基于指纹图谱结合化学计量法对乌头属藏药材榜那的多指标成分分析

目的建立常用乌头属藏药材榜那的指纹图谱及多指标成分含量测定方法,为多基原药材的质量标准制定和临床安全用药提供参考。方法采用HPLC建立榜那药材的指纹图谱并进行相似度评价;测定30批榜那药材中7种生物碱成分含量,并结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)评价榜那药材的2种不同基原植物的生物碱成分的差异。结果建立的指纹图谱确认17个共有峰,指认出12-表-欧乌头碱、雪上一枝蒿庚素、苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头原碱、新乌头碱、乌头碱、3-乙酰乌头碱7个色谱峰。基于相似度分析,铁棒锤和伏毛铁棒锤种内化学指纹图谱均一,种间指纹图谱存在一定差异。PCA和OPLS-DA结果表明铁棒锤和伏毛铁棒锤2种基原物种在这7种化学成分含量上存在一定差异;且依据OPLS-DA和t检验分析结果可确定伏毛铁棒锤中主要差异成分12-表-欧乌头碱和乌头碱含量显著高于铁棒锤(P0.01)。结论本实验所建立的指纹图谱和多组分定量分析方法简便、易操作、信息量大,可用于榜那药材的质量和临床用药安全性控制;有必要建立和完善榜那的双酯型生物碱限度测定。     

伏毛铁棒锤根部二萜生物碱的研究

 目的研究伏毛铁棒锤根部的二萜生物碱成分。方法采用正、反相硅胶柱色谱分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定结构。结果从伏毛铁棒锤根部的乙醇提取物中分离鉴定出11个二萜生物碱,分别为3-脱氧乌头碱(Ⅰ)、3-脱氧乌头原碱-8-亚油酸酯(Ⅱ)、3-乙酰乌头碱(Ⅲ)、16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱(Ⅳ)、尼奥灵(Ⅴ)、宋果灵(Ⅵ)、乌头原碱-8-亚油酸酯(Ⅶ)、乌头碱(Ⅷ)、12-表-欧乌头碱(Ⅸ)、欧乌头碱(Ⅹ)和6-O-去甲基尼奥灵(Ⅺ)。结论二萜生物碱是伏毛铁棒锤药材的主要化学成分,其中Ⅱ,Ⅳ～Ⅶ和Ⅺ为首次从该植物中分离得到。     

人工种植伏毛铁棒锤的化学成分研究

目的 研究人工种植伏毛铁棒锤的化学成分.方法 采用超声波乙醇提取法和正、反相硅胶柱色谱分离纯化,根据理化性质和波谱数据鉴定结构.结果 从人工种植的伏毛铁棒锤中分离鉴定出11个化合物,分别为3脱氧乌头碱(Ⅰ)、3-乙酰乌头碱(Ⅱ)、乌头碱(Ⅲ)、3-脱氧乌头原碱-8亚油酸酯(Ⅳ)、尼奥灵(Ⅴ)、宋果灵(Ⅵ)、乌头原碱-8亚油酸酯(Ⅶ)、16,17-二氢-12β,16β-环氧欧乌头碱(Ⅷ)、12-表-欧乌头碱(Ⅸ)、欧乌头碱(Ⅹ)和6-O-去甲基尼奥灵(Ⅺ).结论 人工种植的伏毛铁棒锤的化学成分与已报道野生的基本相同,人工种植的伏毛铁棒锤能够满足药用需要.     

