人不同组织间充质干细胞免疫调控能力的比较

目的 比较人5种不同组织来源间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)免疫调控能力的差异。方法 炎症因子干扰素γ(interferon gamma, IFNγ)和肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha, TNFα)可诱导MSCs高表达吲哚胺-2,3-双加氧酶(indole-amine-2,3-dioxygenase, IDO)和趋化因子,从而抑制抗CD3/CD28抗体激活的T细胞增殖。通过RT-PCR及Western印迹法检测抑制T细胞增殖相关基因表达。使用Cell Tracer Violet的染料对T细胞进行标记,检测其增殖能力变化。同时,使用EdU染色检测MSCs细胞增殖。过程炎症因子刺激后的MSCs与PBMC进行共培养,检测PBMC的增殖情况,同时检测MSCs相关基因表达及其增殖情况。结果 炎症因子刺激的MSCs对抗CD3/28抗体激活的单个核细胞增殖有明显抑制作用,不同组织来源MSCs对单个核细胞增殖的抑制作用无明显区别。结论 与骨髓来源MSCs相比,其他组织来源MSCs对单个核细胞免疫调节作用无明显区别。     

MSCs联合雷帕霉素对异基因鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用

目的探讨体外骨髓间充质干细胞（MSCs）联合雷帕霉素对BALB/c鼠T、B淋巴细胞的免疫调节作用及可能机制。方法从5～6周龄BALB/c鼠骨髓中分离培养MSCs并鉴定其纯度。用EZ SepTM Mouse 1X分离异体BALB/c鼠脾脏淋巴细胞,分别在刀豆蛋白A（ConA）、脂多糖（LPS）刺激下,用MSCs和/或雷帕霉素处理,MTT法检测淋巴细胞的增殖,流式细胞术检测T、B淋巴细胞CD69、CD28和CD86的表达和T淋巴细胞凋亡情况,Real time PCR测定T淋巴细胞IL 10 mRNA、IFN γ mRNA的表达水平。结果MSCs明显抑制T、B淋巴细胞增殖,联合雷帕霉素组抑制作用更加显著（P＜0.01）。MSCs可抑制T淋巴细胞的凋亡,联合雷帕霉素组较单独MSCs组抑制作用更加明显(P＜0.01)。MSCs联合雷帕霉素具有协同促进IFN γ mRNA表达和协同抑制IL 10 mRNA表达的作用。单独MSCs或MSCs联合雷帕霉素对T、B淋巴细胞CD69、CD28和CD86的表达无显著影响。结论MSCs联合雷帕霉素对BALB/c鼠T、B淋巴细胞有免疫负调节作用,可能与协同抑制淋巴细胞增殖、T淋巴细胞凋亡和干预IFN γ mRNA、IL 10 mRNA表达有关。     

人肺来源的间充质干细胞对T淋巴细胞增殖的影响

目的探讨来源于人肺的间充质干细胞(MSCs)是否具有免疫调控能力。方法采用流式细胞术鉴定其免疫表型,用淋巴母细胞转化实验观察其是否具有免疫调控能力。结果①MSCs不表达引起免疫反应的细胞表面分子HLA- DR、CD86、CD80等;②随MSCs细胞量增多,抑制T细胞增殖能力越强。结论人肺来源的间充质干细胞具有免疫调控能力。     

大鼠间充质干细胞对BALB/c小鼠体外淋巴细胞实验的影响

目的 研究大鼠间充质干细胞(MSC)对BALB/c小鼠淋巴细胞增殖和CD4+CD25+调节性T细胞亚群的变化。方法 分离、扩增SD大鼠MSCs,流式细胞术检测表面标志以鉴定。取第5代MSC与分离的小鼠淋巴细胞在刀豆蛋白(ConA)刺激下共培养5天 ,流式细胞仪测定细胞增殖,CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例的变化。结果 当淋巴细胞: MSCs在1:10及1:50时均可抑制ConA刺激下可抑制小鼠淋巴细胞增殖,淋巴细胞: MSCs在1:10 时CD4+CD25+调节性T细胞亚群比例明显升高。结论 大鼠MSC具有异种基因免疫抑制作用     

