采用血清蛋白指纹图谱技术筛选食管鳞状细胞癌特异相关性蛋白的研究

目的应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测食管鳞状细胞癌患者血清蛋白指纹图谱,筛选候选肿瘤标志物并建立诊断模型,初步探讨所建的诊断模型在食管鳞癌诊断中的临床意义。方法144例经手术后病理证实的食管鳞状细胞癌患者和50例健康人血清,用SELDI—TOF—MS检测各血清标本获得血清蛋白指纹图谱。用Biomarker Wizard筛选差异峰。扩大样本量,采用SPSS12．0中ROC曲线分析入选差异峰用于食管癌诊断的灵敏度和特异性。结果在分子量1500～30000范围内,共检测到93个蛋白峰,其中10个差异峰有统计学意义（P〈0．01）。ROC曲线面积超过08的有2768、2745、3403、6638、5972、6440、3321和3978m/z差异峰。当差异峰3403m／z以3．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为87．5％和94．0％;3978m/z以2．0为临界值时,其敏感性和特异性分别为8417％和72．0％。其诊断价值均超过CA724、CEA和CA242单独或联合检测。结论3978和3403m/z两个蛋白对区分食管鳞癌患者和健康人群具有较好的诊断价值。     

血清蛋白指纹图谱技术筛查前列腺癌患者特异性血清标志物的应用价值

目的 应用蛋白指纹图谱技术筛查前列腺癌患者血清蛋白质表达谱,寻找血清中的特异性标志物.方法 选择前列腺癌患者22例和前列腺增生患者26例以及同期正常对照者25例,用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术检测各血清样本的血清蛋白指纹图谱,比较血清蛋白指纹图谱的差异.结果 前列腺癌组的血清蛋白质谱图中质荷比为3 165、3 982、4 291的蛋白质相对含量(9.794±4.449、3.968±2.247、11.020±6.069)高于正常对照组(5.062±2.245、1.823±1.432、6.525±5.270),而质荷比为2 747、10 268的蛋白质相对含量(22.390±12.179、0.953±0.338)低于正常对照组(42.231±16.970、1.932±0.864);质荷比为10 268的蛋白质的相对含量前列腺癌组(0.953±0.338)低于前列腺增生组(1.314±0.493),差异均有统计学意义(均P<0.05).但前列腺增生组与正常对照组差异均无统计学意义(均P >0.05).PSA阳性的前列腺癌组质荷比为3 960的蛋白质相对含量(3.447±1.434)高于PSA阳性的前列腺增生组(1.473±0.971),而PSA阳性的前列腺癌组质荷比为10 268的蛋白质相对含量(0.847±0.408)低于PSA阳性的前列腺增生组(1.538±0.182),差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 血清蛋白质谱图存在差异的6个不同质荷比蛋白质组成的蛋白质组有可能成为前列腺癌筛查的血清标志物.质荷比为10268Da的蛋白指纹峰有助于区分前列腺癌患者与前列腺增生患者和正常人群.     

SELDI-TOF质谱技术分析乳腺癌血清蛋白质谱的变化

目的 研究乳腺癌患者血清蛋白质的变化,建立灵敏度和特异度高的乳腺癌诊断模型.方法 利用SELDI-TOFMS技术对194例乳腺癌患者和60例正常人血清蛋白质分别进行检测,IMAC30芯片结合蛋白质后,用蛋白芯片仪读取数据,分析得到区分乳腺癌患者和正常人的树状分类规则,并构建诊断模型.结果 M11368、M7768、M2943等3个蛋白质组成的模型1可将2组准确分组,灵敏度和特异度分别为94.8%(184/194)和96.7%(58/60);以M11368蛋白质单独组成诊断模型2进行区分,灵敏度和特异度分别为89.69%(174/194)和93.33%(56/60).结论 SELDI-TOFMS技术可以应用于乳腺癌的诊断.     

