Twist基因在肝细胞肝癌中的表达及意义

目的探讨转录因子Twist在人肝细胞肝癌、癌旁和肝硬化组织中的表达及其意义。方法利用免疫组化方法检测26例肝细胞肝癌标本（癌和癌旁组织）和10例肝硬化标本中Twist的表达情况;利用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）和Western蛋白印迹方法检测其中10例标本中的Twist mRNA和其蛋白的表达情况,分析其临床病理意义。结果免疫组化显示：Twist蛋白在肝癌、癌旁和肝硬化组织中的阳性率分别为84．6％、19．2％和20．0％,Twist在肝癌组织中的表达明显强于癌旁或肝硬化组织（P〈0．05）;大多数癌旁和肝硬化组织无Twist表达,癌旁与肝硬化组织相比阳性率无差别（P〈0．05）。与癌旁组织相比,Twist mRNA和其蛋白在肝癌组织中表达明显上调（P〈0．05）。结论Twist在肝细胞肝癌组织中的过高表达与肝癌的发生发展相关。     

肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体mRNA在肝癌中的表达及其意义

目的 探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体的4种受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在肝细胞癌肝组织中的表达状况。方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测40例人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织、23例正常人肝组织中DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA表达率及表达水平。结果 （1）40例肝癌组织、癌旁组织、23例正常肝组织DR4、DR5的mRNA的表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）；（2）40例癌旁组织、23例正常肝组织DcR1、DcR2表达水平明显高于40例肝癌组织（P〈0．05）；（3）DR4和DR5mRNA在肝细胞癌组织中表达水平与患者的年龄，肿瘤大小，有无包膜，分级程度，AFP水平，HBsAg，有无肝硬化有关系。结论 肝癌组织中存在TRAIL受体的表达，与其在正常肝组织中的表达差异有统计学意义（P〈0．05）；DR4、DR5表达水平与肝癌的病理状况有关系。     

EphrinA1在原发性肝细胞癌中的表达及临床意义

目的探讨原发性肝细胞癌中EphrinA1的mRNA和蛋白表达水平及其临床意义。方法应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及免疫组织化学方法检测EphrinA1的mRNA及蛋白在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达水平,并分析其与临床病理学特点之间的关系。结果40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphrinA1 mRNA的表达。RT-PCR分析显示EphrinA1mRNA在肝癌组织（0．5413±0．1527）中的表达显著高于癌旁肝组织（0．3895±0．0549,P〈0．05）和正常肝组织（0．3770±0．1055,P〈0．05）,而在癌旁肝组织（0．3895±0．0549）和正常肝组织（0．3770±0．1055）中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。从正常肝组织、癌旁肝组织到肝癌组织,EphrinA1蛋白的阳性表达率分别为20％（2／10）、35％（14／40）和62％（25／40）,呈递增趋势（x^2=14．762,P〈0．05）。EphrinA1蛋白的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关（P〈0．05）。结论EphrinA1蛋白的过表达与肝癌细胞的分化程度、淋巴结转移和门静脉癌栓有密切联系,提示其可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥重要作用。     

肝细胞癌门静脉癌栓中肝细胞生长因子及其受体的表达

目的研究肝细胞生长因子（HGF）及其受体C-Met在肝细胞癌门静脉癌栓中的表达，探讨HGF及C-Met的表达与门静脉癌栓形成与发展的关系。方法用半定量逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测HGFmRNA及C-MetmRNA在20例肝细胞癌门静脉癌栓及其癌旁组织、10例无门静脉癌栓形成的肝细胞癌和癌旁组织及10例正常肝组织中的表达。结果HGF及C-Met在肝癌及癌栓中的阳性表达率均显著高于正常肝组织及癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05），HGF及C—Met在癌栓中及肝癌中表达的阳性率比较差异无统计学意义（P〉0．05），HGF与C—Met在各组织中的表达阳性率高低差异无统计学意义（P〉0．05）。HGF及C—Met在肝癌及癌栓中的表达量均显著高于正常肝组织及癌旁组织，差异有统计学意义（P〈0．05），HGF及C-Met在癌栓中表达量显著高于其在肝癌中表达量（P〈0．05），HGF与C-Met在各组织中的表达量差异无统计学意义（P〉0．05）。结论HGF及C-Met参与了肝癌的形成，而肝癌患者HGF及C-Met量的升高可能是肝癌发展形成门静脉癌栓的原因之一，HGF及C—Met可作为门静脉癌栓形成的监测指标。     

