基于PINK1/Parkin通路探讨灵芝孢子对糖尿病肾病模型大鼠肾脏细胞凋亡的影响

目的 基于PTEN诱导假定激酶(PINK)1/帕金森病蛋白(Parkin)通路研究灵芝孢子对糖尿病肾病(DN)模型大鼠的肾脏细胞凋亡的影响。方法 32只SPF级雄性SD大鼠(180～200 g),随机分成正常对照(NC)组、高脂高糖(HF)组、DN模型(DN)组和灵芝孢子(GLSP)组。除NC组外,其余各组均采用高脂、高糖饲养,同时DN组和GLSP组均联合腹腔注射2%链脲佐菌素(STZ,50 mg/kg)。GLSP组每日灌胃给予灵芝孢子[300 mg/(kg·d)]持续3个月,其余组均灌胃给予等量生理盐水[10 ml/(kg·d)]。每周测定各组空腹血糖。12 w后评估肾脏功能,用试剂盒检测尿素氮、血清肌酐、24 h尿蛋白等生化指标。苏木素-伊红(HE)、过碘酸希未反应(PAS)和Masson染色用于检查肾脏病理学。通过TUNEL法观察大鼠肾脏组织凋亡细胞的分布及凋亡率情况。通过免疫组化检测肾脏组织中P62、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)的表达水平。Western印迹检测PINK1/Parkin通路涉及的关键蛋白PINK1、Parkin及微管相关蛋白1轻链(...     

基于Notch1/Hes1信号通路探讨葛根素对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响

目的 探讨葛根素对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和心室重构的影响及关于缺刻基因(Notch)1/发状分裂相关增强子(Hes)1信号通路表达的变化机制。方法 将96只雄性Wistar大鼠(200～250 g)随机分成3组：对照组：进行假手术;模型组：按照模型制备操作结扎大鼠心脏冠脉;葛根素干预组：同模型组进行模型制备后24 h进行腹腔注射葛根素120 mg/(kg·d)。3组按照术后1、2、3、4 w记录各时间点血液流变学指标后处死大鼠,运用TUNEL法及免疫组织化学法检测心肌细胞凋亡情况;Western印迹检测心肌细胞凋亡基因蛋白及Notch1/Hes1信号通路蛋白的表达情况。结果 模型组左心室功能较对照组显著降低(P<0.05),葛根素干预组左心室功能较模型组明显改善(P<0.05);模型组与葛根素干预组心肌梗死面积差异显著(P<0.05),手术4 w后,模型组左心室重量较对照组显著上调(P<0.05),葛根素干预组左心室重量较模型组明显降低(P<0.05);对照组未出现明显心肌细胞凋亡,模型组和葛根素干预组心肌梗死病灶附近均出现心肌细胞凋亡现象,但葛根素干预...     

CircSEPT9调节miR-650/HSPB1轴对胶质瘤细胞恶性生物学行为影响的探讨

目的 探讨环状RNA(CircRNA)SEPT9调节miR-650/热休克蛋白B1(HSPB1)轴对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法 通过实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)、Western blot法检测胶质瘤组织、癌旁组织、人类正常神经胶质细胞HEB及胶质瘤细胞系LN18、SW1088、U251中CircSEPT9、miR-650、HSPB1蛋白表达水平。将U251细胞分为对照组(NC组)、si-NC组、si-CircSEPT9组、mimic NC组、miR-650 mimic组、si-CircSEPT9+inhibitor NC组、si-CircSEPT9+miR-650 inhibitor组、si-CircSEPT9+pcDNA组、si-CircSEPT9+pcDNA-HSPB1组。采用qRT-PCR法检测CircSEPT9、miR-650表达水平。采用Western blot法检测HSPB1、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、Caspase-3、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9蛋白表达水平。通过双荧光素酶基因实验验证CircSEPT9与miR-650、m...     

