抗组蛋白 Ｈ２ Ａ 抗体间接 ＥＬＩＳＡ 法的建立和临床初步 应用

目的 建立检测血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 技术，探讨抗 Ｈ２Ａ 抗体对类风湿关节炎（ ＲＡ） 的临床意义。 方法 ＲＴ?ＰＣＲ扩增 Ｈ２Ａ 基因，将其克隆到原核表达载体 ｐＥＴ２８ａ，对重组质粒 Ｈ２Ａ ／ ｐＥＴ２８ａ 进行原核表达，经 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 检测后，利 用 Ｈ２Ａ 重组蛋白建立检测人血清中抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 方法。 用建立的间接 ＥＬＩＳＡ 方法检测 ５０ 例 ＲＡ 患者和 ５０ 例健 康人对照组血清抗 Ｈ２Ａ 抗体水平。 结果 表达的 Ｈ２Ａ 蛋白相对分子量约为 １５ ０００，与预期大小相符，ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 结果表明组 蛋白 Ｈ２Ａ 与抗 Ｈ２Ａ 抗体阳性血清具有良好的反应原性。 经方法学评估，建立的 ＥＬＩＳＡ 法在特异性、可重复性方面均达到检 测要求。 ＲＡ 组抗 Ｈ２Ａ 抗体水平高于健康人对照组（Ｐ＜０．０１）。 当 ｃｕｔ?ｏｆｆ 值设为 ０．４９４ 时，ＲＡ 患者血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的阳性率 为 ８４％（４２ ／ ５０），明显高于健康人对照组 ２０％（１０ ／ ５０），差异具有统计学意义（χ２ ＝ ４１．０２６， Ｐ＜０．０１）。 结论 成功建立了检测 血清抗 Ｈ２Ａ 抗体的间接 ＥＬＩＳＡ 技术。 ＲＡ 患者血清中抗 Ｈ２Ａ 抗体水平明显高于健康人对照组。 抗 Ｈ２Ａ 抗体在 ＲＡ 患者血清 中出现可能具有重要的致病意义。     

SLE免疫印迹抗体谱其与荧光NA及LET的关系

用免疫印迹技术（ＩＢＴ）对１５０例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）活动期活动患者进行了７种可提取性核抗原（ＥＮＡ）自 抗体的检测。１３０例（８６．７％）患者检出至少一种自身抗。抗Ｓｍ抗体的阳性率达５１．３％，抗Ｒｏ抗体阳性率为１８．７％（２８例），抗核糖体抗体阳性率为１７．３％。临床应用表明ＩＢＴ具有快速、简便、敏感、稳定和精确等优点。对ＳＬＥ患者ＩＢＴ检测７种ＥＮＡ抗体与荧光ＡＮＡ及ＬＢＴ的关系进行了讨     

ELISA检测抗重组Sm—D与IBT,CIE检测抗Sm抗体的比较

利用重组并纯化的Ｓｍ－Ｄ抗原，通过ＥＬＩＳＡ对２８例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）等结缔组织病（ＣＴＤ）患者和 ３０例正常人及非 ＣＴＤ患者血清中的抗 Ｓｍ－Ｄ抗体进行检测，并与用免疫印迹（ＩＢＴ）、对流免疫电泳（ＣＩＥ）法检测抗Ｓｍ抗体进行比较。结果显示抗Ｓｍ－Ｄ重组抗原的抗体仅在 ＳＬＥ患者中出现，其阳性率为 ６５％； ＩＢＴ法抗 ２９／２８ＫＤ Ｓｍ的阳性率为 ６０％，抗 １３．５ＫＤＳｍ的阳性率为４５％； ＣＩＥ法抗Ｓｍ的阳性率为５５％。用ＩＢＴ和ＣＩＥ法在混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）和原发性干燥综合征（ＩＳＳ）中亦检测到２９／２８ＫＤ的Ｓｍ的抗体和出现Ｓｍ的沉淀线。显示以重组、纯化的Ｓｍ－Ｄ抗原为底物，通过ＥＬＩＳＡ检测抗Ｓｍ－Ｄ抗体具有特异性强、敏感性高的优点。     

抗心磷脂抗体与反复自然流产关系的探讨

应用间接ＥＬＩＳＡ法检测１０５例反复自然流产患者血清中的抗心磷脂抗体，同时对ＡＮＡ、扩ｄｓ－ＤＮＡ、抗－Ｓｍ，抗－ＲＮＰ、ＲＦ进行了测定。结果表明：ＲＳＡ组ＡＣＡ阳性率为２８．６％，明显高于其他自身抗体及对照组（Ｐ＜０．０１），ＡＣＡ与ＲＳＡ患者的孕龄及流产次数无相关性（Ｐ＞０．０５），三种类别Ｉｇ中，以ＩｇＧ、ＩｇＧ、ＩｇＭ型ＡＣＡ检出率较高，中等或高水平的阳性结果占３３．３％（１０／３０），其     