Hedgehog信号通路转录因子Gli2在肝癌组织中的表达及意义

目的探讨Hedgehog（Hh）信号通路下游转录因子胶质瘤相关癌基因同源蛋白2（Gli2）在肝细胞癌组织中的表达及临床意义。方法采用RealtimeRT—PCR法及Westernblot检测20对肝癌及癌旁组织Gli2基因mRNA及蛋白的表达;采用免疫组织化学法检测52对肝癌及癌旁组织Gli2蛋白的表达情况。结果Gli2mRNA及蛋白在肝癌组织中的表达明显高于癌旁组织。52例肝癌组织中Gli2阳性表达38例（73．1％）,相应的癌旁组织Gli2阳性表达8例（15．4％）,差异有显著性（P〈0．01）;且G1i2蛋白表达与肝癌分化程度、有无血管侵犯及淋巴结转移有相关性（P〈0．05）。结论Gli2的异常表达与肝癌的发生发展及浸润转移密切相关,Gli2可能成为肝癌的重要生物学标志和生物治疗靶点。     

人肝细胞性肝癌性激素受体的表达

目的：研究人肝细胞性肝癌组织、癌旁组织和正常肝组织中雄激素受体（AR）和雌激素受体（ER）的表达水平及分布规律。方法：应用单克隆抗体免疫组化法检测50例肝细胞性肝癌标本的肿瘤组织、癌旁组织和10例肝内胆管结石的肝组织中AR和ER的表达情况。结果：在肝癌组织、癌旁组织和肝内胆管结石的肝组织中，AR的阳性表达率分别为30％、8％和0％，除癌组织显著高于癌旁组织外（P＜0．01），其它各组无显著性差异（P＞0．05）；ER的阳性表达率分别为12％、10％和20％，在三组中均无显著性差异（P＞0．05），在所有阳性片中，AR和ER的标记指数（LI）均＜25。结论：AR和ER在肝细胞性肝癌组织中的表达率很低。     

肝癌及癌旁组织中β-葡萄糖醛酸酶蛋白及mRNA的表达及意义

目的探讨肝细胞癌及癌旁组织中β-葡萄糖醛酸酶（β-G）蛋白及β-G mRNA的表达和临床意义。方法采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法和免疫组织化学方法，对25例原发性肝细胞癌及其癌旁组织和10例正常肝脏组织进行检测，并分析其与临床病理特点之间的关系。结果半定量分析显示β-G mRNA的表达在肝脏癌组织（3．71±0．32）与癌旁肝组织（1.83±0.22）以及正常肝脏组织（1．71±0．32）间差异比较，均有统计学意义（均为P〈0．01），而癌旁肝组织和正常肝组织间比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；从正常肝组织、癌旁组织到肝癌组织β-G蛋白的阳性细胞表达率分别为（48．2％±5．5％）、（56．8％±6．2％）和（83．8％±9．1％），呈递增趋势（χ^2=42．33，P〈0．01）；β-G蛋白的表达与肝癌病人的门脉癌栓以及淋巴结转移等临床因素有关（P〈0．01），而与肿瘤大小、AFP水平无关。结论β-G与肝细胞的癌变过程密切相关，可能在肝癌的侵袭和转移过程中也起一定的作用。     

