同型半胱氨酸通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A诱导神经炎症反应

目的探索同型半胱氨酸(Hcy)是否通过促进细胞焦亡和上调琥珀酸脱氢酶亚基A(SDHA)蛋白表达诱导神经炎症反应。 方法使用不同浓度Hcy(1.25、2.50、5.00 mmol/L)处理小鼠海马神经元细胞系HT22细胞。CCK-8检测细胞活力;免疫荧光法观察细胞形态和焦亡相关蛋白消皮素(GSDMD)与细胞膜的共定位情况;Western blotting检测细胞核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1前体(pro-Caspase-1)和Caspase-1的活性片段(cleaved-Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、GSDMD和GSDMD的N端结构域(GSDMD-N)等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平。酶联免疫吸附测定法检测炎症因子白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平。 结果Hcy可显著降低HT22细胞活力,损伤HT22细胞突触,增加GSDMD与细胞膜的共定位和细胞膜破裂程度,上调HT22细胞NLRP3、pro-Caspase-1、cleaved-Caspase-1、ASC、GSDMD和GSDMD-N等焦亡相关蛋白及SDHA蛋白表达水平,并增加IL-1β和IL-18水平。 结论Hcy可诱导神经炎症反应,其机制与其促进细胞焦亡和上调SDHA蛋白表达密切相关。     

原花青素对CIA大鼠足爪组织中NF-κB/p65蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响

目的研究原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎(CIA)大鼠足爪组织中核转录因子NF-κB/p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α等水平的影响。方法建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型,免疫组化法检测足爪组织中NF-κB/p65蛋白的表达,ELISA法检测CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量。结果原花青素能剂量依赖性地下调NF-κB/p65蛋白的表达,降低CIA大鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平。结论原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NF-κB/p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的水平有关。     

CXC趋化因子配体14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响

目的探讨CXC趋化因子配体14(CXCL14)对高糖暴露环境中脂肪细胞焦亡的影响。方法利用“鸡尾酒法”诱导3T3-L1细胞分化为成熟脂肪细胞,用5.5 mmol/L低糖(NG)或25 mmol/L高糖(HG)葡萄糖培养基培养脂肪细胞24 h;HG环境下用不同浓度CXCL14处理3T3-L1细胞不同时间。Western blot检测消化道皮肤素(GSDMD)、核苷酸结合寡聚化结构样受体蛋白3(NLRP3)、天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。实时荧光定量PCR检测GSDMD、NLRP3、白细胞介素-1β(IL-1β) mRNA转录水平。LDH测定试剂盒检测脂肪细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力;Annexin V-FITC荧光检测细胞死亡情况;CCK-8法检测各组细胞增殖活力。结果高糖环境下脂肪细胞焦亡发生率升高,CXCL14处理可提高脂肪细胞增殖活力,但脂肪细胞焦亡相关指标却受到CXCL14浓度梯度的不同影响。50 nmol/L CXCL14处理可降低高糖环境下脂肪细胞GSDMD、NLRP3、IL-1β mRNA以及NLRP3蛋白的表达,下调脂肪细胞LDH活力,减少Annexin V-FITC荧光染色细胞死亡率,但25、100、200 nmol/L CXCL14对其焦亡的指标却呈反向趋势。并且50 nmol/L CXCL14干预后脂肪细胞NLRP3、Caspase-1蛋白随干预时间的延长呈先下降再上升趋势。结论CXCL14对高糖环境中脂肪细胞焦亡的影响与其浓度存在相关性。     

原花青素对CLA大鼠足爪组织中NF-κB／p6S蛋白和血清中某些促炎性细胞因子表达的影响

目的研究原花青素对Ⅱ型胶原诱导的类风湿性关节炎（CIA）大鼠足爪组织中核转录因子NF-κB／p65蛋白表达的抑制作用和血清中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α等水平的影响。方法建立Ⅱ型胶原诱导的CIA大鼠模型，免疫组化法检测足爪组织中NF-κB／p65蛋白的表达，ELISA法检测CIA大鼠血清中IL-1β和TNF-α的含量。结果原花青素能剂量依赖性地下调NF-κB／p65蛋白的表达，降低CIA大鼠血清中TNF-α和IL-1β的水平。结论原花青素对CIA大鼠炎症的抑制作用可能与其下调NF—KB／p65蛋白表达、降低促炎性细胞因子TNF-α、IL-1β的水平有关。     

