hTERT启动子调控的CD：UPRT／5-FC自杀基因对人胃癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的：研究人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子调控的胞嘧啶脱氨酶：尿嘧啶磷酸核糖转移酶／5-氟胞嘧啶（CD：UPRT／5-FC）融合自杀基因系统在体内对人胃癌SGC7901细胞的杀伤作用。方法：构建胃癌皮下移植瘤模型,随机分成3组处理。观察30天,测量肿瘤体积,计算抑瘤率。肿瘤组织做常规病理检查,免疫组化检测CD蛋白的表达。结果：成功构建胃癌皮下移植瘤模型。治疗30天后,B组（瘤内注射hTERT—CD：UPRT＋腹腔注射PBS）和c组（单纯腹腔注射PBS）的肿瘤生长迅速,肿瘤体积分别为（2．72±0．35）cm’、（2．67-＇i-0．30）tin’,A组（瘤内注射hTERT—CD：UPRT＋腹腔注射5-Fc）的肿瘤生长受到明显抑制,第30天体积为（1．10±0．13）cm’,与前两组相比差异有统计学意义（P〈0．05）,其抑瘤率为59．6％。裸鼠移植瘤病理切片镜检,A组可见大量肿瘤细胞排列稀疏,部分肿瘤细胞核固缩、核碎裂;B组和C组则见大量肿瘤细胞排列紧密,细胞形态和细胞核呈多形性,核大深染,核分裂像多见。免疫组化显示,A组和B组可见CD的表达,C组cD表达呈阴性。结论：hTERT启动子调控的cD：UPRT／5-FC融合自杀基因系统对裸鼠胃癌皮下移植瘤有显著的杀伤作用,为胃癌的基因治疗提供了-种可能的方法。     

融合自杀基因对鼻咽癌细胞的体内杀伤作用

[目的]研究融合自杀基因对鼻咽癌细胞的体内杀伤作用.[方法]培养鼻咽癌CNE-2细胞,建立裸鼠荷瘤模型.随机分为6组,每组5只,A组:脂质体包裹质粒瘤内注射瘤内组;B组:脂质体包裹质粒瘤内注射+肿瘤局部照射γ射线(总剂量9Gy)组;C组:脂质体包裹质粒瘤内注射+腹腔注射5氟胞嘧啶(5-Fc)组;D组:脂质体包裹质粒瘤内注射+肿瘤局部照射γ射线(总剂量9Gy)+腹腔注射5-Fc组;E组:肿瘤局部照射γ射线(总剂量9Gy)+腹腔注射5-Fc,以及空白对照组.记录肿瘤体积变化;计算各组肿瘤抑制率,绘制肿瘤生长曲线;取肿瘤组织进行病理观察;鉴定肿瘤组织中CD/UPRT.UL49基因.肿瘤体积变化的比较采用单向方差分析,组间多重比较采用LSD法.[结果]成功建立鼻咽癌裸鼠荷瘤模型,生长曲线显示:5组瘤体积差异有统计学意义(F=720.684,P＜0.01),测序结果证实,除E组外,其余各处理组均检测到目的基因,且Western blot检测结果示:B和D组肿瘤组织内自杀基因的表达高于其余各组.病理切片证实肿块为低分化鳞癌,其中D组肿瘤组织在干预作用下出现明显坏死.[结论] E6.BARF1p.CD/UPRT.UL49自杀基因载体联合前药5-Fc在放射线的作用下,可明显抑制鼻咽癌移植瘤的生长,转染该融合自杀基因可增强放疗敏感性,为鼻咽癌的基因—放射治疗开辟了新思路.     

Ad-KDR-CDglyTK双自杀基因系统对荷瘤鼠胃癌体内抑制实验

目的:探讨KDR启动子驱动双自杀基因体系对荷瘤鼠胃癌的体内抑瘤作用.方法:建立胃癌移植瘤动物模型,当肿瘤直径达0.5 cm时,随机分为A组:空白对照,不施加任何处理;B组:注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK与前药5-FC和GCV;C组:仅注射重组腺病毒AdKDR-CDglyTK;D组:仅注射前药5-FC和GCV.治疗过程中绘制肿瘤生长曲线,观察该治疗体系的体内抑瘤效应;通过RT-PCR检测肿瘤组织内融合基因的表达;采用免疫组化行微血管密度检查.结果:接种肿瘤细胞后13d,裸鼠出现右臀区皮下瘤结节.治疗结束后A、B、C、D组间瘤质量差异有统计学意义(F=12 727.42,P=0.000),B组明显缩小.重组腺病毒转基因荷瘤鼠胃癌组织内可检测到CDglyTK融合基因产物的表达.肿瘤组织的MVD值在A、B、C、D组之间差异有统计学意义,F=27.04,P=0.000.结论:KDR启动子驱动双自杀基因体系对裸鼠皮下移植瘤有明显的抑瘤作用,表现为肿瘤的生长抑制和瘤体微血管密度减少等.     