女性系统性红斑狼疮患者血清中抗卵巢抗体的观察

人卵巢匀浆后用ＴｒｉｔｏｎＸ－１００处理和亲和层析柱纯化获纯化抗原，建立ＥＬＩＳＡ间接法，检测８８例系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）女性患者血清抗卵巢抗体，其阳性率３６．４％（３２／８８），显著高于正常对照组（Ｐ〈０．０１）。提示ＳＬＥ患者存在在卵巢自身抗体，可能导致卵巢功能紊乱，性激素代谢异常。     

酶联免疫吸附法检测血清抗内皮细胞抗体

培养人脐带静脉内皮细胞并制备内皮细胞膜，以内皮细胞膜为抗原，经酶联免疫吸附法（Ｍ－ＥＬＩＳＡ）检测系统性红斑狼疮患者血清抗内皮细胞抗体，并将结果与细胞ＥＬＩＳＡ作比较。实验表明，两方法符合率为９２％，抗内皮细胞抗体阳性率两法差异无显著性（Ｘ￣２＝０．０６，Ｐ＞０．０５），抗体活性呈明显正相关（ｒ＝０．５１，Ｐ＜０．０１），但Ｍ－ＥＬＩＳＡ可检测ＩｇＧ、ＩｇＭ两型抗体，能节省大量试剂及血清，省时省力，便于推广，也适于制作药盒。     

自身免疫病患者可抽提核抗体谱与体液免疫的关系

目的　探讨可抽提核抗原（ Ｅ Ｎ Ａ） 抗体谱的临床意义及与其他免疫指标的关系。方法　对１５６ 份自身免疫病患者血清样本,采用免疫印迹法检测抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体,经免疫浊度法检测 Ｉｇ 和补体。结果　（１） 抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体在自身免疫病有较高的检出率,其中抗平滑肌（ Ｓｍ） 抗体、抗 Ｕ１ 核糖核蛋白抗体的阳性率在系统性红斑狼疮（ Ｓ Ｌ Ｅ） 中分别为３６ ．３ ％ 、２８ ．８ ％ ; 抗 Ｓ Ｓ Ａ 和抗 Ｓ Ｓ Ｂ 抗体的出现在干燥综合征（ Ｓ Ｓ） 患者中分别为５／１６ 和３／１６ 。（２） 与正常对照和抗体阴性组比较,抗 Ｅ Ｎ Ａ 阳性血清中 Ｉｇ Ｇ、 Ｉｇ Ｍ、 Ｉｇ Ａ 增高,分别为（２１ ．６ ±１５ ．０） 、（１ ．７ ±０ ．８） 、（２ ．２ ±１ ．２）ｇ／ Ｌ, 而 Ｃ３ 、 Ｃ４ 和总补体溶血活性（ Ｃ Ｈ５０）水平下降分别为（１ ．０８ ±０ ．３７） 、（０ ．２１ ±０ ．１２） 、（９８ ．±２９） ｇ／ Ｌ;（３） 随着抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体免疫印迹条带数的增多, Ｉｇ Ｇ 增高,而 Ｉｇ Ｍ、 Ｃ３ 、 Ｃ４ 及 Ｃ Ｈ５０ 与之相反,下降很明显;（４） Ｃ３ 、 Ｃ４ 、 Ｃ Ｈ５０ 与疾病活动性有相关关系。结论　抗 Ｅ Ｎ Ａ 抗体阳性者存在体液免疫应答增加,且与抗     

心血管疾病患者抗心磷脂抗体与酸性成纤维细胞生长因子关系的研究

应用双抗体夹心ＥＬＩＳＡ和间接ＥＬＩＳＡ法检测１３２例心血管病患者（高血压病、冠心病、风湿性心脏病）血清中酸性成纤维细胞生长因子（ａＦＧＦ）和抗心磷脂抗体（ＡＣＡ）水平。结果表明，风湿性心脏病、高血压病、冠心病患者ＡＣＡ阳性率分别为２６．３％、２３．７％、１６．１％，均较对照组显著增高（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５）。各种心血管病患者三种Ｉｇ类ＡＣＡ阳性检出率无显著差异，且存在一定程度的ａＦＧＦ水平升高。其中尤以ＡＣＡ阳性者为甚（Ｐ＜０．０１）。ＡＣＡ与ａＦＧＦ水平的升高有一定伴随，提示ＡＣＡ可能是诱发ａＦＧＦ水平增高的重要因素之一。     

