山萘酚通过抑制伽马辐射诱导的氧化应激和凋亡发生来发挥辐射防护作用

目的在从动物水平和细胞水平研究一种黄酮醇类化合物山萘酚的体内外辐射防护作用,并对其作用可能机制进行探索。方法将C57小鼠分为正常对照组、8.5 Gy辐射模型组、8.5 Gy辐射+山萘酚15 mg·kg~(-1)组、7 Gy辐射模型组、7 Gy辐射+山萘酚15 mg·kg~(-1)组,小鼠在辐射前连续灌胃给药五天,之后一次性分别接受8.5 Gy或7 Gy剂量全身γ射线辐射,观察并记录8.5 Gy辐射后各组动物在辐射后30 d的生存情况以及十天体重变化。在辐射后的第7天,记录各组动物体重,全部处死7 Gy辐射的各组动物,取小鼠脾组织和胸腺组织测定脏器指数并分别检测组织中SOD和MDA水平变化,取小鼠外周血利用抗体标记和流式细胞仪检测外周血中EPCs水平变化,取小鼠小肠组织利用HE染色和TUNEL染色观察小肠组织病理形态变化和凋亡情况,利用Western印迹检测小肠组织蛋白表达变化。使用人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株,实验分为正常对照组、辐射模型组、山萘酚给药组,辐射前24 h给予药物孵育,之后一次性接受24 Gy剂量γ射线辐射,辐射后24 h,利用MTT法检测各组细胞的存活率,流式细胞术和Hoechst 33258染色检测细胞凋亡、试剂盒检测细胞ROS,NO,SOD和MDA水平、实时PCR和Western印迹检测细胞prx5,Cyt-c,Bax,胱天蛋白酶,活化胱天蛋白酶9,胱天蛋白酶3和活化胱天蛋白酶3在m RNA和蛋白水平表达变化。结果山萘酚可以明显的增加辐射后动物生存率,减少辐射引起的体重降低,提高辐射后脏器指数,增加辐射后组织中SOD水平,降低组织中MDA水平,显著保护辐射后肠结构完整性,增加辐射后小肠平均绒毛高度,增加隐窝数,减少辐射诱导的绒毛细胞和隐窝细胞凋亡,并且提高外周血中内皮祖细胞水平;山萘酚可以增加辐射后细胞生存率,减少细胞凋亡,清除辐射产生的过剩ROS和NO,降低MDA水平,增加SOD水平,恢复辐射后prx-5,Cyt-c,胱天蛋白酶9,活化胱天蛋白酶9和胱天蛋白3,活化胱天蛋白3在m RNA和蛋白水平的异常高表达。结论山萘酚通过减少辐射诱导的氧化应激和细胞凋亡发挥辐射防护作用。     

毛酸浆活性成分PPB诱导人肝癌HepG2细胞凋亡

目的研究毛酸浆活性成分PPB对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响。方法用MTT法考察1,2,4,8,16和32μmol·L~(-1)PPB分别作用于HepG2细胞6,12,24,36及48 h的生长抑制作用,并用MTT法考察1,2,4,8,16,32μmol·L~(-1)PPB分别作用于人外周血单个核细胞24和48 h的生长抑制作用。7μmol·L~(-1)PPB作用于HepG2细胞3,6,12及24 h后,采用Hoechst 33342,Mitotracker Deep Red,Rhodamine 123荧光染色结合高内涵细胞分析技术检测细胞数、线粒体质量、线粒体膜电位的变化。采用Western印迹法检测胱天蛋白酶3和聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)蛋白水平的变化。结果PPB对HepG2细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖性,且24 h IC50为(6.78±1.96)μmol·L~(-1),48 h IC50为(5.50±1.64)μmol·L~(-1)。PPB对人外周血单个核细胞无显著的细胞毒性,其24 h IC50为(252.34±126.24)μmol·L~(-1),48 h IC50为(92.93±35.93)μmol·L~(-1)。高内涵细胞分析结果显示,与对照组相比,PPB处理后,细胞数显著下降(P<0.05),线粒体质量显著增加(P<0.05),线粒体膜电位显著降低(P<0.05)且呈时间依赖性。Western印迹结果显示,胱天蛋白酶3蛋白表达水平降低,PARP表达水平降低,活化形式的PARP表达水平升高。结论 PPB可通过诱导人肝癌HepG2细胞凋亡而抑制其增殖,且PPB对人正常细胞无显著的细胞毒性。     