基于大孔吸附树脂纯化技术比较不同产地铁棒锤中总生物碱与乌头碱的含量

目的:优选大孔吸附树脂纯化铁棒锤总生物碱的最佳条件,比较不同产地铁棒锤中总生物碱与乌头碱的含量,为进一步研究铁棒锤质量提供依据.方法:采用正交设计优选大孔吸附树脂对铁棒锤总生物碱的最佳纯化条件,以滴定法测定总生物碱的含量.采用最佳工艺条件对4个不同产地铁棒锤的总生物碱进行纯化,并用HPLC测定乌头碱的含量.结果:不同工艺条件对总生物碱的纯化有不同影响.最佳纯化条件为树脂型号HPD-722,80％乙醇,乙醇洗脱量80 mL·min-1.HPLC测得青海、马衔山、宁夏、永登4个不同产地铁棒锤中乌头碱质量分数分别为0.493 5,0.883 5,1.527 8,1.664 4 mg·g-1.结论:该文的最佳工艺条件可用于总生物碱和乌头类生物碱的纯化.不同产地铁棒锤中乌头碱含量以甘肃永登栽培最高.     

止痛涂膜的制备工艺研究

止痛涂膜处方来源于《回回药方》伏毛铁棒锤止痛膏，为回族长期用于止痛和治疗关节炎的外用止痛药。其君药（毛铁棒锤）为毛茛科乌头属植物伏毛铁棒锤（Aconitum filavum Hand．-Mazz）的干燥块根，经中药炮制处理降低了伏毛铁棒锤的毒性，并将其提取物（生物碱类）制成止痛涂膜制剂，我们经过正交设计对处方制备工艺条件进行优化研究，现报导如下。     

铁棒锤止痛膏的临床疗效

铁棒锤止痛膏是甘肃省平凉卫生材料厂在有关单位协助下研制并生产的外用(硬膏型)止痛新药。经甘肃省卫生厅和甘肃省医药总公司组织有关专家、教授通过鉴定,一致认为本品有较好的镇痛消肿作用。铁棒锤止痛膏的处方组成:铁棒锤、透骨草、白芷、老鹳草、祖师麻、红花、乳香、没药、樟脑、冰片、冬青油、颠茄浸膏等十二味。主要铁棒锤为毛莨科乌头属植物伏毛铁棒锤(Aconitumflavum Han-Nazz)的干燥块根。当地民间习用野生草药,以研细或磨汁涂敷治疗腰腿痛、关节痛、头痛、牙痛等。据报道,伏毛铁棒锤总碱中,有两个主要成分,一为已知的乌头碱,另一为新化合物3-乙酰乌头碱。3-乙酰乌头碱有明显的镇痛和局部麻醉作用,起效慢而持续时间长。因此,铁棒锤止痛膏以伏毛铁棒锤为主药,辅以白芷、乳香、透骨草等祛风活血要药,更增强了其活血散瘀,祛风止痛的功效。经甘肃省人民医院等单位临床观察证明,对于各种急慢性关节炎,骨及肌肉慢性劳损,多种扭、挫伤等均有较高疗效。一、疗效判断标准:痊愈,疼痛完全消失或体征消除;显效,病痛或体征明显缓解或缓解达75%以上;好转,疼痛或体征有所改善,但程度少于50%者;无效,无改善或症状加重者。     

铁棒锤及其炮制品中二萜生物碱化学成分研究

目的研究铁棒锤及其水煮炮制品的化学成分。方法采用硅胶柱色谱等方法对铁棒锤及水煮炮制品的化学成分进行分离纯化,根据化合物的理化常数和波谱数据鉴定其结构。结果从铁棒锤及其水煮炮制品中共分离得到12个化合物,经鉴定为去氧乌头碱(1)、3-乙酰乌头碱(2)、乌头碱(3)、15α-OH-neoline(4)、8-acetyl-15-hydroxyneoline(5)、尼奥灵(6)、14-benzoyl-8-O-methylaconine(7)、苯甲酰乌头原碱(8)、多裂乌头碱D(polyschistineD,9)、苯甲酰去氧乌头碱(10)、polyschistineA(11)、乌头原碱(12)。结论二萜生物碱是铁棒锤块根的主要化学成分,其中化合物4～8为首次从该植物中分离得到。与生品相比,铁棒锤水煮炮制品中二萜生物碱成分发生了一定的变化,其中化合物9～12为炮制品新增的成分,这些成分的鉴定为铁棒锤水煮炮制法炮制原理的揭示提供了依据。     

