尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin的表达

目的探讨β-catenin与尖锐湿疣皮损角质形成细胞增生的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法检测尖锐湿疣皮损感染的HPV分型,将HPV16/18型皮损分为高危型组(CA1),HPV6/11型皮损分为低危型组(CA2),每组30例;分别应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法检测β-catenin蛋白及β-catenin mRNA在CA1组和CA2组角质形成细胞中的表达。结果在正常皮肤组织中β-catenin蛋白阳性物质均表达于胞膜;CA1组和CA2组中主要表达于胞核和胞质,CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin蛋白均呈异常表达,异常表达率(分别为86.70%,40.00%)均显著高于正常对照组(0);CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin mRNA的表达水平(阳性分别为23例,18例)亦均显著高于正常对照组(阳性10例)。结论尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin表达异常,在胞膜、胞浆及胞核的分布与正常角质形成细胞不同,可能与细胞过度增殖有关。     

HPV6／11相关尖锐湿疣皮损中P53和P21蛋白的表达

目的：了解P53和P21在HPV6/11相关尖锐湿疣（CA）皮损中的表达和意义。方法：用免疫组化SP法检测经PCR法证实HPVDNA6/11阳性的27例CA皮损和10例正常皮肤。结果：（1）CA皮损基底细胞和棘细胞表达P53较正常皮肤显著增加；（2）CA皮损棘细胞表达P21与正常皮肤无显著差异。结论：（1）P53可能刺激和促进HPV6/11相关CA皮损的细胞增殖；（2）P21在抑制CA的细胞增殖中无重要作用。     

增殖细胞核抗原、细胞周期素E及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子p21和p27在尖锐湿疣中的表达

目的 探讨细胞周期相关因子增殖细胞核抗原（ PCNA）、细胞周期素 E（ cyclinE）、 p21(WAF1/CIP1)、 p27在 HPV6/11相关尖锐湿疣 (CA)病变中的各种变化及其意义。方法 应用原位杂交技术诊断 HPV6/11相关 CA,采用 SP免疫组化染色技术检测 50例 HPV6/11阳性 CA患者皮损、 25例正常人皮肤（包皮）中 PCNA、 cyclinE及 p21、 p27的表达及分布。结果 ① CA皮损中 PCNA、 cyclinE、 p21的表达较正常人上皮中均有不同程度的增强, p27的表达则无统计学差异; CA皮损中其表达主要分布于棘层及颗粒层。② CA皮损中 cyclinE与 p21和 p27的表达、 p21与 p27的表达间存在相关性。结论 HPV6/11阳性尖锐湿疣中, PCNA、 cyclinE、 p21的表达增强,并可能通过 PCNA、 cyclinE、 p21、 p27的相互协调或制约,引起自身限制的角质形成细胞增殖。     

尖锐湿疣、鲍温样丘疹病及鲍温病皮损中人乳头瘤病毒感染与P16蛋白表达的关系

目的：探讨鲍温样丘疹病（BP）、鲍温病（BD）及尖锐湿疣（CA）皮损中高、低危人乳头瘤病毒（HPV）感染对P16蛋白表达的影响。方法：用荧光定量PCR（FQ－PCR）方法检测30例CA病损及12例正常人皮肤粘膜中HPV6／11、HPV16／18DNA；用原位杂交方法检测30例BP、15例BD中HPV16DNA；用免疫组化方法检测上述组织中P16蛋白、Ki-67蛋白的表达。结果：在HPB感染皮损中，P16蛋白、Ki-67蛋白的表达均增高（P＜0．05），且在HPV16阳性的BP、BD中的表达高于HPV6／11感染的CA（P＜0．05）；P16蛋白表达与Ki-67蛋白表达呈正相关（P＜0．05）。结论：HPV感染皮损中，P16蛋白的过度表达可能是机体对HPV感染引起细胞异常增殖的一种反馈调节；P16蛋白表达的不同可能是由于高、低危HPV引起的Rb蛋白功能失活不同。     

