应用pcr-sscp技术检测结核分枝杆菌耐链霉素相关基因rpsl和rrs突变

目的 应用聚合酶链反应-单链构象多态性(pcr-sscp)技术,建立快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsl和rrs突变的新方法.方法 采用常规药敏试验检测112株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素的耐药性,建立pcr-sscp法检测耐药相关基因rpsl和rrs的突变.采用pcr直接测序技术(pcr-ds)确定rpsl和rrs基因突变情况并与pcr-sscp法检测结果进行比较.结果 112株结核分枝杆菌临床分离株均携带rpsl和rrs基因,52株(46.4％)对链霉素敏感,其中有1株敏感菌株rrs基因pcr-sscp条带异常,pcr-sscp方法的特异性为98.1％ (51/52).60株(53.6％)结核分枝杆菌对链霉素耐药,用pcr-sscp方法分别检出46株(76.6％) rpsl基因和11株(18.3％)rrs基因条带异常,1株同时出现rpsl和rrs基因条带异常,pcr-sscp检测的灵敏度为93.3％ (56/60).结论 pcr-sscp方法检测结核分枝杆菌耐药相关基因rpsl和rrs突变的特异性和敏感性高,临床上值得推广应用. abstract： objective to establish a novel rapid detection method based on pcr-single-strand-conformational polymorphism (pcr-sscp) to determine mutation of streptomycin-resistance associated rpsl and rrs genes in isolates of mycobacterium tuberculosis (mtb).methods streptomycin-resistance of 112 mtb isolates was detected using the routine drug susceptibility test,and a special pcr-sscp assay was established.the mutations of rpsl and rrs genes in streptomycin-resistant mtb isolates were detected by pcr-sscp and pcr direct sequencing (pcr-ds) ; the results from two techniques were compared.results all isolates had both rpsl and rrs genes.fifty-two isolates (46.4％) were streptomycin susceptible,in which only 1 isolate showed abnormal pcr-sscp fragments from rrs gene,and the specificity of pcr-sscp was 98.1％ (51/52).sixty isolates (53.6％) were streptomycin-resistant,in which 46 (76.6％) and 11 ( 18.3％ ) isolates presented the abnormal pcr-sscp fragments of rpsl and rrs gene,respectively.one streptomycin-resistant isolate showed abnormal pcr-sscp fragments from both rpsl and rrs genes.the sensitivity of pcr-sscp was 93.3％ (56/60).conclusion the pcr-sscp that established in this study is a specific and sensitive method for rapid detection of the streptomycin-resistance associated mutations in rpsl and rrs genes of mtb.     

突变敏感性分子开关技术在检测乳腺癌磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α基因突变中的应用

目的 利用突变敏感性分子开关技术检测乳腺癌磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α(PIK3CA)基因A3140G突变频率,以便建立快速检测基因突变的技术方法.方法 用高保真DNA聚合酶介导的突变敏感性分子开关技术对62例乳腺癌组织和10例乳腺纤维腺瘤组织DNA进行检测,并利用凝胶成像系统对结果进行分析.结果 在62例乳腺癌患者中检测出10例PIK3CA基因A3140G突变(突变率为16.1％),10例乳腺纤维腺瘤中未发现该突变.PIK3CA基因A3140G突变与年龄、肿瘤大小、淋巴结状态、雌激素受体(ER)/孕激素受体(PR)状态、表皮生长因子受体-2(cerbB-2)和表皮生长因子受体(EGFR)表达等无相关.结论 突变敏感性分子开关技术可快速准确地检测乳腺癌PIK3CA基因A3140G突变.     

