胰岛素样生长因子结合蛋白－3基因在乳腺癌中的表达

我们应用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法、组织原位分子杂交、细胞生长曲线和ＤＮＡ合成等技术，检测９例人类乳腺癌细胞株和２０例乳腺癌标本中胰岛素样生长因子结合蛋白－３（ＩＧＦＢＰ－３）基因的蛋白质和ｍＲＮＡ水平的表达，研究其生物学作用。结果：①在乳腺癌细胞株中，雌激素受体阴性（ＥＲ－）者，分泌大量的ＩＧＦＢＰ－３，而雌激素受体阳性（ＥＲ＋）者不分泌ＩＧＦＢＰ－３；②在乳腺癌病人标本中，ＥＲ（－）者ＩＧＦＢＰ－３ｍＲＮＡ的定量表达明显高于ＥＲ（＋）者（Ｐ＜０．００５）；③ＩＧＦＢＰ－３能明显增强乳腺癌ＭＣＦ－７细胞株胰岛素样生长因子－Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）所致的细胞生长和ＤＮＡ合成作用。结论：我们认为ＩＧＦＢＰ－３基因蛋白质和ｍＲＮＡ的表达水平有可能成为乳腺癌患者的预后指标。     

胰岛素样生长因子结合蛋白—3基因在乳腺癌中的表达

我们应用ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ法，组织原发子杂交，细胞生长曲线和ＤＮＡ的合成等技术，检测９例人类乳腺癌细胞株和２０例乳腺癌标本中胰岛素样生长因子结合蛋白－３（ＩＧＦＢＰ－３）基因的重蛋白质和ｍＲＮＡ水平的表达，研究其生物学作用，结果：（１）在乳腺癌细胞株中，雌激素受体阴性（ＥＲ－）者，分泌大量的ＩＧＦＢＰ－２而雌激素受体阳性（ＥＲ＾＋）者不分泌ＩＧＦＢＰ－３；（２）在乳腺癌病人标本中，ＥＲ（－）者     

尿激酶受体反义RNA表达质粒的构建

构建能在哺乳动物细胞中表达尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ的表达质粒ｐＵＲＡＳ。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增并克隆尿激酶受体（ｕＰＡＲ）ｃＤＮＡ５’端－４６～４５４ｂｐ一段长５００ｂｐ的顺序，利用ＤＮＡ重组技术将该片段反向插入表达载体ｐｃＤＮＡ３的ＣＭＶ启动子下游。结果限制性内切酶分析和ＤＮＡ顺序分析证实ＲＴ－ＰＣＲ获得的ｕＰＡＲｃＤＮＡ片段与文献报道相吻合；重组质粒ｐＵＲＡＳ转染肺癌细胞株９５Ｄ，ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ证实转染细胞克隆有ｕＰＡＲ反义ＲＮＡ的表达。结论重组质粒ｐＵＲＡＳ能在肺癌细胞株９５Ｄ中表达尿激酶受体反义ＲＮＡ，尿激酶受体（ｕＰＡＲ）反义ＲＮＡ表达质粒的构建获得成功。     

肾综合征出血热患者尿融合细胞内病毒G区基因及其蛋白表达

目的：研究肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）患者尿融合细胞内汉坦病毒（ＨＶ）Ｇ区靶基因（膜蛋白基因）ＲＮＡ、ｍＲＮＡ的定位和ＨＶ膜蛋白在尿融合细胞中的表达定位。方法：设计针对病毒Ｍ片段Ｇ基因区的探针，地高辛素标记，运用核酸原位杂交技术检测靶基因ＲＮＡ　和ｍＲＮＡ在尿融合细胞中的定位。同时用ＳＡＢＣ免疫组化法检测病毒膜蛋白在尿融合细胞中的表达定位。结果：病毒靶ＲＮＡ和ｍＲＮＡ检出于细胞核和细胞浆。２１例中，１４例阳性，阳性率６６．６％（１４／２１），其中核型９例，核浆混合型５例。病毒膜蛋白检测，２１例中１６例阳性，阳性率７６．２％（１６／２１），病毒膜蛋白表达见于细胞膜。两者阳性率相比较差异无显著性（Ｐ＞０．０５）。结论：　ＨＦＲＳ病毒膜蛋白的表达与病毒编码该蛋白的Ｇ基因区ＲＮＡ、ｍＲＮＡ均可在患者尿融合细胞内检出。     

表皮生长因子受体反义RNA表达对乳腺癌细胞恶性表型的抑制作用

表皮生长因子受体（ＥＧＦＲ）是具有酪氨酸蛋白激酶活性的跨膜糖蛋白［１］。为了直接观察ＥＧＦＲ过表达在人类肿瘤中的作用，我们应用反义核酸技术，针对ＥＧＦＲ５′１３５０ｂｐ片段构建了反义ＲＮＡ表达质粒ｐＬＸＳＮＡＥ５′，将其导入人乳腺癌细胞ＭＤＡＭＢ...     

