ML-7对酒精致肠黏膜屏障功能障碍的作用

目的 探讨MLCK特异性抑制剂ML-7对乙醇诱导的肠上皮细胞通透性的作用.方法 应用ML-7预处理Caco-2细胞后,测定跨上皮细胞电阻值(TEER)及荧光黄透过率,分析肠上皮细胞屏障的通透性的变化.应用Western blotting检测紧密连接相关蛋白(Occludin和ZO-1)的表达.结果 ML-7显著抑制乙醇诱导的肠上皮细胞屏障TEER值降低、荧光黄透过率升高、Occludin(S/IS)比值增加及ZO-1表达减少.结论 MLCK参与乙醇诱导肠上皮细胞屏障通透性增加的过程,揭示了乙醇引起肠上皮细胞屏障对大分子的通透性增加的部分机制.     

血小板活化因子引起肠上皮细胞屏障非凋亡依赖性的通透性增高

 目的 研究血小板活化因子对肠上皮细胞屏障通透性的影响,并探讨其作用位点。方法 体外培养Caco-2细胞建立肠上皮细胞屏障模型。不同浓度PAF(0, 50, 100, 200nM)作用24h,应用TEER和荧光黄透过量检测肠上皮细胞屏障通透性;应用Annexin V和Hoechst染色,用荧光显微镜和流式细胞仪检测肠上皮细胞凋亡情况;透射电镜下观察紧密连接。结果 Caco-2细胞培养21天左右可形成类似人肠黏膜上皮细胞屏障结构,给予50nM PAF即可引起TEER的下降和荧光黄透过率的增加,PAF100nM组肠上皮屏障通透性增加达到高峰,与对照组相比,差异显著(P<0.01)。实验并未发现PAF引起明显的细胞凋亡增加,但透射电镜下出现了紧密连接的断裂和细胞超微结构的破坏。结论 PAF可直接引起肠上皮细胞屏障通透性增加,该作用是凋亡非依赖性的,作用位点在旁细胞途径。     

应用Caco-2细胞模型观察介质pH和氨氯地平对替米沙坦跨膜吸收转运的影响

目的 探讨介质pH值和常用合并用药氨氯地平对血管紧张素Ⅱ受体(AT1型)拮抗剂替米沙坦跨膜吸收转运的影响.方法 体外培养人结直肠癌Caco-2细胞,通过细胞形态观察、跨上皮细胞电阻(TEER)测定和荧光黄通透性实验验证Caco-2细胞单层完整性;通过ATP酶活性测定和双向转运实验分析替米沙坦是否外排糖蛋白(P-gp)底物;观察改变介质pH及合并使用氨氯地平时对替米沙坦跨膜吸收转运的影响.结果 建立的Caco-2细胞单层完整,适用于转运实验.替米沙坦ATP酶活性与空白对照ATP酶活性的比值为1.73,双向转运实验结果显示外排比率为4.53.随着pH值(8.0～5.0)的降低,替米沙坦吸收表观通透性逐渐增强,跨膜吸收转运呈现明显的pH依赖性.在pH 7.4且合并氨氯地平时,替米沙坦吸收表观通透性明显增强.结论 P-gp可能参与替米沙坦跨膜分泌转运,介质pH酸性环境和氨氯地平可易化替米沙坦跨膜吸收转运.     

白术/防风药对对Caco-2细胞屏障功能的协同保护作用及机制研究

目的通过研究白术、防风、白术/防风药对对Caco-2细胞屏障损伤模型的作用,获得白术/防风药对协同保护肠黏膜机械屏障的证据,并从PAR-2信号介导的Caco-2细胞屏障损伤探讨白术/防风药对保护肠机械屏障的分子机制。方法建立Caco-2细胞肠机械屏障损伤模型,测定肠Caco-2细胞的跨上皮细胞电阻值(TEER)和荧光黄透过率(PFP),评价白术/防风药对对肠Caco-2细胞机械屏障的影响,并分别应用Q-PCR和Western blot技术检测Caco-2细胞PAR-2基因和细胞紧密连接ZO-1蛋白的表达。结果白术、防风、白术/防风药对能提高细胞TEER和降低PFP,抑制PAR-2基因的表达,上调ZO-1紧密连接蛋白的表达,且白术/防风药对效果优于单味药。结论白术/防风药对对Caco-2细胞屏障损伤模型具有保护作用,起协同增效作用,其机制可能与调控肠屏障损伤关键信号PAR-2有关。     