民族药铁棒锤炮制减毒原理初步研究

目的:研究铁棒锤不同炮制方法的炮制减毒原理。方法:采用高效液相色谱法和急性毒性试验比较铁棒锤炮制前后化学成分和毒性的变化。结果:生品中的主要毒性成分为乌头碱、去氧乌头碱和3-乙酰乌头碱,炮制品中这3种生物碱的含量降低,苯甲酰乌头原碱的含量增加,新出现了polyschistine-D,beyzoyldeoxyaconine,16-epi-pyroaconitine,16-epi-pyrodeoxya-conitine等生品中所不含的生物碱,从结构上分析,这些新增的成分由乌头碱等毒性成分转化而来。结论:铁棒锤的炮制减毒原理与乌头碱等有毒成分通过酯键水解和高温热解的方式转化成毒性小的成分有关,不同炮制方法均能够达到减毒的目的。     

陕产铁棒锤不同生长期不同器官中3种酯型生物碱的含量测定

目的对陕产铁棒锤不同生长期不同器官中乌头碱、次乌头碱及中乌头碱进行含量测定,探讨化学成分的动态变化,为资源开发及合理使用提供参考。方法色谱柱:Diamonsil C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:A:乙腈-四氢呋喃(25:15),B:0.1 mol/L醋酸铵溶液(每1000mL加冰乙酸0.5 mL);流速:1.0 mL/min;梯度洗脱:检测波长为235 nm;温度25℃。结果铁棒锤不同生长期、不同器官中酯型生物碱含量均较高,不同器官中酯型生物碱的含量差异较大;块根在果期酯型生物碱的含量最高,茎在花前期酯型生物碱的含量最高,叶在花期酯型生物碱的含量最高;乌头碱在植物体内的含量呈现先升后降的变化趋势,花前期乌头碱的含量最高;次乌头碱在植物体内的含量呈现S变化趋势,苗期和花期的含量最高;中乌头碱在植物体内的含量呈现先升后降的变化趋势,花前期中乌头碱含量最高。结论铁棒锤不同生长期、不同器官酯型生物碱的含量远大于川乌的限量标准,且资源优质,具有较高的药用价值,本研究为陕产铁棒锤合理使用、资源开发及质量评价提供理论依据。     

铁棒锤药材质量标准研究

铁棒锤来源于毛茛科植物铁棒锤Aconitum pen-dulumBusch·和伏毛铁棒锤A·flavumHand-·Mazz·的干燥子根。别名:铁牛七(陕西)、断肠草、两头尖、磨三转(甘肃)、乌药(青海)、一枝箭、三转半(四川)、一支蒿(宁夏)。西北各省及上海市药材标准均有收载。其性热,味辛、苦,有大毒;归心、肾、脾经;具有活血祛瘀,祛风除湿,止痛消肿的功效。多数地区用其子根,个别省份用其地上部分。据报道其子根中含有乌头碱、去氧乌头碱、3-乙酰乌头碱....     

铁棒锤止痛涂膜的体外透皮吸收试验

目的:制备铁棒锤止痛(乌头碱)涂膜,考察透皮吸收促进剂氮酮对铁棒锤止痛涂膜中生物碱的促透作用,找到最佳促透浓度。方法:利用自制改良Franz扩散池,小鼠皮,分别用0.05%,10%,1.5%,20%的水溶性氮酮对铁棒锤生物碱进行体外透试验。结果:水溶性氮酮能增加铁棒锤生物碱的透皮吸收,水溶性氮酮最佳促透浓度为1.5%。结论:水溶性氮酮在铁棒锤止痛涂膜中对铁棒锤生物碱最佳促透浓度为1.5%。     