间充质干细胞对异基因鼠脾淋巴细胞的免疫调节作用

目的:探讨体外间充质干细胞(MSCs)对BALB/c鼠T,B细胞的免疫调节作用及可能机制.方法:从5～6周龄BALB/c鼠骨髓中分离培养MSCs并鉴定其纯度.用EZ-SepTM Mouse 1X分离异体BALB/c鼠脾脏淋巴细胞,分别在刀豆球蛋白A(ConA)、脂多糖(LPS)刺激下,用不同比例MSCs处理,MTT法检测淋巴细胞的增殖,流式细胞术检测T,B细胞CD69,CD28和CD86的表达和凋亡,实时定量PCR测定细胞因子IL-10和IFN-γ的mRNA水平.结果:MSCs明显抑制T,B细胞增殖和T细胞的凋亡,促进IFN-γ、抑制IL-10的mRNA表达(P<0.01),并且随着MSCs数量的增加而更加明显.MSCs对T,B细胞CD69,CD28和CD86的表达无显著影响.结论:MSCs对BALB/c鼠T,B细胞有免疫负调节作用,但机制复杂,可能与协同抑制细胞增殖和凋亡、干预相关细胞因子mRNA的表达有关.     

间充质干细胞抑制T淋巴细胞增殖减轻移植后GVHD机制研究

目的体外培养间充质干细胞(MSCs)并研究其抑制T淋巴细胞增殖减轻移植后移植物抗宿主病(GVHD)的机制。方法采用密度梯度离心法体外培养间充质干细胞,通过免疫细胞化学染色观察其是否表达TGF-β1及HGF,并在与异体T淋巴细胞共培养体系中加入抗-TGF-β1、抗HGF,通过MTT法检测T淋巴细胞增殖活性。结果间充质干细胞与淋巴细胞混合培养后淋巴细胞的增殖活性被明显抑制(P<0.001),免疫细胞化学染色发现间充质干细胞高度表达TGF-β1和HGF,在混合培养体系中加入两种细胞因子的抗体可以使T淋巴细胞的增殖活性恢复到未与间充质细胞共培养前的状态(P>0.05)。结论间充质干细胞分泌TGF-β1与HGF两种细胞因子抑制T淋巴细胞增殖减轻移植后GVHD,且二者具有协同作用。     

胎儿肝脏与骨髓间充质干细胞的分离鉴定

目的：建立胎儿肝脏与骨髓间充质干细胞(MSCs) 的分离培养方法,并对两种来源细胞的生物学特性加以鉴定。方法：取胎龄4或5月水囊引产胎儿肝脏和骨髓,用1.073 g·mL^-1的percoll密度梯度离心分离低密度细胞,MSCs培养基纯化贴壁细胞,用流式细胞术检测其表面标志,成脂肪及成骨诱导鉴定多向分化潜能,对比两种来源的MSCs增殖及生长特征。 结果：胎儿肝脏及胎儿骨髓MSCs CD29、CD44、CD73（SH-3,4）、CD105（SH-2）、CD166、HLA-ABC阳性,CD35、CD45、HLA-DR阴性,均能成脂肪及成骨诱导分化,随MSCs 数量增加,其对外周血T 淋巴细胞转化的抑制作用增强。结论：胎儿肝脏和骨髓中可成功分离MSCs。     

间充质干细胞移植治疗免疫性疾病的研究进展

间充质干细胞（MSCs）是一类具有多向分化潜能和低免疫原性的成体干细胞,具有促进血管形成、保护神经和细胞替代治疗作用,此外,MSCs还具有免疫调节功能,如抑制T细胞增殖和B细胞增殖分化、调节自然杀伤性细胞活性和树突状细胞成熟及功能等。最新研究表明,移植MSCs能有效治疗免疫性疾病如移植物抗宿主病、类风湿性关节炎、糖尿病和多发性硬化症等,文章就MSCs移植治疗免疫相关性疾病的研究进展进行综述。     

