CO2气腹环境对胃癌细胞黏附与侵袭转移的影响

目的 探讨不同压强持续性CO2气腹环境对胃癌细胞黏附与侵袭转移的影响.方法 建立体外CO2气腹模型,选用3种不同分化程度的胃癌细胞株MKN-45(低分化腺癌细胞)、SGC-7901(中分化腺癌细胞)和MKN-28(高分化腺痛细胞),分别在9 mm Hg、15 mm Hg以及常规条件下(0 mm Hg,对照组)作用2 h和4 h后,用RT-PCR法、CytoMatrixTM细胞黏附试剂盒和ECMatrixTM细胞侵袭试剂盒检测黏附分子E钙黏蛋白(E-cadherin)和细胞间黏附分子1(intercellular adhesionmolecule-1,ICAM-1)以及侵袭分子基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinases,MMP-2)和血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGF-A)的表达.将胃癌细胞注入裸鼠腹腔(2×106个细胞/只),每组10只.4周后每组取5只处死,记录腹腔成瘤情况,观察其余裸鼠的生存时间.结果 RT-PCR结果显示3种胃癌细胞株经CO2处理后,随着时程的延长及压强的升高,E-cadherin表达有下降的趋势(MKN-45:2.26→2.19、SGC-7901:2.16→2.09、MKN-28:2.06→1.99),而ICAM-1(MKN-45:2.20→2.28、SGC-7901:2.10→2.18、MKN-28:2.00→2.08)、MMP-2(MKN-45:2.05→2.13、SGC-7901:1.95→2.03、MKN-28:1.85→1.93)和VEGF-A(MKN-45:2.10→2.16、SGC-7901:2.00→2.06、MKN-28:1.90→1.96)则有升高的趋势,但是各实验组之间比较或实验组与对照组之间比较差异均无统计学意义(P>0.05).黏附侵袭实验也得出类似的结果.裸鼠模型显示3种胃癌细胞株在不同CO2气腹环境及对照条件下,腹腔成瘤个数随着时程的延长及压强的升高而增加(MKN-45:22→23、SGC-7901:20→22、MKN-28:21→22),存活天数则减少(MKN-45:23→21、SGC-7901:22→21、MKN-28:22→21),但各组的腹腔成瘤个数和存活时间之间相比差异均尤统计学意义(P>0.05).结论 在不高于15 mm Hg 压强以及不超过4 h的情况下,不同压强与时程的CO2对3种胃癌细胞株的黏附和侵袭能力并无显著影响,且不增加肿瘤的转移风险.     

不同压强与时程CO2气腹对胃癌细胞黏附侵袭能力的影响

目的 分析不同压强与时程的CO2气腹对胃癌细胞黏附侵袭能力的影响.方法 建立体外CO2气腹模型,选用3种胃癌细胞株MKN-45、SGC-7901和MKN-28,分别暴露在0 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、9 mm Hg (2 h、4 h)和 15 mm Hg(2 h、4 h)的条件下.RT-PCR法检测胃癌细胞中黏附侵袭分子E-cadherin、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)、金属基质蛋白酶-2(MMP-2)和血管内皮生长因子-A(VEGF-A) mRNA在上述条件下的表达水平; 流式细胞仪检测胃癌细胞中E-cadherin和ICAM-1蛋白在0 mm Hg和15 mm Hg(4 h)条件下的表达水平.结果 随着CO2时程延长或压强升高,E-cadherin mRNA的表达水平有下降趋势,而ICAM-1、MMP-2和VEGF-A mRNA的表达水平则有上升趋势; 流式细胞仪检测结果显示E-cadherin蛋白的表达水平有下降趋势,而ICAM-1蛋白的表达水平有升高的趋势.但各种条件下黏附侵袭分子的表达水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在压强不高于15 mm Hg和时程不超过4 h前提下,不同压强与时程的CO2气腹对胃癌细胞株的黏附侵袭能力无明显影响,并不增加肿瘤的转移几率.     

