VEGF对大鼠海马回神经干细胞体外增殖和分化的影响

目的： 观察血管内皮细胞生长因子(VEGF)对大鼠海马回神经干细胞（NSCs）增殖和分化的影响。方法: 自生后第3 d的SD大鼠脑海马区分离NSCs，进行体外培养并传代，分为2组：（1）VEGF组加入150 μg/L VEGF的培养液培养；（2）对照组未加VEGF。培养7 d后，撤除VEGF，分别在第7 d及第11 d通过相差显微镜观察细胞形态，并用免疫荧光方法检测nestin和NF的表达，计算各组免疫染色阳性细胞率。结果: 在VEGF作用下第7 d，VEGF组nestin阳性细胞率为52.19%±7.95%，多于对照组的29.26%±4.12%（P<0.01），NF阳性细胞率为22.33%±4.13%，对照组仅有38.62%±5.31%（P<0.01）；在实验第11 d，VEGF组NF阳性细胞率为43.10%±3.70%，对照组仅30.56%±4.16%，P<0.01。结论: 本实验提示VEGF能促进NSCs的增殖,并抑制其分化。     

bFGF和EGF对胚胎神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的影响

目的：观察碱性成纤维生长因子（bFGF）和表皮生长因子（EGF）对体外培养胚胎神经管神经干细胞生长和分化的影响。方法：从孕12天大鼠胚胎神经管分离神经干细胞，进行原代培养，分为bFGF组、EGF组、bFGF＋EGF组及对照组：培养过程中观察干细胞的生长，培养2小时做nestin染色鉴定神经干细胞，培养第5天用免疫组化方法检测培养细胞神经元特异烯醇化酶（NSE）和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达，以观察神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的状况。结果：取材细胞大部分为nestin免疫阳性细胞；各实验组均可促进培养细胞的生长和分 化。免疫组化中，EGF使神经干细胞增殖成团，增加GFAP的表达（P＜0．01）；bFGF能明显增加NSE及GFAP的表达（P＜0．01）；两种因子联合应用，神经元和神经胶质细胞均比对照组增多（P＜0．01）。结论：EGF和bFGF两类生长因子均能促进胚胎神经干细胞的生长，在分化方面，EGF倾向于诱导干细胞增并向着胶质细胞分化，bFGF则诱导干细胞分 成更多的神经元。     

人胚胎干细胞向内皮细胞的分化诱导

BACKGROUND:Human embryonic stem cells exhibit self-renewal and multi-differentiation potential, and can differentiate into endothelial cells under certain induction conditions. OBJECTIVE:To explore induced conditions of the human embryonic stem cells differentiating into endothelial cells and to investigate the effect of vascular endothelial growth factors on the endothelial differentiation of human embryonic stem cells. METHODS:After resuscitation, passage 40 human embryonic stem cell lines H9 were subjected to suspension culture to prepare embryos, and after 5-day culture, these cells were cultured in attachment medium to differentiate into embryoid bodies, followed by induction with 50 µg/L vascular endothelial growth factors. Passage 2 and 15 embryonic stem cells after induced differentiation were taken for Dil-Ac-LDL uptake test and immunohistochemical staining, respectively. RESULTS AND CONCLUSION:After 1-day culture, cord-like or polygonal monolayer cells around embryoid bodies showed bud-like and radial growth with a relative rapid speed merging into surrounding colonies; at 2-3 days, the number of suspension cells increased further, but the small-round cells in the center began to die; at 5 days, embryoid bodies started to passage, and aggregated cells exhibited typical paving stone-like appearance. Moreover, some human embryonic cells after induced differentiation could actively take up fluorescent labeled LDL, and red fluorescent particles appeared. Additionally, passage 15 embryonic stem cells after induced differentiation could express CD31 and FLK-1. These findings suggest that human embryonic stem cells induced by vascular endothelial growth factors can differentiate into endothelial cells.     