Effects of IL-10 on inhibiting the activation of HSC induced by TNF-α

目的 探讨白细胞介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肝星状细胞(HSC)激活的抑制作用.方法 使用10 ng/ml TNF-α刺激体外培养的HSC,建立HSC激活模型,给予HSC激活模型不同浓度IL-10(2、10、20 ng/ml)作用不同时间(1、2、24、48、72、96 h)后,油红O染色观察细胞脂肪含量,分别用Western blot和RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA) 和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平.结果 TNF-α刺激后,HSC脂肪含量显著减少,α-SMA和MCP-1表达量水平均随时间延长而升高(P<0.05).联合使用IL-10,α-SMA水平显著下降(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05),MCP-1水平亦下降(P<0.05).结论 IL-10可以抑制由TNF-α诱导的HSC激活,在肝脏早期炎症和肝纤维化进程中起保护作用.     

川芎嗪对IL-1β诱导的兔原代软骨细胞iNOS表达和NO合成的影响

目的观察川芎嗪(tetramethylpyrazine,TMP)对IL-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的兔原代软骨细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达及一氧化氮(NO)合成的影响。方法体外培养兔软骨细胞,用甲苯胺蓝染色检测蛋白多糖,免疫荧光检测兔原代软骨细胞Ⅱ型胶原;用IL-1β10 ng/ml和(或)不同浓度(5、10、15、20μg/ml)川芎嗪共培养兔原代软骨细胞48 h后,RT-PCR和免疫组化检测iNOS基因及蛋白表达;用硝酸还原法检测细胞培养上清液NO的表达。结果软骨细胞呈三角形或多角形,蛋白多糖表达于细胞质中,Ⅱ型胶原主要表达于细胞质,少见于细胞核。与对照组比较,IL-1β单独作用软骨细胞iNOS和NO的表达显著增加(P<0.01);IL-1β和川芎嗪联合作用后,软骨细胞iNOS和NO的表达较IL-1β单独作用显著降低(P<0.05,P<0.01),但仍显著高于对照组(P<0.01)。结论川芎嗪能有效抑制IL-1β诱导兔软骨细胞iNOS的表达和NO的合成。     

羟基红花黄色素A对血管紧张素Ⅱ诱导H9c2心肌细胞焦亡的影响

目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD焦亡信号通路探讨羟基红花黄色素A(Hydroxy saffloweryellow A,HSYA)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠H9c2心肌细胞焦亡及肥大的影响。方法 体外培养H9c2细胞,分别设空白对照组、模型组(1μmol/L AngⅡ)、HSYA低剂量组(1μmol/L AngⅡ+6.25μmol/L HSYA)、HSYA中剂量组(1μmol/L AngⅡ+12.5μmol/L HSYA)、HSYA高剂量组(1μmol/L AngⅡ+25μmol/L HSYA)、单给HSYA组(25μmol/L HSYA)。采用CCK-8法测定心肌细胞存活率;罗丹明标记的鬼笔环肽细胞染色法检测细胞面积;BCA法测定心肌细胞内总蛋白质含量;ELISA试剂盒检测细胞培养液中白细胞介素-1β(Interleukin1β,IL-1β)的分泌水平;Western blot法检测NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-18蛋白表达水平。结果 HSYA可明显提高AngⅡ诱导H9c2细胞活力下降;改善AngⅡ诱导的H9c...     

白藜芦醇对肥胖者骨性关节炎软骨细胞的作用及对 TLR4、NF-κBmRNA表达的影响

目的:探讨白藜芦醇是否可通过抑制TLR4/NF-κB信号通路发挥抗骨性关节炎的作用。方法:采用两步酶消化法分离培养肥胖者骨性关节炎软骨细胞。免疫细胞化学染色及甲苯胺蓝染色对细胞进行表型鉴定。应用MTT法测定白藜芦醇对软骨细胞增殖活力的影响。ELISA法检测细胞培养基上清TNF-α的水平。RT-PCR法检测TLR4、NF-κBm RNA表达水平。结果:软骨细胞Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色及蛋白多糖甲苯胺蓝染色呈阳性。白藜芦醇浓度在6.25~100μmol·L-1时对细胞增殖均无抑制作用,其中低浓度的白藜芦醇(6.25~12.5μmol·L-1)能促进细胞增殖(P<0.05)。IL-1β(10 ng·ml-1)能抑制细胞增殖(P<0.05)。白藜芦醇浓度在6.25~12.5μmol·L-1时,对IL-1β诱导的细胞活力降低有显著抑制作用。相比对照组,IL-1β诱导组的培养基上清中TNF-α水平及软骨细胞TLR4、NF-κBm RNA表达均明显增加(P<0.01),而加入白藜芦醇(6.25~12.5μmol·L-1)处理后,TNF-α水平及TLR4、NF-κBm RNA表达均显著降低(P<0.01)。结论:白藜芦醇可能通过抑制TLR4/NF-κB信号通路发挥抗骨性关节炎效应。     