CO2气腹对胃癌细胞腹腔种植转移影响的动物实验研究

目的比较不同压力CO2气腹处理的人胃癌MKN-45细胞在裸鼠腹腔内的成瘤数量、重量及裸鼠生存时间，探讨CO2气腹对胃癌细胞侵袭转移能力的影响。方法实验分为4组（对照组和5、10、15mmHg CO2气腹组），即将胃癌细胞在5％CO2 37℃条件下或5、10、15mmHg100％CO2 37℃条件下培养4h，然后收集细胞并将2×10^5个细胞注射入裸鼠腹腔，建立胃癌腹腔转移动物模型。4周后处死裸鼠，观察其腹腔成瘤率、成瘤数量和重量以及裸鼠生存时间。结果各组裸鼠腹腔成瘤数量、肿瘤总重量和生存时间均无显著差异（P〉0．05）。结论在气腹压力≤15mmHg时CO2对胃癌MKN-45细胞在裸鼠腹腔内的种植转移无显著影响。     

CO_2对结肠癌细胞表面黏附分子mRNA表达的影响

目的探讨不同压强持续性CO2压力对结肠癌细胞表面黏附分子mRNA表达的影响。方法建立体外气腹模型,选用人结肠癌细胞株SW1116,分别在6、9、12和15mmHg压强下,以99%医用CO2气体以及常规培养条件下暴露1h,采用实时荧光定量PCR检测细胞表面黏附分子0,12,24,48和72h的表达变化。结果SW1116细胞株E-cadherin,ICAM-1,CD44,CD44v6mRNA在处理后表达增高,与处理前差异有统计学意义,在处理后的72h之前表达降至或低于处理前水平。E-cadherin、CD44v6和ICAM-1随压强增高其表达量逐渐降低,在处理后0h各压强组差异有统计学意义。结论持续性CO2压力对结肠癌细胞表面的黏附分子mRNA的表达产生一过性双向影响;随CO气体压强增高,黏附分子的表达遭到抑制。     

二氧化碳气腹对胃癌MKN-45细胞侵袭能力的影响

目的 探讨CO2气腹对人胃癌细胞在裸鼠体内侵袭能力的影响.方法 建立体外CO2气腹模型,实验组胃癌细胞暴露于CO2气腹2 h(压力分别设为9、12、15 mm Hg,1 mm Hg=0.133 kPa).对照组胃癌细胞普通培养,然后注入裸鼠腹腔(2×106个细胞/只),每组10只.4周后每组取5只处死,记录腹腔及各脏器成瘤情况,剩余裸鼠观察生存时间.结果 各组裸鼠腹腔种植成瘤率、不同脏器成瘤率差异均无统计学意义(P＞0.05).腹腔内成瘤数:对照组(26.40±5.59)个,9 mm Hg组(25.40±5.27)个,12 mm Hg组(25.00±5.43)个,15 mm Hg组(22.40±5.37)个,各组间比较差异无统计学意义(P＞0.05).裸鼠生存分析各组间差异无统计学意义(P＞0.05).结论 常用CO2气腹压力不会促使胃癌细胞裸鼠腹腔侵袭转移,不缩短被接种裸鼠的生存时间.     

