肢体缺血后处理对脑缺血大鼠神经功能恢复和神经细胞增殖的作用

目的探索非侵入式肢体缺血后处理（NLIP）对脑缺血大鼠的脑保护作用和损伤侧皮质区神经细胞的表达与分布。方法SD大鼠110只随机分成假手术组(n=10), 缺血再灌注损伤组（I/R组,n=50）,NLIP组（治疗组,n=50）。I/R组和治疗组动物采用线栓法制备大脑中动脉栓塞（MCAO）模型（假手术组不插入线栓）,治疗组于再灌注即刻给予NLIP处理（改良的缺血弹性带股动脉近端加压阻断股动脉10 min,再通10 min,循环3次）,术后3 d、7 d、14 d、21 d、28 d分别称取大鼠体质量,并进行行为学评估后处死大鼠取脑组织,免疫组织化学染色检测各时点缺血脑皮质中的双皮质素（DCX）和胶质细胞原纤维酸性蛋白（GFAP）的表达,Western blot检测缺血脑皮质中微管相关蛋白2（MAP2）的表达。结果假手术组动物术后1 ~3 d表现出轻度的体质量下降和行为学缺损,术后1 d出现上肢肌力减弱,之后开始恢复。与假手术组比较,以上神经缺损在I/R组和治疗组动物中更加明显（P<0.05）,术后3 d到21 d逐渐缓解,到术后28 d时接近假手术组水平。与I/R组相比,治疗组动物体质量在术后2~7 d有明显恢复（P<0.05）,动物上肢肌力在14~28 d有明显改善 (P<0.05),治疗组行为学评分在各时点与I/R组差异无统计学意义。与假手术组比较,I/R组和治疗组脑皮质缺血区周围DCX阳性细胞和GFAP阳性细胞随时间推移逐渐增多,伴随胞体肥大和突起变长加粗,分别在术后21 d和28 d大量增殖并聚集在脑皮质缺血区周围。I/R组和治疗组在术后3 d缺血脑皮质中MAP2表达量下降,但与假手术组差异无统计学意义（P>0.05）,之后逐渐上调,术后14 d和21 d时高于假手术组（P<0.05）。治疗组MAP2表达量在术后7~28 d高于假手术组（P<0.05）,在术后7 d时高于I/R组（P<0.05）。结论NLIP可减轻脑缺血大鼠神经行为学异常和促进缺血周围区神经细胞的增多。     

实验性大鼠颅脑损伤后GFAP的表达研究

目的:通过建立针刺颅脑损伤动物模型,研究颅脑损伤后星形胶质细胞随损伤时间的变化规律.方法:采用针刺法复制大鼠脑挫伤模型,造成右顶叶局限性脑挫伤,于伤后不同时间将其处死,取脑组织,用免疫组化方法及图像分析技术检测脑组织中GFAP的含量变化,并与正常对照组进行比较.结果:GFAP随损伤时间会出现规律性变化,呈现上升后下降的趋势,伤后3天表达达最高,伤后21天时基本恢复正常.且各时间段双侧大脑表达无明显差异.结论:在针刺法致脑损伤模型中星形胶质细胞参与了颅脑损伤后的修复过程,其标志性蛋白GFAP随损伤时间会出现规律性改变.     

TSA对发育期大鼠癫痫后脑损伤的保护作用及其机制

目的 探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑素A(TSA)在癫痫后脑损伤发病中的作用及其机制。方法将32只雄性SD大鼠随机分为4组:对照组、海人酸(KA)组、小剂量TSA干预组(0.03 mg/kg)及大剂量TSA干预组(0.1 mg/kg)组,通过腹腔注射海人酸(KA)制作发育期大鼠癫痫模型,TSA于KA诱导癫痫前2 h腹腔注射给药,评估惊厥发作的等级及记录惊厥的潜伏期。癫痫后24 h处死大鼠,HE染色观察脑组织病理变化;TUNEL染色检测大鼠海马神经元细胞凋亡;CD68染色检测活化的小胶质细胞;Western blot检测IL-1β和TNF-α蛋白的表达。结果KA组均达到Ⅳ~V级惊厥发作,而TSA干预组能减轻惊厥发作的等级和延长惊厥的潜伏期。HE染色可见KA组明显的神经元凋亡及细胞水肿,伴有较多的炎症细胞浸润,而TSA干预组能减轻神经元凋亡及细胞水肿,同时减少炎症细胞浸润。与对照组比较,KA组神经元凋亡数、小胶质细胞活化数及炎症因子的表达均显著增加(P<0.05),而TSA能抑制KA诱导的改变。相对于0.03 mg/kg TSA干预组,0.1 mg/kg TSA干预组治疗作用更明显(P<0.05)。结论TSA能抑制癫痫后海马神经元凋亡、小胶质细胞活化及炎症因子的表达,同时能减轻惊厥发作的等级和延长惊厥的潜伏期,从而对癫痫后脑损伤起到保护作用。     