四例脂蛋白肾病患者载脂蛋白E基因突变筛查

目的 通过对4例脂蛋白肾病患者及家系成员载脂蛋白E(apoE)基因的分析， 研究脂蛋白肾病的发病机制。 方法 调查患者家系情况，对其中2例患者的家系成员进行尿常规筛查及血肌酐、血脂和血清脂蛋白的检测。PCR法扩增4例患者apoE基因的外显子， DNA测序， 发现突变后，寻找限制性内切酶酶切位点。使用聚合酶链反应-限制性酶切片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法筛查正常对照及其家系成员。 结果 4例脂蛋白肾病患者中有2例携带杂合的apoE基因缺失突变 (142-144-0)，2例患者携带杂合的apoE点突变 (Arg25Cys)，2种突变均可见于尿液检查正常的亲属，并均表现为apoE升高。 结论 4例脂蛋白肾病的患者中发现两种apoE基因的突变，apoE Arg25Cys和apoE(142-144-0)。结合既往的研究结果，apoE(142-144-0)同时见于5例(本研究2例，前期研究3例)患者，为中国脂蛋白肾病患者常见的致病性基因突变。患者家系成员中的携带者可以不表现出肾脏病。     

肺炎克雷伯菌cAMP受体蛋白基因缺失株的构建及其在生物膜形成中的作用

目的：构建肺炎克雷伯菌cAMP受体蛋白基因（crp基因）缺失突变株与回补株，了解crp基因在肺炎克雷伯菌生物膜形成中的作用。方法设计位于crp基因（566 bp）上游698 bp片段及下游576 bp片段的两对引物，分别扩增出相应片段并通过融合PCR构建一个1274 bp片段的突变盒，利用双酶切克隆的方法将突变盒克隆至温度敏感性自杀载体pKO3-Km的NotⅠ位点间，电转化至肺炎克雷伯菌中构建肺炎克雷伯菌crp基因无痕缺失突变株（Δcrp）。扩增包含crp基因编码、启动子结合区及转录终止区的2063 bp基因片段并克隆至pGEM-T-easy质粒上，将此质粒电转至crp基因缺失突变株中构建crp基因回补株（C-crp）。采用RT-PCR方法检测crp基因在基因缺失株与回补株的表达情况，确定crp基因缺失突变株与回补株构建成功。利用结晶紫染色法检测crp基因对肺炎克雷伯菌生物膜形成的影响，并通过酵母凝集试验检测crp基因对肺炎克雷伯菌的菌毛形成影响。结果成功构建了肺炎克雷伯菌crp基因缺失突变株与回补株，RT-PCR结果显示，crp基因在缺失突变株中无表达，在回补株重新表达。体外试管静止培养48 h后，crp基因缺失株无明显生物膜形成，而在野生株及回补株的液体培养基表面形成宽厚生物膜。结晶紫染色定量发现，crp缺失突变株的生物膜相对形成量显著低于野生株（0.063±0.011 vs 1.020±0.056，P＜0.001）。酵母凝集试验发现在crp基因缺失突变株中细菌菌毛生成能力下降，提示crp基因影响肺炎克雷伯菌菌毛的生成。结论肺炎克雷伯菌crp基因可能通过调控肺炎克雷伯菌菌毛生成而正调控细菌生物膜的形成。     

淋病奈瑟菌GyrA基因及ParC基因突变与耐喹诺酮类药物的关系

目的 :探讨淋病奈瑟菌DNA回旋酶A亚单位GyrA基因及拓扑异构酶ⅣC亚单位ParC基因突变与耐喹诺酮类药物之间的关系。　方法 :采用DNA序列测定法对 2 0株无锡地区淋病奈瑟菌临床分离株的GyrA及ParC基因的喹诺酮耐药决定区 (QRDR)相关序列进行测序分析 ,并利用琼脂扩散法检测了该 2 0株淋病奈瑟菌临床分离株对诺氟沙星药物的敏感性。　结果 :2 0株被检淋病奈瑟菌菌株在GyrA基因的两个常见突变位点之一的Ser91处均未发生突变 ,却在另一位点Asp95处则均有突变 ;而 19株被检淋病奈瑟菌菌株中有 16株发生了ParC基因的 86、87、88、91位点突变。　结论 :GyrA基因的Asp95位点突变与ParC基因的Asp86、Ser87、Ser88和Glu91位点突变共同参与了淋病奈瑟菌对喹诺酮类药物产生的耐药。     

