马兜铃酸对人肾小管上皮细胞损伤的体外实验研究

目的 研究马兜铃酸(aristoloehie acid,AA)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)的损伤及可能机制.方法 将细胞分为4组:正常对照组与AA30、60、120 μmol/L组(n=6),分别作用于HK-2细胞培养48 h后,倒置相差显微镜观察细胞形态,CCK8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测增殖,流式细胞仪检测凋亡,Western blot分析激活型Caspase-3的表达,全自动生化检测仪测定上清液中乳酸脱氢酶(LDH)和B-N-乙酰氨基匍萄糖苷酶(NAG酶)的含量,激光共聚焦扫描荧光显微镜(Laser scanning eonfocal microscope,LSCM)观察α-平滑肌肌动蛋白(smooth muscle aetin,α-SMA)和E-钙黏连蛋白(E-cadherin)的表达,ELISA测定上清液中转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和Ⅲ型胶原的分泌.结果 HK-2分别在30、60、120 μmoi/L AA作用48 h后,出现增殖抑制,凋亡增加,激活型Caspase-3表达增多,LDH和NAG酶升高,均旱剂量依赖性.60μmol/1.浓度的AA还表现E-cadherin表达减弱,α-SMA表达增强,TGF-β1和Ⅲ型胶原分泌明显增加(P<0.05).结论 AA可引起HK-2细胞明显的增殖抑制、凋亡和上皮-间允质转分化呈一定的浓度依赖性.     

糖基化终产物对人肾小管上皮细胞Fractalkine表达的影响

目的 既往实验已观察到糖基化终产物(advanced glycation end products, AGE)可增加人肾系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein-1, MCP-1)、RANTES等表达,fractalkine(FKN)在糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)中的作用尚不明确.本实验探讨AGE对人肾小管上皮细胞(tubular epithelial cells, TEC)株HK-2 FKN表达的影响.方法 运用AGE-BSA按不同的时间和浓度干预HK-2,分别用RT-PCR和ELISA法检测FKN mRNA的表达及蛋白分泌;用AGE-BSA及AGE-BSA加FKN中和抗体分别干预HK-2,用Transwell小室、共培养及荧光染色法检测HK-2趋化和黏附单核细胞株U937的功能.结果 AGE-BSA干预组的HK-2 FKN的mRNA表达和蛋白分泌较对照组显著增加(P＜0.05),且随干预时间和浓度的增加而进一步增加.AGE-BSA干预组HK-2趋化及黏附的U937数较对照组和加FKN抗体组明显增加(P＜0.01). 结论 AGE可能部分通过FKN/CX3CR1途径参与DN肾小管间质病变的发生发展.     

达格列净对糖尿病肾脏病的保护作用及机制研究

目的 研究达格列净对糖尿病肾脏病的保护作用及机制。方法 将28只大鼠随机均分为4组：正常组、达格列净干预正常组、糖尿病组、达格列净干预糖尿病组。灌胃法每天给予大鼠达格列净（1mg/kg）8周后,ELISA法检测各组大鼠尿微量白蛋白,WST-1法检测肾脏组织和尿液SOD活性、TBA法检测肾脏组织和尿液MDA含量,RT-PCR检测肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA表达,Western blot检测肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)、磷酸化P38MAPK蛋白表达,PAS染色观察肾脏组织病理形态。结果 相对于正常大鼠,糖尿病大鼠尿微量白蛋白排泄增多,肾脏组织和尿液SOD活性减弱,同时MDA含量增加,肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA及蛋白表达,磷酸化P38MAPK蛋白表达增强,肾脏组织病理改变明显;达格列净治疗后,糖尿病大鼠尿微量白蛋白排泄减少,肾脏组织和尿液SOD活性增强,同时MDA含量减少,肾脏组织p22phox、p67phox、Nox2(pg91)mRNA及蛋白表达,磷酸化P38MAPK蛋白表达...     