瘦素通过JAK/STAT途径对IL-1β诱导的软骨细胞增殖和炎性反应的影响

目的 探讨瘦素通过JAK/STAT途径对IL-1β诱导的软骨细胞增殖和炎性反应的影响及机制研究。方法 提取SD大鼠的软骨细胞并进行鉴定;CCK-8筛选瘦素最佳浓度;集落形成实验检测细胞增殖能力;ELISA检测炎性细胞因子(IL-6、IL-8、TNF-α)的表达;Western blot法检测JAK/STAT途径相关蛋白的表达。结果 瘦素的最佳作用浓度为10、20、40ng/ml;瘦素呈剂量依赖性使IL-1β刺激诱导的软骨细胞的增殖能力增强(P<0.05),且抑制了由IL-1β刺激诱导的软骨细胞中炎性细胞因子的上调(P均<0.05)。此外,瘦素抑制IL-1β刺激诱导JAK/STAT途径的激活,JAK和STAT3蛋白的磷酸化水平降低(P均<0.05)。结论 瘦素通过抑制JAK/STAT途径的激活,从而提高软骨细胞的增殖能力,抑制炎性反应,从而对骨关节炎具有潜在的治疗作用。     

IL-10对TNF-α诱导肝星状细胞激活的抑制作用

目的探讨白细胞介素-10(IL-10)对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的人肝星状细胞(HSC)激活的抑制作用。方法使用10 ng/ml TNF-α刺激体外培养的HSC,建立HSC激活模型,给予HSC激活模型不同浓度IL-10(2、10、20 ng/ml)作用不同时间(1、2、24、48、72、96 h)后,油红O染色观察细胞脂肪含量,分别用Western blot和RT-PCR检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达水平。结果 TNF-α刺激后,HSC脂肪含量显著减少,α-SMA和MCP-1表达量水平均随时间延长而升高(P<0.05)。联合使用IL-10,α-SMA水平显著下降(P<0.05),且具有浓度依赖性(P<0.05),MCP-1水平亦下降(P<0.05)。结论 IL-10可以抑制由TNF-α诱导的HSC激活,在肝脏早期炎症和肝纤维化进程中起保护作用。     

白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的作用及机制研究

【目的】观察白脉软膏含药血浆对大鼠退变滑膜细胞和软骨细胞共培养体系的干预作用,并从"滑膜—软骨"轴角度探讨骨关节炎(OA)的发病机制。【方法】取新生SD大鼠膝关节滑膜,经消化酶消化后获得原代滑膜细胞,取第1代(P1)细胞进行实验。实验设空白组、模型组、西药组、白脉组。模型组加入脂多糖(LPS)进行诱导,西药组与白脉组在模型组LPS诱导的基础上分别加入扶他林软膏、白脉软膏含药血浆干预。LPS诱导24 h后观察滑膜细胞形态变化,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测滑膜细胞上清中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量。此后,各组皆与正常软骨细胞进行共培养。共培养24 h后观察软骨细胞形态,实时定量PCR(qPCR)检测软骨细胞基质金属蛋白酶3(MMP3)、带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解整链蛋白金属蛋白酶4(ADAMTS4)、TNF-α、性别决定区Y框蛋白9(Sox9)mRNA表达情况,Westernblot法检测Ⅱ型胶原蛋白(COL2A1)、基质金属蛋白酶13(MMP13)、磷酸化核因子κBp65(p-NF-κBp65)表达情况。【结果】LPS诱导后滑膜细胞形态由原来的多角形变成长梭形。ELISA结果显示,模型组滑膜细胞上清中IL-1β、TNF-α含量较空白组升高(P 0.05),而白脉组IL-1β、TNF-α含量较模型组下降。软骨细胞与退变滑膜细胞培养24 h后由原来的多角形变为长梭形。qPCR结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP3、ADAMTS4、TNF-αmRNA表达升高(P 0.05),Sox9mRNA表达降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP3、TNF-α、ADAMTS4 mRNA表达明显降低(P 0.05),Sox9 mRNA表达水平升高(P 0.05)。Western blot结果显示:与空白组比较,模型组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达升高(P 0.05),COL2A1表达明显降低(P 0.05);与模型组比较,白脉组软骨细胞MMP13、p-NF-κBp65表达降低(P 0.05),COL2A1表达升高(P 0.05)。【结论】退变滑膜细胞可导致软骨细胞退变并促进骨关节炎发展,白脉软膏对此病理过程有明显的抑制作用。     