微卫星不稳定结直肠癌hMLH1和hMSH2及hMSH6种系突变与hMLH1启动子甲基化检测

目的探究微卫星不稳定（MSI）结直肠癌患者的hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变特征和hMLH1启动子甲基化状态。方法对前瞻性收集的34例MSI结直肠癌患者检测其hMLH1、hMSH2和hMSH6种系突变，并研究其肿瘤的hMLH1启动子甲基化状态。结果34例MSI结直肠癌中。共检测到MLH1基因启动子的甲基化19例（55．9％）。19例MSI—H结直肠癌中检测到MLH1基因的甲基化14例（73．7％）；15例MSI—L结直肠癌检测到MLH1基因的甲基化5例（33．3％）；两组差异有统计学意义（P〈0．05）。全组共发现8个hMSH2和hMSH6基因的突变，其中hMSH6基因突变3个，hMSH2基因突变5个。结论中国人MSI结直肠癌错配修复基因突变（未测到MLH1基因突变）和MLH1基因启动子的甲基化检出率可能有别于国外MSI结直肠癌。     

fimH基因对泌尿道致病性大肠埃希菌1型菌毛粘附功能影响的初步探讨

目的 研究fimH基因对泌尿道致病性大肠埃希菌(UPEC)1型菌毛粘附功能的影响,比较1型菌毛粘附阳性与阴性菌株的基因变化.方法 对天津地区三家三级甲等医院(天津医科大学第二医院、天津市第一中心医院、天津市儿童医院)2012年1月至2013年1月非植入导尿管患者的尿液样本分离非重复感染大肠埃希菌171株进行研究,通过PCR检测fimH基因携带情况,酵母细胞粘附实验检测1型菌毛的粘附情况.针对fimH基因进行RT-PCR实验,消除转录对粘附作用的影响.采用常规x2检验和Yates校正x2检验比较fimH基因转录粘附阴性组与阳性组间fimH基因序列的改变.结果 天津地区UPEC菌株fimH基因携带率为83％,1型菌毛粘附率为57％,粘附阳性菌株均携带fimH基因.因fimH基因未转录导致粘附阴性的菌株占18％.第51位氨基酸位点粘附阳性组较阴性组更易发生突变(x2=6.64,P=0.010);第190位与第219位氨基酸位点于粘附阴性组各有6株菌和7株菌发生突变,而阳性组未见突变(x2=4.69和5.87,P值均＜0.05);粘附阴性组其余23株菌株无法用单核苷酸多态性改变解释其粘附阴性.结论 fimH基因的突变与缺失可以影响UPEC菌株1型菌毛粘附功能,除了转录调控外,还发现了可能引起1型菌毛粘附功能改变的3个关键位点;粘附过程中除fimH基因这一关键因素外,其他基因可能也会影响1型菌毛的粘附功能.     

浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变研究

目的 了解浙江省耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变特征.方法 利用传统药敏检测法和以PCR为基础的DNA测序对从浙江省立同德医院和浙江省中西医结合医院的188例结核病患者中分离的188株结核分枝杆菌进行耐药分析和rpoB基因突变分析,观察结核分枝杆菌利福平耐药决定区基因突变情况与临床耐药的关系.结果 188株临床分离株中有57株为耐药株(30.3％),其中单耐利福平18株(9.6％),单耐其他抗结核药物28株(14.9％)(异烟肼10株、链霉素12株和乙胺丁醇6株);耐2种或2种以上药物(包括异烟肼、链霉素和乙胺丁醇)的多耐药临床分离株11株(5.9％).29株耐利福平菌株中,27株(93.1％)存在rpoB基因突变,其中526位突变率为55.6％ (16/27),513位突变率为22.2％(5/27),531位突变率为14.8％ (4/27),529位突变率为7.4％ (2/27);28株耐其他抗结核药物分离株中,4株(14.3％)存在rpoB基因突变,突变位点分别位于526位(2株)和513位(2株).其余131株敏感菌株rpoB基因均无突变发生.结论 浙江省耐利福平结核分枝杆菌与rpoB基因突变有关,主要以526位与513位突变为主.     