大黄酸和大黄素在体外对人肾小管上皮细胞的毒性作用研究

目的 在体外比较大黄酸和大黄素作用于人肾小管上皮细胞 (HK-2) 的毒性表现和差异,并初步探讨其肾毒性机制。方法 采用 MTT 法观察细胞生长抑制作用;透射电镜观察细胞内超微结构变化;流式细胞仪观察细胞凋亡情况;检测乳酸脱氢酶 (LDH) 和N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶 (NAG) 释放水平。结果 大黄酸和大黄素均可明显抑制 HK-2 细胞增殖;电镜观察均可见细胞核不规则,出现了染色质的浓缩和边集;流式细胞仪观察大黄素和大黄酸均能诱导细胞凋亡;大黄素组 LDH 和 NAG 释放水平均高于大黄酸组。结论 大黄酸和大黄素均能诱导 HK-2 细胞凋亡,具有明显的细胞毒性作用,并且大黄素对 HK-2 细胞的毒性作用强于大黄酸。     

iPLA2β通过调控铁死亡减轻高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤

目的 探讨钙离子非依赖型磷酸酯酶A2β(iPLA2β)在高糖诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达,iPLA2β与铁死亡的关系以及iPLA2β对高糖诱导的HK-2细胞损伤的保护机制。方法 用30 mmol/L葡萄糖刺激HK-2细胞,iPLA2β质粒转染构建过表达模型,铁死亡抑制剂Ferrostatin-1(Fer-1)和铁死亡激活剂erastin作为铁死亡对照组。干预36 h后,试剂盒检测细胞内超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、铁含量,DCF免疫荧光检测细胞内活性氧(ROS)水平。Western blot法检测铁死亡指标ACSL4、GPX4、LPCAT3、TFR1的表达。结果 高糖刺激可以降低HK-2细胞内iPLA2β的表达,HK-2细胞内ROS、MDA水平升高,GSH、SOD水平降低。Western blot结果显示ACSL4、LPCAT3、TFR1表达增高,GPX4表达降低。Fer-1干预后上述指标改善。过表达iPLA2β后,可降低KIM-1表达,减轻HK-2细胞损伤。进一步研究发现,过表达iPLA2β后可抑制高糖诱导的HK-2细胞的氧化应激和铁死亡。另外,era...     

迷迭香酸对醛固酮诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及机制研究

目的:探讨迷迭香酸(rosmarinic acid,RA)对醛固酮(aldosterone,ALD)诱导的人肾小管上皮细胞转分化的影响及其作用机制。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2),分为5组:正常对照组、ALD(100nmol/L)诱导组、ALD(100nmol/L)+RA(5μg/ml)干预组、ALD(100nmol/L)+RA(25μg/ml)干预组、ALD(100nmol/L)+线粒体呼吸链酶抑制剂rotenone(ROT,10μmol/L)干预组。应用倒置相差显微镜观察细胞形态学的变化;应用RT-PCR、Western blot检测波形蛋白(Vimentin)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及钙粘蛋白(E-cadherin)的表达水平;采用Western blot检测细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)的磷酸化水平;DCFDA荧光法定量检测活性氧(ROS)表达情况。结果:①与对照组相比,醛固酮诱导肾小管上皮细胞从原有典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态;Vimentin和α-SMA表达显著上调,E-cadherin表达下降;ERK1/2磷酸化水平增高;活性氧族(ROS)释放显著...     

达格列净对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用机制研究

目的 探讨达格列净对糖尿病肾病（diabetic nephropathy,DN）大鼠的肾脏保护作用及对AMP活化蛋白激酶（AMP-activated protein kinase,AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammalian target of rapamycin,mTOR）信号通路表达的影响。方法 SPF级Wistar雄性大鼠40只,随机分为正常组、模型组、低剂量组和高剂量组,每组各10只。成功制备DN模型后,正常组大鼠给予普通饲料+生理盐水灌胃;模型组大鼠给予高糖高脂饲料+生理盐水灌胃;低剂量组大鼠给予高糖高脂饲料+达格列净1mg/（kg·d）灌胃;高剂量组大鼠给予高糖高脂饲料+达格列净10mg/（kg·d）灌胃。各组大鼠连续干预12周。比较各组大鼠的肾功能指标、肾脏病理组织变化、p-AMPK和p-mTOR蛋白表达、Ⅰ型胶原（collagen type Ⅰ,COL Ⅰ）、Ⅳ型胶原（collagen type Ⅳ,COL Ⅳ）、纤维连接蛋白（fibronectin,FN）水平。结果 模型组、低剂量组和高剂量组大鼠的血尿素氮（blood urea nitrogen,BUN）、血肌酐（serum creatinine,SCr）、24h尿蛋白定量、p-mTOR蛋白表达、COL Ⅰ、COL Ⅳ和FN水平均显著高于正常组,p-AMPK蛋白表达显著低于正常组（P<0.05）;低剂量组和高剂量组大鼠的BUN、SCr、24h尿蛋白定量、p-mTOR蛋白表达、COL Ⅰ、COL Ⅳ和FN水平均显著低于模型组,p-AMPK蛋白表达显著高于模型组（P<0.05）;高剂量组大鼠的BUN、SCr、24h尿蛋白定量、p-mTOR蛋白表达、COL Ⅰ、COL Ⅳ和FN水平均显著低于低剂量组,p-AMPK蛋白表达显著高于低剂量组（P<0.05）。结论 达格列净对DN大鼠具有良好的肾脏保护作用,其机制可能与调节AMPK/mTOR信号通路表达有关。     