光敏生物素标记质粒DNA检测双链DNA抗体ELISA的建立及初步应用

建立一种既可定性也可定量检测血清抗双链ＤＮＡ抗体的ＥＬＩＳＡ，进一步提高对系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）诊断和监测的水平。以链霉亲合素处理微孔板，包被光敏生物素标记的质粒ＤＮＡ，用ＨＲＰ－羊抗人ＩｇＧ测定血不表双链ＤＮＡ抗体。分别以自制ＥＬＩＳＡ和Ｂｉｎｄｉｎｇ ｓｉｔｅ公司ＥＬＩＳＡ抗ｄｓＤＮＡ定量试剂盒和胶体金斑点免疫渗滤法定性检测了３２例活动期ＳＬＥ，６例类风湿关节炎（ＲＡ），３０例健康人血清，阳     

天津市3622例不同人群丙型肝炎病毒抗体检测结果分析

目的：了解丙型肝炎的流行病学情况。方法：采用ＥＬＩＳＡ法对天津市３６２２例不同人群进行丙型肝炎病毒抗体（抗－ＨＣＶ）检测。结果：自然人群（１组）、普通患者（２组）、肝病患者（３组）抗－ＨＣＶ阳性率组间比较，均Ｐ〈０．０１，且随年龄增长有递增趋势。１、２、３组用血及血制品者抗－ＨＣＶ阳性率明显高于未用者，均Ｐ〈０．０１。在抗－ＨＣＶ阳性组和阴性组中，ＨＢｓＡｇ阳性率，１、２组Ｐ〉０．０５，３组Ｐ〈０     

一种新的检测抗双链DNA抗体的斑点免疫结合试验

以纯化的不含单链ＤＮＡ的大肠杆菌质粒双链ＤＮＡ（ｄｓ一ＤＮＡ）作为抗原，经生物素化后，结合于包被了亲和素的硝酸纤维素膜上，建立了一种新的检测抗ｄｓ一ＤＮＡ抗体的斑点免疫结合试验（ＤＩＢＡ）。对１２０份临床血清标本的检测结果显示：４１例未经选择的系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者有２２例阳性，占５４％，其中活动性ＳＬＥ１９例，阳性１４例，占７４％；２９例其他自身免疫病患者仅１例阳性；５０例正常人全部阴性。与短膜虫免疫荧光法（ＣＬ，ＩＦＡ）和酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）试剂盒比较的结果为：ＤＩＢＡ的敏感性优于ＣＬ，ＩＦＡ，特异性优于ＥＬＩＳＡ试剂盒。ＤＩＢＡ快速、简便、可靠，可作为检测抗ｄｓ一ＤＮＡ抗体的常规方法。     

Ｂ（ Ａ） ０４ 亚型血清学与分子生物学鉴定及与其他 ＡＢ 亚型的鉴别要点

目的 对 ３ 例血清学定性为 Ａ ｗｅａｋ Ｂ 亚型的血标本进行 ＡＢＯ 基因检测，探讨其分子遗传学特点，并探讨 Ｂ（ Ａ） 亚型与 ＣｉｓＡＢ、Ａ 亚 Ｂ 型的鉴别要点。 方法 用 ＰＣＲ?ＳＳＰ 对常规血清学方法定型困难的 ３ 例标本进行 ＡＢＯ 基因分型，并对其 ＡＢＯ 基 因第 ６、７ 外显子扩增后进行直接测序及单倍型测序，确定其基因型。 结果 ３ 例标本血型血清学结果均为 Ａｗｅａｋ Ｂ 型，存在不 规则抗 Ａ 抗体。 基因分型均为 Ｂ（Ａ）０４ 型，其 Ｂ 等位基因在第 ７ 外显子存在 ｎｔ６４０Ａ＞Ｇ 突变，标本 １ 为 Ｂ（Ａ）０４ ／ Ｏ０２，标本 ２、３ 为 Ｂ（Ａ）０４ ／ Ｏ０１。 结论 当血清学检测结果正反定型不一致时，应采用分子诊断技术进行辅助诊断，并采用配血相合输血策 略，可确保临床输血安全。     