CO2气腹对结肠癌细胞粘附能力影响及其与粘附分子的关系

目的分析不同压强CO2气腹对结肠癌细胞表面粘附分子表达的影响以及在此基础上对癌细胞粘附能力的影响。方法建立体外气腹模型,选用人结肠癌细胞株SW 1116,分别在6mmHg(1mmHg=0.133 kPa)、9mmHg、12mmHg和15mmHg压强CO2以及常规条件下暴露1h后,流式细胞技术(FACScan)检测粘附分子上皮钙黏着素(E-cadherin)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、CD44和E-选择素(E-selectin)于处理后0h、12h、24h、48h和72h在结肠癌细胞表面的表达;取各组处理后0 h和72 h细胞进行体外粘附试验。结果经各组压强CO2气腹处理后,SW 1116表面各粘附分子的表达与处理前相比变化有显著性(P<0.05),这些变化在各压强CO2处理后72h之前均恢复至处理前水平,或低于处理前水平(P<0.05)。在处理后0h,随CO2气腹压强增高,E-cadherin、CD44和ICAM-1表达量降低,差异均有显著性(P<0.05),结肠癌细胞的粘附能力也呈下降的趋势(P<0.05),处理后72 h,各压强组之间的细胞粘附差异无显著性。结论CO2气腹对结肠癌细胞表面粘附分子的表达可产生一过性双向影响,随CO2气腹压强的增高,癌细胞粘附分子的表达与粘附能力均受到抑制。     

不同压强持续性CO2对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨不同压强持续性CO2气腹对结肠癌细胞体内侵袭转移能力的影响.方法建立体外气腹模型,将人结肠癌细胞株SW1116分为5组,分别在不同压强CO2气体[6、9、12、15 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)]以及常规培养条件下暴露1 h后,各自注入每组16只裸鼠腹腔(1×106个细胞/裸鼠).2周后,各组裸鼠取10只处死,观察腹腔内肿瘤结节数及各脏器转移情况.各组剩余6只裸鼠观察生存时间.结果各组裸鼠致瘤率对照组10/10例,6 mm Hg组9/10例,9 mm Hg组9/10例,12 mm Hg组9/10例和15 mm Hg组10/10例,差异无统计学意义.裸鼠腹腔内瘤结节数6 mm Hg组(41.70±14.90)与15 mm Hg组(29.70±9.91)之间差异有统计学意义(P＜0.05),其余各组间差异无统计学意义(P＞0.05).各脏器转移情况在各压强组差异无统计学意义(P＞0.05).各组裸鼠生存时间差异无统计学意义(P＞0.05).结论CO2气腹并不增加肿瘤细胞在腹腔内以及对各脏器的侵袭转移能力,对致瘤裸鼠的生存时间无影响.高压强CO2气腹对肿瘤细胞在体内的转移侵袭能力有抑制作用.     

模拟CO2气腹对胃癌细胞黏附分子表达的影响

目的研究体外模拟不同压力CO2气腹环境对人胃癌MKN,45细胞表面黏附分子表达的影响。方法体外建立模拟CO2气腹环境,实验组分为3个亚组,气腹压力分别为1．2、1．6和2．0kPa,作用时间均为4h。实验组经气腹处理后第0、24、48、72和96h,对照组普通细胞培养4h,用流式细胞仪检测胃癌MKN-45细胞表面黏附分子CD44v6、细胞间黏附分子1（ICAM-1）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）表达。结果胃癌MKN-45细胞经1．2、1．6kPaCO2气腹作用后CD44v6和ICAM-1表达呈现先升高后回落,24h时与对照组的差异有统计学意义（P〈0．01）,48h时达到高峰,然后逐渐下降,72h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平：E-cadherin表达变化为先降低后回升,处理后即较对照组明显下降（P〈0．01）,然后开始回升,48h时与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0．05）,96h恢复至对照组水平。2．0kPa组CD44v6、ICAM-1和E-cadherin表达变化均更为显著．CD44v6和ICAM-1在处理后即显著高于对照组（P〈0．05）．E-cadherin表达在48h仍然明显低于对照组（P〈0．05）。结论模拟临床常用的CO2气腹压力对胃癌MKN．45细胞表面黏附分子表达可产生一过性影响．但均能在较短时间内恢复。     