两种蛋白芯片筛选血清蛋白标志物的对比分析

目的从CM10、IMAC3-Cu这两种芯片中选择适合应用于血清蛋白质指纹图谱研究的芯片种类。方法选择慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者和健康人血清各13例,采用CM10、IMAC3-Cu两种蛋白芯片,经SELDI-TOF-MS技术对样本进行检测比较。结果在2000-50000Da范围内,CM10和I-MAC3-Cu芯片在各实验组捕获的有效蛋白峰数的差异均有统计学意义（P〈0.05）。结论CM10能得到更多慢性乙型肝炎患者、肝硬化患者和健康人的有意义的蛋白峰值,能更好的应用于血清蛋白组学的实验研究。     

应用SELDI-TOF-MS筛选矽肺模型大鼠的血清生物标志物及建立血清蛋白指纹分类决策树

【目的】应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱(surface enhanced laser desorption-ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)技术寻找染矽尘大鼠血清潜在生物标志物,探索建立染矽尘大鼠血清蛋白指纹分类决策树。【方法】128只雄性Wistar大鼠随机分为对照组和染矽尘模型组,以气管暴露法建立矽肺模型,分别在7、14、28和60 d进行腹主动脉采血。采用SELDI-TOF-MS技术以CM10芯片检测大鼠的血清蛋白指纹图谱,用Ciphergen公司专有软件分析数据并建立血清蛋白指纹分类诊断决策树。【结果】与对照组相比,14 d时,m/z 4968.66多肽分子在染矽尘大鼠模型组显著升高(P<0.05);而m/z 9312.29和m/z 9511.19多肽分子分别在28、60 d时显著升高(P<0.05),并均与Ⅰ型胶原增加呈显著正相关(r=0.982,P=0.018;r=0.939,P=0.061);以28、60 d的对照组和染矽尘大鼠组为训练样本,血清蛋白指纹诊断决策树图分类敏感性和特异性分别达100%、83.33%。【结论】m/z 4 968.66多肽分子可作为矽尘所致早期炎症反应的生物标记物,m/z 9312.29、m/z 9511.19多肽分子可能是矽尘所致进行性肺间质纤维化的标志分子。在矽尘暴露28、60d时,血清蛋白指纹分类诊断树的敏感性和特异性分别达100%、83.33%。     

SELDI-TOF质谱技术分析家族性腺瘤性息肉病血清蛋白质谱

目的研究家族性腺瘤性息肉病患者血清蛋白质的变化,建立灵敏度和特异度高的家族性腺瘤性息肉病诊断模型。方法利用SELDI-TOF-MS技术对18例家族性腺瘤性息肉病患者术前、术后血清蛋白质分别进行检测,IMAC30芯片结合蛋白质后,用蛋白芯片仪读取数据,分析得到区分两组的树状分类规则,并构建诊断模型。结果 M8514.89蛋白质组成的模型可将两组准确分组,灵敏度和特异度分别为88.89%(16/18)和100%(18/18)。结论 SELDI-TOF MS技术可将家族性腺瘤性息肉病术前、术后正确分组,可应用于家族性腺瘤性息肉病的诊断、鉴别、随访和手术时机的选择。     

激光捕获显微切割联合SELDI蛋白质芯片筛选肺腺癌早期诊断标志蛋白

目的 探讨应用激光显微切割(LCM)联合表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片(SEL,DI-TOF-MS)及模式识别分类技术-支持向量机(SVM)筛选肺腺癌标志蛋白的可行性.方法 将6例新鲜肺腺癌组织标本及其配对的4例正常肺组织制备8μm厚度冰冻切片,改良HE染色;用LCM技术选择性获取同质腺癌细胞和配对正常肺组织细胞.应用PBSⅡ+型SELDI-TOF-MS分析仪(IMAC芯片)分析腺癌及其配对正常细胞的蛋白质表达谱,比对差异点;应用SVM筛选并验证候选标志蛋白的判别效能.结果 平均每个LCM帽子的激光点数约4000 shots,获得了同质性>95%的肿瘤细胞和正常细胞.比较腺癌和配对正常细胞之间的SELDI谱图,共筛选出84个蛋白峰.将差异最明显的10个蛋白峰作为候选标志蛋白.和正常组织相比,6种蛋白在腺癌中呈低表达,4种蛋白在腺癌中呈高表达.差异有统计学意义(P<0.05).初步筛选出3191 m/z蛋白峰作为腺癌诊断标志蛋白.结论 LCM联合SEIDI蛋白质芯片技术有可能筛选出敏感性高、特异性强的肺腺癌标志蛋白;该技术将为肺腺癌早期诊断研究提供新的强有力的工具.     