迷迭香酸对γ射线致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的保护作用

目的研究迷迭香酸对γ射线致小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的保护作用。方法以骨髓嗜多染红细胞微核形成率为观测指标,C57BL/6J小鼠经60Coγ射线1～3 Gy照射24 h后观察骨髓嗜多染红细胞微核发生率的变化以选择合适的照射剂量;C57BL/6J小鼠经60Coγ射线2Gy照射后不同时间观察骨髓嗜多染红细胞微核发生率的变化以选择照射后取骨髓的时间;2 Gy照射前经迷迭香酸处理的C57BL/6J小鼠照后24 h观察骨髓嗜多染红细胞微核发生率的变化,以确定迷迭香酸对小鼠微核保护作用的剂量效应与时间效应。结果 2 Gy照射24 h后小鼠骨髓嗜多染红细胞微核发生率增加比较明显,适合作为小剂量照射条件;照射后24 h或48 h骨髓嗜多染红细胞微核发生率增加比其他时间明显;经迷迭香酸100 mg/kg连续7次处理后的受照射小鼠骨髓细胞中,微核发生率（6.50‰）明显低于单纯照射组（23.65‰）。结论迷迭香酸对γ射线致骨髓嗜多染红细胞微核具有保护作用。     

大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷联合去甲斑蝥素体内外抗肿瘤作用及其机制

目的 探究大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷(EG)与去甲斑蝥素(NCTD)联用的抗肿瘤作用及机制。方法(1) EG和NCTD与人肝癌HepG2细胞和人肺癌A549细胞作用48 h。给药方案：EG和NCTD分别单用(终浓度均为60～960μmol·L^-1)、同时联用(EG+NCTD,1∶1同时给药，终浓度分别为30～480μmol·L^-1)、序贯联用方案Ⅰ(EG→NCTD,EG作用24 h后除去EG，加入NCTD继续作用24 h，终浓度均为60～960μmol·L^-1)和序贯联用方案Ⅱ(NCTD→EG,NCTD作用24 h后除去NCTD，加入EG继续作用24 h，终浓度均为60～960μmol·L^-1)。MTT法检测细胞存活率，并计算相应的联合指数(CI)值，判断药物联合作用效应。随后利用反向找靶技术并构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络筛选两药联用潜在的关键靶点。流式细胞术分析EG和NCTD单用及NCTD→EG序贯联用对HepG2和A549细胞凋亡的影响，Western印迹法检测胱天蛋白酶3(CASP3...     

猪苓多糖联合硼替佐米促进多发性骨髓瘤U266细胞的凋亡和自噬

目的研究猪苓多糖(PPS)联合硼替佐米(BTZ)对人多发性骨髓瘤U266细胞的影响。方法 (1)PPS 12.5～400μmol·L^-1或BTZ 10～80 nmo·L^-1处理U266细胞48 h,PPS 50μmol·L^-1+BTZ 10～80 nmol·L^-1处理U266细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率。PPS 12.5～50μmo·L^-1+BTZ 10～80 nmol·L^-1处理U266细胞48 h,Calcusyn软件分析计算联合用药指数(CI),并确定联合用药的浓度。(2) U266细胞分为细胞对照组、PPS 20μmol·L^-1组、BTZ 25 nmol·L^-1组和PPS 20μmol·L^-1+BTZ 25 nmol·L^-1组,孵育48 h。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western印迹法检测细胞Bax、Bcl-2、活化胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶3、自噬...     