CCR1趋化因子受体在人肝癌组织中表达及其临床意义

目的了解CCRl趋化因子受体在人肝癌组织中表达分布情况，探讨其表达水平与临床病理特性的关系。方法采用RT-PCR、免疫组化、Western blot技术检测45例肝癌组织及相应癌旁肝组织CCRl趋化因子受体表达及分布情况，并分析其表达水平与临床病理特性的关系。结果RT-PCR、Western blot在肝癌组织及相应癌旁肝组织中均可以检测到CCR1趋化因子受体mRNA及蛋白，肝癌组织表达水平高于癌旁肝组织。免疫组化显示CCR1趋化因子受体主要表达于肝癌细胞膜。CCR1mRNA表达水平与病人性别、年龄、血清AFP水平、肿瘤大小、分期无明显相关性，而与肿瘤是否有包膜（t=2．305，P〈0．05）、门静脉浸润显著相关（t=3．004，P〈0．01）。无门静脉浸润的肝癌组织中，47．4％免疫组化染色强度为＋＋～＋＋＋，而有门静脉浸润的肝癌组织中，80．8％染色强度为＋＋～＋＋＋，两者比较差异具有显著意义（X^2=5．511，P〈0．05）。结论肝癌细胞表达CCR1趋化因子受体，其表达水平与肝癌侵袭性尤其是门静脉浸润相关，有望成为判断肝癌侵袭性及预后的指标。     

p27kip1及相关分子skp2在人肝癌组织中的表达变化

目的探讨细胞周期素依赖性激酶抑制蛋白27（p27^kip1）和细胞S相激酶相关蛋白2（skp2）表达与人肝癌发生的关系。方法用免疫组织化学SP法检测62例肝癌组织中p27^kip1、skp2蛋白的表达，并与22例癌旁正常肝组织作对比。结果p27^kip1蛋白阳性表达率在肝癌中为46．77％，而癌旁肝组织中为95．45％（P〈0．01）。skp2蛋白阳性表达率在肝癌中为32．26％，而癌旁正常肝组织中为13．64％（P〈0．05）。p27^kip1、skp2蛋白在肝癌中的表达呈负相关（P〈0．01）。结论p27^kip1、skp2蛋白检测有助于肝癌的临床诊断及判断预后。     

原发性肝癌癌旁组织生长激素受体的基因研究

目的探讨原发性肝癌癌旁组织生长激素受体（GHR）的基因表达情况或变化。方法采用放射配体法、半定量的逆转录-多聚酶链式反应（RT—PCR）对45例原发性肝癌（HCC）的癌旁组织进行了生长激素受体（GHR）的检测，以8例正常肝组织作为对照，并随机选择12例RT—PCR阳性扩增产物直接进行DNA序列测定。结果在蛋白表达水平，应用放射性配体法于正常肝组织与45例HCC癌旁组织中检测到单一的GH特异性结合位点（即GHR）。对照组肝组织GHR的RT值为40．2932±3。5667．fmol／mg；protein，Kd为0．6167±0．1007nmol／L。HCC癌旁组织GHR的RT为33．6283±3．6218fmol／mg。protein，Kd值为0．6319±0．1978nmol／L，与正常肝组织相比，HCC癌旁GHR的RT降低（P〈0．05）．而Kd无显著性改变（P〉0．05）。半定量的RT—PCR法发现GHRmRNA在正常肝组织与HCC癌旁组织的表达率均为100％。GHRmRNA在正常肝组织与原发性肝癌癌旁组织的表达两者之间差异无显著性（P〉0．05）。结论全部肝癌癌旁组织在蛋白与mRNA水平均表达GHR，在其受体功能未明的情况下，目前rhGH在肝癌患者中的使用应慎重，以免造成肿瘤的增殖与复发。     