血清蛋白质指纹图谱对紫杉类联合蒽环类化疗一线治疗乳腺癌的预测作用

目的 寻找能预测紫杉类联合蒽环类（AT）一线治疗转移性乳腺癌疗效的潜在蛋白质标志物。方法 以2015年8月至2018年7月浙江大学医学院附属第二医院经AT一线化疗的转移性三阴性乳腺癌的26例患者为对象,使用实体瘤疗效评价标准（RICIST）区分经过2个疗程治疗后的化疗受益者和化疗无效者,使用血清蛋白质指纹图谱技术分析比较化疗受益者和化疗无效者的血清蛋白质谱的差异,并构建预测模型。结果 经AT一线化疗,26例患者中17例有效,9例无效。表面增强激光解吸/电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）和人工神经网络（ANN）分析发现,两组患者间5个蛋白质峰存在差异。基于血清蛋白质指纹图谱构建的乳腺癌患者AT方案化疗疗效的潜在预测模型可有效区分化疗受益者与化疗无效者,灵敏度达1.000,特异度达0.889。结论 血清蛋白质指纹图谱模型可有效筛选出可能从AT方案化疗中受益的转移性乳腺癌患者。     

表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术筛选的肺腺癌血清标志蛋白与传统肿瘤标志物的比较

目的比较表面增强激光解析离子化飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)筛选的肺腺癌血清标志蛋白与传统肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、糖类抗原(CA125)和细胞角蛋白19片断(CYFRA21-1)对肺腺癌诊断价值的差异。方法肺腺癌组和健康对照组各71例,按性别、年龄配对,采用SELDI-TOF-MS检测血清蛋白质质谱,筛选出血清肺腺癌标志蛋白。采用化学发光法检测血清CYFRA21-1、CEA、CA125和NSE水平。并比较联合检测对肺腺癌的诊断价值。结果①SELDI-TOF-MS检测结果:肺腺癌组有5个蛋白质峰明显呈高表达,该5个峰的相对分子质量分别为4047.79±1.60、4203.99±1.91、4959.81±2.13、5329.30±2.55和7760.12±4.11。②肺腺癌组血清CEA、CA125、NSE和CYFRA21-1水平分别为(54.38±12.79)μg/L、(130.45±54.36)mg/L、(16.85±4.65)μg/L和(23.45±5.75)μg/L,均显著高于健康对照组[(5.26±1.74)μg/L、(21.01±8.1 6)mg/L、(8.53±3.08)μg/L和(2.48±1.23)μg/L,P值均<0.05]。③5个蛋白质峰联合检测中,以3项指标阳性对肺腺癌的诊断效率最高(灵敏性、特异性分别为92.96%、90.14%);CEA、CAl25、NSE和CYFRA21-1联合检测中,2项指标阳性对肺腺癌的诊断效率较高(灵敏性、特异性分别为63.38%、56.34%)。结论SELDI-TOF-MS技术是一种快速、简便易行且高通量的分析方法,可直接筛选出相对特异的肿瘤标志蛋白,与传统肿瘤标志物相比,更利于肺腺癌早期诊断和筛查。     

蛋白质组学在上皮性卵巢癌的研究进展

蛋白质组学从整体上,全面、动态、定量地分析正常及肿瘤标本中蛋白质种类和数量的改变,有助于阐明肿瘤相关蛋白质间的调控网络。卵巢癌是女性生殖器官恶性肿瘤中首位的致死性疾病,但卵巢位置隐匿,卵巢癌早期往往没有特异性症状,而现有的卵巢癌肿瘤标志物用于卵巢癌诊断价值有限,导致70%~75%的卵巢癌确诊时已是晚期,5年存活率低于30%,严重危害妇女健康。而蛋白质组学对上皮性卵巢癌具有广阔的应用前景,有助于卵巢癌的诊断、治疗等。     

食管粘膜下鳞状细胞癌的组织发生学观察

观察了１２例粘膜完整的食管鳞状细胞癌的临床病理学特征和组织发生。结果：１２例标本中有６例食管粘膜上皮为单纯增生，５例为不典型增生，１例为原位癌。这些病变与粘膜下的浸润性鳞癌无任何过渡关系。在９例标本中发现食管粘膜固有层及粘膜下层腺体有单纯增生、鳞状上皮化生和不典型增生，并可见不典型增生向鳞状细胞癌过渡的现象。结果提示：食管鳞状细胞癌不仅可起源于粘膜上皮，而且还可能来自食管腺。     