远隔缺血预处理分离液对人肾小管上皮细胞缺氧性损伤的保护作用

目的:研究远隔缺血预处理(RIPC)分离液对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧(H/R)损伤的影响及机制。方法:将HK-2细胞分为时间对照组、H/R、RIPC处理组、自噬干预组。时间对照组细胞在正常条件下培养,RIPC组细胞使用RIPC分离液预处理,自噬干预组细胞在RIPC处理基础上,加入自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine, 3MA),后三组细胞使用三气培养箱进行H/R构建损伤模型。模型成功后使用光学显微镜观察各组细胞状态,应用Western blot观察LC3Ⅱ/Ⅰ蛋白、Beclin1蛋白的表达水平。结果:镜下示RIPC分离液可明显减轻H/R对HK-2细胞的损伤,加入自噬抑制剂,RIPC分离液对HK-2细胞H/R损伤的保护作用被阻断。Western blot结果显示,RIPC分离液可使HK-2细胞线粒体中的自噬特异性蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达水平增高。Real-time PCR结果显示,与H/R组比,RIPC组LC3及Beclin1的mRNA表达量明显升高;加入自噬抑制剂,HK-2细胞线粒体中的自噬特异性蛋白LC3Ⅱ/Ⅰ、Beclin1表达降低,L...     

黄芪注射液对高糖诱导的肾小管上皮细胞凋亡的影响

[目的] 研究黄芪注射液对高糖环境下肾小管上皮细胞(HK-2)凋亡的影响。[方法] 传代培养人近曲肾小管上皮细胞,细胞用无血清培养基同步化24 h后,将细胞分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+不同浓度黄芪注射液组(2、20、200 μg/mL),每组设3个复孔。将细胞置于37 ℃恒温培养箱中培养至24、48、72 h,收集细胞及细胞上清液。用流式细胞仪测定细胞凋亡率。[结果] 24、48、72 h,低糖对照组细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。细胞培养24 h,黄芪干预组200和20 μg/mL细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。细胞培养48和72 h,黄芪注射液干预组细胞凋亡率明显低于高糖组(P<0.05)。黄芪注射液干预组各组之间凋亡率比较差异也都有显著性(P<0.05),其干预作用呈剂量依赖性。[结论] 黄芪注射液能抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞的凋亡,有助于糖尿病肾病的治疗。     

马兜铃酸对体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞的损伤作用

目的:观察马兜铃酸(aristolochic acid,AA)对体外培养的大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK-52E)的损伤作用。方法:体外培养NRK-52E,分别以不同浓度的AA-Na刺激细胞,每组设6个复孔,孵育24 h。透射电镜观察NRK-52E细胞的超微结构,MTT法检测不同浓度AA对NRK-52E细胞增殖的影响,流式细胞仪检测NRK-52E细胞的凋亡,免疫细胞化学法检测AA对NRK-52E细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响;检测不同时间段(12、24、48 h)马兜铃酸对NRK-52E细胞转化生长因子-β1(TGF-β1)及内皮素-1(ET-1)mRNA和Ⅰ型胶原(ColⅠ)表达的影响。结果:①AA浓度低于10μg/ml时对NRK-52E的增殖无明显影响,20~40μg/ml浓度的AA可明显抑制NRK-52E细胞的增殖;②较高浓度的AA(40μg/ml)可明显刺激细胞凋亡;③AA5、10、20、40μg/ml均可刺激NRK-52E表达α-SMA,其中AA10μg/ml对α-SMA表达较强;④AA刺激NRK-52E细胞24 h后TGF-β1mRNA、ET-1 mRNA表达最多,48 h时表达水平下降,而COL-I的表达水平随时间的延长而上调,呈时间依赖性。结论:AA可直接损伤肾小管上皮细胞,促进其表达肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA,即有促转分化作用,且其对NRK-52E细胞的损伤作用呈剂量及时间依赖性。     

