大鼠肝抑素纯化及其对再生肝细胞和肝癌细胞增殖的影响

制备大鼠肝抑素（ＨＣ）纯品，研究它对再生肝细胞和肝癌细胞体外增殖的影响。用ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｌｏｓｅ阴离子交换层析法提取ＨＣ纯品，用液法检测ＨＣ样品的生物活性。结果：提取的ＨＣ纯品的ＳＤＳ电泳纯度达８９．５％， Ｍｒ １３．５ × １０３；该 ＨＣ纯品对大鼠再生肝细胞和人肝癌细胞体外增殖有明显抑制作用，抑制率分别为６３．１％（０．２ ｍｇ／Ｌ）和７７．７％（０．３ ｍｇ／Ｌ），但对人胃癌细胞增殖无抑制效应。结论：结果提示提取的ＨＣ是抑制再生肝细胞和肝癌细胞增殖的特异性因子。     

肝细胞再生因子的纯化及治疗小鼠中毒性肝炎的研究

目的探讨提纯人胆肝细胞再生因子（ＨＨＧＦ）方法及对小鼠中毒性肝炎的治疗作用。方法人胚肝细胞裂解物加热后分别经稳膜；超滤，再经ＤＥＡＥ离子交换层析和ＦＲＬＣｍｏｎｏＱ阴离子交换色谱，最后经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析．用３Ｈ－ＴｄＲ渗入法在人胚肝细胞和ＳＭＭＣ－７７２１人肝癌细胞株中检测ＨＨＧＦ活性．尾静脉注射ＨＨＧＦ治疗小鼠ＣＣｌ４，中毒性肝炎。结果纯化的ＨＨＧＦ较纯化前相对活性提高２万倍．ＨＨＧＦ可使小鼠ＣＣｌ４中毒性肝炎升高的ＡＬＴ和ＳＢＩＬ在９６ｈ时接近正常，死亡率从对照组６０％降至为０。并有促进肝细胞ＤＮＡ合成作用．组织学检查ＨＨＧＦ有促进肝细胞再生和治疗肝损伤作用．结论ＨＨＧＦ对促进肝细胞再生、减轻肝功能损伤有明显作用     

还原型谷胱甘肽对DEN诱发大鼠肝癌的预防作用

目的：研究还原型谷胱甘肽（ＧＳＨ）对化学致癌原Ｎ－二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）诱致雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠肝癌的保护作用。方法：雄性 ＳＤ大鼠 ７５只分成 ７组，每天 ＤＥＮ ８ｍｇ／ｋｇ ｉ．ｇ 诱发大鼠肝癌模型，分别不同途径预防性给予ＧＳＨ。结果：对照组１６ｗ后大鼠的肝脏癌变率为７６．５％，伴有镜检典型的弥漫性癌结节、畸型核分裂和重度肝硬化及胆管炎，于 １２ｗ及 １６ｗ ＡＫＰ及 γ－ＧＴ明显增高；同剂量 ＤＥＮ １６ｗ伴以 ＧＳＨ １５０ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇ、 １０００ｍｇ／ｋ（ｉｐ）及 １０００ｍｇ／ｋｇ（ ｉｇ） １６ｗ，明显降低癌变率，分别降为１１．１％、１６．７％、１６．７％及１８．２％；ＧＳＨ大剂量组大鼠未癌变，肝组织仅见少量纤维增生，ＡＫＴ及γ－ＧＴ值与正常大鼠无显著差异；ＤＥＮ诱癌１２ｗ后用ＧＳＨ治疗４ｗ对大鼠肝脏癌变率无明显防治效果。结论：早期用外源性 ＧＳＨ对 ＤＥＮ诱发大鼠肝癌有预防作用，ＤＥＮ诱发肝癌形成后用ＣＳＨ无效。     

GnRH及其受体表达与肝癌细胞增殖和分化的关系

目的：探讨促性腺激素释放激素及其受体表达与肝癌病理学分级和肝癌细胞增殖的关系。方法：用常规组织学ＨＥ染色确定肝癌的病理学分级；用免疫组织化学ＳＡＢＣ技术检测４９例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ），ＧｎＲＨ及其受体的表达。     