外周血造血干细胞动员对循环血管内皮细胞的影响

目的 :探讨自体外周血干细胞动员对循环血管内皮细胞 (CirculatingEndothelialCells ,CECs)和循环血管内皮前体细胞 (CirculatingEndothelialPrecursors ,CEPs)的影响。方法 :采用流式细胞法检测 6 8例肿瘤患者及 15例正常人外周血CECs和CEPs ,其中 11例患者 (4例乳腺癌、7例淋巴瘤 )经造血干细胞动员 (常规化疗 G CSF)。结果 :肿瘤患者外周血中循环血管内皮及其前体细胞分别为 0 378%± 0 10 3%和 0 0 5 9%± 0 0 13% ,高于正常对照组。经造血干细胞动员后患者外周血CECs和CEPs升高。结论 :G CSF在动员造血干细胞的同时 ,对血管内皮干 /祖细胞亦有动员作用。     

干细胞与神经元、神经胶质细胞的分化

神经细胞与神经胶质细胞的分化是发育神经生物学中颇具挑战性问题，目前仍有许多问题有待探索与解决。对这一领域的研究作一回顾与总结，有助该课题的深入研究。     

VEGF转基因神经干细胞移植对大鼠急性放射性脑损伤后脑组织中NSE表达的影响

目的： 探讨血管内皮生长因子（VEGF）转染的神经干细胞(NSC)对放射性脑损伤的影响。方法：将Sprague-Dawley(SD)大鼠随机分为对照组、放射性脑损伤组、NSC和转染VEGF的NSC治疗组, 放射性脑病模型成功制备后1周脑内移植转染VEGF的NSC,移植后1周、2周、3周、4周和6周末取其脑组织,用免疫组织化学法测定神经元特异性烯醇化酶(NSE)阳性细胞数,Western blotting法检测NSE蛋白表达情况。结果：与对照组相比, 放射性脑损伤组大鼠脑组织中NSE阳性细胞数显著下降(P<0.05);与放射性脑损伤组相比,NSC治疗组和转染VEGF的NSC治疗组在移植3周后NSE阳性细胞数明显增加(P<0.05), 与NSC治疗组比较,在移植6周末转染VEGF的NSC治疗组NSE的阳性细胞数增加更明显(P<0.05)。与放射性脑损伤组比,NSC治疗组和转染VEGF的NSC治疗组在移植3周末NSE蛋白表达量明显增加(P<0.05), 与NSC治疗组比较,在移植6周末转染VEGF的NSC组NSE蛋白表达量增加更明显(P<0.05)。结论：转染VEGF的NSC移植可提高放射性脑损伤组织中NSE的含量。     

神经干细胞的分化与定向诱导分化

传统观点认为成体哺乳运动中枢神经系统的神经元损伤后不能再生，但从1992年Reynoldsu和Richards从成鼠纹状体和海马中分离出神经干细胞(neural stem cell，NSC)之后，人们又从其他成体哺乳动物神经系统中又发现了神经干细胞，神经干细胞的研究已成为当今生命科学的热点之一。神经干细胞的分离、体外培养，到移植治疗神经系统疾病都     

影响神经干细胞增殖、分化的外部因素

1细胞因子对神经干细胞增殖、分化的影响在体外，NSCs的增殖需要多种因子的维持，如表皮生长因子（EGF）和碱性成纤维生长因子（bF—GF），去除这些因子后，NSCs会中止有丝分裂，影响神经干细胞增殖。研究人员分析了过量表达白血病抑制因子（LIF）对正常大脑神经形成的作用，     

