1例非肌性肌球蛋白重链9基因相关疾病家系并文献复习

目的鉴定1例非肌性肌球蛋白重链9(MYH9)基因相关疾病家系的致病突变。方法调查收集先证者和家系成员病史资料,观察其临床特征和实验室检查指标。采用芯片捕获高通量测序方法检测先证者MYH9基因,确定突变位点后,对先证者和家系成员进行Sanger验证。结果该家系三代4名患者均有鼻衄、瘀斑紫癜、外伤血肿或月经量增多病史,长期存在镜下血尿和蛋白尿。血涂片镜检均有血小板减少、巨大血小板和粒细胞异常包涵体"三联征"。所有患者MYH9基因第40内含子供体剪接位点存在错义突变c.5765+2TA(p.R1922Rfs*43),且该基因突变与疾病表型共分离。结论该家系存在MYH9基因c.5765+2TA(p.R1922Rfs*43)剪接突变,是MYH9基因相关疾病的致病突变,为国内首次报道。     

一角膜营养不良家系的TGFBI基因突变*

摘要:目的对一角膜营养不良家 系的致病基因进行检测,明确该家系角膜营养不良的致病基因突变位点。方法采集先证者及其家系成员外周血标本，提取基因组DNA,采用全外显子组测序筛查先证者致病基因及突变位点，并通过Sanger测序对 先证者及其家系成员DNA样本进行验证。结果全外显 子测序结果显示，先证者5号染色体上的转化生长因子β诱导基因(TGFBI)4号外显子发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,8号外显子发生c.1007 A>T(p.E336V)杂合突变。Sanger 测序验证 发现患者父亲及家系其他患者TGFBI基因也发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,患者母亲及家系其他正常成员未见TGFBI基因发生突变。TGFBI基因c.370 C>T(p.R124C)突变与疾病表型共分离。结论TGFBI 基因e.370 C>T(p.R124C)杂合突变 是导致该家系角膜营养不良的致病原因。     

用 Ion Torrent 半导体测序技术对血友病 B 家系 F9 基因行突变分析及产前诊断

目的用Ion Torrent半导体测序技术对11个血友病B(HB)家系的F9基因进行序列分析,寻找致病突变,并为遗传咨询和产前诊断提供依据。方法采集11个HB家系先证者及女性成员的外周血样本,抽提基因组DNA,利用Ion Torrent半导体测序技术检测F9基因致病突变,对发现的致病突变进行Sanger测序验证。进一步对7例高危家系孕妇进行羊膜腔穿刺,采集胎儿羊水样本,并进行产前诊断。结果 13例HB患者均存在F9基因致病性突变,共发现10种突变,其中1种为新的突变类型。对8例胎儿进行产前诊断,其中1例为半合子突变,2例为杂合突变,5例不携带母源致病突变。结论用Ion Torrent半导体测序技术检测F9基因的突变谱,对于HB家系携带者的产前诊断具有一定的临床意义。     

1例男性乳腺癌患者的临床特征及基因突变分析

目的对1例异时性男性乳腺癌和结肠癌患者及其家系成员进行基因突变分析,以明确病因,便于指导临床风险管理决策。方法采用全外显子测序技术对先证者外周血样本进行基因突变分析,结合表型资料,确定候选基因的可能致病位点。应用Sanger测序技术对先证者及其家系成员候选突变位点进行共分离验证。结果在先证者BRCA2基因第11号外显子中发现c.64026406delTAACT (p.Asn2134fs)杂合突变,该突变在乳腺癌信息中心(BIC)、ClinVar数据库中已有报道,为乳腺癌致病性突变。Sanger测序证实其儿子也为该突变的携带者,而其患结肠癌的母亲未检测到该突变。结论 BRCA2基因c.64026406delTAACT突变是该先证者乳腺癌的致病突变位点,而先证者及其母亲所患结肠癌可能为散发。     

Ⅰ型肢根型点状软骨发育不良家系的遗传学分析

目的分析1个Ⅰ型肢根型点状软骨发育不良家系过氧化物酶生物合成因子7(peroxisomal biogenesis factor 7,PEX7)基因突变情况,探讨其致病原因。方法采集先证者留存羊水样本,先证者父母及其外祖父母、舅舅和50例体检健康者外周血,提取基因组DNA,进行全外显子组测序及生物信息学分析,采用Sanger测序法进行验证。结果先证者母亲及先证者外祖母存在PEX7基因c.45₅2dupGGGACGCC位点杂合突变,先证者父亲存在PEX7基因c.527-1G>C剪接位点杂合突变,先证者存在PEX7基因c.45₅2dupGGGACGCC位点和c.527-1G>C剪接位点复合杂合突变;先证者舅舅及先证者外祖父、50例体检健康者2个位点均为野生型。PEX7基因c.45₅2dupGGGACGCC位点突变为已报道的致病性突变;c.527-1G>C剪接位点突变未报道,为可能致病性突变。结论 PEX7基因复合杂合突变可能是该家系Ⅰ型肢根型点状软骨发育不良患儿的致病原因。     