藏药铁棒锤及其习用品中3种生物碱含量测定

目的建立同时测定铁棒锤及其习用品中苯甲酰乌头碱、乌头碱、3-脱氧乌头碱的HPLC含量测定方法,为铁棒锤药材质量标准毒性成分控制及其与习用品区别提供依据。方法采用Agilent Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-0.04%三乙胺(每1000 mL水加4 mL三乙胺、1.68 mL磷酸),梯度洗脱,检测波长235 nm,流速1 mL/min,进样量10μL,柱温25℃。结果苯甲酰乌头碱、乌头碱、3-脱氧乌头碱分离度良好,3种成分在检测范围内均呈良好线性(r0.999),平均加样回收率为97.66%~98.47%,RSD为0.84%~1.60%。结论铁棒锤及其习用品中3种生物碱的含量差异较大,多裂乌头A.polyschistum、缩梗乌头A.sessiliflorum应另立药名加以区别。     

栽培与野生藏药铁棒锤中活性成分乌头碱的HPLC分析

目的:对3个不同产地栽培与野生铁棒锤中乌头碱活性成分进行分析,对其做出客观评价.方法:采用高效液相色谱法(HPLC),使用ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈-0.2%二乙胺水溶液(35:65);柱温30℃;流速0.8mL·min-1;检测波长240nm结果:乌头碱在0.39～1.95μg与峰面积有良好的线性关系,平均回收率为98.35%,RSD1.5%(n=6);甘肃产铁棒锤药材中乌头碱的质量分数为0.3244%;宁夏产铁棒锤药材中乌头碱为0.2144%;青海产铁棒锤药材中乌头碱为0.1397%.结论:3个不同产地铁棒锤中乌头碱含量差异较大,甘肃栽培铁棒锤中乌头碱含量最高,宁夏野生铁棒锤次之,青海野生铁棒锤含量较低.     

不同来源铁棒锤中乌头碱的含量比较

目的:采用RP-HPLC法测定宁夏固原地区4种地质条件下铁棒锤根、茎、叶及果实中乌头碱的含量并进行分析比较,为铁棒锤药材的标准化种植提供实验数据。方法:色谱柱ThermoODS-HYPER-SIL(4.6mm×250mm,5μm);DAD检测器;流动相0.1%乙二胺水溶液-甲醇-乙腈(37:39:24);流速1mL/min;柱温30℃。结果:测定了16批次样品,其中铁棒锤根部乌头碱的含量高,最高为固原地区黑城乡铁棒锤根中乌头碱的含量1.7494(mg/g);铁棒锤茎部中乌头碱的含量最低。结论:宁夏固原地区不同地质条件下的铁棒锤及其不同生长部位之间乌头碱的含量存在差异。所测定的乌头碱含量数据可作为宁夏铁棒锤药材标准化种植的实验依据。     

宁夏不同地域伏毛铁棒锤茎中总生物碱含量分析比较

目的：考察并比较宁夏不同地域伏毛铁棒锤茎中总生物碱含量。方法：样品经732型阳离子交换树脂处理,以乌头碱为对照采用紫外分光光度法测定总生物碱的含量。结果：宁夏种苗园伏毛铁棒锤茎中总生物碱含量最高,为54．67mg·g^-1。结论：实验结果可见,宁夏种苗园伏毛铁棒锤茎总生物碱含量最高,为日后最大化有效利用资源提供了实验支持。     

基于药材表征和色谱技术对铁棒锤药材质量标准提升的相关研究

目的：建立铁棒锤药材表征特性和其有效成分的色谱检测方法,为铁棒锤质量标准提升提供参考。方法：运用中药鉴别手段对野生和栽培铁棒锤性状形态表征、显微特征、薄层色谱进行定性鉴别;采用紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法对其总乌头碱及乌头碱含量进行定量分析。结果：在外观形态上铁棒锤野生品比栽培品个体明显偏小,块根干瘪,而显微鉴别上两者差异较小;薄层色谱中,斑点清晰,分离度好,可用于快速鉴别;紫外分光光度法其总生物碱以乌头碱计在0.012~0.072 mg·mL-1与峰面积呈良好的线性关系。高效液相色谱法在0.025~0.500 mg·mL-1与峰面积呈良好线性关系。不同批次铁棒锤中乌头碱与总乌头碱含量差异较大,野生品中的总乌头碱高于栽培品;子根中的乌头碱高于块根。结论：为确保临床用药安全,在铁棒锤入药时应区分野生品与栽培品、子根与块根。应综合考量药材各因素与品质之间的关系,建立多种有效且科学的质量评价方法。为其在质量评价中的进一步应用提供参考。     