人脂肪干细胞向淋巴管样内皮细胞分化的最佳条件

背景：作者所在课题组前期研究表明,脂肪干细胞在血管内皮生长因子C作用下,可以诱导分化为淋巴管样内皮细胞,经淋巴内皮细胞透明质酸受体1染色证实为淋巴管样内皮细胞,但其最佳诱导方案尚不明确。 目的：探讨利用血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C156s)诱导脂肪干细胞成为淋巴管样内皮细胞的最佳条件。 方法：取健康成人脂肪组织,胰酶消化法获得脂肪组织来源的间质干细胞,通过流式细胞仪检测其表面标记,并进行成脂肪、成骨诱导等体外分化能力鉴定。取生长状态良好的第3代细胞,对照组加入低糖DMEM培养基,其余5组分别加入含25,50,100,200,300 μg/L VEGF-C156s,分别观察诱导结果。 结果与结论：成功分离纯化脂肪干细胞,在体外成功利用含VEGF-C156s、碱性成纤维生长因子等生长因子的诱导液将脂肪干细胞诱导为淋巴管内皮样细胞,对照组未见明显淋巴内皮细胞透明质酸受体1染色阳性细胞。诱导8 d后,25 μg/L VEGF-C156s诱导后可见少数细胞染色阳性;50,100 μg/L VEGF-C156s诱导后可见大量细胞淋巴内皮细胞透明质酸受体1阳性表达;200,300 μg/L VEGF-C156s诱导会导致细胞大量死亡。说明以质量浓度为50 μg/L的VEGF-C156s诱导8 d,是脂肪干细胞诱导分化为淋巴管样内皮细胞的最佳条件。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程     

人骨髓间充质干细胞体外内皮细胞诱导分化的研究(英)

目的：探讨人骨髓间充质干细胞hMSCs(human mesenchymal stem cells,hMSCs)体外内皮分化基础及其诱导条件。方法：〖HTSS〗采用密度分离与贴壁筛选结合法分离hMSCs，体外联合应用生长因子VEGF165和不同细胞外基质纤维连接蛋白(FN)与Ⅰ型胶原(Col)，对其进行内皮诱导分化。通过免疫细胞化学、细胞化学、流式细胞分析法及透射电镜对其分化后细胞进行鉴定。结果：hMSCs表达早期内皮分化标志之一KDR；PAS反应阳性及超微结构显示，hMSCs胞浆内含有大量糖原形成糖原池，分化后细胞胞浆外质内糖原明显减少或消失，暗示细胞发生分化；细胞诱导后CE34、β1整合素和KDR表达均增强。结论：诱导后细胞为过渡细胞群类型(transit population,TP)，可向内皮前体细胞(endothelial progenitor cells,EPC)EPC方向分化。推测由此类型细胞再分化为内皮细胞(endothelial cells,ECs)，即hMSCs→TP→EPC→ECs。     

休克淋巴液对大鼠内皮细胞VEGF表达的影响

目的观察休克淋巴液对大鼠肺微血管内皮细胞(PMVEC)、肠系膜微淋巴管内皮细胞(MMLEC)、血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法无菌条件下复制大鼠重症失血性休克模型,引流休克时肠系膜淋巴液或收集门静脉血,同时收集正常淋巴液及门静脉血作为对照。以4%终浓度的处理因素与第3代PMVEC及MMLEC共同孵育6h,RT-PCR测定VEGF mRNA表达。结果不同处理因素与PMVEC及MMLEC孵育6h后,休克淋巴液组两种内皮细胞的VEGF mRNA表达均显著低于休克血浆组、正常淋巴液组、正常血浆组、胎牛血清(FBS)组、DMEM组;休克血浆组显著低于正常淋巴液组、正常血浆组、FBS组和DMEM组;其它组间无统计学差异。结论休克淋巴液可抑制内皮细胞的VEGF mRNA表达,且作用强于休克血浆。     

犬骨髓间充质干细胞定向分化为内皮细胞的研究

应用密度梯度离心法分离狗骨髓间充质干细胞,建立诱导分化内皮细胞的方法及条件。密度梯度离心法分离狗骨髓间充质干细胞后,在体外经血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)、内皮细胞生长因子(Endothelial growth factor,EGF)等诱导后,分化形成内皮样细胞。结果表明:光镜下细胞单层融合生长,呈铺路石样形态,单个核位于中央。电镜下可见到Weibel-Palade小体,在细胞胞浆vWF染色阳性。骨髓间质干细胞,在体外可诱导分化成内皮细胞。     

骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究

目的 :探讨骨髓间充质干细胞 (MSCs)自体移植后在扩张型心肌病(DCM)微环境中分化为血管内皮细胞的可行性。方法 :以日本大耳白兔为研究对象 ,分离培养扩增MSCs,盐酸阿霉素耳缘静脉注射复制兔DCM模型 ,将 5溴脱氧尿嘧啶 (BrdU)标记的MSCs移植到DCM心肌内 ,4周后观察移植细胞的增殖分化情况。结果 :细胞移植 4周后 ,实验组心肌内有BrdU标记的阳性细胞 ,有一部分参与组成新生血管 ,对照组中没有发现 ,且实验组毛细血管密度大于对照组 ,差异具有显著性 (P<0 .0 1)。结论 :MSCs自体移植到扩张型心肌病后可以分化为血管内皮细胞。     

可溶性血管内皮生长因子受体1真核克隆表达及其对血管内皮细胞增殖的影响

本研究旨在构建可溶性血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)受体1(soluble fmslike tyosine kinase-1,sFlt-1)的真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,并观察sFlt-1对血管内皮细胞增殖的影响。提取人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)总RNA,扩增Flt-1基因胞外1-3结构域,构建真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,测序鉴定基因序列。将重组质粒转染Lewis肺癌细胞,采用RT-PCR和SDS-PAGE检测sFlt-1在基因及蛋白水平的表达情况。MTT法检测sFlt-1对VEGF诱导的HUVECs生长的影响。结果显示:①插入片段序列正确;②sFlt-1在基因水平成功表达且转染后的Lewis肺癌细胞能分泌表达sFlt-1;③含sFlt-1的细胞上清液可明显抑制VEGF诱导的HUVECs增殖。本研究成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-sFlt-1,sFlt-1,在基因和蛋白水平均获得有效表达,且表达的蛋白可明显抑制由VEGF诱导...     

In vitro Studies on Binding and Release of Vascular Endothelial Growth Factor in Heparinized Bovine Pericardiums

Objective: To investigate binding and release of vascular endothelial growth factor (VEGF) and its effect on adhesion and proliferation of endothelial cells (Ecs)in acellular fresh specimens of bovine pericardiums,which were modified by heparinization.Methods:Cross-linked acellular fresh specimens of bovine pericardiums were heparinized by three methods:(1) heparinized N-(3-dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) treated acellular tissue samples;(2) heparinized poly(ethyleneimine)(PEI) treated acellular tissue samples;(3) heparinized EDC-PEI treated acellular tissue samples.Controlled release of VEGF and its effect on adhesion and proliferation of Ecs was evaluated.Results:In the present study,binding and release of VEGF had better performance in heparinized EDC-PEI treated group,compared with heparinized EDC-alone treated group and heparinized PEI -alone group.We could observe enhanced ability to adhesion and proliferation via modest moisture and effective controlled binding and release of VEGF.Conclusion:Binding of VEGF in heparinized EDC treated group was stable,while Exeiease of VEGF in heparinized treated group was adjusted freely.Interestingly,controlled binding and release of VEGF could exert beneficial effect on adhesion and proliferation of Ecs in heparinized EDC-PEI treated group.     

脂质体介导的VEGF_(165)基因转染对内皮细胞生长的作用

构建血管内皮细胞生长因子基因VEGF165真核表达载体pcDNA3 VEGF165,以阳离子脂质体介导的基因转染技术 ,将基因转入原代培养的人脐静脉内皮细胞中。结果表明 ,基因转染 1h后细胞内就有VEGFDNA存在 ,VEGFmRNA水平显著上升 ;基因转染 2d后培养液上清VEGF蛋白表达显著上升 (135 5 12± 6 2 34)pg/ml和 (19 2 7± 2 96 )pg/ml,P <0 0 1。转染VEGF165基因 2d的内皮细胞再经程序降温冷冻保存复苏后 ,其存活率显著高于对照组 (pcDNA3 组 ) (90 13%± 2 84 %和81 5 2 %± 2 15 % ,P <0 0 5 ) ,凋亡率显著低于对照组 (7 15 %± 0 4 2 %和 17 6 1%± 1 5 6 % ,P <0 0 5 )。MTT法显示转染VEGF165基因能促进内皮细胞VEGF蛋白的表达 ,促进细胞增殖 ,抑制细胞凋亡。在治疗心脏及下肢动脉缺血性疾病中 ,VEGF165基因治疗可能具有重要的意义。     