中国汉族人群vWF基因MspⅠ和RsaⅠ限制性片段长度多态性研究

目的：研究我国汉族人群ｖＷＦ基因的多态性特点。方法：应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术结合ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ酶切分析研究了５２名汉族人１０４条染色体ｖＷＦ基因ＭｓｐⅠ限制性片段长度多态性（ＲＦＬＰ）和４８名汉族人９６条染色体的ＲｓａⅠＲＦＬＰ。结果：在我国汉族人中，等位基因ＭｓｐⅠ＋／ＭｓｐⅠ－的频率为０．２０∶０．８０，理论杂合频率为３６％；ＲｓａⅠ＋／ＲｓａⅠ－的频率为０．９３∶０．０７，理论杂合频率为１３％。结论：在我国汉族人中，在ｖＷＦ基因的５′端存在ＭｓｐⅠ和ＲｓａⅠ的多态性位点，可用于血管性血友病的遗传咨询和产前诊断。     

遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系中R152Q及IVS6+1G→T突变的鉴定

目的检测1个遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症家系中因子Ⅶ基因的突变。方法应用PCR结合直接测序的方法对先证者的因子Ⅶ基因9个外显子及其侧翼序列进行分析，鉴别其中可能存在的基因变异。应用PCR产物反向测序法或PCR限制性内切酶分析技术对突变位点进行确证。随机选取100名健康体检者作为正常对照。结果先证者FⅦ基因第6外显子和第6内含子分别存在R152Q和IVS6＋1G→T杂合突变，家系分析表明这2个突变是双重杂合子型，前者遗传自父亲，后者遗传自母亲。100名健康对照者均未发现R152Q错义突变。结论FⅦ基因第6外显子R152Q错义突变和第6内含子供体剪接位点IVS6＋1G→T突变可能是先证者因子Ⅶ先天性缺陷的原因。     

1例罕见Melnick-Needles综合征患者基因变异分析

目的 研究1例Melnick-Needles综合征家系的致病基因并为该家系提供遗传咨询依据。方法 采集先证者即1例不明原因骨骼发育异常、身材矮小的青年女性患者及其父母外周血标本,提取基因组DNA,采用家系全外显子组测序(Trio-WES)筛查先证者致病基因及突变位点,并通过Sanger测序进行验证。结果 先证者位于X染色体上的FLNA基因有一杂合变异位点：NM＿001110556.2:c.3562G>A(p.A1188T),父母均为野生型。根据ACMG指南,提示FLNA基因的c.3562G>A突变为1个致病突变位点,与X连锁显性遗传疾病Melnick-Needles综合征相关。国内未见该致病位点报道。结论 确诊1例罕见Melnick-Needles综合征,致病FLNA突变c.3562G>A在国内为首次报道,为患者及家属遗传咨询提供了依据。     

SPTB基因新型复合杂合突变致遗传性球形红细胞增多症遗传学分析及产前诊断

目的:探讨一个遗传性球形红细胞增多症(HS)家系的临床及遗传学特征,明确其致病原因并为遗传咨询和产前诊断提供依据.方法:收集家系成员的临床资料,应用高通量测序的方法检测先证者HS相关致病基因变异情况,采用PCR-Sanger测序法对疑似致病突变位点进行家系验证,对先证者母亲所妊娠的胎儿行产前诊断.结果:先证者临床表现为...     