扁塑藤素对LPS诱导的HUVEC细胞功能损伤和焦亡的作用

目的研究扁塑藤素对脂多糖(LPS)诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及可能机制。方法 建立LPS诱导HUVEC损伤模型,HUVEC细胞分为对照组、LPS组以及低、中、高剂量扁塑藤素组(0.1、0.2、0.4 μmol/L扁塑藤素)。CCK-8法测定细胞活力;试剂盒法检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)含量;ELISA法检测白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-18蛋白水平;蛋白免疫印迹法、实时荧光定量PCR法检测焦亡相关分子NLRP3、Caspase-1、GSDMD蛋白和mRNA表达量。 结果与对照组比较,LPS组细胞活力和SOD含量显著下降(P＜0.05),LDH和MDA含量、NLRP3、Caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA表达量均显著升高(P＜0.05)。扁塑藤素呈剂量依赖性提高细胞活力和SOD含量,抑制LDH、MDA,降低NLRP3、Caspase-1、GSDMD的蛋白和mRNA表达水平(P＜0.05)。 结论扁塑藤素呈剂量依赖性抑制细胞焦亡和减轻氧化应激,从而改善LPS诱导的HUVEC功能损伤。     

基于HMGB1/NF-κB通路探讨温经通络汤对IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞炎症的影响

目的 观察温经通络汤对IL-1β诱导关节软骨细胞炎症的影响并探讨其作用机制。方法 从小鼠膝关节软骨中提取原代软骨细胞,并用甲苯胺蓝染色法鉴定;IL-1β诱导软骨细胞炎症模型,采用慢病毒RNAi-HMGB1转染软骨细胞,干扰HMGB1的表达;后用不同浓度的温经通络汤含药血清干预细胞;Western blot分析各组细胞中HMGB1、NF-κB信号通路蛋白的表达水平;qPCR检测HMGB1、NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平;ELISA检测细胞上清中炎症因子IL-6、PGE-2和TNF-α的表达水平。结果 与正常培养的细胞相比,IL-1β诱导软骨细胞炎症模型中HMGB1的表达水平显著上升(P<0.01),且p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平均有所提高(P<0.01);与模型组比较,RNAi-HMGB1慢病毒转染可显著下调HMGB1的表达水平(P<0.01),并抑制p-IκBα/IκBα和p-P65/P65蛋白的相对表达量(P<0.01)与NF-κB1、NF-κB2 mRNA的表达水平...     

达格列净在ox-LDL诱导形成的THP-1源性泡沫细胞焦亡中的作用

目的 探讨达格列净(DAPA)在氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导形成的人髓系白血病单核细胞(THP-1)源性泡沫细胞焦亡中的作用。方法 通过ox-LDL诱导THP-1源性巨噬细胞构建THP-1源性泡沫细胞焦亡模型。设置实验分组为：空白对照(NC)组、ox-LDL组和药物干预(ox-LDL+DAPA)组;以油红O法检测巨噬细胞泡沫化水平;细胞增殖与毒性检测试剂盒(CCK-8)检测DAPA对泡沫细胞活力的影响;Hoechst 33342/PI双染检测THP-1源性泡沫细胞焦亡;细胞免疫荧光双染检测DAPA对泡沫细胞焦亡中焦亡关键因子Caspase-1表达的影响;采用微量酶标法检测细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性;采用qRT-PCR和Western blot分别检测核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、消皮素D(GSDMD)、白细胞介素(IL)-18、IL-1β mRNA和蛋白表达水平。结果 CCK-8法检测结果提示DAPA的最佳干预浓度为10μmol/L;油红O染色结果示THP-1巨噬细...     