血管紧张素Ⅱ受体A1166C基因多态性对体外循环中血压的影响

目的 研究血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1R)基因多态性对体外循环(CPB)术中转流平稳期病人动脉血压的影响。方法 详细记录82例病人CPB转流平稳期的平均动脉压(MAP)，放免法测定所有病人CPB前和CPB中血浆血管紧张素Ⅱ的浓度，用PCR-RFLP方法检测其ATIR基因型，根据突变与否分为突变组与正常组。结果 突变组7例，正常组75例。突变组病人观察期内MAP的平均值(MMAP)、最小值(Mini)和扩血管药的用量与正常组相比差异有显著性，其与血浆中血管紧张素Ⅱ的浓度无关。结论 AT1R基因多态性对CPB转流平稳期血压状态有明显影响，可能是CPB中某些情况下循环高灌注和CPB预后不良的原因之一。     

尿液中多基因启动子甲基化联合检测诊断膀胱癌的研究

目的探索一种更加有效的通过尿液细胞中多基因甲基化分析诊断膀胱癌的方法。方法应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测37例膀胱癌患者和31例非膀胱癌对照患者尿液中P14、RASSF1A、SLIT2、RASAL1基因启动子区的甲基化状态。结果尿液细胞中通过P14、RASSF1A、SLIT2、RASAL1基因启动子区的甲基化状态检测膀胱癌的敏感性分别为75.7%、75.7%、62.2%、37.8%,与此相对它们的特异性为77.4%、90.3%、90.3%、93.5%。当4个基因中只有一个出现甲基化就诊断为膀胱癌时的敏感性为89.2%。结论膀胱癌患者尿液中多基因甲基化联合分析可能是一种高效的诊断膀胱癌的方法。     

脊柱结核耐药性检测及耐药基因PCR-SSCP分析的应用价值

目的了解临床脊柱结核耐药情况,探讨耐药基因PCR-SSCP分析的临床应用价值。方法31例脊柱结核病灶应用BACTECMGIT960培养,所得临床分离株行药敏试验,对耐药基因rpsL、katG、rpoB行PCR-SS-CP分析。结果31例样本中27例培养阳性,其中18株存在不同程度耐药,总耐药率为66.67%。药物耐药率由高至低为链霉素10株(55.56%)、异烟肼8株(44.44%)、利福平7株(38.89%)、PZA3株(16.67%)。耐链霉素株rpsL突变率为70%,耐异烟肼株katG突变率为50%,耐利福平株rpoB突变率为71.43%。高浓度水平耐药株耐药基因突变率明显高于低浓度水平耐药株。结论常规药敏试验与耐药基因分析相结合可能更能准确地反应MTB的耐药情况。     

应用Xpert MTB/RIF对脊柱结核临床标本行结核分枝杆菌与利福平耐药性检测的验证性研究

 目的 采用Xpert MTB/RIF系统对系列脊柱结核临床标本进行结核分枝杆菌检出与利福平耐药基因rpoB突变检测,初步验证该项技术的可行性与准确性。方法 自全军结核病研究所标本库中筛选140份脊柱结核临床标本,对标本行前处理后采用Xpert MTB/RIF系统进行结核分枝杆菌与利福平耐药基因rpoB的突变检测,以培养结果及表型药敏试验为金标准,判断Xpert MTB/RIF检测的敏感度、特异度、95%置信区间及检测耗时。结果 对临床确诊为脊柱结核的140份临床标本,Xpert MTB/RIF系统的结核分枝杆菌阳性检出率为63.57% (89/140);在64份培养阳性标本中,Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度为98.44% (63/64);在76份培养阴性标本中,Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌的敏感度为34.21% (26/76)。以表型药敏试验为金标准,采用Xpert MTB/RIF系统行利福平耐药性检测的敏感度为93.33% (28/30),特异度为94.12% (32/34)。Xpert MTB/RIF系统平均检测耗时为2.1 h (1.8~2.6 h)。结论 Xpert MTB/RIF是一种简便、快速、准确,且能够同时对脊柱结核临床标本行结核分枝杆菌检测与利福平耐药性检测的分子检测技术,具有潜在的临床应用价值。     