苦参碱对PC12细胞的毒性及线粒体损伤机制

目的研究苦参碱(MT)对大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)的毒性作用及其机制。方法用MT 2,4和8 mmol·L-1分别作用PC12细胞8,16,24和48 h,MTT法测定细胞存活率。PC12细胞经上述浓度的MT作用24 h后,采用Hoechst33342荧光染色法观察细胞形态变化,采用羟胺法和硫代巴比妥酸(TBA)法分别检测PC12细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,流式细胞术检测细胞凋亡率及活性氧(ROS)水平,JC-1染色法检测细胞线粒体膜电位(MMP)的改变,Western蛋白印迹法检测胱天蛋白酶原3、胱天蛋白酶原9、活化的胱天蛋白酶3、Bax和Bcl-2蛋白水平。结果随着作用时间及浓度的增加,MT对PC12细胞的抑制作用逐渐增强。MT作用24 h后,与正常对照组相比,MT 2,4和8 mmol·L-1组的细胞数减少,出现染色质凝集和部分破裂的现象,且给药组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01);细胞内ROS和MDA含量显著增加(P<0.05,P<0.01),SOD活性显著降低(P<0.01),且MMP降低;细胞内胱天蛋白酶原9、胱天蛋白酶原3和Bcl-2蛋白水平显著下降(P<0.01,P<0.05),活化的胱天蛋白酶3和Bax蛋白水平显著上升(P<0.05,P<0.01);且Bcl-2/Bax比值显著降低(P<0.01)。结论 MT对PC12细胞具有一定毒性作用,其机制可能与细胞内活性氧堆积而引起线粒体途径诱导细胞凋亡有关。     

脱氢枞胺对氟苯甲醛激活JNK/P38通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡北大核心CSCD

目的研究脱氢枞胺对氟苯甲醛(DHAA-F)对人肝癌Hep G2细胞存活的影响,探讨其诱导细胞凋亡作用机制。方法用不同浓度DHAA-F处理Hep G2细胞24,48和72 h,CCK-8法检测细胞存活;DHAA-F20,40和80μmol·L^(-1)处理Hep G2细胞24 h,荧光显微镜观察细胞形态的变化,Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡,Western蛋白印迹法检测凋亡相关蛋白BCL-2、BAX、活化的胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3蛋白表达水平,以及丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)家族中ERK,JNK和P38蛋白的表达。结果与细胞对照组比较,DHAA-F可显著抑制细胞存活(P<0.01),24,48和72 h的IC50值分别为56.8±4.4,40.2±3.4和24.2±2.4μmol·L^(-1);DHAA-F 20,40和80μmol·L^(-1)作用24 h后,核固缩程度加深,PI染色增多,细胞凋亡率明显增加(P<0.01),由细胞对照组的(6.4±0.6)%分别增加至(12.3±1.7)%,(28.8±3.2)%和(61.8±4.6)%;DHAA-F可以增加Hep G2细胞中JNK和P38蛋白的磷酸化(P<0.01),引起BCL-2表达下调(P<0.01)、BAX及活化的胱天蛋白酶9和胱天蛋白酶3表达上调(P<0.01);与DHAA-F组相比,P38MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125可逆转DHAA-F引起的BCL-2表达下调、BAX表达上调和胱天蛋白酶3的活化(P<0.01)。结论 DHAA-F可通过激活JNK/P38通路诱导人肝癌Hep G2细胞发生凋亡。     