CO2气腹对胃癌细胞SGC-7901裸鼠腹腔增殖和侵袭能力的影响

目的 通过体内模拟腹腔镜气腹环境,探讨CO2:气腹对裸鼠腹腔胃癌细胞增殖和侵袭转移能力的影响.方法 棵鼠随机分成3组:对照组(A组).行开腹探查;5 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)CO2气腹组(B组);8 mmHg CO2:气腹组(C组);每组9只.人胃癌细胞SGC-7901棵鼠腹腔注射后建立CO2气腹胃癌细胞裸鼠腹腔种植模型,气腹持续1 h.建模后每周秤体质量,观察各组裸鼠生长情况和腹腔成瘤情况.28 d后处死解部裸鼠,记录腹水量、腹腔各脏器、穿刺口和腹壁切口成瘤情况和肿瘤数,测量肿瘤最大径、总重量,并检测胃癌种植瘤组织中乙酰肝素酶(Hpa)mRNA的表达.结果 各组裸鼠成瘤率100%.各组裸鼠体质量、腹腔不同脏器成瘤率、腹水量差异均无统计学意义(P>0.05).肿瘤结节数:A组(7.4±2.5)个,B组(7.3±2.4)个,C组(7.5±2.1)个.肿瘤最大径:A组(7.0±2.2)mm,B组(6.9±2.0)nnn,C组(6.8±1.9)mm;肿瘤重量:A组(0.99±0.30)g.B组(0.87±0.20)g,C组(0.91±0.13)g.Hpa mRNA表达指数:A组0.41±0.07,B组0.45±0.06,C组0.43±0.09,各组间差异均无统计学意义(P>0.05).结论 在5 mmHg和8 mmHg气腹压力下,CO2:气腹不促进胃癌细胞裸鼠腹腔内增殖和侵袭转移,也未明显影响胃癌细胞成瘤组织Hpa mRNA的表达.     

不同压力CO2气腹对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的通过体外模拟气腹环境,观察CO2在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法以CO2为气体介质,在气腹机作用下维持密闭培养箱内压力为0、5、10、15mmHg,作用时间为4h。于处理后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;通过流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;采用AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈酸性,但在恢复正常培养后6h即恢复正常。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg压力下处理组与对照组比较无明显差异(P>0.05),而在15mmHg压力下处理组与对照组比较OD490值在前3d无明显差异(P>0.05),在4～7dOD490值下降非常显著(P<0.01)。在CO2环境下,0mmHg组细胞凋亡指数和凋亡比例与对照组相比无明显差异(P>0.05),而5、10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.05)。结论在较低压力范围内(≤10mmHg)CO2对胃癌细胞增殖、凋亡影响不大,而在15mmHg压力下,CO2可抑制MKN-45细胞增殖,促进其凋亡。     

体外模拟气腹环境对胃癌细胞增殖凋亡的影响

目的通过体外模拟气腹环境,观察二氧化碳(CO2)和氦气(He)在不同压力下对胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡的影响。方法实验分为对照组、CO2组和He组,其中CO2组和He组又按照压力不同分为0、5、10、15mmHg组(作用时间均为4h)。细胞在密闭培养箱内经不同压力CO2或He作用4h后用血气分析仪检测培养液pH值;MTT法检测细胞增殖情况;流式细胞仪观察细胞凋亡指数变化;AnnexinV-FITC/PI双标染色、流式细胞仪测定凋亡细胞比例。结果处理结束后即刻检测,CO2组细胞培养液呈弱酸性,He组细胞培养液呈弱碱性。MTT法检测细胞增殖变化,CO2组0、5、10mmHg组OD值与对照组比较无明显差异(P>0.05),15mmHg组OD值与对照组比较在前3天无明显差异(P>0.05),在4~7天OD值明显低于对照组(P<0.01)。而在He组,不同压力组细胞增殖活性与对照组比较无明显差异(P>0.05)。在CO2环境下,0、5mmHg组细胞凋亡指数与对照组比较无明显差异(P>0.05),而10、15mmHg组明显大于正常对照组(P<0.01)。0、5mmHg组细胞凋亡比例与对照组比较无显著差异(P>0.05...     