Exosomes联合卡介苗的体内抗肿瘤效应

目的: 探讨细胞因子诱导杀伤细胞(cytokineinduced killer cell,CIK)对裸鼠胃癌移植瘤的靶向抑制作用。方法:将人胃癌细胞SGC7901注射到裸鼠腹股沟皮下建立胃癌移植瘤裸鼠模型,荷瘤裸鼠随机分为CIK细胞组与成纤维细胞组,分别注射荧光染料SPDiI标记的CIK细胞与成纤维细胞(HFLI)于裸鼠种植瘤对侧腹股沟皮下, 观察其在荷胃癌裸鼠体内各种组织中的分布情况;同时观察CIK治疗后肿瘤的体积大小并计算抑瘤率,病理观察肿瘤的坏死面积。结果: SPDiI标记的CIK细胞注射后10 d主要浓集在荷瘤裸鼠的肿瘤组织,注射局部、肝脏、脾脏和肺脏组织中无CIK细胞或分布极少（P＜001）;标记的成纤维细胞没有出现在肿瘤组织、肝脏、脾脏和肺脏组织,主要集中于注射局部。CIK细胞治疗后裸鼠的移植瘤体积显著小于对照组（P＜0.05）,其抑瘤率为29.82％;移植瘤组织坏死面积评分显著高于对照组（P＜0.01）。结论: CIK细胞对裸鼠胃癌移植瘤有良好的靶向性和杀伤性。     

肺腺癌组织特异性自杀基因治疗实验研究

目的 探讨肺腺癌组织特异性自杀基因治疗的安全性及有效性。方法 采用病毒感染法，将癌胚抗原(CEA)基因启动子所驱动的CD基因的组织特异性逆转录病毒载体(G1CEACDNa)，导入分泌CEA的肺腺癌细胞系A549细胞．研究裸鼠体内抑瘤效果；应用重组逆转录病毒裸鼠体内治疗A549肿瘤，观察G1CEACDNa／5-氟胞嘧啶(5-FC)对A549细胞致瘤裸鼠的治疗作用及毒副反应。结果 (1)将转基因的A549细胞和未转基因的A549细胞接种至裸鼠皮下．两者成瘤性无明显差异；(2)在转基因细胞致瘤裸鼠实验中，5-FC对转CEA启动子调控自杀基因的肿瘤生长具有明显的抑制作用；(3)将G1CEACDNa重组逆转录病毒上清直接注射到裸鼠成瘤部位．然后腹腔内注射5-FC同样获得明显的抑瘤效果；(4)与直接注射5-FU相比，组织特异性自杀基因治疗对骨髓的抑制明显降低。结论 组织特异性自杀基因治疗可能成为肿瘤治疗个体化的重要方法之一。     

脂质体-c-erbB-2反义寡核苷酸对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

目的　探讨c erbB 2反义寡脱氧核苷酸 (ASODN )对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法　将 15只裸鼠建立人卵巢癌皮下移植瘤模型 ,然后随机分成 3组予以不同条件处理 :对照组 (腹腔注射转染液和脂质体 ) ,正义治疗组 (腹腔注射脂质体 c erbB 2 -SODN ) ,反义治疗组 (腹腔注射脂质体 c erbB 2 -ASODN )。治疗期间定期观测裸鼠体重和肿瘤体积 ,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。利用RT -PCR技术比较治疗后各组肿瘤组织中c erbB 2基因水平。结果　反义治疗组与正义治疗组的抑瘤率分别为 71.2 %和 7.6% ,反义治疗组肿瘤缩小率为 2 2 .7% ,与正义治疗组相比较有显著性差异。各组裸鼠体重变化无明显差异。RT -PCR结果显示反义治疗组c erbB 2表达水平降低约 61.0 %。结论　脂质体 c erbB 2 -ASODN对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤有一定的治疗作用 ,可能成为日后卵巢癌基因治疗的重要途径。     