GRIM-19在肝细胞癌组织中的低表达及对其侵袭能力的影响

目的：检测GRIM-19在肝细咆癌（HCC）中的表达,分析其与HCC生物学行为的关系,并探讨GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。方法：应用实时定量PCR技术检测83例HCC及其相对应的癌旁组织和8例正常肝组织中GRIM-19mRNA的表达,分析其与HCC临床病理因素之间的关系。用Westernblot法检测低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L和高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7中GRIM-19蛋白的表达。应用细胞转染技术将GRIM-19shRNA转入HL-7702和Huh-7,从而构建HL-7702和Huh-7的GRIM-19kd细胞系,并用Westernblot法检测转染效果。应用Transwell细胞迁移实验研究GRIM-19对HCC侵袭能力的影响。结果：实时定量PCR结果显示,83例HCC组织中有52例（62．65％）GRIM-19的表达低于相对应的癌旁组织（P〈O．01）,其表达水平也低于8例正常肝组织（P〈005）。GRIM-19的表达与HCC的TNM临床分期（P=O．011）、微血管浸润（P=O．047）和包膜浸润（P=O．013）密切相关。Westernblot显示HL-7702、MHCC-97L、MHCC-97H、Huh-7细胞系表达GRIM-19蛋白,且低侵袭力细胞株HL-7702、MHCC-97L中GRIM-19表达高于高侵袭力细胞株MHCC-97H、Huh-7。细胞侵袭实验显示GRIM-19低表达促进了HCC的侵袭能力。结论：GRIM-19在HCC的侵袭中起重要作用,可能为检测HCC的侵袭潜能提供新的研究思路。     

磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达及其意义

目的 探讨人肝细胞肝癌组织中磷酸化蛋白p27的表达及其与临床病理特征的关系.方法 利用Ti4+-IMAC富集和LC-MS2-MS3检测磷酸化蛋白的方法鉴定人肝细胞肝癌组织磷酸化蛋白,进一步利用Western blot检测40例肝细胞肝癌、相应癌旁组织和12例正常肝组织中T187、S10磷酸化p27蛋白(P-p27T187、P-p27S10)的表达.结果在肝癌组织磷酸化蛋白的筛选中鉴定到磷酸化蛋白p27,并确定IPI、磷酸化位点、蛋白激酶等信息,Western blot检测提示P-p27T187与P-p27S10在肝细胞肝癌组织表达明显高于癌旁、正常肝组织,其相对表达量分别为0.635±0.108、0.306±0.078和0.149±0.031,差异有统计学意义(P<0.05).且P-p27T187和P-p27S10与肝癌病理分级、临床分期及转移相关,而与发病年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤数目等无明显相关(P>0.05).结论 磷酸化蛋白p27在肝细胞肝癌中表达水平明显升高,与肝癌的发生发展及转移相关.     

肝细胞癌Period1 表达与预后的关系

目的：探讨Period1在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及意义。 方法：用RT-PCR与Western blot法检测30例HCC组织与其癌旁肝组织及5例正常肝组织中Period1 mRNA与蛋白表达;甲基化特异性PCR检测HCC组织与癌旁肝组织中Period1启动子甲基化水平;免疫组化检测67例HCC组织及其癌旁肝组织石蜡切片中Period1蛋白的表达;分析Period1的表达与HCC患者临床病理特征及预后的关系。 结果：HCC组织Period1 mRNA和蛋白的表达水平均较癌旁肝组织与正常肝组织明显降低（均P<0.05）,而两者在癌旁肝组织与正常肝组织间差异无统计学意义（均P>0.05）;HCC组织Period1启动子甲基化水平较其癌旁肝组织明显增高（均P<0.05）。HCC组织石蜡切片中Period1阳性表达率为47.8%,而癌旁肝组织阳性表达率为83.6%,差异有统计学意义（P<0.05）;Period1表达与HCC分化程度、结节数目、有无静脉浸润有关（均P<0.05）;Period1阳性表达HCC患者中位复时间与中位生存时间均明显短于阳性者（均P<0.05）。 结论：Period1在肝癌中表达下调可能与HCC的发生发展和侵袭转移密切相关;启动子甲基化可能是Period1表达下调的重要机制。     

