MALDI-TOF MS在感染性疾病诊断中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)用于临床感染性疾病的诊断具有操作简单、鉴定快速、通量高、灵敏度好、准确性高的优点,已成为目前临床微生物实验室方便快捷的实验技术。该文依据现有文献综述了MALDI-TOF MS在临床感染性疾病诊断中的最新应用,介绍了MALDI-TOF MS用于微生物鉴定的基本原理和现状,以及在抗生素耐药性检测和临床标本直接测试中的应用。     

MALDI-TOF MS在血流感染快速鉴定病原菌中的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）结合短时培养在快速鉴定血流感染病原菌中的应用。方法 对南京医科大学附属淮安第一医院微生物室2020年11月至2021年12月血培养报告阳性的标本进行革兰染色分类,并采用4h和6h短时培养法及MALDI-TOF MS技术快速鉴定感染病原菌并实时报送病区单元。结果 4h短时培养革兰阴性菌共351株,339株（96.6%）细菌鉴定到种属,与24h鉴定结果相同,11株无鉴定结果,1株鉴定错误;6h短时培养革兰阳性菌共216株,212株（98.1%）鉴定到种属,与24h鉴定结果相同,3株无鉴定结果,1株鉴定错误。跟踪321株革兰阴性菌的临床反馈,287例（89.4%）给予临床关注,89例（27.7%）进行药物调整,238例（74.1%）临床疗效良好;跟踪183株革兰阳性菌的临床反馈,其中150例（82.0%）给予临床关注,49例（26.8%）进行药物调整,131例（71.6%）临床疗效良好。结论 MALDI-TOF MS技术结合短时培养方法可有效提高血流感染病原菌鉴定准确率,改善血流感染患者抗菌药物治疗时机。     

基于MALDI-TOF MS检测肺泡灌洗液病原菌分布和耐药性分析

目的 了解呼吸危重症医学科和重症监护病房(Intensive care unit,ICU)肺部疾病患者支气管肺泡灌洗液(Bronchoalveolar lavage fluid,BALF)病原菌种类及其耐药性。方法 回顾性分析2017年1月～2018年12月我院呼吸危重症医学科和ICU肺部疾病患者BALF分离的病原菌种类及耐药性情况。采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)对病原菌进行鉴定。结果 BALF阳性检出率为17.80%(162/910),共分离培养出病原菌191株,其中真菌98株(51.31%),以念珠菌、曲霉菌和新生隐球菌为主;革兰阴性杆菌共90株(47.12%),以鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌和肺炎克雷伯菌为主,多药耐药鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均为58.33%,对头孢哌酮/舒巴坦和替加环素的耐药率分别为45.83%、16.67%,对哌拉西林/他唑巴坦及头孢类药物的耐药率均大于54.0%。其他革兰阴性杆菌对常用抗菌药物的耐药率不高。结论 基于MALDI-TOF MS鉴定的BALF病原菌种类多样,以真菌和革兰阴性杆菌为主,其中鲍曼不动杆菌多药耐药现象严重。病原菌的准确鉴定和敏感药物使用为临床提供治疗依据。     

MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本的研究

目的 探讨用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定腹水培养阳性病原菌的方法.方法 收集2016年9～11月培养阳性的腹水标本202瓶,差速离心法富集菌体,利用MALDI-TOF MS对菌液进行直接鉴定.结果 202瓶样本中,196瓶为单菌株感染,6瓶为混合菌感染.单菌株感染中,菌株的种、属鉴定符合率分别为77.6％和93.4％.其中革兰阴性菌的种、属鉴定符合率为75.9％和91.1％;革兰阳性菌的种、属鉴定符合率为80.2％和95.3％;真菌的菌种、属鉴定符合率为12.5％和50.0％.6瓶混合菌感染样本,均鉴定出其中一种菌.结论 利用MALDI-TOF MS直接鉴定腹水培养阳性样本中的病原菌,鉴定准确率高,检测时间短,为腹腔感染的快速诊断提供了有力的检测手段.     

