选择性COX-2抑制剂尼美舒利诱导胆管癌细胞凋亡的研究

[目的]探讨选择性环氧合酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）抑制剂尼美舒利诱导人胆管癌QBC939细胞凋亡的机制。[方法]通过体外细胞培养，用流式细胞术观察尼美舒利作用后QBC939细胞周期及凋亡率变化；荧光显微镜、透射电镜观察细胞的凋亡形态变化；并用免疫组化法检测细胞bcl-2、bax蛋白的表达。[结果]通过荧光显微镜和电镜技术观察到凋亡的QBC939细胞，流式细胞仪也检测到尼美舒利诱导QBC939细胞凋亡，并随着尼美舒利浓度的增加，细胞凋亡率显著增加，蛋白水平检测表明尼美舒利促进QBC939细胞bax表达升高，bcl-2表达下调。[结论]尼美舒利可能通过调节bcl-2和bax蛋白表达诱导QBC939细胞凋亡。     

尼美舒利抑制人食管癌细胞增殖及诱导凋亡

 目的　研究尼美舒利对食管癌细胞株 (Eca 10 9)增殖的影响 ,探讨其可能的作用机制。方法　以人食管癌细胞株作为研究对象 ,采用噻唑蓝 (MTT)法、流式细胞仪 (FCM )、电镜和细胞免疫组化等技术 ,研究尼美舒利对食管癌细胞增殖的抑制和促进凋亡的可能机制。结果　MTT显示尼美舒利对Eca 10 9有细胞毒作用 ,且与药物浓度和作用时间有相关性 (r =0 .976 0 ,P <0 .0 5 )。FCM显示DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰” ,凋亡率在 8.0 1%～ 36 .12 % ,使S期、G2 /M期细胞比例升高 ,G1期比例下降 ,呈一定剂量效应关系。电镜下见典型的细胞凋亡形态学特征 :细胞核染色质致密浓缩 ,凋亡小体形成等。并能在体外抑制食管癌细胞的COX 2和bcl 2表达。结论　体外尼美舒利能抑制人食管癌细胞的增殖 ,可能与诱导细胞凋亡和阻止细胞周期的进展 ,抑制COX 2和bcl 2的表达有关。     

选择性COX2抑制剂对胃癌细胞增殖的影响

背景与目的：越来越多证据表明非甾体类抗炎药（NSAIDs)可以减少消化道肿瘤的危险,其化学预防作用在于抑制了环氧全酶－2（COX－2）,但选择性COX－2抑制剂对胃癌细胞生长的影响及机制目前3仍不十分清楚。本研究目的是观察选择性COX－2抑制剂尼美舒利对SGC7901胃腺癌细胞PGE2释放及增殖和凋亡的影响。方法：采用MTT比色法和放射免疫分析法观察尼美舒利对SGC7901细胞增殖及前列腺素E（PGE2）释放的影响,采用透射电镜及流式细胞仪观察尼美舒利对SGC7901细胞诱导凋亡的作用及细胞周期的影响。结果：尼美舒利呈时间,剂量依赖性方式抑制SGC7901细胞增殖,减少PGE2释放;改变细胞周期的分布,增加G0／G1期细胞比例,呈剂量依赖性非线型方式诱导其凋亡。结论：尼美舒利可能通过减少PGE2释放,影响细胞周期分布和诱导细胞凋亡,从而抑制SGC7901胃腺癌细胞的增殖,选择性抑制COX－2发挥其抑制人胃癌细胞恶性增殖和诱导凋亡的作用。     