黄芪丹参配伍调控ASIC1a/CaMKⅡδ信号抑制酸性微环境中心肌细胞焦亡

目的 探讨黄芪丹参配伍对乳酸诱导的酸性微环境中心肌细胞焦亡损伤的保护作用及基于酸敏感离子通道1a(ASIC1a)/钙离子-钙调蛋白依赖性激酶Ⅱδ(CaMKⅡδ)信号通路的调控机制。方法 采用Lactate刺激H9C2心肌细胞建立pH 6.5酸性微环境细胞损伤模型。分为正常对照组、模型组、黄芪丹参提取物(HQ)组、HQ+ASIC激动剂Nocistatin组和ASIC抑制剂NS383阳性药对照组。采用CCK-8法测定心肌细胞活力,流式细胞术检测心肌细胞凋亡,免疫荧光检测ASIC1a表达,qPCR分析NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达,Western blot检测ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspase-1、Cleaved Caspase-1、GSDMD及GSDME-N蛋白的表达。结果 在pH 6.5酸性环境中,心肌细胞活力显著降低(P<0.01),细胞凋亡明显增加(P<0.01),NLRP3、Caspase-1、IL-1β及GSDMD mRNA表达明显增加(P<0.01),ASIC1a、CaMKⅡδ、NLRP3、Caspas...     

低强度脉冲聚焦超声通过上调PGAM5蛋白表达促进软骨细胞线粒体自噬

目的 探讨低强度脉冲聚焦超声(focused low-intensity pulsed ultrasound,FLIPUS)对软骨细胞线粒体自噬活化的影响.方法 提取C57BL/6J乳鼠膝关节原代软骨细胞进行体外实验,IL-1β处理细胞模拟骨关节炎样软骨细胞损伤并进行验证.细胞分为对照组、IL-1β组和IL-1β+FLIPUS组.RT-PCR检测各组Col2α1 和MMP13 mRNA 表达;Western blot 检测各组Col2α1、MMP13、LC3B-Ⅱ、TOM20、TIM23、PGAM5、FUNDC1及p-FUNDC1(p-ser13)蛋白表达.结果 成功提取原代软骨细胞并模拟骨关节炎样软骨细胞损伤.与对照组比较,IL-1β组Col2α1 mRNA和蛋白表达明显降低(P＜0.01),MMP13 mRNA和蛋白表达明显增加(P＜0.01);与IL-1β组相比,IL-1β+FLIPUS组Col2α1表达明显上升(P＜0.05),MMP13表达明显下降(P＜0.01).与对照组相比,IL-1β组LC3B-Ⅱ蛋白表达显著降低(P＜0.05);与IL-1β组相比,IL-1β+FLIPUS组LC3B-Ⅱ、PGAM5蛋白表达显著上升(P＜0.01),TOM20、TIM23、p-ser13蛋白表达则明显下降(P＜0.05).结论 FLIPUS可能通过上调软骨细胞PGAM5蛋白表达,使FUNDC1第13位丝氨酸去磷酸化,活化线粒体自噬.     

热量限制缓解血管紧张素Ⅱ诱导的心肌细胞肥大作用

目的 探讨热量限制(caloric restriction, CR)对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,AngⅡ)诱导的大鼠心肌细胞肥大的影响及可能机制。方法 将H9c2细胞分为6组：正常对照组、AngⅡ组(1μmol/L)、热量限制组(CR)、CR+AngⅡ组、NF-κB抑制剂组(CR+AngⅡ+Ss)、NF-κB激动剂组(CR+AngⅡ+Bet)。将各组细胞进行相应的药物处理后,用CCK-8法检测细胞活力;鬼笔环肽染色检测心肌细胞表面积;细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、髓过氧化物酶(MPO)及氧化应激指标(ROS、SOD、MDA)的检测采用相应试剂盒;RT-qPCR法检测心肌细胞中肥大相关基因(ANP、BNP、β-MHC)与焦亡相关基因(NLRP3、ASC、GSDMD、caspase1、IL-18与IL-1β)的mRNA表达;Western blot法检测心肌细胞中NLRP3、ASC、GSDMD、caspase1以及NF-κB的蛋白表达水平。结果 (1)AngⅡ可诱导H9c2心肌细胞表面积及肥大标志基因(ANP、BNP、β-MHC)的mRNA表达量较对照组显著增加,而这种改...     