不同方法鉴定临床常见念珠菌性能评价

目的 评估表型鉴定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析、真菌核糖体内转录间隔区序列测序三种方法鉴定念珠菌株的性能。方法收集分离自临床标本的63株念珠菌,采用表型鉴定、基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱分析、真菌核糖体内转录间隔区序列分析三种方法进行念珠菌鉴定,以序列分析作为参考方法,比较表型鉴定与质谱分析对于念珠菌的鉴定性能。结果（1）真菌表型鉴定与测序鉴定结果一致率93.44%（57/61）。（2）基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱与测序鉴定结果一致率96.7%（59/61）。（3）表型鉴定与质谱分析鉴定结果差异无统计学意义。结论念珠菌生化表型鉴定可作为临床念珠菌株的常规鉴定方法,满足临床需要。当临床念珠菌株生化表型鉴定结果不确定时,应直接进行真菌rDNA ITS测序,不应加做质谱鉴定。有条件的实验室应首选MALDI-TOF MS质谱分析方法鉴定念珠菌以获得最大的鉴定效率,并可作为疑难菌种鉴定确诊方法。当质谱鉴定的结果不确定时,应直接进行真菌rDNA ITS测序,不应再用表型鉴定的方法确认鉴定结果。     

蛋白质指纹图结合支持向量机生物信息学分析在早期胰腺癌检测中的应用

目的建立早期胰腺癌的血清蛋白质质谱模型,探讨蛋白质指纹图结合支持向量机生物信息学分析在早期胰腺癌诊断中的应用价值.方法选取用22例胰腺癌患者及20例健康者,采用表面增强激光解吸/电离时间飞行质谱(SELDI-TOF-MS)结合弱阳离子交换芯片(CM10)检测分析样本.采用支持向量机方法建立早期胰腺癌和健康者辨别模型.结果共筛选出11个蛋白质峰建立了早期胰腺癌和健康者辨别模型,辨别的敏感性为100%,特异性为95%.结论 SELDI-TOF-MS 技术结合生物信息学方法检测早期胰腺癌具有较高的敏感性和特异性.     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪快速鉴别青霉素耐药及敏感的肺炎链球菌的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪（matrix-assisted laser desorption/ ionization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS）快速鉴别青霉素耐药及青霉素敏感的肺炎链球菌的可行性。方法 收集2017年1月到2019年12月广州市番禺区中心医院青霉素耐药的肺炎链球菌（PRSP）10株及青霉素敏感的肺炎链球菌（PSSP）30株。其中31株肺炎链球菌分离自呼吸道标本,占77.5%,18株肺炎链球菌分离自儿科,占45.0%。年龄分布,60岁以上15株,12岁以下18株。用MALDI-TOF MS进行菌株鉴定,用VITEK 2 Compact的药敏卡AST-GP68进行耐药性检测,用VITEK MS的Launch pad软件对MALDI-TOF MS鉴定的肺炎链球菌所产生的质谱峰图进行分析。结果 质谱峰m/z的3992、4419为肺炎链球菌的特征峰,质谱峰m/z的 3853、4218、4619是用于区分PRSP及PSSP最主要的特征峰,不同菌株质谱峰略有不同。164株肺炎链球菌青霉素的耐药率为8.5%,万古霉素﹑利奈唑胺﹑厄他培南的敏感率均为100.0%。90株PSSP及64株PRSP对15种抗生素的药敏结果显示,PSSP的阿莫西林及青霉素的敏感率分别为100.0%,而PRSP的阿莫西林及青霉素的敏感率为0。结论 MALDI-TOF MS可快速准确鉴别PRSP及PSSP,具有耗时短,灵敏度高,特异性好等特点。     

应用基质辅助激光解吸质谱的源内衰变及串联质谱技术测定重组人纽兰格林的C端序列

目的测定重组人纽兰格林的C端序列。方法用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI—TOF-MS）的源内裂解（ISD）及串联质谱技术（TOF—TOF,LIFT）,测定重组蛋白纽兰格林的C端序列。结果用该方法鉴定了重组蛋白纽兰格林C端序列的10个氨基酸残基。结论与现有的C-端序列测定方法比较,该方法简便快捷,可适用于部分重组蛋白药物的质量控制。     

MALDI-TOF MS技术和AFLP技术在肺炎链球菌同源性分析中的应用

目的 探讨基质辅助激光解吸飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)技术和扩增片段长度多态性(amplified fragment length polymorphis...     