人类免疫缺陷病毒/结核分枝杆菌双重感染者结核分枝杆菌分离株一线药物耐药特征

目的分析人类免疫缺陷病毒(HIV)感染者的结核分枝杆菌(MTB)分离株对一线抗结核分枝杆菌药物的耐药特征,为临床治疗HIV/MTB双重感染提供参考依据。 方法选取上海市公共卫生临床中心2012年1月至2016年12月收治的HIV合并MTB感染者154例(实验组)和单纯结核分枝杆菌感染者357例(对照组),进行异烟肼(INH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)、链霉素(STR)4种一线药物耐药性检测,比较两组患者MTB的总耐药率和总耐多药率,初始及获得性耐药、耐多药率。 结果HIV/MTB双重感染组患者总耐药率(44.2%,68/154)、初始耐药率(42.2%,19/45)、初始耐多药率(13.3%,6/45)、STR总耐药率(31.8%,49/154)和初始耐药率(28.9%,13/45)显著高于单纯结核分枝杆菌感染组(33.9%、25.0%、3.8%、22.7%、11.4%)(P均<0.05)。INH、RFP、EMB耐药率与单纯结核分枝杆菌感染组差异无统计学意义(P均> 0.05)。单纯结核分枝杆菌感染组患者获得性耐药率(39.1%,88/225)和获得性耐多药率(19.1%,43/225)分别高于初始耐药率(25.0%,33/132)和初始耐多药率(3.8%,5/132)(χ²= 16.785、P < 0.001;χ²= 7.393、P = 0.004)。 结论HIV/MTB感染者分离的MTB对一线抗结核分枝杆菌药物耐药率和耐多药率高,其中STR耐药最为严重,提示临床治疗应重视HIV/MTB双重感染者的结核耐药问题,及时采取预防措施和制定个体化治疗方案。     

荧光定量PCR技术检测肺外结核患者样本临床应用

目的评估赛沛分子检测技术（结核分枝杆菌和利福平耐药基因）（GeneXpert MTB/RIF）检测心包和胸腔积液样本中结核分枝杆菌的有效性。 方法收集2015年1月至2017年6月天门市第一人民人民医院和汉川市人民医院收治的286例结核病疑似患者的临床资料,分别收集158例胸腔积液和128例心包积液样品。每个样品均经过抗酸染色涂片镜检、罗氏培养基结核分枝杆菌培养（LJ培养）和GeneXpert MTB/RIF测定。使用结核分枝杆菌罗氏培养作为金标准,评估GeneXpert MTB/RIF技术检测MTB的有效性。 结果在286例积液样本中,MTB通过LJ培养阳性者51例（17.8%）,GeneXpert MTB/RIF测定阳性者43例（15%）,抗酸染色镜检阳性者11例（3.8%）。GeneXpert技术灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为84.3%、100%、100%和96.7%,抗酸染色方法的灵敏度、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为18.3%、99.1%、81.8%和85.4%。GeneXpert技术检查心包积液中MTB的灵敏度可达90%。GeneXpert MTB/RIF和抗酸染色镜检鉴定两种样本中结核分枝杆菌有效性的差异具有统计学意义（χ² = 233.199、33.715、P均< 0.001）。 结论GeneXpert MTB/RIF技术对于检测胸腔和心包积液中的MTB具有高灵敏度和高特异性。     

结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测在脊柱结核诊断中的应用

目的探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素定量检测(TB-IGRA)在脊柱结核诊断中的应用价值。方法分析44例疑似脊柱结核病例资料,结合最终临床诊断,分为脊柱结核组和非脊柱结核组,计算TB-IGRA、抗结核抗体(TB-Ab)检测、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测(Xpert MTB/RIF)及病理学检测4种方法诊断脊柱结核的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值,采用kappa一致性检验评估TB-IGRA与TB-Ab检测、Xpert MTB/RIF及病理学检测结果的一致性。结果纳入的44例患者中,确诊或高度怀疑脊柱结核病28例,确诊非脊柱结核16例。TB-IGRA的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为85.7%、68.8%、82.8%和73.3%;TB-Ab检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为53.6%、87.5%、88.2%和51.9%;Xpert MTB/RIF的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为68.8%、71.4%、84.6%和50.0%;病理学检测的灵敏度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为92.9%、100%、100%和88.9%。TB-IGRA与TB-Ab诊断结果一致性较差(κ=0.25),与Xpert MTB/RIF及病理学诊断结果一致性较高(κ=0.68、0.71)。结论TB-IGRA作为脊柱结核的辅助诊断手段,简便、快速,灵敏度和特异度较高,尤其适用于不方便获取病灶组织的患者。     

