue piece. The effect of primary synoviocyte culture supernatants on the fibroblast proliferation were assayed and IL-1, TNF-α bioactivity and PGE₂ content of supernatants of cultured synoviocytes were measured.Results: TBL could significantly inhibit the synovial fibroblast proliferation (P < 0.001), and down-regulate IL-1, TNF-α and PGE₂ productions (P < 0. 001); indomethacin could obviously promote the synovial fibroblast proliferation (P < 0.001). It significantly inhibited PGE₂ production, but further up-regulated IL-1 and TNF-α secreted by synoviocytes (P<0.01).Conclusion: The therapeutical effect of TBL on AA might be associated with its down-regulating the secretory function of synoviocyte, then restoring the abnormal proliferation of fibroblast to normal levels. This program was supported by the Nature Science Foundation of Guangdong Province (No. 960550)