组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移的疗效

目的:探讨组织特异性胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶(cytisine deaminase/5-fluorocytosine,CD/5-FC)系统热化疗对结肠癌肝转移裸鼠模型的治疗作用.方法:将含CEA启动子调控CD基因表达的逆转录病毒载体进行扩增、纯化、包装,并收集病毒上清.45只裸鼠经门静脉注射人结肠癌LoVo细胞,成瘤后2 d腹腔注射病毒上清(0.2 ml/次,每天1次,共5 d).随机分为对照组、常温化疗组和热化疗组,分别经腹腔注射生理盐水、室温前药5-FC和43℃前药5-FC[均为500 mg/(kg·d)]进行治疗.治疗21 d后处死裸鼠,观察肝脏转移率和转移结节数,RT-PCR检测CD基因在肿瘤组织的表达,光镜及电镜下观察肿瘤病理学的变化.结果:病毒滴度为5.6×106CFU/L.CD基因在移植瘤组织中有效表达.热化疗组的肝转移率与转移结节数均低于常温化疗组[13.3%vs 40.0%,(0.20±0.56)个vs(0.80±1.01)个;均P＜0.05].光镜下见对照组肝转移瘤组织细胞生长活跃,热化疗组较化疗组肝转移瘤细胞生长受抑制更明显.电镜下见化疗组、热化疗组肝转移瘤细胞有不同程度的凋亡改变.结论:组织特异性CD/5-FC系统热化疗对裸鼠结肠癌肝转移瘤有明显的抑制作用.     

慢病毒RNA干扰E2F-1对人胃癌裸鼠皮下瘤耐药性的影响

目的 观察E2F-1基因沉默的慢病毒载体E2F-1/RNAi-LV对人胃癌裸鼠皮下瘤耐药性的影响.方法 将人胃癌SGC7901-顺铂(DDP)耐药细胞接种于裸鼠皮下,建立人胃癌耐药裸鼠皮下瘤模型.将成瘤的36只裸鼠随机分为E2F-1/RNAi-LV组、LV-scrRNAi组和PBS组,每组12只.隔日向3组裸鼠肿瘤内分别注射E2F-1/RNAi-LV、LV-scrRNAi或PBS,并按体重腹腔注射DDP,共9次.注射期间和处死裸鼠后测量各组裸鼠的肿瘤体积.应用TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡指数,应用半定量RT-PCR和Western blot法检测肿瘤组织中E2F-1、c-Myc、survivin、多药耐药基因1(MDR1)和多药耐药相关蛋白(MRP) mRNA和蛋白的表达.结果 注射慢病毒后,E2F-1/RNAi-LV组肿瘤的生长速度明显减慢.处死裸鼠后,E2F-1/RNAi-LV组裸鼠的肿瘤体积为(745.13±154.42)mm3,明显低于LV-scrRNAi组[(1988.80±171.35) mm3]和PBS组[(1633.48±215.25) mm3,P＜0.05].E2F-1/RNAi-LV组肿瘤组织的凋亡指数为(27.5±9.7)％,明显高于LV-scrRNAi组[(7.0±1.1)％]和PBS组[(7.3±1.2)％,P＜0.05].E2F-1/RNAi-LV组肿瘤组织中E2F-1 mRNA和蛋白的表达量分别为0.40±0.32和0.35±0.01,明显低于LV-scrRNAi组和PBS组(P＜0.05).E2F-1/RNAi-LV组c-Myc、survivin、MDR1和MRP mRNA和蛋白的表达量亦明显低于LV-scrRNAi组和PBS组(均P＜0.05).结论 慢病毒载体E2F-1/RNAi-LV瘤内注射可降低人胃癌SGC7901-DDP耐药细胞对DDP的耐药性,抑制人胃癌耐药裸鼠皮下瘤的生长.     