RT-PCR法测定脂肪组织解偶联蛋白mRNA表达水平的探讨

目的：建立解偶联蛋白（ＵＣＰ）ｍＲＮＡ表达水平的竞争ＲＴ－ＰＣＲ测定法;并应用该方法测定ＵＣＰ ｍＲＮＡ在成人腹膜内与腹膜外脂肪组织的表达水平。方法：应用剪接重叠延伸ＰＣＲ（ＳＯＥ－ＰＣＲ）合成中央缺失型ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ。ＵＣＰ ｍＲＮＡ与作为内设标准的ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ用相同的引物在同一反应体系中进行逆转录反应和ＰＣＲ扩增。通过比较ＵＣＰ ｍＲＮＡ产物和ＵＣＰ竞争者ＲＮＡ产物的放射性信号强度求     

受体相关蛋白在大鼠各组织中的分布

用ＳＤ大鼠肾皮质总ＲＮＡ克隆的ＲＡＰ－ｃＤＮＡ，经原核融合蛋白表达系统获得纯化的受体相关蛋白（ＲＡＰ）由此制备特异的免疫抗血清，分别提取大鼠各组织蛋白，经蛋白质聚丙酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）分离后，转移至硝酸纤维素膜，用抗ＲＡＰ抗血清进行蛋白质印迹分析（ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔＡｎａｌｙｓｉｓ）结果显示，ＲＡＰ在大鼠肝，胰，肾皮质，肾上腺，大网膜，大脑，小脑，骨骼肌等组织内匀在不同程度的表达，     

维甲酸受体α在乳腺癌细胞中的表达

研究维甲酸受体α（RARα）基因在乳腺癌细胞中的表达情况。用NorthernBlot、WesternBlot和免疫组化等方法。结果：RARα受体蛋白表达与其mRNA表达相一致，RARαmRNA表达在ER阳性乳腺癌细胞中比ER阴性的乳腺癌细胞高，RARα受体蛋白表达也是如此，RARαmRNA及RARα受体蛋白表达都与ER状况相关。结论：3种检测方法都具可信性，实际工作中可以因地制宜选用合适的检测手段为临床服务。     

ＲＮＡｉ沉默ＰＥＬＰＩ／ＭＮＡＲ基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用

【目的】 构建脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１（ＰＥＬＰ１）基因慢病毒表达载体,研究沉默ＰＥＬＰ１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ）基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】 构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,并转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入Ｅ２的培养基培养各组细胞,ＭＴＴ检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期情况;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＥＲ下游靶基因ｃ－ｆｏｓ,ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的蛋白表达水平。【结果】 成功构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,转染后 ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ的表达和蛋白的表达分别下降８６％和６５％（Ｐ ＜ ０．０５）。转染后Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞与对照组相比增殖抑制（Ｐ ＜ ０．０５）, 细胞周期Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少 （Ｐ ＜ ０．０５）。加入雌激素后,三组细胞的生长速度加快,细胞Ｓ期的比例增加,转染组增殖抑制明显（Ｐ ＜ ０．０５）,Ｓ期比例降低（Ｐ ＜ ０．０５）。转染组ＥＲ下游基因ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１蛋白水平均显著降低（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 在子宫内膜癌细胞中沉默ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在Ｇ１期,下调ＥＲ靶基因蛋白表达,ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