Xpert MTB/RIF在脊柱结核诊断及利福平耐药检测中的应用价值

目的:探讨Xpert MTB/RIF技术在脊柱结核诊断及利福平耐药检测中的应用价值。方法:选取109例初步诊断为脊柱结核患者的脓液标本,分别行抗酸染色、BACTEC MGIT 960液体快速培养和Xpert MTB/RIF试验,对比3种检测结核分枝杆菌的敏感性及特异性的差异。对不同方法获取的脓液标本行Xpert MTB/RIF检测,评估脓液标本本身对Xpert MTB/RIF检测结核分枝杆菌效能的影响。以BACTEC MGIT 960液体快速培养药敏试验结果为金标准,分析Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的效能。结果:抗酸染色、BACTEC MGIT 960液体快速培养及Xpert MTB/RIF检测的总体敏感性分别为25.92%、48.15%和77.78%。Xpert MTB/RIF检测开放手术、B超定位穿刺和穿刺活检取得脓液标本的敏感性分别为83.78%、76.47%和44.68%。以BACTEC MGIT 960液体快速培养药敏试验结果为金标准,Xpert MTB/RIF检测利福平耐药的敏感性和特异度分别为80%(4/5)和90.70%(39/43)。结论:Xpert MTB/RIF试验对脊柱结核具有较高的诊断价值,同时能对利福平耐药菌株进行检测,脓液标本中结核分枝杆菌含量对Xpert MTB/RIF检测的敏感性影响较大。     

应用微列阵技术快速鉴定常见致病性分枝杆菌

目的利用微列阵技术建立一种简便、快速、灵敏、特异的分枝杆菌菌种鉴定方法,为临床医师正确诊断提供依据。方法以DNA测序法为对照,通过微列阵技术分析20种分枝杆菌标准株及473株分枝杆菌临床分离株。结果微列阵技术分析20种分枝杆菌标准株,特异性为100％,在473株分枝杆菌临床分离株中,358株与分枝杆菌属探针和结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）复合群探针杂交阳性,鉴定为MTB复合群。115株为非结核分枝杆菌（nontuberculosis myvobacterial,NTM）,其中47株为龟分枝杆菌龟亚种和脓肿亚种,32株为胞内分枝杆菌,15株为鸟分枝杆菌,11株为堪萨斯分枝杆菌,4株为偶然分枝杆菌,2株为戈登分枝杆菌,2株为土分枝杆菌,2株只与分枝杆菌属探针杂交,经测序显示1株为副瘰疬分枝杆菌,1株为莫娜分枝杆菌,芯片上无鉴定这2个菌种的探针。结论做列阵技术是一种能准确、高效鉴定分枝杆菌菌种的分子诊断技术,对临床快速、特异诊断结核病具有重要意义。     

二代测序技术应用于脑脊液检测在结核性脑膜炎中的早期诊断价值

目的评价二代测序技术应用于脑脊液检测在结核性脑膜炎（TBM）患者中的早期诊断价值。 方法前瞻性纳入2018年2月2日至2018年8月2日于山东省胸科医院就诊的临床怀疑TBM的患者共50例,并跟踪随访其诊疗结局。送检脑脊液标本均进行二代测序,测序所得原始序列与病原微生物数据库进行对比得到最终结果。二代测序结果以检测到结核分枝杆菌复合群唯一比对序列为阳性,未检测到唯一比对序列为阴性。以符合脑脊液结核分枝杆菌培养阳性、涂片阳性、Xpert MTB/RIF检测阳性及结核分枝杆菌核酸检测阳性等4项中至少1项即为确诊TBM患者;临床可疑TBM且抗结核治疗有效为临床诊断患者;有其他病原学依据或临床排除TBM者为非TBM患者。分析二代测序在TBM早期诊断中的敏感性和特异度。 结果确诊为TBM患者22例中Xpert MTB/RIF检测阳性13例,培养阳性6例,结核分枝杆菌核酸PCR检测阳性5例,临床诊断为TBM患者12例,非TBM患者16例。在确诊及临床诊断患者中,二代测序技术检测到结核分枝杆菌复合群系列20例,敏感性为58.8%（20/34）,特异度为100%（16/16）。在确诊患者中,二代测序的敏感性为63.6%（14/22）;在同步进行结核分枝杆菌培养、Xpert MTB/RIF检测与二代测序的50例标本中,以临床诊断为标准,3种方法的特异度均为100%（16/16）;传统方法、Xpert MTB/RIF检测及二代测序的敏感性分别为29.4%（10/34）、38.2（13/24）和58.8（20/34）,前两种检测方法与二代测序敏感性差异均有统计学意义（McNemar检验：χ² = 8.333、P = 0.013,χ² = 8.333、P = 0.065）。传统方法与二代测序联合检测的敏感性高达82.4%（28/34）。 结论二代测序技术能够较快速地检测脑脊液中的结核分枝杆菌复合群,且其敏感性和特异度均较高,可作为TBM的早期诊断指标。二代测序联合传统检测方法可提高检出率。     