肝炎等三种肝病中癌基因c－myc、c－erbB－2和胰岛素样生成因子Ⅱ及表皮生长因子受体的表达

对慢性肝炎、亚急性重症肝炎、肝硬变及肝细胞肝癌共３７９例标本，进行了癌基因ｃ－ｍｙｃ、ｃ－ｅｒｂＢ－２和胰岛素样生成因子Ⅱ（ＩＧＦⅡ）及表皮生成因子（ＥＧＴ）受体的测定。结果，ＥＧＦ受体主要定位于良、恶性肝组织中的血窦内皮细胞，可能不参与肝癌发生；ｃ－ｍｙｃ表达选择性不强，也见于２１％结构正常肝中，可能与成熟肝细胞的增殖有关；ｃ－ｅｒｂＢ－２阳性率最高，广泛分布于肝小多角细胞（ＳＰＬＣ）、小细胞性不典型增生（ＳＣＤ）及小管状化生（ＤＭ）之肝细胞及癌细胞，提示ｃ－ｅｒｂＢ－２不仅参与肝癌发生，可能还与肝细胞ＤＭ有关；ＩＧＦⅡ表达仅见于慢性肝脏病变，在细胞类型上有严格的选择性，集中于癌细胞、ＳＰＬＣ和ＳＣＤ肝细胞，提示ＩＧＦⅡ基因的活化及高表达与ＳＰＬＣ明显增生及ＳＣＤ有关，是肝癌发生过程中的关键环节。还观察到ＳＰＬＣ和ＳＣＤ肝细胞中ＩＧＦⅡ和ｃ－ｅｒｂＢ－２的表达与乙型肝炎病毒Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）密切相关，提示ＨＢＶＸ基因表达可能与这两种肝癌相关基因活化有关。     

大鼠肝抑素提取物对肝再生过程的影响

制备大鼠肝抑素，研究它对肝再生过程的影响。应用酒精沉析和超速离心法从正常大鼠肝提取肝抑素提取物（ＨＣ），将其注入肝大部切除大鼠体内。每１２ｈ一次至９６ｈ。每１２ｈ取残余肝测重量和体积，计肝细胞分裂指数（ＭＩ），用体视法测肝细胞数，用流式细胞术测分离肝细胞含不同ＤＮＡ倍体的细胞数。结果：①再生肝重量和体积增长缓慢，至９６ｈ为对照组的７１％；②肝细胞ＭＩ明显降低，ＭＩ高峰延后并为对照组的３３％；③再生肝肝细胞数增长缓慢，至９６ｈ为对照组的６９，８％；④４倍体肝细胞ＤＮＡ合成受阻，Ｓ期和８倍肝细胞数增长现象（见于对照组）消失。结论：ＨＣ提取物具有延缓肝再生的生物活性，它主要阻滞４ｎ肝细胞合成ＤＮＡ，抑制再生肝肝细胞的增殖与分裂。     

香烟烟雾提取物对气道平滑肌细胞增殖及内皮素释放的影响

探讨气道平滑肌细胞（ＡＳＭＣ）自分泌的内皮素（ＥＴ）是否介导了吸烟对ＡＳＭＣ的作用。方法在体外培养的家兔ＡＳＭＣ上加入香烟烟雾提取物（ＣＩＳＥ）测定细胞存活率，乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）水平，并用Ｈ－ＴｄＲ掺入法及放射免疫方法观察ＣＳＥ对ＡＳＭＣ的增殖作用，及对ＥＴ－１释放的影响。用３Ｈ－ＴｄＲ掺入实验，观察低浓度（５％）ＣＳＥ对ＡＳＭＣ增殖的影响及与ＥＴ的关系。结果１０％和３０％ＣＳＥ对ＡＳＭＣ呈现明显毒性作用，表现为细胞存活率降低，脂质过氧化终产物丙二醛（ＭＤＡ）含量增加和细胞ＬＤＨ漏出随时间进行性增加。５％ＣＳＥ呈时间依赖地刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１并促进ＡＳＭＣ（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入（较对照组增加５９．９％，Ｐ＜０．０１）。内皮素Ａ受体（ＥＴＡ受体）拮抗剂ＪＫＣ－３０１呈浓度依赖地抑制５％ＣＳＥ促ＡＳＭＣ增殖作用。结论吸烟可以刺激ＡＳＭＣ释放ＥＴ－１且通过ＥＴＡ受体介导ＡＳＭＣ增殖     

