高质量植物基因组DNA的分离

为了从富含多酚和我糖的药用植物组织中分离出高质量基因组DNA,本文通过改良几种已经存在的分离方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。使用该方法从人参、西洋参及三七的新鲜或干燥根组织分离DNA时,A260/A280为1.8左右,分子量大小约为21.2kb,由此所得的DNA可直接用于AFLP分析,即用EcoR I/Mse I消化DNA后,用DNA的限制酶切片段经T4 DNA连接酶连接,再用巢式PCR扩增,构建出可重复的、多态性丰富的人参、西洋参、三七基因组DNA AFLP指纹图谱。结果表明,该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量和高分子量DNA,此法亦有望用于其它植物DNA的分离。     

泰山白花丹参干叶片高质量DNA的提取

目的为了从富含多酚和多糖的泰山白花丹参干叶片中分离出适用于AFLP分析的高质量基因组DNA。方法比较了4种DNA提取方法,获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。CTAB-freeBuffer清洗,4倍CTAB抽提和固体PVP和VC防止氧化。结果使用该方法从泰山白花丹参干叶片中分离的DNAA260/A280为1.86,由此法所得的DNA可直接用于AFLP分析。结论该技术可有效地从富含多酚和多糖的药用植物组织中分离出高质量DNA。     

高质量的丹参叶片DNA的提取方法研究

目的从富含多酚和多糖的泰山白花丹参干叶片中分离出适用于AFLP分析的高质量基因组DNA。方法比较4种DNA提取方法，获得了一种以CTAB法为基础的分离高质量完整DNA的简便、快速方法。此法包括：CTAB-free buffer清洗，4倍CFAB抽提和固体PVP和Vc防止氧化。结果使用该方法从泰山白花丹参干叶片中分离的DNA OD260／OD280为1．86，由此法所得的DNA可直接用于AFLP分析。结论该技术可有效地从富含多酚和多糖的药周植物组织中分离出高质量DNA。     

改良SDS法快速提取赤芍干叶片DNA的研究

目的 从富含多糖和小分子杂质的赤芍干叶片中快速分离出适用于各生物技术分析的高质量基因组DNA,为赤芍的鉴定研究提供实验基础。方法 以常规的SDS法为基础,进一步优化DNA提取各步骤,获得了一种快速可行的提取高质量赤芍干叶片DNA的方法。结果 使用该方法从4个不同产地的赤芍干叶片中分离的DNA A_260/A280分别为1.90、1.88、1.91、1.93,所需时间均小于2.5 h,所得DNA分别直接用于PCR分析,结果满意。结论 该方法用于提取赤芍干叶片DNA快速可行,可有效地从富含多糖和小分子杂质的组织中分离出高质量DNA,方法简便、快速,成本低。     

人参与西洋参(Ⅰ)

综述01西洋参提取物CVT一E001的化学和药理学标准 〔英〕/专利,7402西洋参多糖5一2的分离、理化性质和生物活性 研究己中刀论文,3栽培、组织培养和鉴别03人参不同栽培群体(包括一西洋参种)遗传关系 的随机扩增多态DNA分析〔中〕/论文,404西洋参营养特点的研究Vn:氮肥施用方法对西 洋参产量的影响〔中〕/论文,305西洋参营养特点的研究u:西洋参硝酸还原酶 的研究〔中〕/论文,206人参(包括西洋参)愈伤组织的培养〔日〕/专利, 607可产生人参皂普的西洋参愈伤组织〔日〕/专利, ll08Ri质粒转化的西洋参的研究l:西洋参毛状根 培养系统的建立与…     

介绍一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的改良方法

目的 建立一种快速提取胎鼠基因组DNA进行基因型分析的简便方法.方法 先对胎鼠组织进行碱裂解,然后通过盐析纯化DNA,经琼脂糖凝胶电泳判断DNA大小,检测A260/A280的比值判断其纯度,最后将抽提的DNA进行PCR扩增和基因型分析,检测其作为PCR模板的稳定性.结果 在2h内能分离到胎鼠基因组DNA,片段完整没有明显的降解现象,A260/A280比值＞1.77,能稳定用于PCR基因型鉴定分析.结论 该方法简便、快速、经济,能得到PCR级的高质量胎鼠基因组DNA,为准确和快速地进行胎鼠的基因型分析提供保证,具有很好的稳定性、可靠性和实用性.     