人骨髓间充质干细胞对异体外周血T淋巴细胞的抑制作用及机制

目的:探讨骨髓间充质干细胞(MSCs)体外对异体外周血T淋巴细胞的抑制作用及机制.方法:从骨髓中分离培养MSCs,反复贴壁进行纯化;用尼龙棉柱法纯化异体外周血T淋巴细胞;观察MSCs对植物血凝素(PHA)刺激下T淋巴细胞增殖的影响,用ELISA方法检测IFN-γ,IL-4水平变化.结果:MSCs对PHA诱导的T淋巴细胞增殖有抑制作用,并呈剂量依赖性;同时MSCs亦可抑制T淋巴细胞的IFN-γ分泌,但可促进IL-4的分泌.结论:MSCs对异体外周血T淋巴细胞的增殖有抑制作用,其作用可能与其影响T淋巴细胞分泌IFN-γ和IL-4有关.     

人脐血间充质干细胞体外分离、培养与鉴定

目的 建立体外分离和培养人脐血间充质干细胞的方法,并探讨脐血间充质干细胞是否具有与骨髓间充质干细胞相一致的免疫表型.方法 无菌条件下采集正常产胎儿脐血,用相对密度为1.077的淋巴细胞分离液分离脐血间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,UCB-MSCs),采用贴壁培养法获得MSCs,体外培养并对其增殖进行观察.用流式细胞仪检测细胞周期状态和白细胞表面抗原.结果 来源于脐血的MSCs在含有15%胎牛血清和低糖DMEM培养基中可以贴壁,并表现为间充质样细胞;传3代后,此类细胞可以纯化、扩增;其细胞倍增时间为60h左右.流式细胞分析细胞周期显示大部分细胞(85%)处于G0/G1期;此类细胞稳定地表达相关的抗原标记CD29、CD44、CD54、CD105,但不表达造血细胞系的表面标记CD34、CD45.结论 脐血中可培养出非造血干细胞,其白细胞表面抗原表达与骨髓间充质干细胞有较强的一致性.     

系统性红斑狼疮患者免疫细胞系列分化抗原的表达

目的：探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者疾病活动期和非活动期各种免疫细胞系列分化抗原表达的变化。 方法：采用直接和间接免疫荧光法流式细胞术研究SLE患者疾病不同时期外周血T、B、NK及粒、浆细胞系列分化抗原18种CD分子的表达情况。 结果：SLE患者疾病活动期外周血CD2、CD3、CD4、CD45RA、CD56、CD89表达下调;CD8 、CD10、CD23、CD25、CD29、CD138表达上调,特别是CD29明显上升;CD19、CD20、CD21、mIgD、mIgM、mIgG表达与正常组比较差异无显著性。疾病非活动期仅有CD3、CD4、CD23、CD25、CD29、CD45RA、CD89尚未恢复正常。患者血尿与CD89水平呈负相关,治疗前、后相关系数分别为-0.5 821和-0.7 948。 结论：SLE患者T、B、NK、粒、浆细胞分化抗原的表达均有异常,特别是疾病活动期患者。     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞表型分析

目的 了解Ｔ淋巴细胞亚群、Ｂ细胞及自然杀伤细胞（ＮＫ细胞）在活动期ＳＬＥ患者中的改变,探讨这些免疫细胞在ＳＬＥ发病机理中的作用方法 采用微量微量全血标记免疫荧光染色和流式细胞仪,对３８例活动期ＳＬＥ患者及２０例正常人的外周血淋巴细胞表型进行检测。结果 ３８例活动期ＳＬＥ患者ＣＤ４＾＋细胞和ＣＤ４＾＋／ＣＤ８＾＋比值降低（Ｐ〈０．０１）,ＣＤ３＾＋细胞、ＣＤ４＾＋细胞与正常对照组比较无统计学差异（Ｐ     

Immunophenotyping of lymphocyte T and B in the peripheral blood of systemic lupus erythematosus