高迁移率蛋白B1和血管内皮生长因子在人食管鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的 探讨高迁移率蛋白B1(HMGB1)和血管内皮生长因子(VEGF)在人食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义.方法 选择51例食管鳞状细胞癌标本,应用SP免疫组织化学染色法,检测HMGB1和VEGF在人食管鳞状细胞癌组织中的表达,并与临床病理参数的关系进行统计学分析.结果 食管鳞状细胞癌组织中HMGB1、VEGF的表达显著高于正常组织(P<0.05),且与淋巴转移相关(P<0.05),与肿瘤大小、分化程度等无相关性,食管鳞癌中HMGB1与VEGF的表达呈正相关(r=0.476,P<0.05).结论 HMGB1和VEGF的表达与食管癌患者的淋巴结转移相关,可作为判断预后的观测指标. Abstract： Objective To investigate the expression and clinicopathological significance of high mobility group box 1 (HMGB1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in esophagus squamous cell carcinoma. Methods The immunohistochemical S-P method was used to detect the expressions of HMGB1 and VEGF in 51 esophagus squamous cell carcinoma tissues and 12 normal tissues, and to study the significance of expression of HMGB1 and VEGF protein.Results HMGB1 and VEGF expressions were closely correlated with lymph node metastasis(P<0.05),but not with tumor size,The expression of HMB1 was related with VEGF (r=0.476,P<0.05).Conclusions HMGB1 and VEGF are closely correlated with lymph node metastasis,the expression may become predictor to the prognosis of esophagus squamous cell carcinoma.     

金属硫蛋白在食管鳞癌中的表达及其与增殖凋亡的关系

目的:探讨金属硫蛋白在食管鳞癌中的表达及其与癌细胞增殖、凋亡的关系。方法:采用免疫组化法检测92例食管鳞癌组织中的金属硫蛋白(MT)、增殖细胞核相关抗原(Ki-67抗原)的表达,并用TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果:92例食管鳞癌标本中65例MT呈阳性表达,阳性率为70.6%,明显高于正常食管粘膜上皮组织(3/20,P<0.01);MT表达与食管鳞癌患者年龄、性别、浸润深度及病变长度无关,而与组织分化程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关,MT与Ki-67抗原表达强度呈正相关,Pearson列联系数=0.227(P<0.05)。随MT表达强度的增加,癌组织凋亡指数逐渐降低。结论:MT表达与食管鳞癌的发生、发展密切相关,MT能促进癌细胞增殖,抑制细胞凋亡,可作为食管鳞癌治疗的新靶点。     

食管鳞癌患者组织和血清中VEGF-C的表达

目的:检测食管鳞癌患者组织和血清中VEGF-C的表达,探讨其在判断淋巴结转移中的作用.方法:62例食管鳞癌患者和10例正常人的血清,用酶联免疫吸附法检测血清中VEGF-C的含量,用免疫组织化学法检测食管癌组织中VEGF-C的表达,并进行ROC曲线分析.结果:食管鳞癌组织中VEGF-C在有淋巴结转移者的阳性表达率高于无转移者(P=0.015),肿瘤浸润深度T3者阳性表达率高于T1-2者(P=0.039);组织学检查诊断淋巴结转移的灵敏度为55.5%,特异性为76.1%,准确率为67.8%.食管鳞癌患者血清VEGF-C的水平高于正常人(P＜0.0001),有淋巴结转移者高于无转移者(P＜0.0001),肿瘤浸润深度T3者高于T1-2者(P=0.009);如果血清VEGF-C水平以2 474.5 ng/L为界值,则诊断淋巴结转移的灵敏度和特异性分别为85.0%和73.8%,准确率77.4%.结论:血清VEGF-C检测是判断食管鳞癌淋巴结转移的可靠标志物.     

食管鳞癌增殖细胞核抗原表达178例分析

目的：增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）是一反映细胞增殖的指标。本文旨在探讨不同分化程度的食管鳞癌中ＰＣＮＡ的表达及其在预后上的意义。方法：用免疫组化ＬＳＡＢ方法研究１７８例不同分化的食管鳞癌中ＰＣＮＡ的表达情况，用卡方检验及Ｐｅａｒｓｏｎ相关系数方法检验肿瘤的分化程度与ＰＣＮＡ阳性表达的关系。结果：ＰＣＮＡ的高表达（阳性细胞＞５０％）分别为Ⅰ级７／３６，Ⅱ级３１／７４，Ⅲ级４１／６８。表明食管鳞癌的组织分化程度（Ⅰ～Ⅲ级）与ＰＣＮＡ的阳性表达（＋～）有正相关关系存在（χ２＝２２．８９８，Ｐ＜０．００５），但属低度相关（Ｐｒ＝０．３３８）。结论：ＰＣＮＡ免疫组化标记是反映肿瘤细胞分化程度的客观指标之一，能客观反映食管鳞癌肿瘤细胞的增殖活性。     