不同温度及pH值对人结肠腺癌细胞模型的影响

目的:建立人结肠腺癌细胞系(Caco-2)细胞模型并对其药物研究的方法进行初步探讨。方法:通过测定跨细胞膜电阻(TEER)、荧光素通透量及碱性磷酸酶(AKP)评价Caco-2细胞模型,用MTT法考察HBSS缓冲液在不同pH值、不同温度及不同时间条件下对Caco-2细胞的毒性。结果:各项指标的测定值符合要求,表明本实验建立的Caco-2细胞模型的完整性、紧密性和通透性良好;进行药物Caco-2细胞吸收潜性研究时,药物作用4 h之内对Caco-2细胞模型没有影响。结论:建立的Caco-2细胞模型可用于药物吸收机制研究。     

12外泌体对体外血脑屏障模型功能的影响

目的在体外建立血脑屏障模型,研究非小细胞肺癌a549细胞来源的外泌体对血脑屏障模型功能的影响。方法利用小鼠脑微血管内皮细胞与星型胶质细胞建立体外血脑屏障模型。模型建立后通过4 h渗漏实验鉴定是否成模。建模成功后分为对照组与实验组,将利用超速离心法及Exo-spin试剂盒分离提纯的非小细胞肺癌A549细胞培养基中外泌体接种至实验组Transwell上室,置于培养箱孵育,分别于共培养24 h、48 h、72 h后进行跨内皮电阻检测实验及48 h辣根过氧化物酶渗透试验,以评估体外血脑屏障模型的功能。结果 (1) 80%血脑屏障模型在建立建模成功;(2) 2组TEER值比较24 h后2组间差异无统计学意义(P> 0.05);48 h后实验组TEER降低,与对照组比较差异有统计学意义(P <0.01);72 h后实验组TEER进一步降低且与对照组相比差异有统计学意义(P <0.01);(3)共培养48 h后实验组通透性较对照组明显升高,差异有统计学意义(P <0.05)。结论人非小细胞肺癌细胞外泌体可以影响小鼠体外血脑屏障模型的功能,人非小细胞肺癌细胞外泌体可使BBBM通... 更多     

铜绿假单胞菌pvdQ基因在肠道上皮细胞Caco-2中的表达及其功能研究

目的 探讨铜绿假单胞菌pvdQ基因阻止密度感应系统自体诱导因子3O-oxo-C12-HSL干扰肠道上皮细胞Caco-2的作用.方法 构建带有FLAG标签的pvdQ基因真核表达质粒pIRES2-EGFP-pvdQ并鉴定,将带有pvdQ基因的质粒转染入Caco-2细胞,并用Western blot法检测pvdQ基因在Caco-2细胞中的表达.3O-oxo-C12-HSL干扰转染前后的Caco-2细胞,利用质谱分析仪检测Caco-2细胞上清中3O-oxo-C12-HSL浓度变化.结果 经酶切鉴定pvdQ基因真核表达载体构建成功,Western blot检测结果显示pvdQ基因能在人肠道上皮细胞Caco-2中表达.质谱分析结果显示,转染pvdQ基因后,Caco-2细胞上清中3O-oxo-C12-HSL浓度明显减少(P＜0.05).结论 pvdQ基因成功在人肠道上皮细胞Caco-2中表达,并降解细胞周围3O-oxo-C12-HSL分子,为进一步研究pvdQ基因对Caco-2细胞的保护作用奠定基础.     

C3 胞外酶抑制缓激肽诱导的血肿瘤屏障通透性的增加

 目的 研究RhoA的特异性抑制剂C3 exoenzyme对缓激肽诱导的血肿瘤屏障通透性的作用 方法 应用RhoA的特异性抑制剂C3 exoenzyme 预处理大鼠原代脑微血管内皮细胞后,测量跨内皮阻抗值,辣根过氧化物酶渗漏量,分析血肿瘤屏障的通透性的改变;应用Western-blot法检测紧密连接相关蛋白ZO-1的表达;应用免疫荧光方法观察原代大鼠脑微血管内皮细胞紧密连接相关蛋白ZO-1和丝状肌动蛋白结构和分布的改变。结果C3 exoenzyme显著抑制缓激肽诱导TEER值的降低,HRP的升高;C3 exoenzyme显著抑制ZO-1的表达;C3 exoenzyme 抑制ZO-1由内皮细胞的边缘向细胞质转移,抑制丝状肌动蛋白由细胞膜边缘向细胞中央区分布,分布于细胞边缘的F-actin明显增加,应力纤维形成明显减少。结论RhoA介导缓激肽开放血肿瘤屏障。 关键词：RhoA;缓激肽;血肿瘤屏障;紧密连接;ZO-1;肌动蛋白重排 中图分类号：R338.2     