缺血再灌注对心肌细胞Ca~(2+)-ATP酶蛋白及其基因表达的影响

目的 研究鼠缺血再灌注（Ｉ／Ｒ）心肌细胞肌浆网钙ＡＴＰ酶（ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ,ＳＥＲＣＡ２ａ）的蛋白及其基因表达的变化,探讨基固调控在。肌保护中的作用。方法 将ＳＤ大鼠分为正常对照组与Ｉ／Ｒ组,利用离体心工作模型进行灌注,采用Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法检测心肌细胞ＳＥＲＣＡ２ａ蛋白的含量,利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ－Ｂｌｏｔ方法测定ＳＥＲＣＡ２ａ ｍＲＮＡ相对含量。结果Ｉ／Ｒ心肌细胞的ＳＥＲＣＡ２ａ蛋白含量（０．５３８±０．００６ｖｓ１．０２０±０．０１５）及其ｍＲＮＡ相对量（０６２±０．００８ｖｓ０．９５±０．００９）均明显下降,分别下降３４．７％与４７．３％,其变化状态与其心肌功能变化一致。结抡 缺血再灌注过程严重影响了心肌细胞 ＳＲ·Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ蛋白及其基因的表达,ＳＥＲＣＡ２ａ基因表达显著下降可能是心肌Ｉ／Ｒ损伤的重要机制;若采取有效措施进行基固调控,增强ＳＥＲＣＡ２ａ基因的表达,可能起到保护Ｉ／Ｒ心肌细胞、增强心肌功能的作用。     

内皮素A受体在oxLDL促血管平滑肌细胞增殖中的作用

目的：研究氧化低密度脂蛋白（ｏｘＬＤＬ）对培养血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）增殖中皮素受体Ａ亚型（ＥＴＲＡ）ｍＲＮＡ表达水平的影响。方法：Ｃｕ＾２＋氧化法制备ｏｘＬＤＬ,观察ｏｘＬＤＬ对大鼠主动脉ＶＳＭＣ增殖和ＥＴＲＡｍＲＮＡ表达的影响。将ＶＳＭＣ用非肽类ＥＴＲＡ拮抗剂ＢＭＳ－１８２８７４预处理生,加入１０μｇ／ｍｌ ｏｘＬＤＬ温育２４ｈ。采用非核素ＭＴＳ吸光度法测定细胞增殖,ＲＮＡ印迹法检测ＥＴＲｍ     

乙型肝炎病毒X抗原转导细胞差示表达全长基因C2的克隆及初步？…

目的 克隆乙型肝炎病毒Ｘ抗原（ＨＢｘＡｇ）相关肝癌差示表达基因并做功能研究。方法 （１）用逆转录病表达ＨＢｘＡｇ细胞模型。（２）用抑制差减杂文做基因差示表达分析。（３）做ＲＮＡ印迹分析（Ｎｏｒｔｈｅｒｎｍ Ｂｌｏｔ）及原位分子杂交筛选基因探针。（４）用５＇和３＇迅速未扩增法（ＲＡＣＥ ＰＣＲ进行全长基因序列扩增，并进行体外蛋白翻译及制备抗体，做蛋白质印迹（Ｗｅｓｔｅｒｎ Ｂｌｏｔ）分析。（５）进行     

反转录聚合酶链反应检测自身免疫疾病和正常人外周血淋巴细胞C-myc癌基因的表达

目的：探讨癌基因Ｃ－ｍｙｃ在自身免疫病患者和正常人外周血淋巴细胞上的表达情况。方法：分离正常人及系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血淋巴细胞，采用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ，利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，比较正常人及自身免疫病患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达程度。结果：ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达较正常人和ＲＡ患者高，ＲＡ和正常人之间没有差异。ＨＬ－６０细胞系Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达最强，ＧＢＣ胃癌细胞株较正常人为高。结论：提示Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ在肿瘤细胞株及ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞上有较高的表达，认为自身免疫病原癌基因的表达在其发病机理中具有重要的作用。     

人胚胎甲状腺褪黑素受体mRNA的检测

目的：检测胚胎甲状腺中是否表达褪黑素受体。方法：取人胚胎甲状腺,抽提总ＲＮＡ并用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测其ｍＲＮＡ,阳性产物用自动测序仪测序。结果：人胚胎甲状腺总ＲＮＡ以ＭＴ１及ＭＴ２两种引物进行的ＲＴ－ＰＣＲ产物电泳呈现阳性条带,测序结果显示扩增产物与人类褪黑素受体ｃＤＮＡ相吻合。结论：人胚胎甲状腺组织中存在有褪黑素ＭＴ１,ＭＴ２两种受体的ｍＲＮＡ,表明该组织中有褪黑素ＭＴ１,ＭＴ２受体的表达。     