不同压力CO_2气腹对人胃癌MKN-45细胞生长的影响

目的研究体外模拟不同压力CO2气腹环境对人胃癌MKN-45细胞生长增殖能力的影响。方法实验组于体外建立模拟CO2气腹环境,全自动气腹机维持气腹压力分别为9、12、15mm Hg,作用时间均为4h,对照组直接放入37℃、5%CO2孵箱中培养。处理后第0、0.5、1、1.5、2、2.5、3h,用pH计检测细胞培养液pH值变化;第1、2、3、4、5、6、7天,MTT法检测细胞增殖情况。结果15mmHgCO2气腹处理后胃癌细胞增殖较对照组下降显著(P<0.05),但9、12mmHg组与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。CO2气腹处理后细胞培养液pH值较对照组下降非常显著(P<0.01),但在恢复正常培养后最长3h即恢复正常。胃癌细胞增殖在第1天与不同压力CO2气腹处理后细胞培养液的即时pH值有显著相关性(P<0.05),而第2、3、4、5、6、7天均无相关性(P>0.05)。结论模拟9、12mmHgCO2气腹对胃癌MKN-45细胞增殖没有显著影响,模拟15mmHgCO气腹对胃癌MKN-45细胞增殖有显著的抑制作用。     

流式细胞术检测CO_2气腹对结肠癌细胞表面黏附分子的影响

目的:探讨不同压强下持续性CO2气腹对结肠癌细胞表面黏附分子表达的影响。方法:建立体外气腹模型,选用人结肠癌细胞株SW1116,分别在不同压强CO2(6mmHg、9mmHg、12mmHg和15mmHg)以及常规条件下暴露1h。应用流式细胞技术(FACScan)检测黏附分子E鄄钙黏着素(E鄄cadherin)、ICAM鄄1、CD44、E鄄选择素(E鄄selectin)于处理后0h、12h、24h、48h及72h在结肠癌细胞表面的表达。结果:SW1116经6mmHg压强CO2气腹处理后,表面ICAM鄄1、CD44表达显著增强,9mmHgCO2气体处理处理后,E鄄选择素、E鄄钙黏着素和CD44表达显著增高,15mmHg压强CO2处理后,E鄄钙黏着素表达增强,与处理前表达水平的差异均有显著性(P<0.05),上述黏附分子的表达在各压强CO2处理后72h之前均降至处理前水平(P>0.05)。或低于处理前水平(P<0.05)。随CO2气腹压强的增高,E鄄钙黏着素、CD44和ICAM鄄1表达量逐渐降低,在处理后0h,差异均达到显著性(P<0.05)。结论:CO2气腹能对肿瘤细胞表面的黏附分子表达产生一过性双向影响。随着CO2气腹压强的增高,可抑制黏附分子表达的增强。     

不同压力的二氧化碳气腹对胃癌细胞迁移运动和细胞骨架的影响

目的通过体外模拟气腹环境，观察不同压力CO2或He（helium）对胃癌细胞MKN-45迁移运动和细胞骨架的影响。方法将MKN-45细胞置于充满CO2或He的密闭培养箱中，按模拟气腹种类不同分为对照组、CO2气腹组和He气腹组，模拟气腹压力分别为12mmHg和15mmHg，作用时间均为4h。于处理结束后即刻用血气分析仪检测培养液pH值；Transwell法观察细胞迁移运动变化；激光共聚焦显微镜观察细胞骨架变化。结果CO2组细胞培养液呈酸性，He组细胞培养液呈碱性。CO2组和He组在12mmHg压力下MKN-45细胞穿过滤膜的数量较对照组差异无统计学意义（P〉0．05）。CO2 15mmHg组细胞穿过滤膜的数量较对照组明显减少（P〈0．01）；He15mmHg组与对照组差异无统计学意义（P〉0．05）；CO2 15mmHg组细胞微丝、微管结构模糊，伪足消失。结论在临床常用气腹压力（12mmHg）下CO2对胃癌细胞迁移运动及细胞骨架无明显影响；在15mmHg压力下，CO2对胃癌细胞迁移运动起抑制作用，其作用机制可能与其细胞骨架受破坏有关。