一例Fechtner综合征临床与分子缺陷研究——附文献复习

目的对1例Fechtner综合征先证者及其家系进行临床与实验室研究并检测非肌性肌球蛋白重链9基因（MYH9）突变。方法采用瑞特染色观察先证者及其家系患者的外周血涂片血小板和中性粒细胞的特殊形态；透射电镜观察先证者血小板及中性粒细胞的超微结构。从先证者及其家系成员外周血白细胞中提取基因组DNA，PCR扩增MYH9的40个外显子及侧翼内含子序列，检测其基因突变。结果该家系中Fechtner综合征患者表现为血小板减少、巨大血小板、中性粒细胞包涵体，伴或不伴遗传性肾炎。先证者及其家系患病成员的MYH9改变为外显子40第5981位核苷酸C-T杂合改变，使第1933位密码子CGA（编码Arg）突变为终止密码TGA。结论国内首次报道Fechtner综合征家系。MYH9（外显子40）R1933X杂合改变是导致Fechtner综合征的原因。     

高通量测序技术在遗传性白内障诊断中的应用研究

目的探讨高通量测序技术在遗传性白内障诊断中的应用价值。方法提取先证者(34岁先天性白内障孕妇)及其家系18例家庭成员外周血全基因组DNA,采用高通量测序法筛查先证者可疑致病突变位点,采用Sanger测序方法验证先证者及其他家庭成员的可疑致病位点,在先证者孕16周时进行羊水穿刺,提取胎儿DNA并采用Sanger测序法进行验证。结果先证者和家系另10例患者均存在GJA3基因(NM_021954.3)c.176 CT位点错义杂合突变,8例表型正常的家系成员和胎儿均未检测到该位点突变。结论 GJA3基因c.176 CT位点错义杂合突变为该家系致病基因突变,该突变位点具有致病性;高通量测序结合Sanger测序技术是一种成本相对较低、速度较快、结果可靠的分子诊断方法,可应用到先天性白内障的诊断及家庭成员的生育指导。     

１ 个脆性 Ｘ 综合征家系的 ＦＭＲ１ 基因 ＣＧＧ 重复及甲基 化状态分析

摘要：目的 应用 ＰＣＲ 微流控芯片毛细管电泳联合 ＭＳ ＭＬＰＡ 技术对 １ 个脆性 Ｘ 综合征家系进行 ＣＧＧ 重复序列和甲基化状 态分析，探讨 ＦＭＲ１ 基因甲基化程度和临床表型的关系。方法 应用 ＰＣＲ 微流控芯片毛细管电泳法对该家系 ２２ 个成员进行 ＦＭＲ１ 基因 ＣＧＧ 重复数检测，采用甲基化特异性多重连接依赖探针扩增（ＭＳ ＭＬＰＡ）技术检测 ＦＭＲ１ 基因启动子区域 ＣｐＧ 岛 的甲基化情况，并用 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ 印迹杂交技术对全突变患者进行验证。结果 ２２ 个家系成员中检出前突变携带者 ８ 例，全突变 女性携带者 １ 例，脆性 Ｘ 综合征男性患者 ４ 例。ＭＳ ＭＬＰＡ 分析发现女性正常型和前突变携带者的甲基化比值分别为 ０．２５ ～ ０．４８（中位数 ０．３３）和 ０．３３～ ０．４６（中位数 ０．３８），两组间差异无统计学意义（ｔ ＝ ０．０９５，Ｐ＞０．０５），１ 例女性全突变携带者甲基化比 值为 ０．５２，高于正常型和前突变携带者，４ 例男性全突变患者甲基化比值均＞０．６４，中度智力障碍组和重度智力障碍组之间甲 基化比值差异无统计学意义（ｔ ＝ ０．５８，Ｐ＞０．０５）。结论 ＣＧＧ 重复数检测和甲基化分析可为脆性 Ｘ 综合征家系成员提供准确 全面的分子诊断；男性患者临床表型和甲基化程度相关。     

三个遗传性血小板无力症家系临床表型和基因表型诊断的研究

目的对3个遗传性血小板无力症（glanzmann thrombasthenia，GT）家系进行血小板膜糖蛋白Ⅱb、Ⅲa（GPⅡb／GPⅢa）基因突变的检测。方法应用PCR对先证者GPⅡb／GPⅢa基因所有外显子及其侧翼序列进行扩增；PCR产物纯化后直接测序，检测其突变基因。突变位点经直接测序证实排除基因多态性。结果3个家系的先证者PLT均正常，血小板形态分散，出血时间（BT）延长，凝血象正常，对二磷酸腺苷（ADP）、凝血酶、肾上腺素、胶原、花生四烯酸等多种诱聚剂反应低下，而对瑞斯托霉素反应基本正常；家系1和家系2先证者的血小板膜表面CD41，（GPⅡb）／CD61（GPⅢa）的含量极度降低，分别为0．16％／1．8％、0．9％／3．7％，家系3先证者的血小板膜表面GPⅡb阳性血小板为10．1％，GPⅢa阳性血小板为12．8％。免疫印迹法几乎检测不到家系1和家系3先证者的α／Ⅱb。蛋白，家系2先证者的α／Ⅱb蛋白含量明显降低。家系1先证者在GPⅡb基因存在T2255G和C2671T复合杂合突变，家系2先证者在GPⅡb基因存在A2334C纯合突变，家系3先证者在GPⅡb基因存在C1750T和69-79del复合杂合突变。结论T2255G和C2671T复合杂合突变是导致家系1先证者发生GT的原因，A2334C纯合突变是导致家系2先证者发生GT的原因，C1750T和69-79del复合杂合突变是导致家系3先证者发生GT的原因。     