西洋参与胡萝卜体细胞融合愈伤组织中有效成分分析

目的:测定西洋参和胡萝卜体细胞融合培养愈伤组织中有效成分多糖和人参皂苷Rb1含量。方法:用比色法和HPLC法分别测定西洋参和胡萝卜体细胞融合培养愈伤组织中多糖和人参皂苷Rb1含量。结果:10个西洋参和胡萝卜体细胞融合杂交体中均含有多糖,其中有7个杂交体的多糖含量高于胡萝卜愈伤组织;有6个杂交体的人参皂苷Rb1含量高于原西洋参愈伤组织。结论:可利用远缘杂交优势,筛选和获得有效成分含量高的杂交新品种。     

西洋参总皂苷乙酸水解产物的化学成分研究(Ⅰ)

目的 研究西洋参总皂苷乙酸水解产物的化学成分。方法 采用溶剂萃取、硅胶柱色谱及制备型HPLC色谱方法分离纯化西洋参总皂苷乙酸水解产物,通过化学和波谱技术鉴定化合物的结构。结果 从西洋参总皂苷乙酸水解产物中分离得到11个化合物,分别为人参皂苷-Rk1(Ⅰ)、人参皂苷-Rs6(Ⅱ)、人参皂苷-Rs7(Ⅲ)、人参皂苷-Rk2(Ⅳ)、异人参皂苷-Rh3(Ⅴ)、3-O-β-D-glucopyranosyl(1→2)-glucopyransyl-3β, 12β, 20(S)-trihydroxy-25-hydroperoxy-dammar-23(E)-ene(Ⅵ)、三七皂苷B1(Ⅶ)、20(S)-人参皂苷-Rh1(Ⅷ)、20(R)-人参皂苷-Rh1(Ⅸ)、拟人参皂苷-F11(Ⅹ)、6-O-β-D-(6′-acetyl)-glucopyranosyl-24-ene-dammar-3β, 6α, 12β, 20S-tetraol(Ⅺ)。结论化合物Ⅰ～Ⅲ、Ⅴ～Ⅶ和Ⅹ为首次从西洋参水解产物中分得。     

三七花及其易混淆品HPLC指纹图谱鉴别研究

目的:对三七花、人参花、西洋参花进行指纹图谱研究。方法:反相C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-水梯度洗脱,检测波长203 nm;流速1.0 mL·min~(-1);柱温:25℃;进样量:20μL;分析时间:95 min。结果:三种花的皂苷类成分均得到很好分离,构建了指纹图谱共有模式,并依据峰面积和保留时间进行了比较。西洋参花和三七花中皂苷Rb_2和Rb_3的峰面积比值有着很明显的差异,人参花中有独有峰Rg_1,三七花中独有峰Rb_1。结论:该方法简便、重复性好、特征性强,可用于鉴别三七花、人参花、西洋参花。     

从人血凝块中提取基因组DNA

目的从人血凝块中提取基因组DNA。方法室温自然解冻,机械磨碎,高盐、高EDTA提取液处理,消化液消化,酚氯仿抽提。结果用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA,提取的DNA浓度为:(32±10)mg/L,且光吸收比值A260/A280>1.8。结论用改良法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的用于血凝块基因组DNA的提取。     

人源细粒棘球蚴的RAPD分析体系建立

目的建立PCR—RAPD反应体系，提升细粒棘球蚴随机扩增多态性DNA（RAPD）遗传多态性研究的稳定性，为研究细粒棘球蚴的分类学以及包虫病的分子流行病学奠定基础。方法采用改进的酚-氯仿抽提法提取细粒棘球蚴基因组DNA，用单因素筛选方法建立PCR—RAPD分析体系。结果采用改进的酚／氯仿抽提方法提取细粒棘球蚴基因组DNA质量高，适用于PCR—RAPD扩增分析；在25μL体系中，RAPD—PCR扩增反应各成分的最佳浓度为：dNTP0．2—0．3mmol／L、Taq酶2．5U、随机引物0．8—1．4μmol／L，模板为60ng。PCR扩增最佳条件为：95℃预变性5min；94℃变性30s、32℃退火45s、72℃延伸1min、共35个循环；最后72℃延伸10min；初步从20条引物中筛选出11条带型丰富的随机引物。结论酚-氯仿适用于提取细粒棘球蚴基因组DNA，优化的RAPD反应体系和筛选出的随机引物适合进行细粒棘球蚴RAPD遗传多态性分析。     

干血滤纸片试剂盒和水煮法提取间日疟原虫DNA用于PCR检测的比较

目的：比较水煮法和干血滤纸片基因组DNA分离试剂盒提取间日疟原虫DNA用于PCR检测及克隆研究的差异。方法：采集间日疟患者末梢血制备干血滤纸片,分别用水煮法和QIAamp DNAmini kit试剂盒提取间日疟原虫基因组DNA10份。PCR扩增LDH基因,并克隆质粒pGEM-PvLDH。分析比较2种提取方法的差异。结果：水煮法和试剂盒法提取的间日疟原虫gDNA,均扩增出LDH基因特异条带,但试剂盒提取的gDNA目的条带亮于水煮法。结论：水煮法操作简便、快速、经济,在等量血源条件下,所得DNA量较少、纯度较低;试剂盒提取可获得较高的得率,在定量检测和复合扩增时受到的影响因素较少,成功率较高。     