不同剂量 γ射线照射对肺癌细胞分化、增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响

目的探讨不同剂量 γ射线照射对肺癌细胞分化、增殖、凋亡以及放疗敏感性的影响。方法体外培养的人肺癌细胞株 A549采用随机数字表法分为对照组、 2戈瑞( Gy)组、 4 Gy组、 6 Gy组、 8 Gy组、 10 Gy组,以不同剂量的 γ射线照射细胞,以细胞克隆形成实验检测细胞存活情况;以 CKK?8法检测细胞增殖情况,计算细胞的生长抑制率,检测各组的放疗敏感性;以流式细胞技术检测细胞凋亡情况;采用免疫印记( WB)法检测肺组织分化标志物粘蛋白 MUC?1,肺泡 Ⅱ型上皮细胞特异性蛋白标志物 SPC1、SPC2的表达;以 Transwell细胞体外侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果与对照组比较,照射组细胞相对细胞克隆形成、 MUC?1蛋白表达、侵袭能力降低,生长抑制率、凋亡率、 SPC1、SPC2蛋白表达增高且呈剂量依赖性( P＜0.05);照射组细胞的放疗敏感性呈下降趋势,且 6 Gy组、 8 Gy组、 10 Gy组与 2 Gy组相比有统计学意义( P＜0.05)。结论 γ射线照射可抑制人肺癌细胞株 A549增殖、促进其凋亡、促进其分化、减轻其恶性程度且随剂量增加效果增强;但其放疗敏感性随剂量增加呈下降趋势。     

星虫多糖对亚急性辐射损伤小鼠造血系统的保护作用研究

目的 研究星虫多糖（Sipunculus nudus L. polysaccharide, SNP）对亚急性辐射损伤小鼠造血系统的保护作用。方法 选用雄性BALB/c,采用137Cs γ射线对小鼠进行一次性全身照射（总剂量为4.0 Gy）,建立亚急性辐射损伤模型。照射前连续灌胃给药7天,照射后继续给药14天。用细胞分析仪测定外周血象,流式细胞仪检测骨髓造血干细胞含量与细胞凋亡率。照射后24 h取小鼠股骨进行HE染色观察骨髓病理变化。结果 经137Cs γ射线照射后,与辐照模型组相比,照后第10天,90 mg/kg SNP小鼠外周血象红细胞数量显著提高(P<0.05),SNP三个剂量组血小板数量均显著提高(P<0.05);照后第14天,270 mg/kg SNP组小鼠脾脏指数与30 mg/kg SNP组小鼠睾丸指数显著提高(P<0.05),30 mg/kg SNP组骨髓造血干细胞数量显著提高(P<0.05),SNP各给药组骨髓细胞凋亡率显著下降(P<0.01),骨髓组织中有核细胞数量显著增多。结论 SNP对辐射损伤小鼠的造血系统具有较好的保护效果。     

E838对小鼠骨髓细胞染色体的辐射防护作用

目的探讨E838对γ射线照射小鼠骨髓细胞染色体损伤的防护作用。方法将615小鼠,随机分为对照组、辐射对照组、E838组、炔雌三醇(EE3)组。E838组和EE3组分别腹腔注射E838和EE3,另两组给予等体积茶油,第3次给药24 h后进行剂量为1.5 Gy的137Csγ射线全身照射,观察其骨髓细胞染色体畸变率。结果 E838组、EE3组骨髓细胞染色体畸变与辐射对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),E838组畸变细胞与EE3组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论 E838可降低辐射诱发的骨髓细胞染色畸变细胞数,对骨髓细胞染色体具有一定的辐射防护作用。     

p38抑制剂对辐射损伤小鼠中免疫细胞的作用

目的:探讨利用p38抑制剂SB203580(SB)抑制p38通路对6Gy受照小鼠免疫细胞辐射损伤的作用。方法:取雄性C57BL/6小鼠30只,随机分为对照组、照射组和SB组,每组10只。SB组和照射组小鼠接受以6Gy137Csγ射线的全身照射。SB组小鼠照射24h后腹腔注射SB(15mg/kg),每2d1次,共给药5次,其余2组小鼠腹腔注射对照溶液。小鼠受照10d后处死,取外周血计数,流式细胞仪检测CD4、CD8、B220表达,取骨髓细胞测定ROS水平。结果:照射组外周血白细胞(WBC)、CD8、B220细胞比例较对照组明显下降,骨髓ROS水平升高(P<0.01)。SB组外周血CD8比例较照射组上升,骨髓ROS水平下降(P<0.01)。结论:SB对小鼠6Gy照射后造血免疫损伤有一定的缓解作用,其机制可能与其降低照射后骨髓细胞ROS水平有关。     