反义RNA对培养的红系细胞βIVS—2—654C→T基因剪接缺陷的纠正

目的观察反义ＲＮＡＡ２对培养的红系细胞中βＩＶＳ－２－６５４Ｃ→Ｔ（β６５４）突变基因剪接异常的纠正作用。方法将构建的反义核酸真核表达载体通过脂质体介导转染培养的成人红系细胞（ｈＡＥ），应用逆转录－聚合酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）定量测定β珠蛋白ｍＲＮＡ及微量珠蛋白生物合成技术分析转染前后ｈＡＥ细胞内珠蛋白基因表达的变化。结果β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞内，正常剪接的βｍＲＮＡ占总βｍＲＮＡ的比例从转染前的０．０２４上升到第８天的０．３８０；β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．３９６上升到０．８８３；与此相应，新合成的β珠蛋白链也出现升高：β６５４／β４１－４２基因型ｈＡＥ细胞β／α比值从０．０５２升至０．３５９，β６５４／βＡ基因型ｈＡＥ细胞从０．６２４升至０．８２０；正常人ｈＡＥ细胞珠蛋白基因表达不受反义ＲＮＡ的影响。结论反义ＲＮＡＡ２能有效地纠正ｈＡＥ细胞内β６５４ｍＲＮＡ前体异常剪接，进而明显地升高β珠蛋白链的合成，为β６５４地中海贫血的反义ＲＮＡ治疗提供了科学依据。     

自由基促进猪内皮细胞c—sis mRNA／PDGF—B链蛋白表达的实…

采用免疫组织化学和原位杂交方法，研究自由基对猪主动脉内皮细胞的ｃ ｓｉｓ ｍＲＮＡ及血小板源生长因子Ｂ链蛋白表达的影响。结果显示，ＦＲ促进ｃ－ｓｉｓ ｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达。ＥＣ暴露于ＦＲ２０ｍｉｎ，ｃ－ｓｉｓ ｍＲＮＡ和ＰＤＧＦ－Ｂ链蛋白的表达较对照组分别增加１．０和２．２倍。     

人肺癌组织Na^＋／H^＋交换蛋白—1mRNA的表达

目的 通过对人肺癌组织Ｎａ＾＋／Ｈ＾＋交换蛋白－１（ＮＨＥ－１）ｍＲＮＡ表达的检测探讨肿瘤治疗新的特异靶点。方法 采用ＲＮＡ原位分子杂交法（ＲＮＡ－ＩＭＨ）检测了１６例人肺癌组织ＮＨＥ－１ｍＲＮＡ的表达。结果 人肺癌组织ＮＨＥ－１ｍＲＮＡ的表达与正常肺组织相比显著增强，呈现过表达，而各病理类型间无显著差异。结论 人肺癌组织ＮＨＥ－１ｍＲＮＡ的过表达，这一有别于正常肺组织细胞朱分子生物学特征可能为肿     

外源性ANF基因在人血管平滑肌肉瘤细胞中的表达

对体外传代培养的人血管起源平滑肌肉瘤细胞进行直接和脂质体Ｔｆｘ－５０包裹的人心钠素（ＡＮＦ）基因表达质粒ｐｃＤＡＮ３／ＡＮＦ转染，并以非同位素地高辛标记的ＲＮＡ分子探针，对转染细胞中的ＡＮＦｍＲＮＡ水平进行ＲＮＡＤｏｔＢｌｏｔ分子杂交检测；同时，利用...     

人维甲酸受体RAR α基因在大肠杆菌中的表达

采用Ｔ７ＲＮＡ启动子将ＲＡＲαｃＤＮＡ定向亚克隆至ＰＴ７－７质粒，构建了重组维甲酸受体ＲＡＲα表达质粒ＰＴ７－ＲＡＲα并在大肠杆菌中得到稳定表达。方法（１）载体构建：将ＰＴ７－７，ＲＡＲα分别用ＥｃｏＲⅠ酶切后，电泳回收１．９ｋｂＲＡＲα并与ＰＴ７－...     

乳腺上皮不典型增生和乳腺癌激素受体的及其意义

目的：探讨在乳不典型增生癌变过程中激素受体表达的变化及其意义。方法；用ＡＢＣ免疫组化法检测正常乳腺，乳腺囊性增生病不典型增生和乳腺癌细胞雌激素受体（ＥＲ）表达。结果：正常乳腺上皮细胞和乳腺囊性增生病上皮增生Ｉ级者上皮细胞要色结果相似。不典型增生Ⅱ级ＥＲ表达明显增强，１０例均为阳性。１０例不典型增生Ⅲ级中４例强阳性、３例弱阳性、３例完全为阴性。４例乳腺癌中２６例（６０％），ＥＲ阳性。结论：ＥＲ作为乳