棕榈酸钠暴露不同时间对肾小管上皮细胞损伤及对NLRP3炎症小体激活的影响

目的 探究棕榈酸钠(PA)暴露不同时间对肾小管上皮细胞(HK-2)的损伤作用和机制。方法 CCK-8法检测PA作用不同时间HK-2细胞活力;油红染色法检测PA作用不同时间脂质沉积情况;Annexin-Ⅴ-FITC/PI凋亡试剂盒检测PA作用不同时间HK-2细胞凋亡情况;活性氧试剂盒检测PA作用不同时间活性氧(ROS)生成情况;ELISA检测细胞中谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及上清液中白细胞介素(IL)-1β和IL-18的水平;Western blot测定HK-2细胞中核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、半胱天冬酶1(Caspase-1)、NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达情况。结果 CCK-8法结果显示,PA(6、9、12、24 h)组HK-2细胞活力下降;油红染色结果显示,PA(6、9、12、24 h)组脂质沉积增加;Annexin-Ⅴ-FITC/PI凋亡试剂盒结果显示,细胞凋亡率增加;活性氧试剂盒结果显示,PA(6、9、12、24 h)组ROS的生成显著增加;ELISA结果显示,PA(6、9、12、24 h)组细...     

siRNA沉默CTGF表达对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的探讨针对结缔组织生长因子(CTGF)基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化(EMT)的影响。方法将体外培养的HK-2细胞分为6组:(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5 g/L;(3)高糖组,培养基含D-葡萄糖4.5 g/L;(4)高糖+空白对照组:细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5)高糖+阴性对照组:细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6)高糖+干扰组:细胞转染针对CTGF的siR-NA表达质粒后于高糖培养基中培养。应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白水平。结果高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平。而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-...     

水通道蛋白11参与马兜铃酸损伤人肾小管上皮细胞的体外实验

目的:探讨马兜铃酸(AA)对人肾小管上皮细胞(HK-2)损伤机制及水通道蛋白11(AQP11)在损伤过程中的作用。方法:将不同浓度的AA(10、20、40μg/ml)作用于体外培养的HK-2细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT)选择最适浓度AA;用AQP11过表达质粒转染至HK-2细胞并验证,用以观察AQP11是否对AA诱导HK-2细胞转分化具有保护作用。予未转染及转染HK-2细胞分别加入最适浓度AA培养48 h,用ELISA法检测细胞上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)含量,Real-time PCR检测AQP11 mRNA表达,Western印迹法检测AQP11、结缔组织生长因子(CTGF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达。结果:MTT法筛选出的AA最适浓度为20μg/ml;转入质粒过表达AQP11培养48 h后AQP11的表达量显著高于空白组(P0.01),提示转染成功。加入20μg/ml AA后,ELISA检测显示,未转染组的TGF-β1表达量较空白组明显上升(P0.05),至48 h达高峰(P0.01),而转染APQ11质粒组则明显低于未转染组(P0.05);PCR检测显示,未转染组AQP11 mRNA的表达量逐渐降低,至72 h显著低于空白组(P0.05),而转染组虽低于空白组(P0.05),但略高于未转染组(P=0.137);Western印迹法检测显示,未转染组α-SMA、CTGF蛋白表达较空白组明显上升(P0.01)、AQP11蛋白逐渐降低(P0.05),转染组48 h的α-SMA、CTGF蛋白表达量均较空白组有所提高(P=0.874,P=0.696),但显著低于未转染组(P0.01)。结论:AA可抑制HK-2细胞增殖,诱导细胞纤维化、坏死;过表达AQP11蛋白可以抑制AA作用下的细胞纤维化发生发展,AQP11表达调控异常可能是AAN的一个重要发病机制。     

