膀胱移行细胞癌患者RASSF1A蛋白表达和启动子区甲基化的研究

目的:探讨RASSFlA(RAS association domain family1A)蛋白表达水平与启动子甲基化的关系.方法:应用免疫印迹技术(western-blot)检测10例正常膀胱组织和23例膀胱移行细胞癌(Badder transitional cell carcinoma,BTCC)组织中RASSFlA蛋白表达水平;用甲基化特异性PCR(Methylation-Specific PCR,MSP)方法检测正常膀胱组织,BTCC组织中RASSF1A基因启动子CPG岛甲基化状态.结果:RASSF1A蛋白在正常膀胱组织中全部表达,在BTCC组织中表达率为30.4%(7/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05),但各肿瘤分期、病理分级间的表达差异无统计学意义(P＞0.05).在正常膀胱组织中,RASSF1A基因启动子未发生甲基化;在BTCC组织中,RASSF1A基因启动子甲基化频率为60.9%(14/23),二组间表达差异有统计学意义(P＜0.05).在14份启动子异常甲基化的BTCC标本中,13份同时伴有RASSFIA蛋白表达缺失或下调,两者存在明显相关性(P＜0.05).结论:RASSFlA基因启动子在BTCC组织中发生异常甲基化,使RASSF1A蛋白表达缺失,推测RASSFIA基因启动子CPG岛异常甲基化导致RASSF1A基因失活从而引起肿瘤的发生,而与肿瘤的进展可能无关.     

膀胱移行细胞癌中FHIT基因启动子甲基化及其蛋白的表达

目的：探讨膀胱移行细胞癌（BTCC）FHIT基因启动子甲基化状态及其与FHIT蛋白表达的关系。方法：采用甲基化特异性PCR（MSPCR）方法及免疫组织化学S-P法检测62例BTCC组织和10例正常膀胱组织中FHIT基因启动子甲基化状态及FHIT蛋白表达。结果：BTCC组织、正常膀胱组织FHIT基因启动子甲基化频率分别为19．4％（12／62）,0（0／10）。FHIT蛋白在正常膀胱组织、BTCC中阳性表达率分别为100．0％（10／10）和46．77％（29／62）,肿瘤不同分级中随恶性程度的增高,表达减少,Ⅰ级与Ⅲ级比较,差异有统计学意义（P〈0．05）,不同临床分期中随分期的增高,表达减少,Tis～T1与T2～T1比较,差异无统计学意义（P〉0．05）。FHIT基因的启动子甲基化和蛋白阳性表达有相关（P〈0．05）。结论：FHIT基因的启动子甲基化可能是基因失活重要机制之一,FHIT基因启动子甲基化及表达在BTCC的发生、发展中起重要作用。     

基质金属蛋白酶-9和脆性组氨酸三联体基因在人类膀胱移行细胞癌中的表达及其意义

目的 探讨基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和脆性组氨酸三联体基因(FHIT)在膀胱移行细胞癌组织中的表达、相互关系和临床意义.方法 采用免疫组织化学链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法观察50例膀胱移行细胞癌石蜡标本和10例正常膀胱组织中MMP-9和FHIT的表达.结果 50例膀胱癌组织中的FHIT和MMP-9的阳性表达率分别为58.0％和52.0％,与正常膀胱组织中的表达比较差异有统计学意义(P＜0.05和P ＜0.01).FHIT和MMP-9的表达与膀胱移行细胞癌的临床分期、病理分级和肿瘤的复发相关;肿瘤组织中的FHIT与MMP-9的表达呈负相关(r=-0.412,P＜0.01).结论 膀胱癌组织中FHIT和MMP-9的表达在肿瘤进展中发挥重要作用.     

抑癌基因在膀胱癌组织中的表达及其与Akt磷酸化的相关性

目的:探讨抑癌基因PTEN在膀胱移行细胞癌(简称膀胱癌)的表达及其与蛋白激酶B(PKB/AKT)磷酸化的相关性。方法:采用免疫组织化学S-P染色法,Western印迹杂交法检测46例膀胱癌组织中PTEN的表达,并与13例腺性膀胱炎、10例正常膀胱组织进行对照;同时分析膀胱癌组织中PTEN表达与AKT磷酸化水平的关系。结果:膀胱癌组织中PTEN蛋白的阳性表达(60.9%)明显低于腺性膀胱炎(95.4%)和正常膀胱组织(100%)(P<0.01);同时低分化、有肿瘤转移的膀胱癌的PTEN表达强度明显低于高分化、无转移的膀胱癌(P<0.05);膀胱癌组织中PTEN蛋白表达和Akt磷酸化水平呈明显负相关(P<0.01)。结论:由于PTEN蛋白表达下调或缺失,导致AKT磷酸化水平的明显增高,在膀胱癌的发生、发展中起着重要的作用。     