甘肃不同地域伏毛铁棒锤中乌头碱及3-乙酰乌头碱的含量分析

目的:分析甘肃不同地域伏毛铁棒锤中乌头碱及3-乙酰乌头碱的含量差异。方法:采用高效液相色谱法,色谱柱为Gemini-Nx-C_(18)柱(5μm,4.6 mm×250m m),以乙腈:0.2%碳酸氢铵溶液(55:45)为流动相,流速为1.0 m L/min,检测波长230 nm,柱温:30℃进行检测。结果:乌头碱线性范围为:19.20~57.55μg/m L,平均加样回收率为101.30%,(RSD=2.34%);3-乙酰乌头碱线性范围为:4.8~50μg/m L,平均加样回收率为100.67%(RSD=0.77%)。结论:该法快速、简便,结果准确、可靠,可用于伏毛铁棒锤中乌头碱及3-乙酰乌头碱的含量测定及差异分析。     

伏毛铁棒锤地上部分生物碱成分研究

首次从优毛铁棒锤Aconilumflavum地上部分（花、茎、叶）中分离出4个生物碱结晶。经鉴定晶Ⅰ为脱氧乌头碱（deoxyaconitine），晶Ⅱ为3-乙酰乌头碱（3－acetylaconitine），晶Ⅲ为乌头碱（aconitine），晶Ⅳ待鉴定。乌头碱的收率为0．12％（块根中乌头碱收率为0．20％），薄层层析鉴定地上部分与块根的生物碱基本一致，为开发3-乙酰乌头碱寻找了新的资源。     

UPLC同时测定铁棒锤中6种酯型生物碱类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱法同时测定铁棒锤药材中苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱6种生物碱类成分的含量测定方法。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm);乙腈-0.2%冰醋酸水溶液(三乙胺调节PH=6.2)梯度洗脱为流动相;流速0.4mL·min-1;柱温为35℃;检测波长235nm。结果:6种单酯型和双酯型生物碱的线性范围、相关系数良好(r=0.999 4～0.999 9),加样回收率试验的RSD均小于2.0%。结论:该方法简便、快捷、灵敏度高,可用于铁棒锤药材的质量控制。     

铁棒锤种子蛋白质提取及聚丙烯酰胺凝胶电泳研究

目的构建适合铁棒锤种子蛋白质研究的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)体系,为铁棒锤种子纯度检测及鉴别研究提供技术支撑。方法采用6种蛋白质提取法提取伏毛铁棒锤种子蛋白质,并筛选出最佳提取方法,在此基础上研究不同分离胶浓度、料液比、上样量对伏毛铁棒锤种子蛋白电泳分离效果的影响,并采用筛选出的蛋白质最佳提取分离方法对铁棒锤和伏毛铁棒锤种子进行鉴定。结果巯基乙醇法提取的伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱效果较佳,电泳谱带数最多(14条)、最清晰,适合于其种子纯度检测;分离胶浓度为15%、料液比为1∶10(M/V)、蛋白上样量稀释5倍时,其种子蛋白质电泳分离效果较好;铁棒锤和伏毛铁棒锤种子蛋白质电泳图谱在蛋白质谱带位置和强弱上有一定差异。结论本研究建立的铁棒锤种子蛋白样品制备方法及SDS-PAGE技术可用于铁棒锤种子纯度检测,其蛋白质图谱可作为铁棒锤与伏毛铁棒锤种子的鉴别依据。