川芎嗪对过氧化氢诱导星形胶质细胞氧化应激损伤的保护作用

目的 探讨川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对过氧化氢(H202)所致大鼠星形胶质细胞凋亡的保护作用.方法 利用SD新生鼠(24～48h)分离、培养星形胶质细胞,按随机数字表法分为空白对照组(以正常培养液培养)、模型组(100 μmol/L的H202作用24 h)、TMP剂量组(25、50、100...     

星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经保护作用的研究

目的 通过观察星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经细胞调亡的影响,探索星形胶质细胞在脑创伤中的作用及其机制.方法 分离培养小鼠星形胶质细胞并对其进行鉴定.将60只小鼠随机分成假手术组、外泌体组和生理盐水组.在脑创伤后第3天检测小鼠脑组织Bcl2、Bax以及Caspase-3的表达水平、神经细胞凋亡情况以及神经功能预后.结果 样本中存在直径30～150 nm不等的外泌体.脑创伤后第3天,外泌体组小鼠脑组织Bax、Caspase-3的表达水平以及神经细胞调亡水平均低于生理盐水组(P<0.05),而Bcl2的表达水平则高于生理盐水组(P<0.05);外泌体组小鼠神经功能预后较生理盐水组也有明显改善(P<0.05).结论 星形胶质细胞外泌体能显著减少脑创伤小鼠神经细胞调亡,改善神经功能预后.     

星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经保护作用的研究

目的 通过观察星形胶质细胞外泌体对脑创伤小鼠神经细胞调亡的影响,探索星形胶质细胞在脑创伤中的作用及其机制.方法 分离培养小鼠星形胶质细胞并对其进行鉴定.将60只小鼠随机分成假手术组、外泌体组和生理盐水组.在脑创伤后第3天检测小鼠脑组织Bcl2、Bax以及Caspase-3的表达水平、神经细胞凋亡情况以及神经功能预后.结果 样本中存在直径30～150 nm不等的外泌体.脑创伤后第3天,外泌体组小鼠脑组织Bax、Caspase-3的表达水平以及神经细胞调亡水平均低于生理盐水组(P<0.05),而Bcl2的表达水平则高于生理盐水组(P<0.05);外泌体组小鼠神经功能预后较生理盐水组也有明显改善(P<0.05).结论 星形胶质细胞外泌体能显著减少脑创伤小鼠神经细胞调亡,改善神经功能预后.     

大鼠不同类型脑损伤后NO表达变化的比较研究

目的 研究不同类型脑损伤后ＮＯ的表达变化。方法 建立大鼠３种脑２模型：脑皮质针刺伤、短暂性余脑缺血／再灌注与模拟低压性脑缺氧,运用ＮＡＤＰＨ－ｄ组化（ＮＤＰ）、原位分子杂交、图像分析等对３种脑损伤后ＮＯ的表达及其细胞来源进行对比观察。结果（Ｆ１）ＮＤＰ阳性细胞数在脑皮质针刺伤后第５－７ｄ达高峰,且主要分布于海马、室周区等处;全脑缺血再灌注后１－３ｄ即达高峰,以颞叶皮质、海马与室周区明显;高原缺氧     

中药脑脊液药理学研究方法的初建--对中药影响星形胶质细胞神经营养作用的观察

目的 :探求一种合理有效的中药作用于中枢神经系统药效研究的方法。方法 :利用体外细胞培养的方法 ,以 3种不同浓度观察血清、中药血清、脑脊液、中药脑脊液对于星形胶质细胞和神经元的影响。结果 :苔盼蓝染色和L DH检测证明正常血清和中药血清在 3种浓度均出现对细胞的毒害作用 ,尤以 10 0 ,2 0 0 μL 为重 ,且在同一浓度时 ,两组之间没有明显的差异。而正常脑脊液组和中药脑脊液组与空白对照组相比 ,未见明显差异 ,MTT检测证明中药脑脊液组吸光度 (A)明显高于其余各组。结论 :利用脑脊液进行中药对中枢神经系统的药效观察明显优于血清 ,提出“脑脊液药理学”的概念 ;中药可诱导星形胶质细胞产生神经营养作用。     