Efficacy and Long-Term Outcomes of Autologous Stem Cell Transplantation in POEMS Syndrome: A Nationwide Survey in Japan

POEMS syndrome is a rare plasma cell dyscrasia presenting with polyneuropathy, λ-type M protein, vascular endothelial growth factor elevation, and systemic manifestations. The standard treatment has not been established, but autologous stem cell transplantation (ASCT) has exhibited effectiveness in this syndrome. However, the efficacy and long-term outcomes of ASCT have not been systematically studied. To clarify the efficacy and long-term outcomes of ASCT-treated patients in Japan, we performed a multicenter retrospective study assessing the clinical course of patients registered to the Japan Society for Hematopoietic Cell Transplantation Transplant Registry Unified Management Program (TRUMP) database. Between January 2000 and December 2011, 95 patients (58 men) were registered to the TRUMP database with a median age of 53 years (range, 28 to 72). The conditioning regimen was melphalan in 93 of 94 patients (99%), and 69 patients (74.2%) received a melphalan dose ≥ 200?mg/m². The median CD34 cell dose was 2.47?×?10⁶/kg (range, .31 to 20). After ASCT, patient performance status was dramatically improved (Eastern Cooperative Oncology Group performance status 0 to 1: 20.0% versus 71.6%, P?<?.0001). Over a median follow-up of 46.6 months 10 patients died, and 5-year overall survival was 88.8% (n?=?95). Progression-free survival at 3 years was 78.3% (n?=?70; median follow-up, 54.4 months). These data support the promising role of ASCT in patients with POEMS syndrome for both prolonging survival and improving quality of life. However, disease recurrence remains a major issue for long-term survivors.     

体外诱导骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的实验研究

目的探讨体外诱导骨髓间充质干细胞分化为血管内皮细胞的可行性。方法分离培养骨髓间充质干细胞，鉴定其表面抗原，用含2％胎牛血清以及50ng／ml血管内皮生长因子的条件培养基诱导，诱导后细胞通过内皮细胞标志物KDR、FLT-1以及v-WF染色鉴定。结果骨髓间充质干细胞表面抗原CD29、CD44、CD105阳性，CD34、CD45、CD106以及HLA-DR阴性。诱导后细胞形态明显改变，内皮细胞标志物KDR、FLT-1以及v-wF染色结果阳性。结论骨髓间充质干细胞在体外具有分化为血管内皮细胞的能力，可以作为干细胞治疗的一种有效来源。     

新生大鼠海马神经干细胞的分离培养及分化研究

研究新生大鼠海马区脑组织中神经干细胞体外培养方法,为治疗神经系统疾病寻找合适的细胞来源。取新生SD大鼠的海马区脑组织,采用accutase结合机械分离法获取神经干细胞,在含有B－27、碱性成纤维生长因子和表皮生长因子的DMEM／F12无血清培养液中培养;Accutase酶消化后传代培养,取第3代细胞行抗巢蛋白免疫荧光染色鉴定并以含10％胎牛血清培养液诱导分化,神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白免疫荧光染色检测NSCs向神经元及胶质细胞分化的能力。分离的新生大鼠海马区脑组织中细胞,在无血清培养液中形成大量的神经球,部分神经球出现融合及贴壁分化现象,细胞呈典型NSCs 形态。经巢蛋白染色鉴定,大部分为阳性细胞。神经细胞球经含有胎牛血清培养液培养后,可分化为神经元特异烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白表达阳性的细胞。从新生大鼠海马组织分离培养的NSCs具有自我更新和增殖能力,在含胎牛血清培养液中具有向神经元和神经胶质细胞分化的潜能。