二乙基亚硝胺诱发新生大鼠肝癌的实验模型

用肝化学致癌物二乙基亚硝胺（ＤＥＮ）按照Ｐｅｒａｉｎｏ诱癌模式建立ＤＥＮ大鼠肝癌模型，并对ＤＥＮ作用时间与次数加以改进，多阶段观察大鼠肝脏癌前期病变、冲瘤发生率及６种酶组织化学染色。结果表明本实验诱癌过程短，敏感性高，方法简单；碱性磷酸酶（ＡＫＰ）、琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及羧酸酯酶作为肝癌酶标记具有潜在的应用价值。提示以新生大鼠肝细胞活跃增生为基础的Ｐｅｒａｉｎｏ诱发肝癌模式，改进ＤＥＮ的处理方式     

肝癌、胎肝及正常肝组织中性糖脂纯化和分析

取肝癌、胎肝及正常肝组织，经氯仿：甲醇提取总脂，通过ＤＥＡＥ─ＳｅｐｈａｄｅｘＡ２５层析，碱水解和ｆｌｏｒｉｓｉｌ层析获得纯化的中性糖脂。经高效薄层色谱层析和薄层扫描分析，与标准中性糖脂比较，正常肝ＣＤＨ与ＣＭＨ表达减弱；肝癌ＣＤＨ和ＣＭＨ表达增加，胎肝ＣＤＨ也增加。肝癌中性糖脂的表达存在异质性。经乳酸脱氢酶法证实，肝癌中性糖脂对正常人外周血ＮＫ细胞的活性有明显的抑制作用。本文结果提示肝癌组织中性糖脂存在异常合成。     

新生牛肝细胞生长因子的活性研究──Ⅰ．新生牛肝细胞生长因子对原代细胞DNA合成的作用

以原代培养的人胎肝细胞、大鼠肝细胞等为靶细胞，研究了不同纯化阶段的新生牛肝细胞生长因子（ｃＨＧＦ）对靶细胞ＤＮＡ合成活性的影响。结果表明，ｃＨＧＦ对体外培养的人胎肝细胞、大鼠肝细胞的ＤＮＡ合成有明显的促进作用，对大鼠肾细胞、人肝癌细胞株ＳＭＭＣ－７７２１的ＤＮＡ合成亦有一定的促进作用，对Ｓ_（１８０）小鼠腹水癌细胞的ＤＮＡ合成无促进作用。纯品ｃＨＧＦ对人胎肝细胞的最小作用剂量为５ｎｇ／ｍｌ。提示ＨＧＦ是一种较强的肝细胞有丝分裂原。     

牛肝细胞再生刺激因子的制备及其生物学特性

从新生牛肝脏提取肝细胞再生刺激因子（ｃＨＳＳ），并对其理化及生物学特性进行研究。ｃＨＳＳ对原代大鼠肝细胞具有刺激活性，使ＤＮＡ合成明显增加，其活性经９５℃加热１５分钟无明显下降，但对蛋白酶敏感。动物试验结果表明，ｃＨＳＳ能显著降低Ｄ－ＧＡＬ致肝损伤大鼠血清ＡＬＴ水平，对损伤肝细胞具有保护及修复作用，能明显提高ＣＣＬ４致急性肝功能衰竭小鼠的生存率。     

原发性肝癌与乙型、丙型肝炎病毒感染关系的探讨

采用酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）法对７７例原发性肝癌患者进行抗－ＨＣＶ及ＨＢＶ标志检测，抗－ＨＣＶ阳性率为３９％，ＨＢＶＭ阳性率为８３．１％，其中，单独ＨＢＶ和ＨＣＶ感染分别为５０．６％和６．５％；ＨＢＶ和ＨＣＶ混合感染为３２．５％；１３例ＨＢＶＭ阴性的肝癌患者抗－ＨＣＶ阳性５例（３８．５％）。结果提示ＨＢＶ感染仍是肝癌的主要病因，ＨＣＶ感染亦较高，ＨＢＶ和ＨＣＶ混合感染较为常见，在与ＨＢＶ感染无关的肝癌患者中，ＨＣＶ感染率较高，应引起人们的重视。     