尼美舒利联合顺铂对肺癌细胞增殖与凋亡的影响及其机制探讨

目的 研究选择性环氧合酶-2(COX-2)抑制剂尼美舒利(NIM)单独以及与顺铂联合对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长、Ki67及Caspase-3表达的影响,并进一步探讨其机制.方法 将裸鼠用统计学中的依体重按随机数字表法分为4组:对照组、尼美舒利组、顺铂组和联合用药组(尼美舒利+顺铂).将肺腺癌A549细胞接种至裸鼠皮下,并给予相应的药物治疗21d,观察移植瘤生长情况.免疫组化法检测Caspase-3及Ki67的表达变化.结果 尼美舒利联合顺铂对肺癌裸鼠移植瘤的生长抑制作用较单独用药明显,抑瘤率尼美舒利组为44.33％,顺铂组为53.61％,联合用药组为80.41％ (P ＜0.05).Caspase-3的表达率在联合用药组(67.43±23.57)％、顺铂组(48.40±20.37)％、尼美舒利组(38.65±15.37)％明显高于对照组(27.63±13.03)％,P＜0.05,联合用药组Caspase-3表达率(67.43±23.57)％高于顺铂组(48.40±20.37)％和尼美舒利组(38.65±15.37)％,P＜0.05.Ki67的表达率在联合用药组(24.34±15.90)％、顺铂组(40.85±22.47)％、尼美舒利组(53.33±19.67)％低于对照组(80.43±16.88)％,P＜0.05,且联合用药组Ki67的表达率(24.34±15.90)％低于顺铂组(40.85±22.47)％和尼美舒利组(53.33±19.67)％,P＜0.05.结论 尼美舒利可抑制人肺癌裸鼠移植瘤的生长,与顺铂联合可增强顺铂对肺腺癌A549细胞裸鼠移植瘤的抑制作用,其机制可能与抑制肿瘤细胞Ki67表达,增强Caspase-3表达,抑制肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡有关.     

mPGES-1抑制剂MK886对白血病HL-60细胞的增殖抑制作用

目的:观察膜结合型前列腺素E2合酶1(mPGES-1)抑制剂MK886对急性髓细胞白血病细胞株HL-60的增殖抑制作用。方法:不同浓度的MK886作用于HL-60细胞不同时间后,CCK-8测定其对HL-60细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测HL-60细胞的凋亡情况,Western blot法检测mPGES-1、Bax、Bcl-2蛋白的表达,ELISA法检测PGE2。结果:HL-60细胞株高表达mPGES-1。MK886可时间、剂量依赖性地抑制HL-60细胞mPGES-1表达和PGE2合成,同时细胞增殖受到抑制,凋亡增加,Bax蛋白表达上调,Bcl-2表达下降。结论:MK886可抑制HL-60细胞增殖,诱导凋亡,其机制与下调mPGES-1表达、抑制PGE2合成和调控Bcl-2/Bax等有关。     

环氧化酶-2 抑制剂Nimesulide对膀胱癌T24细胞体外生长的抑制作用

 目的 观察环氧化酶-2（COX-2）抑制剂Nimesulide（NIM）对人膀胱癌T24细胞株体外生长的影响，并探讨其作用机制。方法 采用细胞形态学、MTT法、流式细胞术、吖啶橙-溴化乙啶双染法（AO-EB）等技术检测NIM对体外培养的人膀胱癌细胞株T24生长的抑制效应。结果 细胞形态学观察可见NIM对T24细胞生长具有明显的细胞毒作用；MTT法、流式细胞术分析显示NIM能明显抑制T24细胞的增殖，且呈剂量、时间依赖关系；细胞周期分析表明，NIM能使T24细胞G0／G1期细胞比例升高，S期和G2／M期细胞比例下降；流式细胞DNA直方图上出现典型的亚二倍体“凋亡峰”，细胞凋亡率与NIM作用时间和剂量相关；荧光显微镜检查显示NIM处理的T24细胞AO-EB双染色后，细胞核内可见浓染致密的颗粒荧光，典型细胞可见新月形改变，固缩或片段化的核。结论 COX-2抑制剂NIM对T24细胞生长具有明显的抑制作用，其作用机制可能与阻断细胞周期、诱导细胞凋亡等有关。     

尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCL-H446增殖的抑制作用

目的研究尼美舒利对人小细胞肺癌细胞株NCL-H446增殖的抑制作用,为临床治疗提供实验室依据。方法常规培养人小细胞肺癌细胞株NCL-H446,MTT法检测尼美舒利的细胞毒性作用;倒置显微镜与Hoechst33258荧光染色观察细胞形态学变化;流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率。结果MTT显示尼美舒利呈剂量与时间依赖性抑制人小细胞肺癌细胞株NCL-H446的增殖;倒置显微镜下可见细胞变小、变圆、皱缩、部分细胞脱落飘浮于培养基中。荧光显微镜下可见细胞核染色质致密浓缩、荧光强度增强、染色质边集、核破碎,凋亡小体形成等。FCM检测结果表明尼美舒利既可诱导NCL-H446细胞凋亡,又可引起坏死,400μmol/L的尼美舒利作用细胞24h后,细胞早期凋亡率为7.65%,晚期凋亡率为29.76%,细胞坏死占23.9%。结论尼美舒利对体外培养的人小细胞肺癌细胞株NCL-H446有较显著的抑制作用,该作用与诱导细胞凋亡与坏死有关。     