线粒体DNA对Caco-2细胞通透性的影响及机制

目的探讨线粒体脱氧核糖核酸(mtDNA)对Caco-2细胞单层通透性的影响及作用机制。方法利用Transwell培养板制备Caco-2细胞模型,从C57BL/6J小鼠肝脏中提取mtDNA,然后在Transwell培养板顶侧加入不同浓度的mtDNA(0、1、5、10μg/ml)和异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-dextran),检测不同时间跨上皮电阻(TEER)和底室中FITC-dextran含量的改变,确定最佳mtDNA浓度;再将实验分为4组,分别加入FITC-dextran、mtDNA+FITC-dextran、ODN TTAGGG+FITC-dextran和mtDNA+ODN TTAGGG+FITC-dextran,检测不同时间TEER和底室中FITC-dextran含量的改变。同时分别用mtDNA、ODN TTAGGG、mtDNA+ODN TTAGGG预处理Caco-2细胞,采用qRT-PCR方法检测Toll样受体9(TLR9) mRNA表达水平,ELISA检测上清液中肿瘤坏死因子-ɑ(TNF-ɑ)、白细胞介素-6(IL-6)、IL-1β和IL-18的水平。结果与对照组相比,随...     

奇异变形杆菌感染Caco-2细胞模型的建立

目的建立奇异变形杆菌感染人克隆结肠腺癌细胞Caco-2的细胞模型,比较不同来源奇异变形杆菌感染Caco-2细胞的致病性特征。方法活细胞动态观察优化奇异变形杆菌感染Caco-2细胞的感染条件,采用台盼蓝细胞膜通透性检测、稀释平板计数、吉姆萨(Giemsa)染色及透射电子显微镜观察不同来源奇异变形杆菌感染Caco-2细胞后细胞形态学及胞内感染情况的变化,评价该模型中不同来源奇异变形杆菌侵入细胞的特点和病理损伤规律。结果不同来源奇异变形杆菌感染Caco-2细胞的最佳感染复数(MOI)均为100∶1,感染时间均为2 h。致腹泻奇异变形杆菌C02011感染Caco-2细胞的细胞膜通透性改变,黏附率为(0.647±0.038)%,侵袭率为(0.261±0.005)%。健康人群体检株奇异变形杆菌B02005的细胞膜通透性出现轻微受损,黏附率为(0.975±0.030)%,侵袭率为(0.134±0.003)%。尿道分离奇异变形杆菌标准株ATCC29906的黏附率为(0.303±0.027)%,侵袭率为(0.104±0.003)%,并未发现Caco-2的细胞膜发生变化。吉姆萨染色和透射电子显微镜观察与上述方法结果一致,说明了不同来源奇异变形杆菌感染Caco-2细胞的致病性不同(P0.05);同时,透射电子显微镜实验也验证了细胞模型的成功建立。结论成功构建奇异变形杆菌感染Caco-2的细胞模型,并分析了不同来源奇异变形杆菌的致病性特征。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

大鼠脑出血灶周围星形胶质细胞内糖原含量的变化

目的：研究脑出血后局部超微结构的变化，探讨脑出血的病理生理过程，为临床治疗提供理论依据．方法：健康雄性SD大鼠4只，随机等分为实验组和对照组．实验组采用细菌胶原酶注射制作纹状体脑出血模型，对照组采用相同方法在相应部位注入等体积生理盐水，采用透射电镜观察脑出血后24h病变局部及其周围和对照组超微结构的变化和糖原的水平变化．结果：电镜观察到在脑出血动物出血灶周围区，不同类型的细胞内均可见到各种各样的超微结构改变．最为醒目的是在脑内血肿周围星形胶质细胞胞质和突起内有大量的糖原颗粒聚集，尤其在毛细血管周围的胶质细胞突起内非常明显；小胶质细胞和少突胶质细胞内均未发现明显糖原颗粒存在．在生理盐水对照组动物，相应部位的各种细胞的超微结构正常；而且神经元、各种胶质细胞和毛细血管内皮细胞内均无明显糖原颗粒聚集．结论：脑出血周围糖原含量增高，局部存在明显的糖代谢障碍．     