高通量MLPA基因分型技术在1个Del表型家系基因鉴定中的应用

目的 对1个Del表型家系作基因鉴定.方法 运用血型血清学方法对先证者及其家系的3名成员作RhD及相关血型抗原鉴定;提取先证者及其父母和妹妹的静脉血DNA.运用高通量红细胞血型基因的多重连接依赖探针扩增技术(MLPA)对先证者及其他成员血型基因作定性及定量分型;用PCR产物直接测序方法对发现的变异作确认.结果 血型血清学检测:先证者为Del表型,其他3名家系成员为正常的RhD阳性个体.MLPA基因分型:先证者有2条包含1227G＞A突变位点的RHD等位基因,而3名家系成员有1条包含1227G＞A突变位点的RHD等位基因及1条正常的RHD等位基因.结论 高通量红细胞血型基因分型的MLPA技术能够对Del表型作明确的基因鉴定,有助于节约宝贵的RhD阴性血液.     

先天性甲状腺功能减退症壮族患儿 ＴＳＨＲ 基因突变遗 传分析

摘要：目的 分析南宁市先天性甲状腺功能减退症壮族患儿促甲状腺激素受体（ＴＳＨＲ）基因突变及其特点。方法 以 ２１ 例患 有先天性甲状腺功能减退症的壮族患儿及其父母为研究对象。提取患儿及其父母的外周血 ＤＮＡ，采用荧光定量 ＰＣＲ 扩增 ＴＳＨＲ 基因所有 １２ 个外显子、外显子－内含子交界区以及 ３′端和 ５′端非翻译区，利用第一代测序法对基因扩增产物进行测序 并进行分析。结果 ２１ 例患儿中的 １２ 例存在 ＴＳＨＲ 基因突变，分别为 ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）纯合突变 ６ 例，ｃ．Ｃ１５４Ａ（ｐ．Ｐ５２Ｔ）和 ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）复合杂合突变 １ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ）杂合子复合 ｃ．Ｇ２１８１Ｃ（ｐ．Ｅ７２７Ｄ）纯合突变 １ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ（ｐ．Ｒ２６９Ｓ） 杂合子突变 ４ 例。４０ 例父母中存在的 ＴＳＨＲ 位点基因突变分别为 ｃ．Ｃ１５４Ａ（ｐ．Ｐ５２Ｔ）１ 例，ｃ．Ｇ２１８１Ｃ（ｐ．Ｅ７２７Ｄ）９ 例，ｃ．Ｃ８０５Ａ （ｐ．Ｒ２６９Ｓ）２４ 例。结论 先天性甲状腺功能减退症患儿的发病与父母 ＴＳＨＲ 基因具有遗传相关性，新发现的 ｃ． Ｃ８０５Ａ （ｐ．Ｒ２６９Ｓ）基因突变位点可能是壮族人群遗传性先天性甲状腺功能减退症的主要突变位点     

一例肥厚型心肌病家系的产前诊断和遗传分析

摘要：目的：对1例肥厚型心肌病（HCM）家系的孕妇进行产前诊断和遗传分析，探讨HCM致病基因突变与临床表型的联系。 方法：搜集该先证者及其家系成员临床资料，提取先证者外周血DNA、羊水细胞DNA、经培养的羊水细胞DNA，二代测序（NGS）筛查先证者的致病基因位点，PCR扩增产物直接测序验证HCM致病候选基因 MYH7 和 MYBPC3 的可疑致病突变序列，并检测羊水细胞潜在的致病突变。用遗传学数据资料和Mutation taster、PolyPhen-2、ANTHEPROT等生物信息学软件预测突变的致病性。 结果：测序结果显示先证者存在 MYH7 c.1988G＞A（p.Arg663His）和 MYBPC3 c.151G＞A （p.Ala51Thr）杂合突变，其父亲表型正常且未检出异常突变，[JP2]其表型正常的母亲仅携带 MYBPC3 c.151G＞A杂合突变。胎儿仅存在 MYH7 c.1988G＞A[JP]杂合突变，而 MYBPC3 无异常变异。突变效应预测和蛋白质结构功能分析显示这2种错义突变分别影响蛋白质的疏水性和抗原性，且遗传学数据资料显示 MYH7 c.1988G＞A为明确致病性突变。 结论：先证者 MYH7 c.1988G＞A为新发致病性突变或由于其父母为生殖嵌合所致， MYBPC3 c.151G＞A突变可能促进HCM的发生。胎儿虽然仅携带 MYH7 c.1988G＞A，但其表型可能仍为HCM。     