细胞周期素E、p21、转录因子E2F-1在尖锐湿疣中的表达

目的　探讨细胞周期相关因子细胞周期素E(cyclinE)、p2 1(WAF1/CIP1)、核转录因子E2F 1在尖锐湿疣 (CA)皮损中的变化及其意义。方法　应用原位杂交技术检测HPV 6/ 11相关CA ,应用SP免疫组化技术检测 3 8例HPV 6/ 11阳性CA患者皮损和 13例正常人皮肤中cyclinE、p2 1、E2F 1与分布。 结果　①CA皮损中cyclinE、p2 1、E2F 1的表达均较正常皮肤增强 ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ,阳性信号主要分布于表皮棘层和颗粒层。②CA皮损中cyclinE与p2 1的表达间存在正相关性 ,cyclinE与E2F 1、p2 1与E2F 1间无相关性。 结论　HPV 6/ 11CA可能通过细胞周期调控蛋白的相互协调与制约 ,引起角质形成细胞的过度增殖     

外阴HPV相关疾病中p~(53),cyclinD1和ki67蛋白表达及其与HPV感染的关系

目的 探讨人乳头瘤病毒(HPV)在外阴HPV相关疾病—尖锐湿疣(CA)、外阴上皮内瘤变(VIN)和外阴鳞状细胞癌(VSCC)中的感染情况及与p53,cyclinD1,ki67蛋白表达的关系。方法 在110例外阴HPV相关疾病中应用核酸分子快速导流杂交基因分型技术检测HPV16/18,HPV6/11的表达,同时用免疫组化SP法检测p53,cyclinD1,ki67蛋白的表达,并与10例正常组织进行对照。结果 HPV16/18在CA组,VIN组及VSCC组的阳性表达率均高于正常对照组,而且其阳性表达率随外阴上皮恶性程度增加而增加;HPV6/11在CA组及VINⅠ组的阳性表达率均高于VINⅡ组及VINⅢ组和正常对照组;以上差异均有统计学意义(P均<0.05)。HPV6/11在VSCC组无阳性表达,HPV16/18感染与p53,ki67表达呈正相关,与cyclinD1表达无相关性。HPV6/11感染与p53,cyclinD1,ki67表达无相关性。结论 HPV16/18感染与重度外阴上皮内瘤变及外阴鳞状细胞癌密切相关;HPV6/11感染是尖锐湿疣及轻度外阴上皮内瘤变的重要病因。HPV16/18感染与p53,ki67蛋白表达呈正相关,它们在外阴鳞状上皮恶变过程中有着协同的作用。     

自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测尖锐湿疣皮损的研究

目的 采用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体检测外生殖器尖锐湿疣皮损组织中HPV6b和11型E7蛋白的表达,探讨该抗体在临床检验中的应用价值。 方法 55例经临床和病理确诊的尖锐湿疣皮损石蜡标本,用自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体进行免疫组化检测,其中18例皮损冰冻标本用RT-PCR法测定HPV6b和11型E7蛋白mRNA表达,分析与免疫组化结果的符合率。 结果 55例尖锐湿疣皮损的免疫组化染色显示,HPV6b和11型E7蛋白为胞核染色,且皮损全层表皮细胞均有阳性表达,但基底层阳性细胞较多。HPV6b和11型E7蛋白阳性表达率分别为76.36%（42/55）和58.18%（32/55）,总阳性表达率为94.55%（52/55）,两蛋白双阳性率为40.00%（22/55）,两蛋白均阴性表达为3例（5.45%）。18例尖锐湿疣冰冻标本经RT-PCR法检测,HPV6b和11型E7 mRNA阳性表达分别为15例和10例,双阳性表达7例,其阳性表达型别与免疫组化结果完全一致,符合率均为100%。 结论 该自行制备的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗体免疫组化法检测尖锐湿疣皮损,检测结果直观,可以观察到HPV6b和11型感染细胞在病损中的分布位置。     