RASSF1A mRNA在原发性肝癌中的表达及其临床意义

目的 应用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法分析RASSF1 A在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义.方法 提取65例外科手术切除的肝细胞癌组织(其中右肝癌41例,左肝癌的24例)及其相对应的癌旁正常组织和6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株的总RNA,逆转录成cDNA,应用实时荧光定量RT-PCR方法检测RASSF1 A mRNA的表达水平.结果 癌旁正常组织RASSF1A mRNA表达量为癌组织的3.32倍,两者差异有统计学意义(癌旁正常组织△CT=4.64±2-44,癌组织中△CT=6.30±1.92,P<0.01),其中38例(58.5%)肝癌组织中的RASSF1A mRNA表达水平比癌旁正常组织显著下调:下调8倍以上的有17例,下调4倍以上的有8例,下调2倍以上的有13例,另外有5例(7.7%)在肝癌组织中的RASSF1A表达水平比癌旁正常组织较高,其余22例(33.8%)则差异无统计学意义(P>0.05);3株(QGY-7701、PLC、Hep3B,50.0%)肝癌细胞株中的RASSF1A mRNA表达水平比正常肝脏细胞株(HL-7702)显著下调;在肝癌组织中RASSF1A的表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小等无明显相关(P>0,05),但和门脉癌栓与否(P<0.05)、临床分期(P<0.05)及血清HbsAg明显相关(P<0.01).结论 RASSF1A基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用.     

原发性肝癌中RUNX3的表达及其临床意义

目的 探讨RUNX3在原发性肝细胞癌巾的表达及其临床意义.方法 提取肝组织样本的总RNA(包括65例手术切除的肝癌组织及其对应的癌旁组织,6株肝癌细胞株及1株正常肝细胞株),应用实时荧光定量RT-PCR方法 检测标本中RUNX3 mRNA的表达水平,并经Western blot法验证.结果 (1)对照组(癌旁组织)RUNX3 mRNA表达量为肝癌组(癌组织)的4.2倍.41例(63.08%)肝癌组织中的RUNX3 mRNA表达水平比对照组织显著下调:下调8倍以上者17例,下调4倍以上者21例,下调2倍以上者3例.(2)66.67%(4/6)肝癌细胞株RUNX3 mRNA表达水平较正常肝细胞株明显下调.(3)RUNX3在蛋白水平和mRNA水平变化趋势基本一致.(4)在肝癌组织中 RUNX3的表达与患者肝硬化(P=0.028)及组织分型(P＜0.001)相关.结论 RUNX3基因的缺失或低表达可能在肝细胞癌发生、发展过程中起一定作用.     

HLJ1基因在肝细胞癌组织中的表达及其生物学意义

目的:探讨HLJ1基因在肝细胞癌（HCC）组织中的表达及其生物学意义。方法:采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测32例HCC组织及其对应的癌旁肝组织（PLCT）中HLJ1基因的mRNA表达水平;分析HLJ1与肝硬化、HCC的结节数目、静脉浸润、分化程度和肝外转移等临床病理特征的关系。结果:HCC组织中HLJ1 mRNA的表达水平显著性低于PLCT［（1.18±0.82）vs.（1.92±1.15），P＜0.05）］，其HLJ1 mRNA低表达组(n=18)和高表达组(n=14)在静脉浸润（P=0.001）和细胞分化程度（P=0.010）方面差异显著，而在性别、有无肝硬化、结节数目和肿瘤直径等因素的组间差异无显著性（P>0.05）。结论:HLJ1在HCC中表达显著性下调;HLJ1有可能参与HCC的细胞分化和侵袭转移。     

EphA7基因在原发性肝细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨原发性肝细胞癌中EphA7 mRNA的表达及其临床意义.方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时荧光定量PCR法检测EphA7 mRNA在40例肝癌及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中的表达,并分析其与肝癌临床病理因素之间的关系.结果 40例肝癌组织及相应的癌旁肝组织和10例正常肝组织中均有EphA7 mRNA的表达.实时荧光定量PCR分析显示EphA7 mRNA在肝癌组织(20.0711±32.0232)中的表达显著高于癌旁肝组织(4.5184±9.4738,P＜0.05)和正常肝组织(4.1764±4.7193,P＜0.05),而在癌旁肝组织和正常肝组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05).EphA7 mRNA的过表达与肝癌细胞的分化程度、门静脉癌栓的形成及淋巴结转移等临床病理因素有关(P＜0.05).结论 EphA7的过表达与原发性肝细胞癌的生物学行为密切相关,可能在肝癌的恶性转化、侵袭和转移过程中发挥作用.     