系统性红斑狼疮患者血清中巯基蛋白酶抑制肽C的ELISA…

系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）患者血清中含有一定量的巯基蛋白酶抑制肽Ｃ（ｈＣＰＩｃ），对于其浓度的测定，可做为ＳＬＥ诊断的一个重要指标。本文采用兔抗人ｈＣＰＩｃ抗体，建立了一种特异性强、灵敏、简便的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，对ＳＬＥ活动期患者及伴肾病患者血清ｈＣＰＩｃ含量进行检测发现，ＳＬＥ活动期血清ｈＣＰＩｃ含量明显高于对照组（Ｐ〈０．０１），而伴肾病患者血清ｈＣＰＩｃ含量又明显高于单纯性ＳＬＥ活动期患     

血清中三种Ig类抗卵巢自身抗体的测定及其临床意义

用亲和层析柱纯化人卵巢抗原，建立ＥＬＩＳＡ间接法检测不孕、流产患者血清中三种Ｉｇ类抗卵巢抗体。结果表明：以健康孕妇（ｎ＝７０）Ａ值的Ｘ＋２ｓ为正常上限，不孕组患者血清中ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ类抗卵巢抗体的阳性率分别为２２．７％（４８／２１１）、１４．２％（３０／２１１）和１２．３％（２６／２１１）；流产组患者血清中ＩｇＧ、ＩＧＡ、ＩｇＭ类抗卵巢抗体的阳性率分别为２０．６％（２２／１０７）、１５％（１６／１０７）和１２．１％（１３／１０７），均明显高于健康孕妇组（Ｐ＜０．０１）。不孕组以单独ＩｇＧ类或ＩｇＡ类抗体多见，流产组以ＩｇＧ、ＩｇＡ两类抗体为主。     

汉族原发性胆汁性胆管炎患者抗线粒体抗体 Ｍ２ 亚型 抗原表位分布及其临床价值

目的 探讨汉族原发性胆汁性胆管炎（ＰＢＣ）患者抗线粒体抗体 Ｍ２ 亚型（ＡＭＡ?Ｍ２）抗原表位分布情况及其临床价值。 方法 采用 Ｒｅｄ ／ ＥＴ 重组技术制备 ＡＭＡ?Ｍ２ 抗原表位蛋白 ＰＤＣ?Ｅ２、ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２ 和 ＯＧＤＣ?Ｅ２，建立相应的 ＥＬＩＳＡ 检测方法，对 ３７４ 例 ＰＢＣ 患者抗原表位分布进行分析。 比较 ＡＭＡ?Ｍ２ 主要抗原表位组合模式间清蛋白－胆红素评分（ＡＬＢＩ）结果的差异，熊 去氧胆酸（ＵＤＣＡ）药物生化应答和不应答患者抗原表位分布的差异。 结果 ３７４ 例 ＰＢＣ 患者血清与 ＰＤＣ?Ｅ２、ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２ 和 ＯＧＤＣ?Ｅ２ 抗原表位有反应率分别为 ８６．６％、８８．０％和 ３５．０％。 与 ＰＢＣ 患者血清有反应性的常见抗原表位模式（ ＰＤＣ?Ｅ２＋ ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２＋ＯＧＤＣ?Ｅ２、ＰＤＣ?Ｅ２＋ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２、ＰＤＣ?Ｅ２ 和 ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２）间 ＡＬＢＩ 结果的差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），ＵＤＣＡ 生 化不应答患者血清与 ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２ 的反应率（ ８９． ９％） 高于应答患者（ ７７． ９％），差异有统计学意义（ Ｐ ＜ ０． ０５）。 结论 与 ＡＭＡ?Ｍ２抗原表位 ＰＤＣ?Ｅ２、 ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２ 和 ＯＧＤＣ?Ｅ２ 同时有反应性的 ＰＢＣ 患者疾病预后不佳的风险较高， ＰＤＣ?Ｅ２ 和 ＢＣＯＡＤＣ?Ｅ２抗原表位可能与 ＵＤＣＡ 治疗应答相关。     

冠心病心肌梗塞与抗心磷脂抗体关系的探讨

目的：搪塞抗心磷脂抗全（ＡＣＬ）在冠心病特别是心肌梗塞中的意义。方法：应用ＥＬＩＳＡ法测定了冠心病（８０例）、心肌梗塞（３０例）、心房纤颤（２８例）和正常对照组血清中的ＡＣＬ。结果：冠心病患者ＡＣＬ的阳性率（２３．８％）明显高于正常对照组；而心肌要且ＡＣ斩阳性率（４０％显著高于非心肌梗塞组；心纤颤组ＡＣ斩阳性率与非房颤组针显著性差异。结论：ＡＣＬ存在于部分冠心病患者中，在心肌梗塞患者阳性率更高，说     