环氧合酶-2抑制剂对白血病细胞HL-60的化疗增敏作用及机制

 目的　观察环氧合酶-2（COX-2）抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60的化疗增敏作用,并对其机制进行初步探讨。方法　MTT法评估塞来昔布、多柔比星及二者联合对HL-60细胞的生长抑制效应;流式细胞术（FCM）检测细胞的凋亡;反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Survivin基因的表达;Western blotting检测Survivin蛋白的表达。结果　多柔比星联合塞来昔布5和10 μmol／L对HL-60细胞的半数抑制浓度（IC50）分别为0.25及0.16 μg／ml,明显低于多柔比星单用的IC50（0.48 μg／ml）;多柔比星0.10 μg／ml联合10 μmol／L塞来昔布下调Survivin基因mRNA及蛋白的表达;联合塞来昔布5和10 μmol／L的凋亡率[分别为（13.07±1.66）%及（22.36±1.84）%]较多柔比星0.10 μg／ml单用[（5.72±1.25）%]明显增加（P＜0.01）。结论　COX-2抑制剂塞来昔布对白血病细胞株HL-60具有明显的化疗增敏作用,其初步机制涉及下调Survivin的表达,增加细胞凋亡。     

尼美舒利对胃癌细胞BGC823 COX-2、VEGF表达的影响

目的 研究尼美舒利（Nimesulide）对人胃癌细胞株BGC-823增殖和凋亡的干预作用，揭示其抗癌机制。方法 采用MTT法、流式细胞仪等检测细胞增殖、细胞周期和凋亡率以及细胞的形态学改变，同时检测尼美舒利对胃癌细胞COX-2、VEGF表达的影响。结果 尼美舒利抑制胃癌细胞的IC50μM／L。增殖抑制率达到80．31％，流式细胞仪分析发现100-200μM／L的尼美舒利作用48h后，细胞被阻滞于S期，凋亡率分别为5．69％，10．58％；光学显微镜观察到凋亡典型的形态学特征；免疫细胞化学结果显示尼美舒利作用后能降低COX2、VEGF蛋白表达，与对照组比较，具有非常显著性差异（P〈0．01）。结论 尼美舒利能显著抑制人胃癌细胞株BGC-823的生长，此作用可能与降低COX2、VEGF蛋白表达有关。     

舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901 细胞增殖及COX-2 、NF-κB 表达的抑制作用

 目的 探讨舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响. 方法 对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养,MTT法检测不同浓度舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用,免疫组化、western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响. 结果 舒林酸、尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性;与阴性对照组相比,药物作用48h后尼美舒利100、200μmol/L组,舒林酸0.6、1.2mmol/L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P＜0.05）,COX-2、NF-κB之间正相关（P＜0.05）. 结论 舒林酸、尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制NF-κB, COX-2的蛋白表达在二者抑制肿瘤机制中可能具有一定作用.     

EFFECTS OF CURCUMIN ON PROLIFERATION AND APOPTOSIS IN ACUTE MYELOID LEUKEMIA CELLS HL-60

Curcuministhemajoringredientofextractsfromcurryfamilywidelyusedasayellowspiceandfoodadditive.Ithasavarietyofpharmacologicaleffectsincludinganti-inflammation,antioxidant,decreasingbloodlipid,enhancingphagocaryosisofmonocyte-macrophagesystemandregulatinghumanimmunityfunction.Ithasbeenshowntohaveanticarcinogenicpropertiesinanimalmodelsincludingcutaneous,gastrointestinaltractandbreastcancercausedbymanykindsofcarcinogenesisagents[1].Invitrostudieshaveshownthatcurcuminselectivelyinhibitgrowthofsomep…     