VEGF对大鼠星形胶质细胞的缺氧保护作用及其机制

目的 观察缺氧对体外培养的大鼠星形胶质细胞的影响,探讨外源性血管内皮细胞生长因子（VEGF）对大鼠星形胶质细胞缺氧的保护作用及其可能的机制。方法 体外原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞并鉴定（胶质原纤维酸性蛋白GFAP阳性）。星形胶质细胞分别经不同时间的缺氧处理、缺氧处理前加入不同浓度（10～100ng／ml）VEGF处理以及同时加入VEGF受体Flk一1阻断剂SU1498处理后,应用光镜、细胞计数、MTT法、TUNEL标记及免疫组化技术检测星形胶质细胞形态、细胞增殖活性和凋亡、VEGF和Flk-1的表达改变。结果 纯化培养1周的细胞,经鉴定其星形胶质细胞纯度达98％;8～12h缺氧可明显诱导星形胶质细胞活化,表现为细胞胞体变大、胞突变粗、GFAP表达升高,细胞增殖活性降低、凋亡指数增加、VEGF和Flk-1表达增加;缺氧处理前20～24h加入50ng／ml VEGF可使细胞活力明显增强,细胞凋亡指数明显降低,细胞缺氧损伤明显改善;而700ng／ml SU1498可明显阻断或抑制VEGF对星型胶质细胞的缺氧保护作用。结论 缺氧可诱导大鼠星形胶质细胞反应性活化,外源性VEGF可能通过VEGF受体Flk-1发挥对大鼠星形胶质细胞的缺氧保护作用。     

TLR4抗体对MPTP诱导的亚急性帕金森病小鼠的神经保护作用

目的 研究Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)单克隆抗体对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine,MPTP)诱导的帕金森病(Parkinson's disease,PD)模型小鼠的神经保护作用.方法 将48只C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组、MPTP组和TLR4抗体+MPTP组,每组16只.连续7天腹腔注射MPTP制作亚急性PD小鼠模型.用小鼠滚筒协调运动测试仪评价小鼠的运动协调能力,记录运动跌落潜伏期,免疫组织化学法检测各组小鼠中脑酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)(+)多巴胺能神经元、TLR4(+)细胞及CD11b(+)小胶质细胞的表达情况,显微镜观察载玻片并拍照,用Image Pro Plus图像处理软件进行细胞计数并比较各组间的差异.结果 3组小鼠中脑TH(+)多巴胺能神经元计数、TLR4(+)细胞数目和CD11b(+)细胞数目差异具有统计学意义(P均<0.001),对照组小鼠TH(+)多巴胺能神经元数目最多,MPTP组多巴胺能神经元数目最少,TLR4抗体+MPTP组居中;MPTP组小鼠TLR4(+)细胞数目和CD11b(+)细胞数目最多,TLR4抗体+MPTP组次之,对照组最少,组间比较差异有统计学意义(P均<0.001).结论 TLR4特异性抗体可逆转MPTP造成的小胶质细胞激活和多巴胺能神经元损伤,是临床PD治疗方案的新选择.     

星形胶质细胞低氧预适应对缺氧神经元的保护作用

目的：观察星形胶质细胞低氧预适应对神经元缺氧损伤的影响及机制。方法：收集低氧预适应后星形胶质细胞条件培养液（ACM）用于神经元培养。用MTT比色法检测细胞活性，Western Blot法分析星形胶质细胞促红细胞生成素的表达。结果：星形胶质细胞缺氧0．5h和3h后，活性升高，促红细胞生成素表达增多；神经元缺氧后活性明显降低，但低氧处理的ACM可阻止此变化的发生。结论：低氧预适应的ACM对神经元缺氧具有明显的保护作用，其机制可能是星形细胞表达促红细胞生成素增多，通过培养液作用于神经元，从而抑制神经元缺氧后活性的降低。     