基于mTOR/S6K1通路探究CXCR3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响

目的 探究趋化因子受体(CXCR)3对糖尿病肾病足细胞损伤、凋亡、自噬的影响及其作用机制。方法 将分化成熟的小鼠肾脏足细胞MPC-5分为对照组,模型组,si-NC组和si-CXCR3组,噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞24 h、48 h和72 h细胞活力,流式细胞法检测各组细胞凋亡水平,Western印迹检测细胞凋亡关键蛋白B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3表达水平,ELISA法检测各组细胞白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-8,肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,qPCR及Western印迹检测各组细胞自噬相关蛋白(beclin)1、人自噬相关蛋白(ATG)5及ATG7表达水平,同时检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白/蛋白核糖体S6蛋白激酶(mTOR/S6K1)信号通路关键蛋白的蛋白表达水平及其磷酸化修饰水平。结果 与对照组相比,模型组和si-NC组细胞增殖受到显著抑制,并且随着时间增加抑制能力增强,与模型组和si-NC组相比,si-CXCR3组细胞增殖显著提高(P<0.05);与对照组相比,模型组和si-NC组细胞凋亡均...     

lncRNA ARAP1-AS2通过JAK2/STAT3信号通路对小鼠糖尿病肾病的影响

目的 探讨lncRNA锚蛋白重复和pH结构域/反义RNA(ARAP1-AS)2通过酪氨酸激酶(JAK)2/信号转导和转录激活因子(STAT)3信号通路对糖尿病肾病的影响及其机制。方法 将MPC-5细胞分为对照组、高糖组、高糖+pcDNA3.1组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2组、高糖+AG490组、高糖+pcDNA3.1-ARAP1-AS2+AG490组。四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)检测细胞存活率;流式细胞术检测MPC-5细胞凋亡率;Western印迹检测细胞增殖核抗原KI67、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)3、酪氨酸激酶(JAK)2、磷酸化(p)-JAK2、信号转导和转录激活因子(STAT)3、磷酸化STAT3(p-STAT3)蛋白表达;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测ARAP1-AS2和突触孔蛋白(Synaptopodin)、结蛋白(Desmin)、波形蛋白(Vimentin)mRNA的表达水平。结果 与对照组比较,高糖诱导的MPC-5细胞的存活率及KI67表达水平明显降低,细胞凋亡率及Caspase3表达水平明显升高,Synaptopodin mR...     

基于NRG-1/ErbB信号通路探讨黄芪多糖对心肌缺血再灌注损伤大鼠的影响

目的:探讨黄芪多糖通过神经调节因子-1(NRG-1)/表皮生长因子受体(ErbB)信号通路对心肌缺血再灌注损伤大鼠的影响。方法:无特定病原体(SPF)级健康雄性SD大鼠70只,随机分为对照组、模型组、黄芪多糖低浓度组、黄芪多糖高浓度组及阳性对照组,每组14只。对照组进行假手术,其余各组采用左前降支结扎建立心肌缺血再灌注损伤大鼠模型。造模前30 d,模型组、对照组和阳性对照组大鼠分别按1 mL/kg尾静脉注射生理盐水,术后每日1次注射;黄芪多糖低浓度组、黄芪多糖高浓度组分别按1 mL/kg尾静脉注射20、40 mg/mL黄芪多糖溶液,术后每日1次注射。造模前30 min,阳性对照组给予4μg/kg NRG-1溶液静脉注射,术后每日1次注射。各组均连续干预30 d。检测各组大鼠血清心肌酶水平、心肌组织细胞凋亡指数、心肌组织半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和NRG-1、磷酸化ErbB2(p-ErbB2)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2关联X蛋白(Bax)表达水平。结果:治疗后,与模型组比较,黄芪多糖低浓度组、黄芪多糖高浓度组及阳性对照组大鼠血清天门冬氨酸氨基转移酶...     

基于AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路研究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠愈合的机制

目的 基于AMP活化蛋白激酶(AMPK)/沉默信息调节因子(sirt)1/核转录因子(NF)-κB受体活化蛋白配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路,探究补阳还五汤促进骨质疏松性骨折大鼠骨折愈合的机制。方法 将大鼠随机分成假手术组、模型组、补阳还五汤低剂量组(6.25 g/kg)、补阳还五汤中剂量组(12.50 g/kg)和补阳还五汤高剂量组(25.00 g/kg)。除假手术组外,其余组均构建骨质疏松性骨折模型,并给予相应剂量药物干预。检测大鼠骨密度(BMD)值、骨折愈合评分及骨痂体积;自动生化分析仪测定血清碱性磷酸酶(ALP)、骨钙素、钙和磷水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测股骨组织中的丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;苏木素-伊红(HE)染色观察各组大鼠骨痂组织的病理形态;Western印迹检测股骨组织中AMPK/sirt1/RANKL/OPG通路蛋白表达。结果 与假手术组相比,模型组骨痂骨小梁分布稀疏,成骨细胞大量减少且有纤维组织生成,骨痂体积、血清中ALP、骨钙素、钙和磷水平及股骨组织中MDA水平、RANKL蛋白水...     