紫草素衍生物SK36对白血病HL-60细胞增殖及凋亡作用的影响

目的:探讨紫草素衍生物5,8-二甲基-2-β-羟基-异戊酰紫草素(5,8-dimethyl-2-β-hydroxy-isovaleryl shikonin,SK36)对人白血病细胞株HL-60增殖及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制.方法:CCK-8法检测SK36对HL-60细胞的增殖抑制作用;光学显微镜下观察细胞形态的变化;AnnexinⅤ /PI 双标记法检测细胞凋亡率;FCM法检测caspase-3活性;JC-1染色法检测细胞线粒体跨膜电位.结果:SK36能明显抑制HL-60细胞的增殖,呈剂量和时间依赖性;在光学显微镜下可见典型的细胞凋亡形态学变化;FCM法检测结果显示,SK36作用HL-60细胞24和48 h时的细胞凋亡率分别为(55.55±2.88)%和(72.12±14.50)%,明显高于对照组;caspase-3活性增加,线粒体跨膜电位发生崩塌,且随着时间的延长其效应更加明显,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:SK36在体外可抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡 .     

阿斯匹林抑制白血病细胞增殖的实验研究

目的以人急性髓细胞性白血病细胞系HL-60为模型,研究非甾体类抗炎药阿斯匹林(ASA)对HL-60细胞生长的影响.方法利用MTT法测定ASA对HL-60细胞的抑制率,并分析剂量反应曲线;通过流式细胞仪(FCM)了解其对细胞周期的影响.结果(1)ASA在浓度为(2.5～10.0)mmol/L作用72h后,HL-60细胞增殖抑制随浓度增加而增加,其IC 50值为8.97mmol/L;并且2.5mmol/L ASA与100μg/ml Ara-c有协同作用;(2)ASA处理后HL-60细胞G0/G1期细胞减少,S期细胞增多.结论结果提示一定浓度ASA在体外能抑制HL-60细胞增殖,抑制率与ASA剂量相关;ASA抑制HL-60细胞增殖可能与其干扰细胞周期有关.     

PARP抑制剂olaparib对急性髓系白血病细胞HL-60抑制作用研究

目的 研究PARP抑制剂olaparib对人急性髓系白血病细胞株HL-60细胞的抑制作用。方法 对数生长期HL-60细胞经不同浓度(0、1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用不同时间后,CCK-8法检测olaparib对HL-60细胞的增殖抑制作用;Annexin-V/PI双标法检测HL-60细胞凋亡水平,Western blot检测HL-60细胞内相关信号蛋白(PARP-1、Caspase-3)表达变化。结果 与对照组相比,经不同浓度(1.25、2.5、5、10 μmol/L)olaparib作用48 h后的HL-60细胞出现增殖抑制,并且随着作用时间的延长,抑制率逐渐增加;同时发现olaparib诱导HL-60细胞发生凋亡,并显示出剂量依赖效应;Western blot结果显示,olaparib处理后的HL-60细胞内PARP活性受到抑制,Caspase-3活化。结论 PARP抑制剂olaparib对HL-60细胞不仅具有增殖抑制作用,同时可通过激活Caspase-3,抑制PARP活性,诱导HL-60细胞凋亡。     

RNA干扰对白血病细胞系HL-60增生的影响

 目的 研究针对c-myc基因的小分子干扰RNA片断（small interfering RNA, siRNA）对白血病细胞系HL-60细胞增生的影响,探讨应用siRNA进行白血病基因治疗的可能性。方法 制备特异性对应c-myc基因的siRNA转染HL-60细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增生状态,流式细胞仪进行细胞周期分析。结果 siRNA转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,增生能力减弱,其增生抑制作用于转染后48 h、72 h最明显,增生抑制率分别为53.2 %和51.5 %;S期细胞比值由（56.1±4.7）%降至（17.8±3.2）%,细胞阻滞在G0／G1期。结论 针对c-myc基因的siRNA对HL-60细胞增生有明显抑制作用,有望为白血病提供新的治疗途径。     

Avemar, a nontoxic fermented wheat germ extract, induces apoptosis and inhibits ribonucleotide reductase in human HL-60 promyelocytic leukemia cells

