抗组蛋白H2A抗体间接ELISA法的建立和临床初步应用

目的建立检测血清抗H_2A抗体的间接ELISA技术,探讨抗H_2A抗体对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方法 RT-PCR扩增H_2A基因,将其克隆到原核表达载体pET28a,对重组质粒H_2A/pET28a进行原核表达,经Western blot检测后,利用H_2A重组蛋白建立检测人血清中抗H_2A抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法检测50例RA患者和50例健康人对照组血清抗H_2A抗体水平。结果表达的H_2A蛋白相对分子量约为15 000,与预期大小相符,western blot结果表明组蛋白H_2A与抗H_2A抗体阳性血清具有良好的反应原性。经方法学评估,建立的ELISA法在特异性、可重复性方面均达到检测要求。RA组抗H_2A抗体水平高于健康人对照组(P0.01)。当cut-off值设为0.494时,RA患者血清抗H_2A抗体的阳性率为84%(42/50),明显高于健康人对照组20%(10/50),差异具有统计学意义(χ~2=41.026,P0.01)。结论成功建立了检测血清抗H_2A抗体的间接ELISA技术。RA患者血清中抗H_2A抗体水平明显高于健康人对照组。抗H_2A抗体在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义。     

抗瓜氨酸化蛋白抗体特异性免疫复合物ELISA法的建立与临床初步应用

目的建立检测血清抗瓜氨酸化蛋白抗体特异性免疫复合物(ACPA-IC)的ELISA技术,探讨ACPA-IC对类风湿关节炎(RA)的临床意义。方法建立检测血清ACPA-IC的ELISA技术,并对方法的特异性、稳定性和重复性进行评估。采用PEG6000沉淀法自RA患者血清中提取IC。用建立的ACPA-IC ELISA法对92例RA患者包括46例ACPA阳性(ACPA+)患者和46例ACPA阴性(ACPA-)患者、46例SLE患者及47例健康献血员血清ACPA-IC水平进行检测。并分析RA患者血清ACPA-IC水平与ACPA和类风湿因子(RF)的相关性。结果经方法学评估,建立的ACPA-IC ELISA法在特异性、稳定性和可重复性方面均达到检测要求。ACPA+患者ACPA-IC水平高于ACPA-患者、SLE患者及健康对照组(P0.01)。当cut off值设为0.9时,该法测得RA患者血清ACPA-IC的阳性率为45.65%(42/92),显著高于SLE(6/46,13.04%)及健康对照组(2/47,4.26%),χ2分别为14.376和24.632,P均0.01。46例ACPA+RA患者ACPA-IC阳性者36例(78.26%),而ACPARA患者ACPA-IC阳性者仅6例(13.04%),差异有统计学意义(χ2=39.429,P0.01)。ACPA-IC与ACPA和RF的Spearman相关分析结果表明,RA患者血清ACPA-IC水平分别与血清ACPA(r=0.708,P=0.000)、RF(r=0.571,P=0.000)呈正相关。结论成功建立检测血清ACPA-IC水平的ELISA技术。RA患者尤其是ACPA+患者血清ACPA-IC水平显著升高。ACPA-IC在RA患者血清中出现可能具有重要的致病意义。     

抗 ＳＳＡ、ＳＳＢ 和 ＣＥＮＰ⁃Ｂ 抗体在系统性红斑狼疮及干燥 综合征的发生率及浓度分析

目的 比较抗 ＳＳＡ、ＳＳＢ 和 ＣＥＮＰ?Ｂ 抗体在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）和干燥综合征（ＳＳ）患者中的发生率和浓度。 方法 对 ５３１ 例 ＳＬＥ 患者和 ９６ 例 ＳＳ 患者同时采用 ＣＬＩＡ 和 ＥＬＩＳＡ 进行抗 ＳＳＡ、ＳＳＢ 和 ＣＥＮＰ?Ｂ 抗体检测。 比较上述 ３ 种抗体在 ＳＬＥ 和 ＳＳ 患者组的发生率和浓度，以及 ＣＬＩＡ 和 ＥＬＩＳＡ 检测结果的符合率。 结果 抗 ＳＳＡ 和 ＳＳＢ 抗体在 ＳＳ 患者组的发生率明显 高于 ＳＬＥ 患者组（Ｐ＜０．０１），而抗 ＳＳＢ 和 ＣＥＮＰ?Ｂ 抗体在 ＳＳ 患者组的浓度显著高于 ＳＬＥ 患者组（Ｐ＜０．０１）。 在 １３４ 例抗 ＳＳＢ 抗 体阳性的样本中，仅 ４ 例样本抗 ＳＳＡ 抗体阴性。 ＣＬＩＡ 和 ＥＬＩＳＡ 在检测上述 ３ 种抗体的总符合率分别为 ９６．４％、９５．７％和 ９８．３％。 结论 抗 ＳＳＡ 和 ＳＳＢ 抗体对 ＳＬＥ 和 ＳＳ 患者临床诊断具有重要价值。 抗 ＳＳＢ 抗体的发生具有与抗 ＳＳＡ 抗体的依赖 性。 ＣＬＩＡ 和 ＥＬＩＳＡ 两种方法检测上述 ３ 种抗体表现出良好的符合率。     