小胶质细胞在神经退行性疾病中的神经免疫调节作用

<正>近年来的临床研究和动物实验的证据表明脑内神经炎症与多种急慢性神经退行性疾病的发生和发展密切相关,如阿尔茨海默病(Alzheimer's disease,AD)、帕金森病(Parkinson's disease,PD)和多发性硬化(multiple sclerosis,MS)等。而小胶质细胞在神经炎症中起到了关键性的作用,它既能保护神经元,又能分泌神经毒性物质,维持神经元的微环境,并以此来控制神     

高压氧对大鼠颅脑外伤后神经元凋亡的抑制作用

目的:研究高压氧治疗对大鼠颅脑外伤后神经元凋亡的影响,以探讨高压氧治疗颅脑外伤的机制。方法:(1)运用RT-PCR技术,检测高压氧治疗后大鼠脑组织Bcl-2、Bax、Caspase-3基因的变化。(2)运用TUNEL染色法,检测高压氧治疗对TUNEL染色阳性细胞的影响。结果:(1)大鼠颅脑外伤后6小时起高压氧治疗后,与对照组相比Bcl-2基因表达增加,而Bax基因表达下降,Bcl-2/Bax比值明显上升,Caspase-3基因表达增加,均具有统计学意义。(2)高压氧治疗后与对照组相比TUNEL染色阳性细胞数明显减少。结论:高压氧治疗对大鼠颅脑外伤后神经元的凋亡具有抑制作用,从而减轻大鼠颅脑外伤后的继发性脑损害。     

神经胶质细胞的功能

神经胶质细胞（Neuroglial cell）是神经系统的间质细胞,分布在神经元之间,是神经系统内数量众多的一大类细胞群体,约占中枢神经系统（CNS）细胞总数的90％。CNS内的胶质细胞包括：星形胶质细胞（Astrocyte）、少突胶质细胞（Oligodendrocyte）、小胶质细胞（Microglial cell）、室周膜细胞及嗅鞘系膜细胞等。     

神经胶质细胞在疼痛中作用的研究进展

疼痛是机体对组织损伤或潜在损伤所产生的一种不愉快反应,是一种复杂的生理心理活动。世界卫生组织已将疼痛认可为临床的五大生命体征之一;而且慢性疼痛也被公认为是一种疾病。长期以来,关于疼痛的发生及其治疗的研究都集中在神经元上。但作用于神经元的镇痛药尚不能非常理想地止痛,且有明显的不良反应。     

偏侧帕金森病大鼠黑质胶质细胞变化的实验研究

目的 :探讨偏侧帕金森病 (Parkinson sdisease ,PD)大鼠质致密部 (SNpc)胶质细胞的变化。方法 :6 羟多巴胺 (6 OHDA)立体定向注射制备偏侧PD大鼠模型。采用免疫组化方法观察大鼠质致密部酪氨酸羟化酶 (TH)、胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)、增殖细胞核抗原 (PCNA)和S 10 0蛋白免疫阳性细胞并对其面密度进行定量分析。结果 :帕金森病组大鼠毁损侧SNpc部位的TH免疫阳性面密度较正常组大鼠明显减少 (P <0 0 1) ,而GFAP、PCNA、S 10 0免疫阳性面密度则明显增多 (P <0 0 1)。结论 :PD大鼠毁损侧SNpc部位存在明显的胶质细胞增生 ;SNpc部位的胶质细胞可能影响着PD的发生及其严重程度。     

六价铬对大鼠学习记忆的影响

目的 观察六价铬[Cr(VI)] 对大鼠学习记忆的影响。方法 母鼠哺乳期分别给予双蒸水（对照组）、 低（0.8 mg/kg）、中（4.0 mg/kg）、高（20 mg/kg）重铬酸钾溶液（低、中、高剂量重铬酸钾组）。断乳后仔鼠 灌胃与其母鼠相同剂量的重铬酸钾溶液,共6 个月。石墨炉原子吸收光谱法测定大鼠脑组织中铬含量;Morris 水迷宫实验测试大鼠学习记忆能力;尼氏染色和免疫组织化学等方法观察大鼠海马神经细胞及星形胶质细胞 的形态学改变;高效液相色谱法测定谷胱甘肽（GSH）含量。结果 低、中、高剂量重铬酸钾组脑组织中铬 含量与对照组比较,差异有统计学意义（P <0.05）。随着染毒剂量增加,大鼠平均逃避潜伏期和第1 次寻找平 台的潜伏期延长,穿越原平台次数减少,在原平台象限停留时间缩短（P <0.05）。与对照组比较,重铬酸钾组大 鼠海马组织出现损伤、神经元排列紊乱及细胞核浓染固缩。星形胶质细胞GFAP 阳性表达现象随剂量的增加 而加重。与对照组比较,铬暴露组大鼠海马组织的GSH 含量下降（P <0.05）。结论 重铬酸钾可引起大鼠海 马神经元结构及其功能损伤,学习记忆能力降低,其机制可能与Cr（VI）所诱导的氧化应激有关。     