Systemic lupus erythematosus(SLE) ,whosepathogenesis is complicated and remains unclear,is acommon autoimmune disease which cause damage ofmulti- systems.Itis generally believed that,with thesusceptibility due to heredity,the abnormal im-munoregulation induced by such factors as environ-ment and infection can cause the disease.In thisstudy,by using the colourcytofluorography- flow cy-tometry technique,the lymphocyte immunopheno-typing expression in SLE patients was examined.The changes in fu…     

系统性红斑狼疮患者外周血T细胞磷酸肌醇3激酶信号通路异常活化

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T细胞中磷酸肌醇3激酶(PI3K)信号通路活化情况及其临床意义.方法 检测28例SLE患者的T细胞PI3K通路活性.8例类风湿关节炎患者为对照,另以15名健康者为正常对照组.外周血T细胞分离采用RosettSep T细胞提取试剂盒提取,PI3K活性采用免疫沉淀和ELISA法,Akt及其磷酸化蛋白运用免疫印迹法,T细胞增殖采用MTT法,细胞因子水平采用ELISA检测.结果 新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性均显著高于正常对照组和类风湿关节炎组;SLE患者T细胞在体外培养24 h后PI3K和Akt活性与正常对照组差异无统计学意义,而正常对照组T细胞用SLE患者血清孵育24 h后PI3K和Akt活性显著增高;PI3K特异性抑制剂LY294002显著抑制SLE患者T细胞增殖(125±21 vs 197±26,P<0.05)及分泌白细胞介素(IL)-6和IL-10[分别为(425±69)ng/L vs(816±116)ng/L,P<0.05;(114±18)ng/L vs(207±31)ng/L,P<0.05].新鲜分离的SLE患者外周血T细胞PI3K和Akt活性与SLEDAI无相关关系.结论 SLE患者T细胞存在PDK信号通路异常活化,并与T细胞增殖和细胞因子分泌有关,SLE外周血中可能存在激活该通路的血清因子.     

免疫代谢与系统性红斑狼疮

Systemic lupus erythematosus (SLE) is a highly heterogeneous autoimmune disease,characterized by production of pathogenic autoantibodies and wide involvement of multiple systems. Damageofimmune tolerance and imbalance of immune homeostasis lead to the production of autoantibodies and the injuries of multiple organs and systems. In recent years,plenty of studies have identified that immunometabolism affects survival status of certain cells,also cell activation,differentiation and effector functions. Conversely,immune cells with different functions or differentiational status upregulate specific me-tabolic pathways to maintain their identities. In response to outer stimulations,naive immune cells dif-ferentiate into activated cells,accompanied with a series of immunometabolism changes. Therefore,abnormal immunometabolism can induce global imbalance of immune homeostasis,which further results in the initiation and development of autoimmune diseases,including SLE. Multiple abnormalities of immunometabolism have been found in patients with SLE or mouse models of lupus. Immune cells involved in the development of SLE,such as T cells,B cells,dendritic cells and macrophages present various metabolic abnormalities and pathological phenotypes. Among these cells,CD4 ⁺ T cells play predominant roles in the pathogenesis of SLE. Lots of studies demonstrated that CD4 ⁺ T cells and their subsets were in abnormal immunometabolic status,which further resulted in the development of SLE. In CD4 ⁺ T cells from patients with SLE or mouse models of lupus,both levels of glycolysis and oxidative phosphorylation are significantly higher compared with healthy controls. However,mitochondrial abnormalities,decreased ATP production and increased level of oxidative stress also have been found in these cells,which play important roles in the production of reactive oxygen intermediates and autoantibodies. Aggregated lipids rafts and increased synthesis of glycosphingolipid and cholesterol also have been observed in the CD4 ⁺ T cells from patients with SLE,leading to the abnormally elevated TCR signaling. Moreover,mechanistic target of rapamycin (mTOR) signaling is activated in the CD4 ⁺ T cells from both patients with SLE or mouse models of lupus and participate in the metabolic abnormalities of pathological CD4 ⁺ T cells. Progressive understanding of immunometabolism give us new insights of the pathogenesis of SLE and provide us with more therapeutic targets in the treatment of SLE.     