基于MALDI-TOF MS快速鉴定脑脊液中病原菌的方法建立及识别能力评价

目的 研究基于基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）快速鉴定脑脊液中病原菌的方法建立及识别能力。方法 本研究为前瞻性研究,选择2019年5月至2021年5月来河南省儿童医院进行治疗的中枢神经系统感染患者的脑脊液样本90例作为研究对象,分别对以上样本进行基于MALDI-TOF MS快速鉴定以及常规细菌培养,分别对以上样品进行病原菌鉴定以及药敏试验结果分析。结果 本研究中共计鉴定革兰氏阴性菌38例,革兰氏阳性菌42例,真菌10例。本研究中利用短期培养物MALDI-TOF MS鉴定的总体正确率为92.22%。其中革兰氏阴性菌的鉴定正确率为82.33%,革兰氏阳性菌的鉴定正确率为95.23%,真菌的鉴定正确率为90.00%;通过对革兰氏阴性菌对阿米卡星、苄卡西林、氨苄西林、氨曲南、头孢唑林、头孢吡肟、头孢他啶、头孢呋辛、环丙沙星、庆大霉素、亚胺培南、左氧氟沙星、美罗培南、呋喃妥因、哌拉西林、妥布霉素、复方新诺明等抗生素的耐药情况进行短期培养以及常规药敏实验分析显示,两种方法的诊断一致性较强,通过对革兰氏阳性菌对氨苄西林、青霉素、环丙沙星、克林霉素、红霉素、庆大霉素、左氧氟...     

基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌鉴定中的应用研究

目的 探讨基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱仪(MALDI-TOF MS)快速鉴定耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的可行性.方法 对广州市番禺区中心医院各个病区住院患者在不同部位分离的甲氧西林耐药及敏感的金黄色葡萄球菌,用Vitek 2 Compact的药敏卡AST-P639进行耐药性检测,用MALDI-TOF MS对菌株进行...     

中国汉族肢端恶性黑素瘤的差异蛋白质组学研究

目的：研究恶性黑素瘤与正常皮肤组织的蛋白质表达差异,寻找可能的恶性黑素瘤的诊断标志蛋白和治疗靶点。方法：选取经病理确诊的3例恶性黑素瘤切除标本,提取样本的总蛋白质,运用差异凝胶电泳技术分离蛋白质,DeCyder软件分析蛋白图谱的差异,以基质-辅助激光解吸/电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)对差异表达蛋白质进行质谱鉴定。结果：质谱鉴定出差异蛋白质点12个,按功能分为4类,其中上调蛋白质3类,为14-3-3蛋白sigma、角蛋白和serpin B3;下调蛋白质1类,为白蛋白。结论：14-3-3蛋白sigma和serpin B3可能参与恶性黑素瘤的发生和发展,其差异表达提示了可能的恶性黑素瘤的发病机制。     

复发性卵巢癌血清蛋白质质谱分析

目的 探讨复发性卵巢癌早期筛查的血清标志物.方法 应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术分析21例复发性卵巢癌和18例完全临床缓解期卵巢癌的血清蛋白质质谱差异. 结果在Mr 1 000～12 000 D区段,Mr 1944、1980、2080、2661、2993、4450、4659、535...     

磁珠分离结合质谱分析2型糖尿病肾病早期尿多肽谱

目的利用磁珠分离系统结合基质辅助激光解析电离-飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）的方法获取糖尿病肾病（DN）早期的尿小分子差异多肽谱。方法按Mogensen标准,46例2型糖尿病患者经测3d平均微量白蛋白尿排泄率（UAER）后分组,其中正常蛋白尿组（DMl）24例,微量白蛋白组（DM2）22例,健康对照组（C）20例。DMl及DM2组肾小球率过滤（GFR）均大于90ml·min^-1·1．73m^-2。所有受试者留取空腹晨尿经采用弱阳离子（WCX）磁珠纯化试剂盒富集尿多肽,再采用MALDI-TOF-MS技术,获得尿液多肽谱,用ClinProtTM软件进行生物学比较分析。结果相对分子质量〈12000时,DMl组与C组相比,有15个蛋白质峰差异有统计学意义（均P〈0．01）。DM2组与C组相比,有1个蛋白质峰差异有统计学意义（P〈0．05）。DMl组与DM2组相比,有10个蛋白质峰差异有统计学意义（均P〈0．01）。结论弱阳离子磁珠分离系统联合MALDI-TOF-MS蛋白质检测技术,能够获得健康人及DN早期尿液多肽谱,为进一步从中寻找早期诊断及评估药物干预效果需要的标志物提供前期的基础。     

肽质量指纹图谱鉴别诊断IgA肾病和非IgA肾病的可行性分析

目的探索肽质量指纹图谱(PMF)在IgA肾病和非IgA肾病的分类中是否可行。方法采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)分析IgA肾病和非IgA肾病患者的血清肽质量指纹图谱。结果 IgA肾病和非IgA肾病的血清肽质量指纹图谱具有9个差异多肽;其中,最显著的两个多肽峰是4476.46和1968.10,ROC曲线下面积分别为86.18%和79.77%;主因素分析(PCA)表明前8个因素(差异峰)的累积解释变异量超过95%,说明该模型的鉴别诊断能力较MA好L。DI比-T对OF蛋质白谱质技数术据在库Ig,A多肾肽病53和3非8.0I8gA为肾粘病蛋的白分4类同中工,型具的有片可段行;性而,此多技肽术20在82系.7统7为疾α病1-的Ⅱ亚型类胶分原类同中工具型有的广片阔段的。前景结。论     