miR-138调控TrkA-TRPV1信号通路对KOA模型大鼠软骨损伤的影响

目的 探究miR-138调控TrkA-TRPV1信号通路对膝骨性关节炎(KOA)模型大鼠软骨损伤的影响。方法 选取40只健康SD大鼠,随机分为正常组、模型组、沉默组、过表达组,分别进行干预。对比各组大鼠行为学、软骨组织学评分,检测关节液中炎性因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素(IL)-1、IL-6]及软骨组织中骨代谢标志物[基质金属蛋白酶(MMP-13)、Ⅱ型胶原(ColⅡ)]、TrkA、TRPV1、miR-138表达水平,分析miR-138对KOA大鼠软骨损伤的影响。结果 与正常组相比,模型组、沉默组、过表达组大鼠行为学、软骨组织学评分升高(P<0.05);与过表达组相比,模型组、沉默组大鼠行为学、软骨组织学评分升高(P<0.05)。与正常组相比,模型组、沉默组、过表达组大鼠TNF-α、IL-1、IL-6水平及MMP-13、TrkA、TRPV1表达升高,ColⅡ、miR-138表达降低(P<0.05);与过表达组相比,模型组、沉默组大鼠TNF-α、IL-1、IL-6水平及MMP-13、TrkA、TRPV1表达升高,ColⅡ、miR-138表达降低(P<...     

LncRNA MEG3对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞焦亡的机制研究

目的 探讨LncRNA MEG3对过氧化氢诱导人晶状体上皮细胞焦亡的影响。方法 利用CCK-8检测不同浓度下H2O2培养人晶状体上皮细胞活力确定最适浓度。流式细胞术检测在最适浓度下细胞焦亡率、Western-Blot检测caspase-1的表达,qRT-PCR检测LncRNA MEG3的相对表达量。转染HLE-B3细胞沉默LncRNA MEG3,将HLE-B3细胞随机分为空白对照组、siNC组、siMEG3组,CCK-8和流式细胞术分别检测各组细胞活力和焦亡率,Western-Blot检测焦亡相关蛋白caspase-1、N-GSDMD、NLRP3的表达水平,ELISA检测IL-1β的浓度。结果 CCK-8结果显示HLE-B3细胞活力随H2O2浓度上升而下降,最适浓度下人晶状体上皮细胞焦亡率上升、LncRNA MEG3、caspase-1表达上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲低MEG3表达后,与对照组相比细胞焦亡率上升,caspase-1、NLRP3、N-GSDMD蛋白表达下调,IL-1β分泌量减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 LncRNA MEG3通过Caspase-1介导的焦亡经典途径参与H2O2诱导人晶状体上皮细胞焦亡过程,敲低MEG3可以抑制人晶状体上皮细胞焦亡。     

富马酸二甲酯通过NF-κB通路抑制IL-1β诱导的小鼠软骨细胞炎症

目的探讨富马酸二甲酯对软骨细胞炎症的治疗作用及其机制。方法用不同浓度的富马酸二甲酯处理IL-1β诱导的小鼠ATDC5细胞。通过CCK-8实验检测富马酸二甲酯对软骨细胞毒性、增殖的影响;阿利新蓝染色分析富马酸二甲酯对细胞表型的影响;实时定量荧光PCR检测MMP3、MMP9、MMP13和SOX9的mRNA表达;Western印迹法检测MMP9、MMP13、Col2a1及NF-κB通路相关蛋白表达水平;免疫荧光染色检测p65磷酸化入核的影响。结果富马酸二甲酯在0~25 μmol/L对ATDC5细胞的增殖活性没有影响;与对照组相比,IL-1β刺激ATDC5细胞后NF-κB通路被激活,IκBα蛋白表达下降,而p-IKKα、p-IκBα和p-p65蛋白表达增加,活化的NF-κB p65进入细胞核中,MMP3、MMP9、MMP13的表达上升,Col2a1和SOX9的表达下降（P＜0.05）;与IL-1β组比较,富马酸二甲酯治疗后提高IκBα表达,降低了p-IKKα、p-IκBα和p-p65的表达,阻断了NF-κB p65进入细胞核中,MMP3、MMP9、MMP13的表达下降,Col2a1和SOX9的表达上升（P＜0.05）。结论富马酸二甲酯可能通过抑制NF-κB通路来发挥对软骨细胞的保护作用,以改善软骨细胞的炎症反应。