Avemar (MSC) is a nontoxic fermented wheat germ extract demonstrated to significantly improve the survival rate in patients suffering from various malignancies. We investigated its effects in human HL-60 promyelocytic leukemia cells. After 24, 48, and 72 h of incubation, Avemar inhibited the growth of HL-60 cells with IC₅₀ values of 400, 190, and 160 μg/ml, respectively. Incubation with MSC caused dose-dependent induction of apoptosis in up to 85% of tumor cells. In addition, Avemar attenuated the progression from G2–M to G0–G1 phase of the cell cycle and was also found to significantly reduce the in situ activity of ribonucleotide reductase, the key enzyme of de novo DNA synthesis. We conclude that Avemar exerts a number of beneficial effects which could support conventional chemotherapy of human malignancies.     

土贝母苷甲对人HL-60髓性白血病细胞周期与凋亡的影响

目的:研究土贝母苷甲(下称苷甲)对人髓性白血病细胞HL-60的细胞周期及凋亡的影响。方法:采用MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测苷甲对HL-60细胞生长的影响;形态学方法(荧光显微镜和透射电镜)、流式细胞仪和DNA琼脂糖凝胶电泳观察和分析在苷甲作用下HL-60细胞形态、DNA含量的变化和DNA断裂的情况;蛋白印迹免疫法检测细胞凋亡及周期相关基因bcl-2、cyclinB1表达的变化。结果:苷甲显著抑制HL-60细胞的生长,其抑制效果与浓度及时间呈依赖关系。15μmol·L-1苷甲作用24小时可将HL-60细胞阻滞于G2/M期,进而诱导其凋亡,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征,琼脂糖凝胶电泳可见明显的梯状区带。bcl-2表达无明显变化,cyclinB1表达降低。结论:苷甲对细胞周期起阻滞作用,并诱导其凋亡,其作用机制可能与cyclinB1表达降低有关。     

Gallic acid inhibits ribonucleotide reductase and cyclooxygenases in human HL-60 promyelocytic leukemia cells

Gallic acid (GA) is a naturally occurring polyhydroxyphenolic compound and an excellent free radical scavenger. In this study, we examined its cytotoxic and biochemical effects on the human HL-60 promyelocytic leukemia cell line. GA caused a significant imbalance of deoxynucleosidetriphosphate (dNTP) pool sizes, indicating ribonucleotide reductase inhibition. Moreover, GA induced dose-dependent apoptosis in HL-60 cells (80microM GA led to the induction of apoptosis in 39% of cells) and attenuated progression from G0/G1 to the S phase of the cell cycle (60microM GA doubled the number of cells in G0/G1 phase from 22 to 44% when compared to untreated controls). We further determined IC(50) values of 3.5 and 4.4nM for the inhibition of cyclooxygenases I and II, respectively. When cells were simultaneously treated with GA and trimidox, another inhibitor of RR, highly synergistic growth inhibitory effects could be observed. Taken together, we identified novel biochemical effects of GA which could be the basis for further preclinical and in vivo studies.     

番荔枝内酯化合物squamocin诱导白血病HL-60细胞凋亡

目的：研究番荔枝内酯化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ诱导白血病ＨＬ－６０细胞凋亡作用。方法：采用ＭＴＴ法检测番荔枝内酯单体化合物ｓｑｕａｍｏｃｉｎ对白血病细胞株ＩＬ－６０细胞增殖的抑制作用;ＤＮＡ凝胶电泳检测细胞凋亡;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ法检测ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１,磷酸化ｐ４４／４２ ＭＡＰＫ的蛋白水平变化。结果：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞５天后,细胞生长受到明显的抑制,ＩＣ５０为０．１７μｇ／ｍｌ。ＤＮＡ凝胶电泳可见典型的ＤＮＡ梯形带。ｓｑｕａｍｏｃｉｎ处理ＨＬ－６０细胞后,Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测结果呈现ｂｃｌ－２,ｂａｘ,ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白表达无明显变化,而磷酸化的ＭＡＰＫ量显著减少。结论：ｓｑｕａｍｏｃｉｎ能诱导ＨＬ－６０细胞凋亡,且与ｂｃｌ－２、ｂａｘ、ｐ２１＾ＷＡＦ１蛋白