P53 PCNA K-i67 bcl-2在尖锐湿疣中的表达

目的　探讨尖锐湿疣 (CA)中P5 3、Ki 6 7、bcl 2、增殖细胞核抗原 (PCNA)表达与人乳头瘤病毒 (HPV )感染的关系。方法　用免疫组化方法对 40例CA和 10例正常包皮进行检测。结果　 40例CA中P5 3、Ki 6 7、bcl 2、PCNA阳性标本分别为 33例 ( 82 .5 % )、37例 ( 92 .5 % )、2 0例 ( 5 0 .0 % )、35例 ( 87.5 % )。CA组各种蛋白的表达强度均明显高于对照组 (P <0 .0 5 )。HPV感染的空泡细胞核中同时有P5 3、Ki 6 7、PCNA过度表达者 2 5例。P5 3、bcl 2阳性细胞多分布于基底层、棘细胞中下层。结论　CA中存在P5 3、Ki 6 7、PCNA、bcl 2过度表达 ,提示角质形成细胞异常增生与HPV感染有关。     

细胞周期G1调节因子在尖锐湿疣皮损中的表达

目的 探讨细胞周期G1调控点（check point）相关调节因子细胞周期素D1(CycliD1)、周期素依赖性蛋白激酶4（CDK4）、多重肿瘤抑制因子（P16^MTS1)及视网膜母细胞瘤蛋白（PRb）在HPV6／11相关尖锐湿疣（CA）皮损中的表达和意义。方法 采用SP免疫组化染色技术检测27例经PCR检测含HPV6／11DNA的CA皮损和10例正常人皮肤（包皮）中CyclinD1、CDK4、P16^MTS1及PRBb的表达和分布。结果 ①正常人皮肤及CA皮损均无CyclinD1表达。②CA皮损基底细胞表达CDK4（均数2．19）较正常人皮肤（均数4．8）降低（P＜0．01）。③CA皮损棘细胞表达P16^MTS1（均数1．33）较正常人皮肤（均数0）增强（P＜0．05）。④CA皮损基底细胞和棘细胞表达PRb（均数各为0．89、0．44）较正常人皮肤（均数均为0）均增强（P＜0．05）。结论 HPV6／11CA相关皮损的细胞周期G1调控点无明显异常，可能是这类CA皮损不易恶变的原因之一。     

尖锐湿疣患者角质形成细胞中活化型细胞外信号调控蛋白激酶和活化型p38的检测

目的 探讨尖锐湿疣皮损角质形成细胞中活化型细胞外信号调控蛋白激酶(p-ERK)和活化型p38(p-p38)的表达。方法 采用原位杂交方法诊断HPV6/11相关尖锐湿疣50例;采用免疫组化EnVision二步法检测50例尖锐湿疣皮损中p-ERK和p-p38的表达及分布,并以25例正常人皮肤(包皮)作为对照。结果 ①p-ERK和p-p38在尖锐湿疣角质形成细胞中的表达较正常人上皮中均有不同程度的增强,前者u=4.113,P<0.01;后者u=4.497,P<0.01,其表达主要分布于棘细胞层,阳性信号均定位于胞核。②尖锐湿疣皮损中,p-ERK与p-p38的表达呈显著正相关(r=0.42,P<0.01)。结论 HPV6/11阳性尖锐湿疣患者中,p-ERK和p-p38的表达较正常人皮肤明显增强,提示在HPV6/11感染时,角质形成细胞中激酶ERK和p38的激活增加,可能通过ERK和p38MAPK通路起作用。     

Simultaneously detected aberrant p53 tumor suppressor protein and HPV-DNA localize mostly in separate keratinocytes in anogenital and common warts