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验对比检测抗核抗体

50年来,人们对抗核抗体(ANA)的认识不断加深.ANA的现代定义是指细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称,ANA特异性靶抗原逐一被发现并得到纯化.从1957年Holbborow等首先以啮齿动物组织冰冻切片为抗原底物,应用间接免疫荧光法(IIF)检测ANA以来,许多研究者对ANA检测方法进行了大量研究.目前除了IIF以外,还有酶联免疫吸附试验(ELISA)、免疫印迹法、快速胶乳颗粒试剂法等.用IIF检测ANA敏感性高、特异性强,以往临床常规检测ANA一般用免疫荧光法作为筛选试验,但采用的底物不同则结果有差异.常用的两种底物有人喉癌上皮细胞(Hep-2)与鼠肝细胞,目前国内外大多以Hep-2为底物的IIF检测ANA[1].该方法被称为“金标准“,但该方法操作较复杂,读片人要有一定经验.因此,有些单位采用以提取抗原和基因重组抗原为底物的ELISA检测ANA.但是,根据2003年我国48家医院自身抗体检测的质控总结,ANA正确率仅为47%[2],专家提出,自身抗体检测的质控势在必行[3].为比较IIF与ELISA检测ANA的异同,作者对本院80例血清标本同时进行这两种方法检测,报告如下.……     

间接免疫荧光法与酶联免疫吸附试验检测抗核抗体对比分析

目的:应用间接免疫荧光法(indirect immunofluoreseent assay,IF)与酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA) 检测临床疑似自身免疫疾病患者血清抗核抗体并进行相关性及对比分析.方法:IF法按说明书操作,在荧光显微镜下观察到特异的荧光核型为阳性;ELISA法按说明书操作,浓度≥18 U/mL为阳性,12 ～ 18U/mL为可疑,≤12 U/mL为阴性.结果:检测临床疑似自身免疫患者血清138份,IF法阳性50份,阴性88份,阳性率36.23%,ELISA法阳性78份,阴性60份,阳性率56.52%.经卡方检验 P ＜ 0.01.其中IF法样本血清稀释倍数与ELISA法检测浓度的Spearman相关系数为0.499.结论:两种方法检测抗核抗体差异有显著性,ELISA法敏感度明显高于IF法.同时,IF法样本血清抗核抗体血清稀释倍数与ELISA法的浓度呈一定相关性.     

酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测抗dsDNA抗体方法的比较

目的 比较酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测抗dsDNA抗体的检出情况及符合率.方法 用酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法同时检测286份临床疑为系统性红斑狼疮(SLE)的病人血清.结果 286份样本中ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性,255例抗dsDNA抗体阴性,而在ELISA法检出31例抗dsDNA抗体阳性中IIF法检测仅有13例阳性,阳性符合率仅为41.94%.ELISA法检出的255例抗dsDNA抗体阴性标本中IIF法检测有255例阴性,阴性符合率100%.ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率有显著性差异.结论 ELISA法和IIF法检测抗dsDNA抗体的阳性检出率差异有统计学显著性意义(P＜0.05),ELISA法检测抗dsDNA抗体简便、快速、设备要求不高,可以用于大批量的抗dsDNA筛查,但因为特异性不高,假阳性较多,因此有条件的实验室最好采用IIF法对阳性结果进行复检确认.     