天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的：改良常用的植物DNA提取的CTAB，SDS法，以有效去除天麻多糖类杂质。方法：用CTAB法提取天麻鲜品不同部位（块茎、花序轴和胚芽）DNA；用生理盐水浸泡天麻干品之后，在应用CTAB，SDS法提取天麻干品的DNA；通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应（PCR）扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果：提取了44份天麻样本DNA，用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA，成功地用于PCR扩增，并通过DNA测序进一步鉴定；应用改良的CTAB，SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增，但DNA测序未成功。结论：用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析，而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想；改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA。提取的DNA可用于基因扩增。     

广地龙特异性引物序列的设计及其混伪品的鉴别

目的?通过设计特异性引物来鉴定广地龙及其混伪品。方法?提取广地龙及其混伪品的DNA。利用通用引物COⅠ序列对广地龙及其混伪品进行PCR扩增,并对扩增产物进行双向测序。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,找出广地龙的变异位点,设计出广地龙的特异性引物,用于广地龙及其混伪品的鉴定。对PCR反应条件退火温度、循环次数、DNA模板量和Taq酶用量进行适应性考察。结果?COⅠ序列不存在特异性,不同物种、不同品种的动物药均可扩增出750?bp大小的片段,无法鉴定广地龙及其混伪品。通过比对广地龙及其混伪品的COⅠ序列,设计出广地龙的特异性引物PA-f/PA-r。在建立的PCR反应体系中,只有广地龙可以获得574?bp的基因片段,其他混伪品未扩增出相应条带。结论?设计的广地龙特异性引物可以准确、成功鉴别广地龙,与其他混伪品区分,为广地龙的品种鉴别提供了有效的方法。      

金黄色葡萄球菌nuc基因特异性核酸探针的制备及应用

目的　建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法　将重组质粒pGEM NUC中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果　核酸探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌等其他细菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交检测的灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 32 2份SPF小鼠的临床样品进行了检测 ,检出率为 3 1% (10 /32 2 ) ,符合率为 10 0 % ,与细菌学检查的结果相一致。结论　建立的DNA探针检测金黄色葡萄球菌方法具有高度的特异性和敏感性 ,且较快速 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的监测。     

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA（RAPD）的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠（SDS）法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。     

基于双重PCR技术的鹿茸及其伪品DNA指纹特征和鉴定

目的：分析鹿茸线粒体细胞色素b （Cytb）和细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ（COⅠ）基因特异性,建立双重PCR技术鉴别鹿茸真伪的分子指纹特征。方法：利用碱变性法提取梅花鹿茸、马鹿茸、驯鹿茸和新西兰鹿茸的基因组DNA,应用引物设计软件Premier 5.0针对Cytb和COⅠ分别设计特异性引物（分别为Cytb1、2和COⅠ1、2、3）,采用单一及双重引物分别进行PCR扩增,筛选特异性强的引物,确定最佳PCR反应条件。结果：采用碱变性法提取的鹿茸基因组DNA片段长度为23 000bp,DNA纯度即A （260）/A （280）为1.80±0.02;应用单一引物进行PCR扩增无法鉴定鹿茸的真伪,而引物Cytb 1和COⅠ1组合后,解链温度为58℃时,梅花鹿茸（吉林、安徽）、马鹿茸均能扩增出395和525bp大小的2个片段,而驯鹿茸和新西兰鹿茸均未能扩增出相应片段;采用该提取方法及最优化的PCR反应条件,对市售样品进行检测,检测结果与实际情况完全一致。结论：双重PCR技术可从分子水平鉴别鹿茸的真伪,该方法特异性高、实用性强,且简便快捷,在鹿茸真伪鉴别方面具有较高的应用价值。     

恶性疟原虫核糖体小亚基rRNA部分基因片段的克隆及序列分析

目的了解我国恶性疟原虫云南地理株核糖体小亚基rDNA的核苷酸序列。方法根据已知恶性疟原虫核糖体小亚基rDNA序列．在其基因的中下游分别设计引物,采用聚合酶链式反应（PCR）技术,从云南省来源的恶性疟体外培养原虫的基因组DNA中扩增出的基因片段酶切后将其插入pUC118／119载体,用Biosystems373ADNA序列分析仪测定。结果我国恶性疟原虫云南地理株核糖体小亚基rDNA核苷酸序列,与巴西IMTM22／7G8株的序列比较,在该基困的第1563位有一个A被T替换。结论该突变点位于真核生物核糖作小亚基rRNA基因已知序列种类的第三个可变区域内。