SFPQ在肝细胞癌的表达及其对细胞增殖与细胞周期的影响

目的:探讨脯氨酸、谷氨酰胺剪接因子(SFPQ)在肝细胞癌(HCC)中的表达及作用。方法:采用实时定量PCR及Western blot检测HCC患者的癌组织和对应癌旁组织SFPQ mRNA及蛋白表达。采用TCGA和GEO数据库分析正常肝组织及HCC组织中SFPQ的表达丰度差异;采用TCGA数据库分析SFPQ表达与HCC患者临床分期、病理分级以及患者生存期的关系以及与增殖基因PCNA、Ki-67和周期蛋白CCNE1、CDK2的相关性。观察敲低HCC细胞株HepG2及Hep3B中SFPQ的表达后增殖能力与细胞周期的变化。结果:组织标本分析结果显示,SFPQ mRNA及蛋白表达水平在HCC组织中明显高于癌旁组织(均P0.05)。数据库分析结果显示,HCC组织中SFPQ mRNA表达丰度明显高于正常肝组织,且患者临床分期及病理学分级越高,SFPQ mRNA水平越高,高表达SFPQ的患者的总生存率明显降低,SFPQ mRNA表达与PCNA、Ki-67、CCNE1、CDK2的表达均呈明显正相关(均P0.05)。敲低SFPQ表达后,HepG2及Hep3B细胞的增殖能力明显减弱,并出现明显G1期阻滞(均P0.05)。结论:SFPQ在HCC中表达升高,升高的SFPQ可通过调节HCC细胞周期,促进HCC细胞的增殖,加速肿瘤进展。     

CLEC4G在肝脏疾病中的表达及其与肝细胞肝癌的相关性研究

目的探讨C型凝集素结构域家族4成员G(CLEC4G)在肝脏疾病组织中的表达及其与肝细胞肝癌(HCC)患者临床病理特征之间的相关性。方法回顾性分析株洲市中心医院2019年1月-2019年12月经外科手术切除治疗的40例HCC患者癌组织和相应的癌旁组织(距癌组织边缘至少2 cm)及10例正常肝组织标本(肉眼所见尽量远离癌组织边缘)和10例肝硬化标本。利用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库筛选HCC转录组数据集,用生物信息学方法制作热图和箱图分析CLEC4G在癌组织和癌旁组织中的表达差异。实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测CLEC4G的mRNA表达水平;免疫组织化学法(IHC)检测CLEC4G蛋白的表达水平。计量资料用均数±标准差(Mean±SD)表示,组间比较采用成组t检验;计数资料以百分比(%)表示,采用χ2检验分析CLEC4G表达与患者临床病理特征之间的相关性。结果热图显示CLEC4G在癌组织中的表达较癌旁组织显著下降,箱图中CLEC4G mRNA在癌组织的相对表达量为(82.5±18.9),在癌旁组织中为(3354.4±296.2),差异具有统计学意义(P<0.001);qRT-PCR及IHC分别表明CLEC4G的mRNA在正常肝组织中表达丰富(3301.3±286.4),在肝硬化(1742.6±208.7)和癌旁组织(1553.2±249.9)中表达明显下降,而在肝癌组织中表达甚少(63.6±32.9),差异具有统计学意义(P<0.001);并且CLEC4G的低表达与HCC患者的肿瘤血管转移有关。结论CLEC4G在正常肝脏组织中大量表达,而随着肝脏疾病的恶性病变进展其表达显著减少,在HCC组织中表达甚少,有望成为HCC良好的病理诊断标志物。