黄芪总皂苷调控LKB1/AMPK信号通路对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、周期的影响及机制

目的 基于肝激酶(LK)B1/磷酸腺苷激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路探讨黄芪总皂苷对人类乳腺癌细胞增殖、凋亡及周期的影响及作用机制。方法 以人乳腺癌细胞ZR-75-1为研究对象,通过噻唑蓝(MTT)法观察人乳腺癌细胞ZR-75-1增殖活力变化;苏木素-伊红(HE)染色观察人乳腺癌细胞ZR-75-1形态变化;流式术检测人乳腺癌细胞ZR-75-1凋亡率及细胞周期变化;RT-聚合酶链反应(PCR)检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK mRNA水平;Western印迹检测人乳腺癌细胞ZR-75-1 LKB1、AMPK蛋白表达。结果 乳腺癌细胞ZR-75-1的增殖受到黄芪总皂苷的影响,随黄芪总皂苷剂量(0、50、100、150 mg/μl)攀升,癌细胞增殖抑制率逐渐强,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡受到黄芪总皂苷影响,黄芪总皂苷剂量越大,乳腺癌细胞ZR-75-1的凋亡率越高,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌细胞ZR-75-1的细胞周期,随黄芪总皂苷剂量攀升,G0/G1期细胞比例明显增加,S期、G2期明显降低。受黄芪总皂苷影响...     

LncRNA LINC01503调控miR-331-3p/Nrf2/Keap1信号通路对缺氧诱导PC12细胞损伤的影响

目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)LINC01503对缺氧诱导的PC12细胞增殖、凋亡、氧化应激的影响及其对miR-331-3p/核因子相关因子(Nrf)2/Kelch样ECH相关蛋白(Keap)1信号通路的调控作用。方法 采用缺氧诱导PC12细胞建立细胞损伤模型,分别将si-NC、si-LINC01503、miR-NC、miR-331-3p mimics、anti-miR-NC、anti-miR-331-3p、si-LINC01503与anti-miR-NC、si-LINC01503与anti-miR-331-3p转染至PC12细胞48 h后进行缺氧处理24 h;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测LINC01503、miR-331-3p的表达量;噻唑蓝(MTT)、流式细胞术分别检测细胞增殖、凋亡率;检测乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量;双荧光素酶报告实验检测LINC01503与miR-331-3p的靶向关系;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、裂解半胱天冬酶(Cleaved-caspase)-3、Nr...     

香青兰总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病变形成的影响

目的研究香青兰总黄酮对载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病变的作用及可能的机制。方法载脂蛋白E基因缺陷小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组及香青兰总黄酮高、中、低剂量组,以C57BL/6J小鼠为正常对照组,给药第12周后处死,检测血清血脂水平,主动脉粥样硬化斑块面积/管腔面积比值,免疫组织化学染色观察主动脉壁细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1及增殖细胞核抗原的表达。结果与模型组比较,各给药组可以显著降低血清甘油三酯、低密度脂蛋白胆固醇水平(P0.05或P0.01);苏木素伊红染色观察给药组动脉粥样硬化病变减轻,斑块面积/管腔面积比值减小(P0.05或P0.01);免疫组织化学染色显示给药组细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1及增殖细胞核抗原的表达下调(P0.05或P0.01)。结论香青兰总黄酮可能通过调节载脂蛋白E基因缺陷小鼠血脂代谢及下调主动脉壁细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1及增殖细胞核抗原表达等的共同作用与影响,阻止载脂蛋白E基因缺陷小鼠动脉粥样硬化病变形成的发生、发展。     