白头翁皂苷B4对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制研究

目的:研究白头翁皂苷B4(AB4)对肝癌细胞Huh-7及其荷瘤裸鼠肿瘤的抑制作用及机制。方法:将Huh-7细胞分为AB4给药组、阴性对照组(等体积培养液)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50μmol/L),运用MTT法检测0、3、6、12、25、50、100、200、400、800、1 600μmol/L AB4作用Huh-7细胞12、24、36、48 h的增殖抑制率,计算半数抑制浓度(IC50);克隆形成试验评估50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数;膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(AnnexinⅤ-FITC/PI)染色检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的细胞凋亡率;Western blot法检测50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h后B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)、活化胱天蛋白酶3(Cleaved Caspase-3)、活化多腺苷二磷酸核糖聚合酶(Cleaved PARP)等凋亡蛋白的表达。将荷瘤裸鼠随机分为阴性对照组(生理盐水)、阳性对照组(5-氟尿嘧啶50 mg/kg)和AB4低、中、高剂量组(25、50、100mg/kg),每组3只,每天腹腔注射相应药物1次,连续19 d,观察裸鼠肿瘤生长情况,计算抑瘤率;苏木精-伊红(HE)染色观察肿瘤细胞形态变化。结果:AB4对Huh-7细胞的增殖抑制率随给药浓度的增加而增加,但50μmol/L后增加不明显,随作用时间的延长而增加,但作用24 h后增加不明显,AB4的IC50为(56.76±1.756)μmol/L。与阴性对照组比较,50μmol/L AB4作用Huh-7细胞24 h的克隆细胞数明显减少、Bcl-2蛋白表达明显减弱(P<0.05),细胞凋亡率和Bax、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、Cleaved PARP蛋白表达均明显增加(P<0.05或P<0.01),且与阳性对照组差异无统计学意义。与阴性对照组比较,AB4低、中、高剂量组和阳性对照组荷瘤裸鼠的瘤体积明显减小(P<0.05),肿瘤细胞轮廓逐渐模糊,出现核固缩、核质不清晰、核碎裂现象,其抑瘤率分别为25.93%、39.15%、46.26%、42.83%。结论:AB4对Huh-7细胞及其荷瘤裸鼠均有抑制作用,其机制可能与上调Bax/Bcl-2比例、活化Caspase-3、裂解PARP、诱导细胞发生凋亡有关。     

新型孕激素衍生物3α-羟基-3β-甲氧基甲基-16,17-亚甲基-孕甾-20-酮对硝普钠损伤PC12细胞的保护作用

目的探讨新型孕激素衍生物3α-羟基-3β-甲氧基甲基-16,17-亚甲基-孕甾-20-酮(CPU)对硝普钠(SNP)诱导的PC12细胞损伤的神经保护作用及其机制。方法用终浓度为0.01,0.10,1.00μmol·L-1的CPU预处理30 min,然后加入SNP共同作用24 h。采用MTT法检测细胞存活率,分光光度计法检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的变化;流式细胞仪检测活性氧(ROS)、线粒体膜电位和细胞凋亡率;Western蛋白质印迹法检测Bcl-2、Bax和活化的胱天蛋白酶3蛋白表达水平。结果与细胞对照组比较,SNP模型组PC12细胞的存活率显著降低,LDH的释放明显增加(P<0.01),MDA生成增多,SOD活性降低,ROS水平升高,线粒体膜电位水平降低,细胞凋亡率由细胞对照组(1.20±0.14)%增加至(55.52±3.56)%(P<0.01);Bcl-2蛋白表达降低,而Bax表达升高,Bax/Bcl-2比值升高,同时胱天蛋白酶3被激活(P<0.01)。与模型组比较,CPU 0.01,0.10和1.00μmol·L-1作用24 h后,细胞存活率显著升高,LDH的释放减少(P<0.01),MDA的生成量减少,SOD活性增加,ROS累积减少,线粒体膜电位水平升高(P<0.01);凋亡细胞分别降至(37.79±4.85)%,(22.31±4.25)%和(10.39±2.65)%;Bcl-2蛋白表达增加,Bax和活化的胱天蛋白酶3表达降低。结论 CPU对SNP所致损伤的PC12细胞有一定的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化和抗凋亡作用有关。     