抗瓜氨酸化聚合兔IgG抗体ELISA法的建立及初步应用

目的建立检测血清抗瓜氨酸化聚合兔IgG(citrullinated aggregated rabbit IgG,Cit-AgRIgG)抗体的ELISA方法,探讨其对类风湿关节炎(RA)的诊断价值。方法将兔IgG于62℃加热聚合变性,用肽酰精氨酸脱亚胺酶(PAD)将内含精氨酸催化生成瓜氨酸,制成瓜氨酸化聚合兔IgG(Cit-AgRIgG)。以此作为抗原,包被反应板微孔,建立检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA方法。经方法学考核后,检测临床标本并对结果进行评价。结果 Cit-AgRIgG显示出与抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体有较高的结合活性。以其为包被抗原建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法批内和批间平均变异系数分别为4.5%和9.5%。特异性阻断试验显示,Cit-AgRIgG、AgRIgG与CCP抗原对该抗体的最高抑制率分别为80.0%、65.9%和25.0%。抗Cit-AgRIgG与抗AgRIgG抗体的cut off值分别为0.565和0.459,此时RA患者抗Cit-AgRIgG抗体阳性率显著高于其他疾病和健康人对照组(P均0.01),其诊断RA的敏感性为79.3%,特异性为96.5%,阳性、阴性预测值分别为84.7%和95.1%,阳性、阴性似然比分别为22.66、0.215,Youden指数为0.758,ROC曲线下面积(AUCROC)为0.890。对RA和健康人对照者检查结果显示,抗CitAgRIgG与抗AgRIgG抗体(RF)总符合率97.7%,与抗CCP抗体总符合率91.7%。结论建立的检测抗Cit-AgRIgG抗体的ELISA法有良好的稳定性和特异性。抗Cit-AgRIgG抗体兼具RF与抗CCP抗体的双重特性,有可能发展成为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。     

抗CCP抗体与类风湿关节炎的相关性研究

目的研究抗环瓜氨酸肽抗体（CCP）（抗CCP抗体）与类风湿关节炎（HA）的相关性。方法利用酶联免疫吸附法（ELISA）测定患者抗CCP抗体在RA中的含量。结果抗CCP抗体的敏感性比类风湿因子（RF）的敏感性低。但抗CCP抗体的特异性远高于RF,RA患者的RF的阳性率在抗CCP抗体阳性组和阴性组有显著性差异,但抗CCP抗体与年龄、红细胞沉降率、C反应蛋白及病程均无显著性差异。结论研究证明抗CCP抗体含量与疾病活动度（红细胞沉降率、C反应蛋白）无相关性,而和RF存在正相关,并且抗CCP抗体阳性组和阴性组红细胞沉降率、C反应蛋白比较无显著性差异。     

抗角质层抗体的ELISA检测

用盐析法提取大鼠食管上皮组织的角质层抗原成分 ,建立抗角质层抗体 (AKA)的酶联免疫吸附方法 (ELISA) ,探讨AKA在类风湿性关节炎 (RA)、系统性红斑狼疮 (SLE)、干燥综合征 (SS)等风湿病特别是RA诊断中的意义。结果 ,RA、SLE患者中的AKA水平显著高于正常对照组 (P <0 0 1) 。RA的阳性率为 44 7% (31/ 71) ,SLE阳性率为 2 6 8% (11/41) ,RF阴性的RA患者的AKA检出率为 40 9%。     

抗环瓜氨酸肽抗体的定量检测在类风湿性关节炎诊断中的应用

目的探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体在类风湿性关节炎(RA)中的诊断意义.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)定量检测抗CCP抗体相对浓度,采用免疫散射比浊法定量检测类风湿因子(RF)浓度,并比较抗CCP抗体与RF的相关性.结果抗CCP抗体在RA诊断中其敏感性较RF低(P＜0.05),特异性较RF高,有显著性差异(P＜0.01),抗CCP抗体联合检测在诊断RA时,能使敏感性提高到86.7%,特异性提高到98.6%.结论抗CCP抗体对RA具有很高的特异性,尚不能认为与RF具有相关性.因此,两者联合检测能提高RA血清学的阳性率.     