五味子乙素对人胃癌细胞株MGC-803凋亡的影响

目的观察五味子乙素诱导人胃癌细胞株MGC-803凋亡作用。方法用10、50、100、200μmol/L浓度五味子乙素作用胃癌细胞株48 h,倒置显微镜下观察细胞增殖情况;MTT法检测五味子乙素对细胞增殖的抑制作用;电镜观察、判定凋亡细胞;凋亡检测试剂盒检测细胞凋亡。结果倒置显微镜下,随着五味子乙素作用浓度升高,细胞增殖能力随之下降;MTT法亦检测到上述结果;当五味子乙素作用浓度是100μmol/L时,可检测到明显的凋亡细胞。结论高浓度的五味子乙素可剂量依赖性地诱导胃癌细胞株MGC-803细胞的凋亡。     

ERK1/2信号通路阻断剂PD98059对胃癌细胞MGC-803中RECK、MMP-9基因表达的影响

目的:探讨ERK1/2信号通路在RECK基因抑制侵袭转移中的作用.方法:体外培养人胃癌MGC-803细胞,采用MTT法观察胃癌细胞MGC-803增殖情况,Western blot检测P-ERK的蛋白表达,RT-PCR法和Western blot法检测RECK和基质金属蛋白酶9(MMP-9) mRNA和蛋白表达.结果:M...     

大黄酸通过miR-29c-3p调节FSCN1的表达影响胃癌细胞的生物学行为

目的 探讨大黄酸(Rhein)对人胃癌细胞(SGC-7901)增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其机制.方法 通过qRT-PCR检测大黄酸处理后细胞中miR-29c-3p的表达以及miR-29c-3p的转染效率;miR-29c-3p mimics组、NC mimics组、Rhein+miR-29c-3p inhibitor...     

NDRG-1异常甲基化及对胃癌细胞恶性生物学行为影响的研究

目的:探讨N-myc下游调节基因1(NDRG-1)甲基化对胃癌细胞恶行生物学行为的影响.方法:用免疫组织化学法检测NDRG-1在胃癌组织及癌旁组织中的表达;qRT-PCR与Western blot检测胃癌细胞SGC7901及胃正常黏膜上皮细胞RGM-1中NDRG-1的表达,MSP法检测胃癌组织及癌旁组织、胃癌细胞及正常...     

p21WAF1/CIP1 基因转染对胃癌细胞生物学活性的影响

目的探讨p21^WAF1／CIP1基因(p21基因)对人胃癌细胞系(BGC)生物学活性的影响。方法应用分子克隆技术构建p21^WAF1／CIP1基因真核表达载体，然后用脂质体法将其导入到人胃癌细胞BGC中，经G418筛选获得可稳定表达p21^WAF1／CIP1的人胃癌细胞克隆，用中性红摄入法观察细胞生长速率，流式细胞仪(FcM)检测细胞周期变化。结果p21导入胃癌BGC细胞后，肿瘤细胞增值能力明显受到抑制，并出现细胞周期G1期阻滞。结论p21基因具有抑制胃癌细胞增殖的作用，可作为胃癌基因治疗的靶基因．     

胡桃醌对胃癌细胞耐药性及细胞中ANXA2、ERCC1表达和AKT/mTOR信号通路的影响

目的研究胡桃醌对胃癌细胞顺铂耐药性及细胞中膜联蛋白A2(ANXA2)和切除修复交叉互补基因1(ERCC1)表达,及对AKT/mTOR信号通路的影响。方法将BGC-823/DDP细胞株随机分为5组:对照组、胡桃醌组、顺铂组、胡桃醌联合顺铂组、LY294002(AKT抑制剂)联合顺铂组。采用MTT法和流式细胞术检测细胞活性和凋亡率,Western blotting检测细胞中相关蛋白表达。结果与对照组比较,顺铂组细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),而ANXA2、ERCC1、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05);与顺铂组比较,胡桃醌不同浓度组细胞中P-gp、MRP1蛋白表达水平降低(P<0.05),细胞增殖抑制率、细胞凋亡率及细胞中Caspase-3、Caspase-9蛋白表达水平升高(P<0.05),ANXA2、ERCC1、p-AKT、p-mTOR蛋白表达水平降低(P<0.05);与顺铂组比较,LY294002处理后,细胞增殖抑制率和凋亡率升高(P<0.05)。结论胡桃醌增强胃癌细胞对顺铂的敏感性,抑制细胞中ANXA2和ERCC1表达,抑制AKT/mTOR信号通路。     

Effect of NHE1 antisense gene transfection on the biological behavior of SGC-7901 human gastric carcinoma cells