云南省2006年登革热监测分析

目的了解云南省登革热的疫情动态、人群抗体水平、媒介伊蚊种群（包括成幼虫孳生和密度变化）的动态变化、为登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法各级医疗、卫生、检疫机构的医务人员对疑似、临床病例进行及时发现和诊断;在流行季节前随机抽取正常人群血清,-20℃保存,用ELISA方法进行血清学检测;在6～10月采用定时、定点调查法,对登革热的主要传播媒介白纹伊蚊、埃及伊蚊的种群、孳生环境、伊蚊幼虫指数和成蚊密度进行监测,每月1次。结果2006年云南省发生输入性登革热病例18例;健康人群登革热IgG抗体阳性率8．09％。伊蚊幼虫密度布雷图指数（BI）、容器指数（Cl）分别在14～98、4．7～73．68之间,白纹伊蚊成蚊密度在3．5～34只,人工小时之间。结论云南省输入性登革热疫情有不断上升的趋势;人群抗体水平登革热IgG抗体阳性率较高,提示当地人群中可能存在该病毒的既往感染或隐性感染;媒介伊蚊幼虫布雷图指数、容器指数和白纹伊蚊成蚊密度均较高。对登革热传播具有极高的危险性,应引起高度注意。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

黄芪在体内抗氧化作用的实验研究

目的:探讨黄芪水提物抗氧化、清除体内自由基的生物活性。方法:将昆明种小鼠随机分为对照组和黄芪低、中、高剂量组,每组10只。连续灌胃给药7天,采血后,迅速取出肝组织,制成匀浆。测定超氧化物歧化酶(SOD)的活力及丙二醛(MDA)含量。结果:黄芪可减少MDA含量,增强SOD活力。结论:黄芪可有效清除体内的氧自由基,具有减少氧化应激引起的器官损伤和延缓机体衰老的作用。     

Cohort Mortality Study in Three Ceramic Factories in Jingdezhen in China

To investigate the health impacts of crystalline silica mixed dust and other potential occupational hazards on workers in ceramic factories, a cohort study of 4851 workers registered in the employment records in 3 ceramic factories in Jingdezhen city of China between 1972 and 1974 was identified. The cohort mortality was traced throughout 2003 with an accumulation of 128970.2 person-years, revealed 1542 deaths. Standardized mortality ratios （SMRs） were calculated for the main causes of death by using Chinese national mortality rates as reference. The mortality from all causes in three ceramic factories was 12.0‰ and the cumulative mortality was 31.8%. Malignant neoplasm, cardiovascular diseases, respiratory diseases, infectious diseases were the first four illnesses that threaten workers’ life, and they accounted for 73.2% of all deaths. The results of this study showed that the standardized mortality ratio for all subjects was 1.02, which is very close to that expected on the basis of the China national mortality rates. Statistically significant mortality excesses for respiratory disease （SMR=1.36）, pneumoconiosis （SMR=37.34）, infectious disease （SMR=5.70） and pul- monary tuberculosis （SMR=3.88） were observed. The mortality of 2938 dust-exposed workers was higher than that of 1913 non dust-exposed workers. Except for pneumoconiosis, the mortality from lung cancer, non-malignant respiratory diseases and pulmonary tuberculosis in dust-exposed workers were significantly increased as compared with that in non-exposed workers, and the relative risks （RRs） were 1.86 （1.16–2.99）, 2.50 （1.84–3.40）, 1.81 （1.34–2.45）. The exposure-response relationships between cumulative dust exposure level and mortality from all causes, colorectal cancer, lung cancer, respiratory diseases, and pulmonary tuberculosis were also identified. The findings indicated that silica mixed dust in ceramic factories has harmful impact on the workers’ health and life span in ceramic factory.     

2005年汕头市登革热定点监测结果分析

目的 通过定点监测为汕头市登革热流行趋势的预测、预警和制定防治对策、措施提供科学依据。方法收集监测点的登革热疫情、人群抗体水平和媒介伊蚊等监测资料，用EPI2002软件统计分析。结果2005年汕头市无登革热疫情，抗登革热病毒IgG、IgM阳性率低，伊蚊幼虫孳生密度高峰在6、8、9、10月份，低谷在4、7、11月份，孳生情况随着月平均降水量、平均气温变化而变化；孳生场所以农村、暂时性容器为主。结论汕头市有登革热流行的自然、社会环境条件，人群普遍对登革热易感，8～10月是发动爱国卫生运动，清除伊蚊孳生地，预防、控制登革热流行的适当时机。     

2009年泉州市流感监测结果分析

目的了解泉州市2009年流感活动情况及其型别特征。结论通过流行病学和病原学监测,对泉州市流感流行情况进行分析。结果 2009年全市流感样病例占就诊人数的0.26%～2.34%;全年采集监测标本1392份,经RT-PCR法检测样本阳性率为22.34%;经MDCK细胞分离流感毒株134株,其中季节性H3N2和HINl型各占60.45%和11.19%,甲型H1N1流感占21.64%,B型占6.70%。结论 2009年泉州市流感春夏季以季节性H3N2亚型流感为优势毒株,秋冬季以甲型H1N1流感为流行株,需加强泉州市流感监测和流感病毒抗原变异研究。