膀胱移行细胞癌错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3启动子甲基化状态的研究

目的 探讨错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3在膀胱移行细胞癌中启动子甲基化和蛋白表达的相关性.方法 采用甲基化特异聚合酶链反应(MSP)检测正常膀胱上皮组织(13例)及膀胱移行细胞癌组织(57例)hMLH1、hMSH2、hMSH3启动子甲基化状态,免疫组织化学检测其蛋白表达.结果 在正常膀胱上皮中,hMLH1、hMSH2、hMSH3均未发现启动子甲基化;在肿瘤组织中,hMSH2未发现启动子甲基化,hMLH1、hMSH3启动子甲基化阳性率分别为36.8%、49.1%,与正常组织比较差异均有统计学意义(P＜0.01),但在不同肿瘤分级(G1、G2、G3)间及不同临床分期(浅表性、浸润性)间比较差异无统计学意义(P＞0.05).免疫组织化学显示:hMLH1、hMSH2、hMSH3蛋白表达在正常膀胱上皮组织中,阳性表达率分别为100%、100%、92.3%,与肿瘤组织阳性表达率分别为59.6%、52.6%、40.4%,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01),但在不同临床分期(浅表性、浸润性)间比较差异无统计学意义(P＞0.05),且hMSH2、hMSH3蛋白阳性表达率随肿瘤分级的增加显著降低,G1与G3比较差异有统计学意义(P＜0.05).在肿瘤组织中,hMLH1和hMSH3启动子甲基化与蛋白表达具有极显著相关性(P＜0.01).结论 hMLH1、hMSH3蛋白表达受其启动子甲基化的调控,hMSH2蛋白表达不受其启动子甲基化的调控.错配修复基因hMLH1、hMSH2、hMSH3蛋白表达的缺失可能参与了膀胱移行细胞癌的发生.     

膀胱移行细胞癌患者血浆p14基因异常甲基化检测的意义

目的检测膀胱移行细胞癌患者血浆p14基因启动子异常甲基化状态,探讨血浆p14基因甲基化改变作为膀胱移行细胞癌分子生物学标志物的可能。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific PCR,MSP)技术,分别检测62例膀胱移行细胞癌患者血浆和相应肿瘤组织DNA的p14基因甲基化状态。结果血浆和肿瘤组织中,p14基因甲基化的阳性率分别为43.5%(27/62)和46.8%(29/62),血浆和肿瘤组织的总体符合率93.1%(27/29),血浆p14基因的甲基化状况与肿瘤组织中是否出现p14基因甲基化具有显著相关性(P<0.01)。血浆和肿瘤组织中,p14基因甲基化与膀胱移行细胞癌的病理分级和临床分期均呈正相关。结论p14基因的甲基化状态改变在膀胱移行细胞癌的发生起重要的作用。血浆p14基因甲基化的检测是膀胱移行细胞癌诊断和判断预后的一个有效的分子生物学指标。     

FHITmRNA及蛋白在膀胱移行细胞癌中的表达和意义

目的：研究膀胱移行细胞癌组织中脆性组氨酸三联体（fragilehistidinetriad,FHIT）mRNA及蛋白在膀胱移行细胞癌发生、发展中的作用。方法：采用RT—PCR和免疫组化SP法检测FHITmRNA及蛋白在62例膀胱移行细胞癌组织及35例正常组织中的表达情况。结果：FHITmRNA在癌组织及正常对照组中的缺失率分别为54．84％和2．86％。随着临床分期,FHITmRNA和蛋白异常表达呈增高趋势;并且随着膀胱移行细胞癌分化程度呈下降趋势。结论：FHIT基因与膀胱移行细胞癌的发生、发展过程密切相关,FHIT基因的检测可能成为膀胱移行细胞癌的预测指标。     

膀胱移行细胞癌微卫星不稳定性表达及机理探讨

目的 探讨微卫星不稳定性在膀胱移行细胞癌的表达及其作用机制。方法 用PCR方法分析35例膀胱移行细胞癌尿沉渣标本中微卫星不稳定性表达;用RT-PCR方法监测5种人类错配修复基因在膀胱癌细胞系mRNA转录水平的表达;用PCR方法检测膀胱癌细胞系BIU-87中错配修复基因hMLH1的启动子区域出现异常甲基化。结果 35例膀胱癌患者尿沉渣中,有31例（88.6%)可检出微卫星不稳定性表现;5种人的错配修复基因在BIU-87膀胱癌细胞系中有hMLH1和hMSH2表达缺失,而在正常近曲小管细胞系中都有表达;BIU-87细胞错配修复基因hMLH1的启动子区域出现异常甲基化,应用去甲基化剂处理后可检测到hMLH1的启动子区域的表达,再次去除去甲基化剂后叠不能检测hMLH1的启动子区域。结论 微卫星不稳定性与错配修复基因表达有关。甲基化对膀胱癌细胞系BIU-87错配修复基因hMLH1的表达具有调控作用。     

RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其临床意义

目的:探讨RASSF1A基因在膀胱移行细胞癌中的表达及其与膀胱移行细胞癌的发生发展复发的关系.方法:采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测29例膀胱移行细胞癌组织及5例正常膀胱组织中RASSF1A mRNA的表达水平.结果:①RASSF1A mRNA在所有正常膀胱组织中均呈阳性表达,而在膀胱移行细胞癌组织中表达缺失率为79.3%(23/29),两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).②RASSF1A mRNA表达缺失与膀胱移行细胞癌的分级无显著相关性(P＞0.05).RASSF1A mRNA表达在浸润性膀胱中表达缺失率为90%(9/10)明显高于在表浅性膀胱移行细胞癌中的表达缺失率73.7%(14/19),但两者比较差异有无统计学意义(P＞0.05).③RASSF1A mRNA表达与膀胱移行细胞癌复发密切相关(P＜0.05).结论:①RASSF1A mRNA在膀胱移行细胞癌中表达缺失提示RASSF1A基因可能参与膀胱移行细胞癌的发生过程.②RASSF1AmRNA表达缺失可能与膀胱移行细胞癌进展相关.③RASSF1A mRNA的表达缺失与膀胱移行细胞癌的复发密切相关,可以作为复发预后标志物.     

膀胱癌WIF-1启动子甲基化状态及其与膀胱癌临床病理关系的研究

目的:研究Wnt抑制因子1(WIF-1)启动子甲基化状态对WIF-1蛋白表达的影响及其与膀胱癌的临床病理关系。方法:采用甲基化特异性PCR方法和免疫组织化学方法检测57例膀胱癌WIF-1启动子甲基化状态和WIF-1蛋白表达情况。以正常膀胱黏膜及腺性膀胱炎组织为对照。结果:膀胱癌、腺性膀胱炎和正常膀胱组织WIF-1启动子甲基化率分别为57.9%,15.0%和0,差异有统计学意义(P<0.01)。WIF-1启动子甲基化阳性率随肿瘤分级、分期的增加逐渐升高(G1、G2、G3级分别为20.0%、56.3%和86.7%;浅表性和浸润性肿瘤分别为43.8%和76%,P<0.01)。膀胱癌组织WIF-1基因启动子甲基化时WIF-1蛋白表达率明显低于未甲基化组(P<0.001,Kappa值为0.783)。WIF-1甲基化与未甲基化组膀胱癌患者之间的5年总生存率分别为60.6%和91.7%(P<0.05)。结论:膀胱癌WIF-1蛋白表达缺失或减少与WIF-1启动子甲基化密切相关。WIF-1启动子甲基化可能是膀胱肿瘤发生的早期事件,而且与肿瘤的进展有关,可作为膀胱癌患者预后判断分子标志物。     

胫骨干骨折的手术治疗对策

目的：明确不同固定器械在胫骨干不同骨折类型固定中的特点，以指导临床应用。方法：68例胫骨干骨折，行加压钢板螺钉、交锁髓内钉、单侧外固定架固定后，作临床疗效分析。结果：加压钢板固定组42例，感染5例，骨不连1例，平均愈合时间3．8个月；交锁髓内钉固定组13例，无感染及骨不连，平均愈合时间5．4个月；单侧外固定架组13例，骨不连1例，踝关节背伸受限3例，平均愈合时间4．5个月。结论：胫骨骨折交锁髓内钉固定并发症少，功能恢复好，适用范围广，但要注意及时进行动力加压。加压钢板及外固定架固定应选择各自的最佳适应证，以达到理想的疗效。     

不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效分析

目的：探讨不同方法重建指尖离断静脉回流的疗效。方法：2008年3月-2013年2月收治指尖离断患者80例,38例吻合指侧方静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1或1：2或2：2,平均1：2;22例吻合指腹静脉重建回流,术中吻合动静脉比例1：1;20例未吻合静脉,术中仅吻合1条动脉,行侧切口或甲床放血。观察各组治疗效果。结果：吻合指侧方静脉组手指全部成活,无一例发生回流障碍;吻合指腹静脉组19例发生静脉危象,其中4例手指坏死;未吻合静脉组20例均发生回流障碍,其中6例手指坏死。58例获随访,随访时间6~28个月。吻合指侧方静脉组32例,指尖外形佳、指腹饱满;吻合指腹静脉组14例,指体轻度萎缩,指甲生长不平整;未吻合静脉组12例,指体萎缩明显。吻合指侧方静脉组指甲生长近平整,长度长于其他两组[（14.4±3.2）mm比（12.5±2.3）mm和（12.2±2.2）mm],远侧指间关节活动度大于其他两组[（63±5）°比（48±3）°和（45±7）°],两点分辨觉小于其他两组[（4.6±0.4）mm比（7.1±1.2）mm和（7.3±0.6）mm],感觉级别高于其他两组[S（3.45±0.39）级比S（2.57±0.42）级和S（2.55±0.49）级],差异均具有显著性（P〈0.05）。吻合指腹静脉组和未吻合静脉组在指甲长度、运动和感觉方面差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：吻合指侧方静脉能有效解决指尖再植静脉回流问题,可避免回流障碍,成活率高,促进指甲生长,可恢复 DIPJ 活动度及感觉。