Abstract The E6 oncoprotein of human papillomavirus (HPV) is known to inactivate the control function on cell cycle exerted by p53 tumor suppressor protein in vitro by binding to p53 and thus facilitating the degradation of p53. We have applied a simultaneous in situ demonstration method for detecting p53 protein and HPV-DNA on formalin-fixed tissue sections, and investigated the in vivo interrelationship of p53 protein and HPV-DNA. Immunohistochemical staining for p53 protein with polyclonal and monoclonal antibodies, recognizing both wild-type (wt) and mutated p53 protein, was performed first and in situ DNA hybridization (ISH) for HPV types 6/11 or 16/18 with digoxigenin-labelled probes thereafter. 47% (25/53) of 48 histologically confirmed primary or recurrent condylomata acuminata (CA), 2 Bowenoid papulosis (BP) and 3 common wart (CW) biopsies, positive for HPV 6/11 or HPV 16/18 DNA, showed keratinocytes immunopositive for p53 protein. Of these. 11 lesions with abundant numbers of p53-positive cells were further analyzed with the double method. Signals for abnormal p53 protein and HPV-DNA were detected in separate cell nuclei in all biopsies and, additionally, in the same cell nuclei in 3 biopsies (1 BP, 1 CA, 1 CW). Usually the p53 positivity localized more basally in the epidermis than HPV-DNA, although p53- and HPV-positive keratinocytes were always located closely. The findings were similar for HPV-types 6/11 and 16/18. Our finding of both p53 and HPV-6/11 signals in the same cell nuclei may indicate complexing of p53 and low-risk HPV's without degradation of p53. Our results show abnormal p53 expression in HPV-infected skin lesions, and suggest that p53 protein is susceptible to aberrations even in the cells in the vicinity of productive HPV infection. However, it is not yet fully understood how HPV interferes with p53 protein in these cells.     

尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒感染与生存素和增殖细胞核抗原的表达

目的 探讨人乳头状瘤病毒（HPV）6／11、16／18在尖锐湿疣（CA）组织中的感染情况及其与生存素和增殖细胞核抗原（PCNA）表达的关系。方法 HPV分型PCR检测试剂盒检测HPV6／11、16／18在41例尖锐湿疣组织、23例正常皮肤组织中的表达情况，同时用SP免疫组化法检测生存素及PCNA蛋白的表达。结果 ①正常对照组未检测到HPV6／11、16／18感染；HPV6／11在尖锐湿疣中的感染率为87．80％（36／41），与正常对照组比较差异有统计学意义（P〈0．005）；HPV16／18在尖锐湿疣中的感染率为19．51％（8／41），与正常对照组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。②生存素和PCNA在尖锐湿疣组织中的阳性率分别为53．66％（22／41）和87．80％（36／41），在正常皮肤组织中的阳性率分别为8．70％（2／23）和47．83％（11／23）。尖锐湿疣组中生存素和PCNA表达的阳性率与正常对照组比较差异均有统计学意义．且尖锐湿疣中两者的阳性表达呈正相关（P=0．009）。③生存素及PCNA在有HPV6／11感染患者中的表达明显强于无HPV6/11感染患者。结论 HPV感染可上调生存素与PCNA的表达。     

男性尖锐湿疣皮损HPV基因芯片型别分析

目的探讨本地区男性尖锐湿疣患者皮损中的HPV型别感染情况及其临床意义。方法采用基因芯片微阵列技术对200例男性尖锐湿疣皮损进行26种HPV基因型别检测。结果男性尖锐湿疣患者皮损中HPV检出率为99.00%(198/200),检出的198例阳性患者中单一型别感染42.42%(84/198),以HPV6/11为主(94.00%);多重HPV混合感染以高低危HPV混合感染为主(P<0.05),18～35岁组较>35岁组高危HPV感染率偏多(P<0.05),皮损部位间存在HPV型别差异(P<0.05)。皮损中检测出HPV7型感染4例和HPV67型感染1例。结论男性尖锐湿疣皮损以HPV6/11型感染为主,并多伴有其他HPV型别感染;年龄、皮损部位和感染重数影响HPV型别分布。     

HPV and p53 in cervical cancer.