免疫印迹法及免疫双扩散法检测抗ENA抗体的比较

目的：抗ＥＮＡ抗体是多种结缔组织病诊断的标记，用两种检测方法即免疫印迹法（ＩＢＴ）及免疫双扩散法（ＩＤ），对抗ＥＮＡ抗体进行测定，结果表明：抗ｓｍ抗体、抗ＲＮＰ抗体的检测，ＩＢＴ法的敏感性优于ＩＤ法（Ｐ〈０．０５）；抗ＳＳＡ抗体的检测ＩＢＴ法存在假阳性，ＩＤ法特异性强，稳定性好，敏感度高；抗ＳＳＢ抗体的检测两种方法无显著性差异。两种方法互相补充，建议同时使用。     

双抗夹心法检测血浆氧化修饰型低密度脂蛋白

利用淋巴细胞杂交瘤技术制备了鼠抗人氧化修饰型低密度脂蛋白（ＯｘｉｄａｔｉｖｅｌｙＭｏｄｉｆｉｅｄＬｏｗＤｅｎｓｉｔｙＬｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ，ｏｘＬＤＬ）单克隆抗体，并制备了兔抗人ｏｘＬＤＬ多克隆抗体。以ＭｃＡｂ为包被抗体建立了酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）双抗夹心法，该方法的检测范围为０．１０—１．５０ｍｇ／Ｌ，在浓度为０．３和０．８ｍｇ／Ｌ时，其批内ＣＶ分别为４．７％和６．４％，批间ＣＶ为６．５％。此外，对９１例冠心病患者和两组对照进行检测，结果冠心病患者血浆ｏｘＬＤＬ（０．８３４±０．３７９ｍｇ／Ｎ）明显高于其它心脏病对照（０．４４２±０．１９３．Ｐ＜０．００１）和正常对照（０．４４６±０．２１５，Ｐ＜０．００１）。     

狼疮肾炎患者血中抗磷脂抗体与血栓素变化的观察

目的：观察血抗磷脂抗体（ａＰＬ）与前列环素（ＰＧＩ２）和血栓素Ａ２（ＴＸＡ２）在狼疮肾炎（ＬＮ）中的变化,并探讨其临床意义。方法：用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）和放射免疫法分别检测ＬＮ患者血ａＰＬ、６酮前列腺素Ｆ１α（６ｋｅｔｏＰＧＦ１α）和血栓素Ｂ２（ＴＸＢ２）水平。结果：５１例ＬＮ中３５例ａＰＬ阳性（６８．６％）,ａＰＬ与血栓形成、系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）活性及皮肤血管炎显著相关。ａＰＬ阳性组ＴＸＢ２〔（２５６５．８７±５９３．４７）ｎｇ／Ｌ〕较ａＰＬ阴性组〔（７１８．７４±１３７．６３）ｎｇ／Ｌ〕和正常对照组〔（４２１．３７±１０８．５９）ｎｇ／Ｌ〕均显著升高（Ｐ均＜０．０１）;６ｋｅｔｏＰＧＦ１α和ＴＸＢ２比值均显著降低（ａＰＬ阳性组：０．５７０±０．０６９;ａＰＬ阴性组：１．０３０±０．０７７;对照组：１．９１０±０．１１７;Ｐ均＜０．０１）。结论：ａＰＬ与ＬＮ患者的血栓形成有明显关系,其原因可能与体内ＰＧＩ２ＴＸＡ２平衡破坏及ＴＸＡ２升高有关。     

应用双抗原夹心法检测抗－HCV抗体

目的建立检测抗－ＨＣＶ抗体的双抗原夹心酶联免疫吸附测定（ＥＬＩＳＡ）方法。方法用基因工程手段，在大肠杆菌中表达ＨＣＶ抗原表位与大肠杆菌噬菌体ＭＳ２ＤＮＡ聚合酶（ＭＳ２－Ｐｏｌ）的融合蛋白，纯化后作为包被抗原，可溶性表达的ＨＣＶ抗原表位与霍乱毒素Ｂ亚基（ＣＴＢ）的融合蛋白经辣根过氧化物酶标记后作为酶结合物，建立双抗原夹心ＥＬＩＳＡ。结果ＭＳ２－Ｐｏｌ融合蛋白在大肠杆菌中得到高效表达并进行了纯化，所建立的双抗原夹心ＥＬＩＳＡ系统用于检测１４份ＨＣＶ阳性血清样品，抗－ＨＣＶ抗体检出率１００％；检测２１份ＨＣＶ阴性血清，没有假阳性结果。ＣＴＢ抗体不干扰反应。结论双抗原夹心法与采用二抗的ＥＬＩＳＡ系统具有相近的灵敏度和更好的特异性。可以避免由于二抗干扰带来的非特异性。