三个血友病B家系的基因诊断

目的 探讨中国汉族3个无关血友病B家系先证者凝血因子Ⅸ(FⅨ)基因突变及分子发病机制,对家系女性成员进行携带者诊断.方法 家系先证者及成员采静脉血,先证者表型诊断确诊后,检测先证者及其家系成员6个STR位点的基因多态性,进行家系遗传连锁分析,应用PCR法对先证者及可疑携带者FⅨ8个外显子及其侧翼序列进行扩增,用末端标记双脱氧法检测核酸序列.结果 家系1先证者FⅨ基因外显子6发现G22119A突变,家系2先证者FⅨ基因外显子2发现G7392C突变,家系3先证者FⅨ基因外显子8发现T32685C突变.结论 血友病B先证者FⅨ基因缺陷是其发病的分子机制.     

1个糖原累积症家系的分子诊断与产前诊断

目的对1个糖原累积症(glycogen storage disease,GSD)家系进行基因突变分析,并对该家系中的一高危胎儿进行产前分子诊断。方法采集该家系先证者及其父母外周血,采用二代测序方法查找先证者致病基因及突变位点,Sanger测序进行突变验证。确定先证者及其父母基因型后采集羊水标本,采用PCR扩增及直接测序方法进行产前分子诊断。结果该家系先证者为G6PC基因c.648GT纯合突变。双亲均为G6PC基因c.648GT杂合突变。胎儿携带与父母相同的c.648GT杂合突变。结论建立了对GSD进行分子诊断和产前分子诊断的方法,并成功应用于1个GSD家系。     

遗传性凝血因子Ⅶ缺陷症伴组织因子异常的研究

目的探讨1个遗传性凝血因子Ⅶ（FⅦ）缺陷症伴组织因子异常家系的临床出血机制。方法用DNA直接测序法对先证者FⅦ及组织因子（TF）基因的全部外显子及其侧翼5’和3’非翻译区进行分析，寻找突变基因。反向测序证实所发现的突变。用RT—PCR及筑巢式PCR扩增先证者FⅦ cDNA，检测FⅦ基因大的缺失和（或）插入突变。对其家系成员作突变基因检测。结果在先证者FⅦ基因启动子区检测到-55C→T杂合突变。该突变来自先证者的母亲。其姐姐也带有同样的杂合突变。其他家系成员的FⅦ基因未见突型。在先证者及所有家系成员的TF基因中均发现了9363C—T（Arg131Trp）杂合多态性，9363T基因杂合频率为2．63％。结论首次报道先证者的临床出血与FⅦ杂合突变及TF的杂合多态性有关。     

X-连锁迟发性脊髓骨骺发育不良家系的基因诊断

目的 探讨一个X-连锁迟发性脊髓骨骺发育不良(X-linked spondyloepiphyseal dysplasia tarda,SEDL)家系发病的分子机制,建立基因诊断方法 .方法 采用身高测量、影像学检查殚及家系分析进行临床诊断.收集相关家系成员的外周血标本.提取基因组DNA后,采用PCR-SSCP和DNA测序分析家系中先证者、携带者和健康人SEDL基因的第3～6外显子.利用微卫星位点DXS16进行连锁分析.结果 PCR-SSCP检测到先证者第4外显子有异常泳动带;第4外显子的序列分析表明3例先证者均存在C.218C＞T突变,导致氨基酸序列S73L改变,3例携带者均存在该核苷酸位点的杂合突变,健康人未见突变;先证者的第3、5和6外显子核酸序列未见突变.序列分析证实家系中3名未婚女性Ⅲ10、Ⅳ6和Ⅳ7为致病基因携带者.结论 C.218C＞T突变是导致该家系发病的分子机制,可采用第4外显子序列分析对该家系进行基因诊断和产前基因诊断.