AIM： To study the effect of type 1 Na^＋/H^＋ exchanger （NHE1 ） antisense human gene transfection on the biological behavior of gastric carcinoma cell line SGC-7901. METHODS： Antisense NHE1 eukaryotic expression on vector pcDNA3.1 was constructed by recombinant DNA technique and transfected into gastric carcinoma cell line SGC-7901 with DOTAP liposome transfection method. Morphological changes of cells were observed with optic and electron microscopes. Changes in cell proliferative capacity, apoptosis, intracellular pH （pHi）, cell cycle, clone formation in two-layer soft agar, and tumorigenicity in nude mice were examined. RESULTS： Antisense eukaryotic expressing vectors were successfully constructed and transfected into SGC-7901. The transfectant obtained named 7901 -antisense （7901-AS） stablely produced antisense NHE1. There was a significant difference between the pHi of 7901-AS cells （6.77 ± 0.05） and that of 7901-zeo cells and SGC-7901 cells （7.24 ± 0.03 and 7.26 ± 0.03, P 〈 0.01）. Compared with SGC-7901 and 7901-zeo cells, 7901-AS cells mostly showed cell proliferation inhibition, G1/G0 phase arrest, increased cell apoptotic rate, recovery of contact inhibition, and density contact. The tumorigenicity in nude mice and cloning efficiency in the two-layer soft agar were clearly inhibited. CONCLUSION： NHE1 antisense gene significantly restrains the malignant behavior of human gastric carcinoma cells, suppresses cell growth and induces cell apoptosis, and partially reverses the malignant phenotypes of SGC-7901 . These results suggest a potential role for human tumor gene therapy.     

药物敏感试验指导胃癌合并恶性腹水的腹腔内化疗

目的用药物敏感试验预测胃癌腹水癌细胞对抗癌药物的敏感性,观察其在指导胃癌合并恶性腹水腹腔内化疗的价值。方法选择47例腹水癌细胞阳性胃癌患者,随机分离19例的腹水癌细胞,用三磷酸腺苷(ATP)法分别检测其对卡铂、泰素、5氟尿嘧啶、顺铂、阿霉素、羟基喜树碱、甲氨蝶呤、丝裂霉素、氮烯咪胺的敏感性,各选择最敏感的1种药物对患者进行腹腔内化疗。观察治疗后腹水完全缓解率、腹水癌细胞转阴率,并与28例顺铂单药腹腔内化疗组比较。结果19例腹水癌细胞对抗癌药物敏感的例数分别为卡铂7例、泰素6例、5氟尿嘧啶6例、顺铂6例、阿霉素5例、羟基喜树碱5例、丝裂霉素5例,对甲氨蝶呤和氮烯咪胺均不敏感。治疗后药物敏感试验组腹水完全缓解率为57.9%,高于顺铂组的28.6%(P<0.05);药物敏感试验组腹水中癌细胞转阴率为68.4%,高于顺铂组的32.1%(P<0.05)。结论用药物敏感试验指导胃癌合并恶性腹水腹腔内个体化化疗,可提高恶性腹水的完全缓解率和腹水中癌细胞转阴率,该治疗方法具有临床实用价值。     

层粘连蛋白对金属蛋白酶抑制剂-2基因转染人胃癌细胞转移相关行为影响的研究

目的　探讨层粘连蛋白对组织金属蛋白酶抑制剂 2 (Tissueinhibitorofmetalloproteinase 2 ,TIMP 2 )基因转染胃癌细胞的生物学行为变化。方法　采用基因转染的方法将人全长TIMP 2cDNA基因转染入人胃癌SGC 790 1细胞系中 ,利用层粘连蛋白对肿瘤细胞的诱导迁移作用 ,在体外侵袭模型中观察转染基因细胞侵袭能力的改变。结果　转染TIMP 2基因的SGC 790 1细胞侵袭能力 (33.1± 11.3细胞 /h)明显低于未转染组 (135 .7± 2 1.6细胞 /h ,P <0 .0 1) ,细胞的粘附能力受到抑制 ,转染组(2 36 .7± 37.3细胞 /h)低于未转染组 (6 2 6 .1± 45 .1细胞 /h)。且细胞的增殖能力未发生明显变化。结论　TIMP 2基因可阻抑层粘连蛋白对瘤细胞的诱导侵袭影响 ,参与瘤细胞转移的阻断机制。