针对CTGF的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞转分化的影响

目的 探讨针对结缔组织生长因子（CTGF）基因的siRNA对高糖条件培养下的人肾小管上皮细胞株HK-2细胞向间充质细胞转分化（EMT）的影响。方法 将体外培养的HK-2细胞分为6组：(1)正常对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L;(2)等渗对照组,培养基含D-葡萄糖1g/L,甘露醇3.5g/L;(3)高糖组组,培养基含D-葡萄糖4.5g/L;(4) 高糖+空白对照组：细胞转染空白质粒后于高糖培养基中培养;(5) 高糖+阴性对照组：细胞转染含无关序列的重组质粒后于高糖培养基中培养;(6) 高糖+干扰组：细胞转染针对CTGF的 siRNA表达质粒后于高糖培养基中培养。应用RT-PCR检测CTGF mRNA水平,Western blot法检测CTGF、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）蛋白水平。结果 高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGF mRNA及蛋白水平,并呈时间依赖性降低HK-2细胞的E-cadherin蛋白表达水平,升高α-SMA蛋白表达水平。而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低,同时伴有细胞E-cadherin蛋白表达升高,α-SMA蛋白表达水平降低。结论 证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞EMT的重要介质。针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞EMT,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据。     

针对结缔组织生长因子的siRNA对高糖诱导人肾小管上皮细胞肥大的影响

目的 观测人肾小管上皮细胞转染针对结缔组织生长因子(CTGF)的siRNA后对高糖诱导细胞肥大的影响.方法 细胞分6组培养:正常对照组(培养基含D-葡萄糖1 g/L),等渗对照组(培养基含D-葡萄糖1 g,L、甘露醇3.5 g/L),高糖组(培养基含D-葡萄糖4.5 g/L),高糖+空白对照组(细胞转染空质粒后培养于高糖培养基中),高糖+阴性对照组(细胞转染含无关序列的质粒后培养于高糖培养基中),高糖+干扰组(细胞转染针对CTGF的siRNA表达质粒后培养于高糖培养基中).收集各组培养至24、48、96 h的细胞,以实时PCR检测CTGF mRNA水平;Western blotting检测CTGF蛋白水平;MTT法测定细胞增殖活力;流式细胞仪测定细胞周期分布;考马氏亮蓝法测定细胞总蛋白含量.结果 高糖刺激可上调HK-2细胞的CTGFmRNA及蛋白水平,使停留于G_1期的细胞比例升高,增殖活力受抑制,细胞肥大指标胞内总蛋白含量增加:而通过特异性siRNA抑制CTGF mRNA表达后,细胞的CTGF蛋白表达随时间延长进行性降低.细胞增殖活力增强,更多的细胞由G_1期进入S期,细胞内总蛋白含量降低.结论 证实了CTGF是高糖诱导HK-2细胞肥大的重要介质.针对CTGF的siRNA能明显改善高糖诱导的肾小管上皮细胞肥大,为进一步寻找DN防治的靶点提供了新的实验依据.

Abstract：

Objective To observe the effect of transfection with small interfering RNA (siRNA) targeting connective tissue growth factor (CTGF) on human tubular epithelial hypertrophy induced by high glucose. Methods HK-2 cells were cultured in DMEM/F12 medium containing 1 g/L glucose (normal control group), 4.5 g/L glucose (high glucose group), or 1 g/L glucose + 3.5 g/L mannitol (iso-osmolar control group). The cells were transfected with pGenesil-1, pGenesil/neg, or pGenesil/siRNA-CTGF and then cultured in DMEM/F12 medium containing 4.5 g/L glucose as the high glucose + blank control group, high glucose +negative control group and high glucose+ interference group, respectively. After cell culture for 24, 48 and 96 h, the cells were collected to detect the mRNA and protein levels of CTGF by real-time PCR and Western blotting, respectively. The proliferative activities of the cells were evaluated with MTT assay, and the total cellular protein contents were determined with Bradford method. Flow cytometry was employed to analyzed the cell cycle changes. Results High-glucose significantly up-regulated the CTGF mRNA and protein levels in HK-2 cells. The cell proliferation was inhibited after high-glucose exposure with increased cell percentage in G, phase and total cellular protein content suggesting cellular hypertrophy. Transfection with siRNA targeting CTGF significantly inhibited high glucose-induced up-regulation of CTGF mRNA and protein and promoted the cell proliferation, resulting also increased cells in S phase and lowered total cellular protein contents. Conclusion CTGF is an important mediator of high glucose-induced tubular epithelial hypertrophy, and transfection with siRNA targeting CTGF can alleviate the hypertrophy, suggesting the potential value of CTGF-targeted treatment in the management of diabetic nephropathy.     