Characteristics of patients with drug resistant and drug sensitive tuberculosis in East London between 1984 and 1992.

BACKGROUND--The aim of this study was to investigate retrospectively factors associated with drug resistant tuberculosis at the London Chest Hospital. METHODS--The microbiology results for patients with tuberculosis at the hospital for the period 1984-92 were reviewed, together with case notes and chest radiographs of all patients with drug resistant tuberculosis and of 101 patients with drug sensitive tuberculosis notified during the same period as a control group. RESULTS--Culture positive pulmonary tuberculosis occurred in 292 patients. Drug resistant strains were isolated from 20 patients (6.8%). Ten of the 292 (3.4%) had strains resistant to a single drug and nine (3.1%) had resistance to more than one first line drug. One patient had strains resistant to isoniazid and capreomycin. Strains resistant to more than one drug were all resistant to isoniazid and rifampicin. In five patients these strains were also resistant to pyrazinamide and in two they were resistant to streptomycin. Single drug resistant strains were resistant to isoniazid (nine patients) or streptomycin (one patient). Among the risk factors studied previous treatment for tuberculosis was the most significant association with drug resistant tuberculosis (7/9) for patients with resistance to more than one drug; 5/11 for single drug resistance compared with 6/101 patients in the drug sensitive group (odds ratio 22.8). Other risk factors were bilateral disease at presentation (odds ratio 8.5), and disease at a young age (odds ratio 1.03). CONCLUSIONS--Previous treatment for tuberculosis and bilateral disease at presentation were found to be more commonly associated with cases of drug resistant than with drug sensitive tuberculosis.     

馆陶县2012至2014年初治涂阳肺结核患者分枝杆菌培养及耐药

目的调查本县初治涂阳肺结核患者分枝杆菌培养及耐药情况,为分析结核病的防治措施提供依据。 方法选择2012-2014年于本县医院诊治的初治涂阳肺结核患者,在对其进行分枝杆菌培养的基础上,将阳性菌株送至本市相关实验室进行菌种鉴定以及药物敏感性分析。 结果本研究中共收治562例初治涂阳肺结核患者,其中性别比男︰女= 2.23︰1,平均年龄（41.2±3.7）岁;菌群类别：结核分枝杆菌492株（87.54%）,非结核分枝杆菌70株（12.46%）。敏感株为448株（79.72%）,耐药菌株为114株（20.28%）,其中耐多药菌株为36株（6.41%）,单耐药患者以耐链霉素（S）为常见（5.34%）,其次为耐异烟肼（称H）（4.63%）。多耐药中以至少耐异烟肼、链霉素（HS）为常见（22/562,3.91%）,其次为耐异烟肼、利福平（耐HR）（3.73%）。多耐药中耐两药者16例（2.85%）,耐3药者17例（3.02%）,耐4药者3例（0.53%）。耐药顺序为S > H > R > E。 结论中青年男性为肺结核防治的高危人群,需要对其进行密切防控。本县结核分枝杆菌复合群菌株的耐药率虽不高,但初治涂阳患者存在耐多药,需要进一步改进结核病的防控工作。