抗环瓜氨酸肽抗体与类风湿关节炎

类风湿关节炎 (RA)是一种致畸性的自身免疫性疾病 ,发病 2年内即可出现不可逆的骨关节破坏。全世界人口中约有1%的RA患者 ,每年用于医疗及福利的费用达六亿五千万美元[1] ,给患者和社会造成了严重的负担。在过去几十年中 ,对于RA的治疗策略已经从单纯缓解症状过渡到早期干预、阻断疾病进程。因此 ,早期诊断尤其重要 ,在此基础上应用改善病程药 (DMARDs)才能有效地减少关节破坏[2 ] 。现行的诊断标准主要依靠临床表现、X线检查以及类风湿因子 (RF)检测 ,符合此标准时病人常已出现骨关节破坏 ,加之RF缺乏特异性 ,不利于早期诊断及早期…     

血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体检测法的建立与应用

目的 建立血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的ELISA法,探讨其在类风湿关节炎(RA)患者中的应用价值.方法 以自提可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(soluble chicken collagen type Ⅱ,SCC Ⅱ)作为包被抗原,优化实验条件,建立抗Ⅱ型胶原蛋白抗体间接ELISA法.对124例RA病人和54例健康人血清抗II型胶原蛋白抗体进行检测.结果 血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的检测条件为:SCCⅡ包被浓度为20 μg/ml;以含10%羊血清的缓冲液进行封闭、稀释血清和酶标抗体;采用双波长(450nm/630 nm)进行测定.RA患者和健康人血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体阳性率分别为19.35%(24/124)和1.85%(1/54),两组有明显的统计学差异(P<0.01).结论 以SCCⅡ为包被抗原检测抗Ⅱ型胶原蛋白抗体可作为判断RA患者病情的一个辅助诊断指标.     

血清抗环瓜氨酸肽抗体在类风湿关节炎诊断中的评价

目的:评价抗环瓜氨酸抗体在类风湿关节炎(RA)诊断中的价值。方法:用ELISA法检测RA及疑似患者血清中的抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体。比较抗CCP抗体和类风湿因子(RF)对RA诊断的敏感度、特异度及诊断预测性方面的差异。结果:抗CCP抗体的敏感度为42.5%,RF为67.8%,RF高于抗CCP抗体(P<0.05),抗CCP抗体的特异度为97.4%,RF为78.7%,抗CCP抗体明显高于RF(P<0.05),在RA诊断预测中,抗CCP抗体明显优于RF(P<0.05)。结论:抗CCP抗体在RA诊断中具有高的特异性和预测性,可作为诊断RA的理想血清学指标。     

ELISA 与胶体金免疫层析法检测血清抗 CCP 抗体在 RA 诊断中的比较

目的：比较胶体金免疫层析法和酶联免疫吸附试验（ELISA ）检测血清抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体结果差异性。方法采用胶体金免疫层析法和 ELISA 法同步检测110例 RA 患者和110例健康体检者的抗 CCP 抗体。结果2种方法经配对χ2检验,差异有统计学意义（χ2＝174．354,P＜0．01）;K ap pa值评价（K ＝0．890,P ＜0．01）显示2种检测方法具有高度一致性。 ELISA 法灵敏度和特异度分别为83．64％和92．73％,均优于胶体金免疫层析法。结论2种方法检测血清抗 CCP 抗体存在差异,ELISA 法的灵敏度和特异度均较高,优于胶体金免疫层析法。     

不同方法检测类风湿关节炎患者血清中抗环瓜氨酸肽IgG抗体的比较研究

目的 比较不同的方法检测类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中抗环瓜氨酸肽抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibody,抗CCP抗体)的诊断有效性和临床适用性.方法 用电化学发光法(Roche公司提供)和酶联免疫吸附法(德国欧蒙医学实验诊断股份公司和上海富莼科芯生物技术公司提供)试剂盒同时检测58例RA患者和31例非RA患者血清中的抗CCP的IgG抗体.分析比较结果的相关性,对其进行临床诊断试验评价;并观察各方法的检验结果回报时间.结果 ①各方法组检测的RA组抗CCP抗体浓度显著高于非RA组(P均<0.01);②各方法组检测结果之间有相关性(r均>0.9,P<0.01);③各方法组ROC曲线下面积均＞0.9(P>0.05);ECLIA法的灵敏度和特异度分别为91.4%和100%,两种ELISA试剂盒的灵敏度和特异度分别为93.1%,96.8%和89.7%,100%(P均>0.05);④ECLIA的回报时间(turn around time,TAT)(45 min)明显短于ELISA(160 min).结论 抗CCP对RA具有较高的诊断价值.ECLIA和ELISA检测抗CCP抗体对RA的诊断有效性差异无统计学意义.选用ECLIA使检测会更快更及时,能更好地满足患者需要.     