我国东部沿海地区江河入海口水体中致病性弧菌分布特征

目的 分析我国东部沿海江河入海口水域的弧菌分布以及不同季节弧菌种类的差异,为致病性弧菌环境检测策略的制定提供数据支持.方法 分别在2019年8月和2020年1月,在我国濒临渤海、黄海、东海、南海的4个监测地市分别挑选2条河流,在入海口采集水样,进行弧菌分离培养,每份水样挑选30个疑似弧菌菌落,通过微生物质谱仪进行鉴定....     

新发展晚期血吸虫病患者血清肽谱分析

目的:分析新发展晚期血吸虫病患者血清多肽,筛选有潜在应用价值的标志蛋白,为其诊断与发病机制研究奠定基础?方法:采集新发展晚期血吸虫病患者与健康人血清,利用包被有弱阳离子的磁珠富集纯化血清多肽,应用基质辅助激光解析电离时间飞行质谱(MALDI-TOF-MS)Flex分析技术结合Mascot生物信息学分析血清多肽指纹图谱?结果:与健康对照组比较,在0.8~13.0 ku区段,新发展晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 082?4 282多肽表达上调(P < 0.01),2 661?2 991?3 241?5 337?5 906多肽表达下调(P < 0.05);常规晚期血吸虫病患者血清中m/z 2 662?4 209?5 337与5 906处显著下调,2 082处显著上调?结论:m/z 3 241?4 282血清差异多肽对新发展晚期血吸虫病患者的诊断可能具有潜在应用价值,对该病发生发展的机制也奠定了理论基础?     

胰腺组织总蛋白分步提取法的建立

目的:通过对提取狗胰腺组织总蛋白不同方法的研究,建立提取胰腺组织总蛋白的标准方法.方法:用常规的总蛋白一步提取法和三步提取法,以三种溶解性能不同的裂解液分步提取胰腺组织中的总蛋白,测量蛋白浓度并分别用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectra,MALDI-TOF-MS)做蛋白全谱.结果:一步法和分步法总蛋白提取量分别为(18.8±1.2) mg和(23.3±0.9) mg,MALDI-TOF-MS蛋白全谱的谱峰数分别为(22.2±4.5)个和(32.8±3.8)个.结论:分步法与常规的一步法相比具有蛋白提取率高、蛋白溶解性好等优点.     

胃癌及慢性胃炎幽门螺杆菌的蛋白质组学研究

目的:建立胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌的双向凝胶电泳图谱,识别鉴定其差异表达的蛋白质,探讨细菌本身因素在发病过程中的作用.方法:利用固相pH梯度双向凝胶电泳分离胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌菌株的总蛋白质,凝胶经蓝银显色后,采用PDQuest图像分析软件比较、分析、识别差异表达的蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱得到相应的肽质指纹图谱,然后搜索数据库鉴定部分差异蛋白质点.结果:获得分辨率较高、重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,鉴定出14个差异蛋白质,包括抗氧化作用、分子伴侣、解毒和DNA修复相关蛋白质、三大代谢相关酶类、细胞结构相关蛋白质以及信号传导相关蛋白质.结论:建立了分辨率高且重复性较好的胃炎与胃癌相关幽门螺杆菌双向凝胶电泳图谱,并识别鉴定出了两种不同疾病来源幽门螺杆菌差异表达的蛋白质,其蛋白质表达的差异可能在胃癌的发生中起重要作用.     

肽质量指纹图谱鉴别诊断ⅠgA肾病和非ⅠgA肾病的可行性分析

目的 探索肽质量指纹图谱(PMF)在IgA肾病和非IgA肾病的分类中是否可行.方法 采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术(MALDI-TOF MS)分析IgA肾病和非IgA肾病患者的血清肽质量指纹图谱.结果　IgA肾病和非IgA肾病的血清肽质量指纹图谱具有9个差异多肽;其中,最显著的两个多肽峰是4476.46和1968.10,ROC曲线下面积分别为86.18％和179.77％;主因素分析(PCA)表明前8个因素（差异峰）的累积解释变异量超过95％,说明该模型的鉴别诊断能力较好.比对蛋白质数据库,多肽5338.08为粘蛋白4同工型的片段;而多肽2082.77为α1-Ⅱ型胶原同工型的片段.结论　MALDI-TOF质谱技术在IgA肾病和非IgA肾病的分类中,具有可行性,此技术在系统疾病的亚类分类中具有广阔的前景.