基于激光解析/离子化飞行时间质谱技术的中药龟甲胶蛋白质组分析

目的对传统中药龟甲胶蛋白质、肽成分进行组蛋白质组分析。方法采用饱和硫酸胺沉淀,透析脱盐法获得龟甲胶蛋白质成分,美国Ciphergen Biosystems Inc.ProteinChip Biology System(PBSⅡ )及配套的NP10芯片、激光解析/离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF MS,Surface enhanced laser desorption/ionization time-of-flightmass spectro metry)技术,分析了龟甲胶1 500～13 000 Da区间蛋白质、肽分布及其分子量。结果龟甲胶蛋白质/肽质量1 500～3 000区间显示1个分子量峰;4 800～5 400显示3个分子量峰,其中相对分子量分别相差410.8、151.7;8 000～8 600区间显示1个分子量峰;10 000～13 000区间显示1个分子量峰。共获得6个肽分子量峰。结论通过分析,可以形成龟甲胶蛋白质/肽成分质量指纹图,可作为龟甲胶数字化质控标准;并为进一步分离、纯化及验证龟甲胶功能相关活性蛋白质/肽成分打下基础。     

转录调节因子Ets-1在食管鳞癌的表达及其意义

目的:探讨转录调节因子Ets-1在食管鳞癌组织的表达及其意义。方法:采用免疫组化技术(SP法)检测Ets-1在68例食管鳞癌组织及癌旁组织中的表达。结果:Ets-1在食管癌肿瘤组织高表达,远高于癌旁组织(P<0.005);Ets-1在肿瘤组织阳性表达率在不同病理分级、TNM分期各组中,差异均有统计学意义(P<0.05~P<0.01),而且Ets-1阳性表达率与病理分级、淋巴结转移和TNM分期均呈正相关关系(P<0.05~P<0.01)。未发现Ets-1在食管癌肿瘤组织的阳性表达率与病理类型有关(P>0.05)。结论:Ets-1在食管癌组织高表达,并与病理学分级、淋巴结转移及TNM分期有关。     

Foxp3与突变型p53在食管鳞癌中的表达及意义

目的探讨Foxp3和突变型p53在食管鳞癌中的表达及其意义。方法利用免疫组织化学方法对83例食管鳞癌患者的肿瘤组织标本进行Foxp3和突变型p53蛋白检测,并采用配对t检验和K-W检型对两种蛋白检测结果进行统计学分析。结果 83例食管鳞癌患者的肿瘤组织中,Foxp3和突变型p53蛋白的阳性表达率分别为59.04%、61.45%。性别和年龄方面,Foxp3和突变型p53表达差异无统计学意义(P>0.05);Foxp3和突变型p53的表达与肿瘤分化程度,浸润深度和淋巴结转移有关(P<0.01);Foxp3和突变型p53的表达呈负相关(r=-0.474,P<0.01)。结论 Foxp3和突变型p53的表达与不良预后关系密切,可能是预后不良的预测因子。     

子宫颈鳞癌组织中基质金属蛋白酶9表达的意义

目的:探讨基质金属蛋白酶MMP-9与宫颈鳞癌的发生、发展及转移的关系.方法:免疫组化SP法测定MMP-9的表达及分布;明胶酶谱法测定活性型MMP-9蛋白的含量;RT-PCR技术检测MMP-9 mRNA表达水平.结果:在宫颈鳞状上皮癌(SCC)组织和高度鳞状上皮内损害(HSIL)中MMP-9蛋白的表达量均高于低度鳞状上皮内损害(LSIL) (P＜0.05);宫颈SCC组织中淋巴结转移组MMP-9的阳性率为78.3%,高于无淋巴结转移组63.3% (P＜0.01);MMP-9的表达在不同的病理分级与临床分期之间差异无统计学意义. 而SCC和HSIL中的MMP-9酶活性均高于LSIL (P＜0.01). 而SCC和HSIL中的MMP-9 mRNA的表达情况亦与上述结果相似.结论:MMP-9与宫颈SCC的早期浸润及转移有关,MMP-9表达量的增高,尤其是其酶活性的增高有助于正确评估患者预后和制定适当的临床治疗方案.