系统性红斑狼疮患者静脉血BCMA和CD138~+浆细胞的研究

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者和健康者静脉血B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)表达和CD138+浆细胞数量的差异。方法将40例SLE患者血液标本作为SLE组,30例健康人血液标本作为对照组,采用荧光定量实时聚合酶链反应及酶联免疫吸附测定(ELISA)技术检测BCMA的表达,流式细胞技术检测静脉血CD138+浆细胞数量。结果 SLE组患者静脉血中BCMA mRNA水平、蛋白含量以及CD138+浆细胞的数量明显高于对照组(P<0.05)。结论 SLE患者中浆细胞数量的增多可能与BCMA高表达相关。     

免疫磁珠法检测系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞亚群及其意义

目的探求系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者外周血T淋巴细胞CD4、CD8亚群细胞数目的变化.方法采用免疫磁珠方法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离SLE患者外周血CD4、CD8 T淋巴细胞并计数.结果SLE患者CD4及CD4/CD8较正常对照明显减少(CD4,P=0.001;CD4/CD8,P=0.046),CD8细胞无明显差异.结论SLE患者T淋巴细胞CD4及CD8亚群及两者的平衡关系存在异常,其中以CD4 T细胞减少更加显著.     

VTRNA2-1在系统性红斑狼疮患者B 细胞中的高表达及其意义

目的： 检测系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)患者中T和B淋巴细胞中穹窿核糖核酸 2-1(vault ribonucleic acid 2-1,VTRNA2-1)基因的表达水平,初步探索SLE的发病机制。方法： 收集25 例健康对照者 和32 例SLE患者的外周血CD4+ T淋巴细胞,另外再收集62 例SLE患者(其中活动性SLE患者47 例,非活动性患者15 例)和29 例健康对照者的外周血CD19+ B淋巴细胞,采用real-time PCR检测VTRNA2-1 基因的表达水平。采用免疫共 沉淀实验寻找VTRNA2-1 的直接作用蛋白。结果： 通过对SLE 患者和健康对照者外周血T 细胞和B 细胞中的 VTRNA2-1 基因进行检测,发现SLE患者T细胞中的VTRNA2-1 基因表达水平与健康对照者相比较,差异无统计学 意义(P>0.05)。活动性和非活动性的SLE患者外周血B细胞中的VTRNA2-1 基因表达水平与健康对照者相比均显著增 高,差异均有统计学意义(分别P<0.01 和P<0.05)。免疫共沉淀实验证实VTRNA2-1 通过与蛋白激酶R(protein kinase R,PKR)特异性结合而发挥生物学功能。结论： VTRNA2-1 基因在SLE患者的B细胞中呈高表达,其机制可能是通 过调控PKR而发挥生物学功能。     

系统性红斑狼疮患者外周血CD4+和CD8+细胞端粒长度及端粒酶活性的研究

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD4 、CD8 和CD19 细胞端粒长度和端粒酶活性变化及其在发病中的作用.方法:用免疫磁珠法,从外周血单个核细胞分离CD4 、CD8 和CD19 淋巴细胞,提取细胞蛋白后,用PCR为基础的端粒酶测定法(Telomeric repeats amplification protocol,TRAP)测定端粒酶活性;Southern Blot测定细胞端粒长度.结果:SLE患者CD4 、CD8 和CD19 细胞端粒酶活性均高于正常对照,但只有CD19 细胞端粒酶活性与正常对照相比差异有显著性(P<0.05).SLE患者CD4 和CD8 淋巴细胞的端粒长度均较正常对照明显缩短,CD19 淋巴细胞的端粒长度无明显缩短.结论:SLE患者CD19 细胞端粒酶活性显著增高,维持了细胞端粒长度;而CD4 和CD8 细胞端粒酶活性可能不足以维持由于细胞分裂所导致的细胞端粒缩短.