肾小管上皮细胞转分化在糖尿病肾病发生中的作用

糖尿病肾病(DN)是糖尿病的主要微血管并发症,是终末期肾病(ESRD)的最常见病因,也是一类以进行性肾脏纤维化为特征的疾病.     

达格列净对2型糖尿病肾病患者的临床疗效

目的探讨达格列净对2型糖尿病肾病(DKD)患者的临床疗效。方法回顾性分析2018年1月至2019年3月郑州大学第一附属医院内分泌科收治的40例2型DKD患者临床资料。对比患者治疗前后体质量指数(BMI)、收缩压(SBP)、舒张压(DBP)、空腹血糖(FBG),餐后2 h血糖(2 h PG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、肾小球滤过率(eGFR)、24 h尿微量白蛋白(ALB)总量。结果患者服用达格列净的中位时间为6个月。经达格列净治疗后,患者BMI、SBP、DBP、2 h PG、HbA1c、ALB水平较前下降,差异有统计学意义(均P<0.05),治疗前后FBG、eGFR水平相比,差异无统计学意义(均P>0.05)。结论达格列净对2型DKD患者血糖及尿蛋白情况均有改善作用,并可降低体重和血压水平。     

达格列净应用于2型糖尿病肾病中的效果及对患者肾小球和肾小管功能改善分析

目的 探究对治疗2型糖尿病肾病应用达格列净后,分析其效果以及肾小球和肾小管功能改善情况。方法随机选取该院2019年1月—2021年6月收治的60例2型糖尿病肾病患者为研究对象,通过随机数字抽取方式分成两组,A组和B组,各30例。A组给予二甲双胍,B组给予达格列净。比较两组治疗效果、肾小球和肾小管功能改善情况。结果 治疗后,B组总有效率为96.67%明显高于A组的73.33%,差异有统计学意义（χ2=4.706,P<0.05）; B组各项生化指标[血清肌酐（Scr）、尿微量白蛋白/尿肌酐（ACR）、肾小球滤过率（eGFR）、胱抑素C(Cys C)、血尿素氮（BUN）、尿β2微球蛋白（尿β2-MG）、尿α1微球蛋白（尿α1-MG）、糖化血红蛋白(HbA1c)、空腹胰岛素（FINS）、24 h尿蛋白定量(UTP)]分别为[（80.21±14.21）μmol/L、（170.40±18.37）mg/mmol、（79.01±8.36）mL/min、（1.06±0.32）mg/L、（6.48±1.21）mmol/L、（1.01±0.24）mg/L、（10.12±4.51）mg/L、（7.23±...     

氧化应激在碘海醇诱导人肾小管上皮细胞凋亡中的作用

目的观察碘海醇诱导的人肾小管上皮细胞（HK-2）凋亡及氧化应激所起的作用。方法将体外培养的HK-2细胞分为4组：①对照组;②碘海醇组（100mgI/ml）;③N-乙酰半胱氨酸（NAC 10mmol/L）组;④共作用组：NAC10mmol/L预处理1h＋碘海醇100mgI/ml。各组以相应药物孵育6h。采用细胞增殖/毒性检测法（CCK-8）测定细胞存活率,核染色、流式Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,DCFH-DA荧光结合流式细胞法检测细胞内活性氧（ROS）的产生,IF、Western blot检测相关信号转导途径。结果碘海醇降低HK-2细胞存活率至（63±5%）（P〈0.01）,细胞凋亡率升至24.41%（对照组0.9%,P〈0.05）,细胞内活性氧升高至对照组的1.3倍（P〈0.05）。NAC预处理与碘海醇共作用后,HK-2细胞存活率比碘海醇组明显增高（118%vs.63%,P〈0.05）,凋亡率比碘海醇组明显降低（13.46%vs.24.41%,P〈0.05）,活性氧降为对照组的0.93倍,比碘海醇组（1.3倍）明显降低（P〈0.05）。碘海醇作用于HK-2细胞,引起p53磷酸化,上调凋亡相关蛋白（Bax）,下调Bcl-2的表达,促进线粒体内细胞色素C（CytC）释放到胞质,进而引起Caspase-3活化,导致细胞凋亡。NAC降低细胞内活性氧浓度,下调Bax、上调Bcl-2、减少Caspase-3活化,从而减轻细胞损伤。结论碘海醇引起的氧化应激在其诱导的HK-2细胞凋亡中起重要作用。