siRNA抑制胃腺癌VEGF-C表达和淋巴管生成

目的 研究瘤内注射VEGF-C siRNA抑制胃癌移植瘤VEGF-C表达和肿瘤淋巴管生成的有效性.方法 建立裸鼠胃癌皮下移植瘤模型随机分为4组:VEGF-C sLRNA脂质体混合液组、单脂质体组、单siRNA组和PBS组,对肿瘤进行原位注射干预,记录各实验组肿瘤体积变化,免疫组织化学法检测各实验组肿瘤组织VEGF-C的表达,并通过抗人CD31和抗人LYVE-1单克隆抗体检测瘤体内血管和淋巴管生成情况.结果 免疫组化显示干扰组肿瘤细胞VEGF-C染色减弱,和对照组相比VEGF-C表达下调68.3%(P<0.01),而胃癌组织中淋巴管密度(LVD)值干预组和对照组分别为3.2±1.3、9.8±2.7,VEGF-C siRNA干预组LVD值下降至对照组的32.7%(P<0.01),而MVD值无明显差异(P>0.05).结论 瘤内注射VEGF-C siRNA能显著下调肿瘤组织内VEGF-C的表达,有效抑制肿瘤生长和瘤内淋巴管生成,而对肿瘤血管生成无影响.     

仙人掌原液毒性的初步研究

背景与目的： 研究仙人掌原液的毒性。 材料与方法： 小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。 结果： 仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g/kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论： 在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

食管平滑肌瘤10例临床治疗体会

我院１９７５年６月～１９９０年７月共收治食管平滑肌瘤１０例，占同期食管肿瘤总数的０．１９２％（１０／１０９２）。位于食管上段２例，中段５例，下段３例。Ｘ线食管钡餐造影是诊断本病的主要方法。行食管粘膜外肿瘤摘除９例，食管部分切除１例，效果良好。本文就其诊断与手术治疗进行了讨论。     

Assessment of the degree of carcinogenicity of small doses of nitrites

Chronic experiments on CBA and C57B1 mice and acute experiments on CBA mice established: (a) carcinogenic effect of sodium nitrite given continuously with drinking water (0.1; 1.0 and 10.0 maximum allowable concentration) in combination with morpholine fed with bread, and (b) endogenous synthesis of nitrosomorpholine as a result of simultaneous intragastric administration of same doses of sodium nitrite and morpholine. Also, nitrosomorpholine and N-nitrosodimethylamine synthesis was observed in vitro following addition of low-dose sodium nitrite, morpholine and amidopyrine to human gastric juice. Carcinogenic hazard associated with low-dose nitrite consumption in humans is discussed.     

仙人掌原毒性的初步研究

背景与目的:研究仙人掌原液的毒性。材料与方法:小鼠急性毒性试验、Ames试验、小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验、小鼠精子畸形试验、大鼠30 d喂养试验。结果:仙人掌原液雌、雄小鼠LD50均大于20.0 g／kg,属无毒物质;Ames试验、微核试验和精子畸形试验结果均为阴性;大鼠30 d喂养试验结果显示该样品30 d喂养对大鼠各项观察指标未见毒性作用。结论:在本次实验条件下,仙人掌原液为无毒物质,未显示有遗传毒性和亚急性毒性作用。     

中晚期贲门癌148例的外科治疗

目的　总结贲门癌手术治疗影响生存率的因素 ,提供今后工作参考。方法　对 14 8例经手术治疗的贲门癌患者进行术后并发症、绝对生存率的X2 检验。结果　本组切除率为 94.5 9% ,近半胃切除占 72 .14 % ,1、3、5年生存率分别为 67.9%、45 %和 2 4.3 %。病期、外侵程度和淋巴结转移等因素对 5年生存率有显著影响 (P <0 .0 1)。术后并发症以吻合口瘘及肺癌并发症为多见 ,其发生率为 3 .6% ,手术死亡率 1.4%。结论　提高生存率的关键在于早期诊断 ,根治手术和术后积极综合治疗。     

胆囊癌29例分析

目的探索胆囊癌的防治方法。方法分析29例胆囊癌病人临床资料、治疗方法及结果。结果术前诊断明确者21例，剖腹探查发现已属晚期，9例为Ⅳ期行根治术，12例为Ⅴ期未行根治术，均于术后1年内死亡。术前怀疑胆囊癌者5例，剖腹探查冰冻切片证实为Ⅴ期及Ⅳ期者各1例，Ⅴ期未行根治术，Ⅳ期行根治术，均于术后1年内死亡；Ⅲ期者3例，行胆囊癌根治术分别于术后10月、13月、17月死亡。2例术中冰冻切片发现的Ⅱ期胆囊癌，行胆囊癌根治术，分别于术后23月、26月死亡。1例意外胆囊癌属Ⅰ期胆囊癌，术后5年半死亡。结论要减少胆囊癌危害，重在及时治疗胆囊结石。