丹参素对原代培养大鼠肝细胞硫代乙酰胺损伤的影响

目的：观察丹参素对大鼠肝细胞硫代乙酰胺（ＴＡＡ）损伤的影响。方法：以体外原代培养大鼠肝细胞为模型，通过检测培养上清液中ＬＤＨ逸出量和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）显色法了解肝细胞的存活及增殖情况，同时检测细胞内、外ＳＯＤ含量。结果：丹参素在一定范围内呈剂量依赖性地刺激肝细胞增殖，而且能阻止ＴＡＡ引起的体外培养大鼠肝细胞ＬＤＨ逸出的增加、增生指数的下降以及细胞内、外ＳＯＤ活性的降低。丹参素对ＴＡＡ引起的肝细胞损伤的保护作用高于市场销售的乳猪促肝细胞生长素（ＰＨＧＦ）。结论：丹参素具有抗ＴＡＡ肝损伤和刺激损伤后肝细胞再生的作用     

肝细胞癌患者血清与癌组织中抗HCV及HCVRNA的检测

８８例经病理确诊的肝细胞癌患者，用ＥＬＩＳＡ法检测其血清抗－ＨＣＶ与ＨＢＶ－Ｍ，阳性率分别为１４．７７％和９０．９１％。用ＰＣＲ法检测发现血清ＨＣＶＲＮＡ阳性１２例（１３．６４％）；１１例血清ＨＢＶＤＮＡ阳性病人的肝癌组织中８例ＨＢＶＤＮＡ阳性；１例肝癌组织中同时检出ＨＣＶＲＮＡ与ＨＢＶＤＮＡ。结果表明，本组肝癌的发生主要与ＨＢＶ感染有关。而与ＨＣＶ感染也可能有一定关系。     

HBx-DNA探针的研制及在肝癌发生机制研究中的应用

将非放射性标记物地高辛甙元用随机引物法由ｐＢＲ３２２－２ＨＢＶ／ＥｃｏＲⅠ酶切片段（３．２ｋｂ）制备ＨＢＶ－ＤＮＡ探针及由ＨＢＶ／ＢａｍＨⅠ、ＢｇｌⅡ酶切片段（０．５９ｋｂ）制备ＨＢｘ－ＤＮＡ探针。将Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针用斑点杂交、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转膜杂交检测筛选肝细胞性肝癌ＨＢＶ－ＤＮＡ整合型标本，进而用Ｄｉｇ－ＨＢｘＤＮＡ探针检测ＨＢＶ－ＤＮＡ纯整合型肝细胞性肝癌中ＨＢｘ的存在情况。结果显示，７５％（３３／４４）的肝癌ＤＮＡ中有ＨＢＶ－ＤＮＡ存在，其中，以纯整合型方式存在的为６３．６％（２１／３３），混合型为３６．４％（１２／３３），无游离型。纯整合型ＨＢＶ－ＤＮＡ片段中，ＨＢｘ－ＤＮＡ阳性率为９０．５％（１９／２１）。提示ＨＢＶ在肝细胞性肝癌的发生中起着重要的作用，ＨＢＶ－ＤＮＡ可能以片段性整合的方式存在于肝癌细胞染色体上，其中以ＨＢｘ基因的整合为主。     

人肝细胞癌及其癌前病变的DNA、AgNORs定量分析

用图象分析法对２０７例人正常肝、慢性肝炎、肝硬化、肝细胞不典型增生（ＬＣＤ）和肝细胞肝癌（ＨＣＣ）中的细胞ＤＮＡ指数（ＤＩ）、增殖指数（ＰＩ）、核面积（ＮＡ）、二倍体细胞比率（２ＣＲ）和超五倍体细胞百分比（５ＣＥＲ）等项参数进行定量测定；同时进行核仁组织区（ＡｇＮＯＲｓ）计数及其与ＤＮＡ含量相关关系研究。结果显示：人肝癌的发生符合肿瘤发生多阶段理论。癌前病变ＬＣＤ其各项指标均显著增加，其中异倍体ＬＣＤ各项指标与ＨＣＣ＋分接近。因而提出异倍体ＬＣＤ作为病变进入演进期的标志，为肝癌发生的终未阶段，也是癌变的关键。     