GDNF的神经保护作用的研究进展

胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line--derived neurotrophic factor ,GDNF）是转化生长因子（ transforming growth factor β, TGF - β）家族中的一员。GDNF是一种神经营养因子,通过与由GDNF家族受体（GDNF family receptor alpha 1, GFRα1 ）和c-Ret组合成的复合受体结合,激活细胞内一系列信号传导通路,发挥营养神经、抑制神经元变性坏死的作用。多项实验室及临床研究显示,GDNF对多巴胺（dopamine,DA）能神经元和外周的神经元如交感神经元、副交感神经元、感觉神经元与运动神经元等有营养和保护作用。最有希望成为治疗帕金森病（parkinson’s disease,PD）、肌萎缩侧索硬化症（amyotrophic lateral sclerosis,ALS）及外周神经元变性坏死的有效治疗手段。如何通过采用恰当的给药途径及方式,既能使其在体内高效稳定地发挥作用,又能将不良反应减到最低程度是未来研究的努力方向。     

胶质细胞系源性神经营养因子保护帕金森模型大鼠黑质多巴胺能神经元机制的研究

目的 探讨胶质细胞系源性神经营养因子（glial cell line-derived neumtrophic factor，GDNF）在保护黑质多巴胺（dopamine，DA）能神经元过程中，钙结合蛋白D28K（calbindin 28K，CB）和星形胶质细胞的可能作用。方法 采用大鼠右侧纹状体内注射6-羟多巴胺（6-OHDA）制备帕金森病（Parkinson disease，PD）模型。注射后第7天，根据行为学分析筛选模型鼠，将模型鼠随机分为3组：空白对照组，PBS组（右侧黑质注射pm）和GDNF组（右侧黑质注射GDNF）。空白对照组动物分别于6-OHDA注射后第7天、14天、21天和28天时，PBS组和GDNF组动物分别于6-OHDA注射后第14天、21天和28天时，行黑质节段连续冠状石蜡切片，以酪氨酸羟化酶（tyrosine hydmxylase．TH）、CB和胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrous acid protein，GFAP）免疫组织化学染色，分别显示DA能神经元、含cB神经元和星形胶质细胞，光镜观察以及细胞计数，统计学处理。结果 ①TH免疫组织化学染色结果：6-OHDA注射后第28天，GDNF组大鼠右侧黑质rrH表达阳性神经元数量显著多于空白对照组和PBS组；②CB免疫组织化学染色结果：6-OHDA注射后第7天，空白对照组大鼠右侧黑质尚可观察到cB表达阳性神经元，之后的时间点空白对照组和PBS组均观察不到，而GDNF组大鼠右册黑质处在所检测的各时间点均可观察到cB表达阳性神经元；③GFAP免疫组织化学染色结果：空白对照组在6-OHDA注射后第7天时有少量的GFAP表达阳性细胞，于注射后第14天时GFAP表达阳性细胞数达高峰，之后逐渐减少，注射后第28天时已基本检测不到；PBS组GFAP表达阳性细胞数量与空白对照组的表现一致，而GDNF组大鼠黑质在所检测的各时间点均可观察到大量反应性增生的星形胶质细胞。结论 CB和（或）星形胶质细胞可能参与GDNF保护并促进PD模型大鼠黑质DA能神经元存活的过程。     

川芎嗪对大鼠局部脑缺血星形胶质细胞的影响

目的 :观察川芎嗪对缺血后神经元改变和星形胶质细胞GFAP表达的影响。方法 :制作大鼠单侧局灶性脑缺血模型 ,HE染色观察神经元的形态学改变 ,免疫组化染色观察星形胶质细胞GFAP表达的变化。结果 :川芎嗪可提高星形胶质细胞GFAP表达。结论 :川芎嗪对缺血神经元有保护作用