抗CCP抗体检测在类风湿关节炎诊断中的价值

目的:探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体在类风湿关节炎(RA)诊断中的价值.方法:用ELISA法检测92例RA患者及30例非RA患者血清抗CCP抗体,其结果和类风湿因子(RF)进行比较.结果:在92例RA标本中,检出抗CCP抗体63例,抗CCP抗体对RA诊断的阳性率为68.48%(63/92),抗CCP抗体对RA诊断的特异性为96.67%(29/30),RF对RA诊断的特异性为76.67%(23/30),抗CCP抗体的特异性比RF高.结论:检测抗CCP抗体有助于提高类风湿关节炎的诊断率.     

抗环瓜氨酸肽抗体对类风湿性关节炎的诊断价值

目的探讨抗环瓜氮酸肽抗体（抗-CCP）对类风湿性关节炎（RA）诊断的临床价值。方法采用酶联免疫吸附试验法和乳胶增强比浊法分别测定155例RA、178例非RA和100例健康人的血清抗-CCP和类风湿因子（RF）,并比较抗～CCP和RF的灵敏度、特异度、阳性预期值和阴性预期值。结果抗-CCP和RF的灵敏度分别为63．2％和59．1％,特异度分别为95．0％和81．6％,阳性预期值分别为87．5％和64．3％,阴性预期值分别为82．2％和58．2％。抗-CCP阳性率在RF阴性的RA患者中为34．9％,抗-CCP阳性的RA患者有较高的C反应蛋白浓度和较多的关节肿胀,并且抗-CCP与患者的关节损伤率有一定的相关性,但是抗-CCP与DAS28评分之间无相关性。结论与RF相比,抗-CCP对诊断RA有较好的临床价值,并与影像学检查有一定的相关性。     

抗环瓜氨酸肽抗体检测在类风湿关节炎诊断中的临床意义

目的 检测类风湿关节炎(RA)血清中的抗环瓜氨酸肽(抗-CCP)抗体对RA诊断的灵敏度和特异性及其在风湿性疾病中的临床应用价值。方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)对175例RA、其他风湿性疾病患者133例和健康人41名进行抗-CCP抗体检测，并分析RA其他诊断指标与抗-CCP抗体的相关性。结果 175例RA患者中，抗-CCP抗体阳性率为84．6％(148／175)，其他风湿性疾病的阳性率为5．3％(7／133)。抗-CCP抗体对RA诊断的灵敏度为84．6％，特异性为94．7％。阳性和阴性似然比分别为16．08和0．16。抗-CCP抗体和类风湿因子(RF)、抗核周因子(APF)、抗角蛋白抗体(AKA)具有相关性。结论 抗-CCP抗体对RA诊断具有良好的灵敏度和特异性，可视为RA新的血清学指标。     

ELISA法检测血清抗心磷脂抗体

目的分析ELISA检测血清抗心磷脂抗体(ACA)的方法学影响因素,并对实验条件进行优化。方法用间接ELISA检测559份血清ACA水平,并以欧蒙公司标准品标定临界值,用以判定结果。结果对检测方法进行了优化,本试验特异性为96.4%(503/522),敏感性为89.2%(33/37),临床诊断符合率为96.2%(538/559)。结论优化后的ELISA法检测ACA具有敏感、特异、简便快速、重复性佳的特点,可用于血清ACA水平的常规检测。     

抗环瓜氨酸肽抗体水平测定对类风湿性关节炎的临床评价

目的 探讨抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体对类风湿关节炎(RA)诊断的临床意义.方法 用ELISA法对328例患者(RA124例、非RA 204例)及35例正常人血清CCP抗体进行检测,分析抗CCP抗体的水平与RF、AKA的相关性.结果 抗CCP抗体的阳性率在RA中为80.6%,在非RA中为3.4%,正常人全部阴性.3种抗体对RA诊断的敏感性和特异性分别为CCP 80.6%、96.6%;AKA 44.4%、93.6;RF 75.0%、74.0%.抗CCP抗体与AKA、RF之间显著相关(P<0.01).严重关节侵蚀、关节肿痛RA患者,抗 CCP 抗体水平高于无/轻微关节侵蚀、关节肿痛RA患者,两组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 抗CCP抗体对RA诊断具有很高的临床应用价值;抗CCP抗体水平的检测有助于预后判断,有望替代AKA与经典指标RF联合检测.ELISA法检测血清中抗CCP抗体,操作简便,结果可靠,易于临床推广应用.