OBJECTIVE--To determine the prevalence of HPV 16 and 18 E6 by DNA detection and p53 abnormal protein expression in cervical cancers in Hong Kong. MATERIALS AND METHODS--Seventy-three squamous cell cervical cancer biopsy were analysed. Detection of HPV DNA was carried out by the polymerase chain reaction and Southern blotting (PCR/SB) technique using primers to the HPV16 & 18 E6 region and consensus primers to the L1 region. Abnormal expression of the p53 protein was detected by immunohistochemical staining (IHS) using the antibody CM1 on frozen sections of 55 cervical cancer samples. Forty-six samples were analysed for both the presence of HPV DNA and abnormal expression of p53. RESULTS--67.2% of the 64 samples showed the presence of HPV 16 E6 DNA and 39.1% showed the presence of HPV 18 E6 DNA. 32.8% showed the presence of both HPV 16 and 18 E6 DNA. No HPV DNA was shown in 10.9% of samples. Only 3.6% (2) of 55 samples showed positive IHS with CM1. One occurred in a HPV negative sample and the other in a HPV positive sample. CONCLUSION--A high prevalence of HPV DNA was detected in cervical cancer in Hong Kong using the PCR/SB technique. However, abnormal expression of p53 was uncommon amongst patients with or without HPV 16 or 18 infection.     

MDM2蛋白和MDM2 mRNA在尖锐湿疣中的表达

目的 研究尖锐湿疣中MDM2蛋白及MDM2 mRNA的表达情况,探讨MDM2在尖锐湿疣增殖及癌变中的作用。方法 分别采用免疫组化染色及原位杂交方法检测外阴尖锐湿疣和正常人皮肤组织中MDM2蛋白及mRNA的表达情况,同时用PCR法检测人乳头瘤病毒(HPV)型别。结果 32例外阴尖锐湿疣中MDM2蛋白阳性表达18例(56.25%),MDM2 mRNA阳性表达22例(68.75%)。MDM2蛋白与mRNA共同阳性表达14例。PCR检测示尖锐湿疣皮损中HPV6/11型28例(87.5%),HPV16/18型4例(12.5%)。在18例MDM2蛋白阳性表达的标本中,HPV6/11型15例,HPV16/18型3例。在22例MDM2 mRNA阳性表达的标本中,HPV6/11型18例,HPV16/18型4例。而正常人皮肤中MDM2蛋白及MDM2 mRNA均未见表达。结论 MDM2的异常表达可能与尖锐湿疣过度增殖及癌变有关。     

P53,Fas,Bcl-2蛋白在尖锐湿疣组织中的检出及其与HPV感染的相关性

目的　探讨P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白在尖锐湿疣 (CA)组织中的检出情况及其与人乳头瘤病毒 (HPV)感染的关系。方法　采用标准免疫组化法检测了 2 4例CA、46例宫颈癌和 2 8例正常宫颈组织P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白 ,用PCR技术对各组织标本的HPV DNA进行检测和 6,11,16,18分型。结果　P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白在CA组的阳性率显著高于正常对照组 (P <0 .0 0 1) ;CA组和宫颈癌组之间差异无显著性 (P >0 .0 5 )。综合分析 ,蛋白阳性率与HPV感染率密切相关 (P <0 .0 5 ) ,但CA组或宫颈癌组的蛋白阳性率与HPV 6/11型或 16/18型的检出与否无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论　P5 3 ,Fas ,Bcl 2蛋白与尖锐湿疣的发病有密切关系 ,凋亡基因的表达可能抑制HPV的增殖     

女阴尖锐湿疣与假性湿疣鉴别诊断的研究

观察了３０例女阴尖锐湿疣及１８例女阴假性湿疣的组织病理及超微结构变化，重点用免疫组化法及原位杂交法检测了１３例尖锐湿疣及１０例极性湿疣患者皮损中的ＨＰＶ－Ａｇ及ＨＰＶ６Ｂ、１１型ＤＮＡ。结果表明，在真假湿疣的鉴别诊断中，临床及组织学诊断是重要的，原位杂交法检测ＨＰＶ－ＤＮＡ具有较高的特异性。