大鼠肝窦状隙细胞内吞高密度脂蛋白-2的逆向胞饮作用

研究肝细胞选择性摄取高密度脂蛋白（ＨＤＬ２）胆固醇酯的机制。大鼠肝窦状腺细胞与异硫氰酸荧光标记无ＡｐｏＥ－ＨＤＬ２ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２培养后，测定细胞结合、内吞与释放荧光强度。结果：细胞与ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２３７℃培养３ｈ，细胞结合与内吞的荧光强度分别为８．８９±０．８７和５．３５±０．６９。细胞进一步３７℃培养２ｈ，细胞释放的三氯醋酸（ＴＣＡ）沉淀和ＴＣＡ可溶性荧光强度分别为２．９６± ０．５３和０．２８± ０．１５。乙酰咪唑修饰ＨＤＬ２，阻断其与细胞受体相互作用后的细胞结合与内吞分别为１．１５±０．３８和０．７７±０．１７，细胞释放的ＴＣＡ沉淀和ＴＣＡ可溶性荧光强度分别为０．４３±０．１６和０．０５±０．０４。结论：①细胞内吞ＨＤＬ２中８５．５％通过受体途径，１４．５％通过非特异性途径；②进入细胞内ＨＤＬ２颗粒中载脂蛋白（Ａｐｏ）没有经过溶酶体途径分解。而通过逆向胞饮途径释放出胞外。     

维生素E,普罗布考对溶血卵磷脂引起的脑微血管细胞损伤和增殖的…

目的：研究维生素Ｅ（ＶＥ）、普罗布考（ＰＲＢ）对溶血卵磷脂（ＬＰＣ）引起的脑微血管内皮细胞（ＢＣＭＥＣ）损伤的保护作用和脑微血管平滑肌细胞（ＢＣＭＳＭＣ）增殖的抑制作用。方法：以乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）释放及结晶紫染色法分别测定ＢＣＭＥＣ损伤和ＢＣＭＳＭＣ的增殖。结果：ＶＥ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３６．８±１．０）％～（１６．２±２．９）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（３７．６±７．０）％～（６１．３±０．６）％。ＰＲＢ５～５０μｍｏｌ／Ｌ时显著抑制ＬＰＣ５０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＥＣ释放ＬＤＨ，释放率下降至（３４．２±３．３）％～（１９．１±２．４）％；显著抑制ＬＰＣ１０ｎｍｏｌ／Ｌ引起的ＢＣＭＳＭＣ增殖，抑制率为（４０．９±２．４）％～（４７．０±３．７）％。结论：ＶＥ和ＰＲＢ对ＬＰＣ引起的ＢＣＭＥＣ损伤有保护作用，对ＢＣＭＳＭＣ增殖有抑制作用。     

大鼠肝窦状隙细胞内吞高密度脂蛋白—2的逆向胞饮作用

研究肝细胞选择性提高密度脂蛋白胆固醇醇的机制。大鼠肝窦状隙细胞与异硫氰酸荧光标记无ＡｐｏＥ－ＨＤＬ２ ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２培养后，测定细胞结构，内吞与释放荧光强度。结果：细胞与ＦＩＴＣ－ＨＤＬ２３７℃培养３ｈ，细胞结合与 吞的荧光强度分别为８．８９±０．８７和５．３５±０．６９。细胞进一步３７℃培养２ｈ，细胞释放的三氯醋酸沉淀和ＴＣＡ可溶性荧光强度分别为２．９６±０．５３和０．２８±０．１５。     

丹参素对原代培养大鼠肝细胞硫代乙酰胺损伤的影响

目的：观察丹参素对大鼠肝细胞硫代乙酰胺（ＴＡＡ）损伤的影响。方法：以体外原代培养大鼠肝细胞为模型，通过检测培养上清液中ＬＤＨ逸出量和四甲基偶氮唑盐（ＭＴＴ）显色法了解肝细胞的存活及增殖情况，同时检测细胞内、外ＳＯＤ含量。结果：丹参麦在一定范围内呈剂量依赖性地刺激肝细胞增殖，而且能阻止ＴＡＡ引起的体外培养大鼠肝细胞ＬＤＨ逸了的增加、增生指数的下降以及细胞内、外ＳＯＤ活性的降低。丹参素对ＴＡＡ肝损伤和