γ射线照射导致心肌细胞坏死性凋亡和线粒体损伤

目的 探讨γ射线照射引起的心肌细胞死亡方式及其线粒体损伤效应.方法 用60Coγ射线单次照射大鼠H9C2心肌细胞,按照射后时间分为照射后24,48和72 h组,按照射剂量分为细胞对照组及5,10和20 Gy组.用CCK-8试剂盒检测细胞存活率;APC-AnnexinⅤ/7AAD凋亡试剂盒检测细胞凋亡;Western印迹...     

冬凌草甲素对乳腺癌MCF-7细胞氟维司群耐药的逆转作用及机制

目的探究冬凌草甲素(Ori)对乳腺癌MCF-7细胞氟维司群(Ful)耐药的逆转作用及机制。方法MCF-7细胞在含Ful(终浓度为1μmol·L-1)的DMEM培养液中培养12个月,压力筛选MCF-7耐药细胞,制备耐药细胞株MCF-7/Ful。MCF-7和MCF-7/Ful细胞分别加Ful 0,2,4,8和16μmol·L-1,孵育48 h,计算MCF-7/Ful细胞耐药指数(RI)。MCF-7/Ful细胞用Ori 5μmol·L-1+Ful 0,2,4,8和16μmol·L-1联合孵育48 h,计算IC50,根据Ful单独用药和与Ori联合用药的IC50值计算逆转倍数。MCF-7/Ful细胞分为细胞对照组、Ful 8μmol·L-1组、Ori 5μmol·L-1组和Ful+Ori组,作用24 h,彗星实验检测细胞拖尾长度;流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;吖啶橙染色法检测细胞自噬;Western印迹法检测γ-H2AX、Bcl-2、Bax、胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9、周期蛋白D1表达、细胞分裂周期蛋白2(cdc2)磷酸化水平和微管相关蛋白轻链3(LC3)Ⅱ/Ⅰ比值。结果 MCF-7/Ful...     

大黄酰缬氨酸对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用与放射增敏作用研究

目的:研究大黄酰缬氨酸对人宫颈癌Hela细胞生长的抑制作用和放射增敏活性。方法:不同浓度大黄酰缬氨酸(0、6.03、18.09、54.28、162.85、488.56、732.84、1 465.68μmol/L)作用于Hela细胞24、48 h后采用MTT法测定细胞活力,计算抑制率、半数抑制浓度(IC50)与20%抑制浓度(IC20)并绘制浓度-抑制率曲线。试验分为模型(等容培养液)6组与大黄酰缬氨酸(30μmol/L)6组,培养细胞24 h后分别接受0、1、2、4、6、8 Gyγ射线照射(剂量率:0.78 Gy/min),再继续培养24 h,绘制照射剂量-存活比曲线,计算N(外推数)、D0(平均致死剂量)、SF2(单次照射2 Gy的细胞存活比)、SER(模型组D0与用药组D0之比或模型组SF2与用药组SF2之比)。结果:54.28、162.85、488.56、732.84、1 465.68μmol/L大黄酰缬氨酸作用24 h时和6.03、18.09、54.28、162.85、488.56、732.84、1 465.68μmol/L大黄酰缬氨酸作用48 h时均可明显抑制细胞活力;其对宫颈癌He La细胞的抑制作用呈剂量依赖性,IC50分别为179.423μmol/L(24 h)和84.192μmol/L(48 h),IC20分别为52.943μmol/L(24 h)和30.505μmol/L(48 h)。与模型组比较,大黄酰缬氨酸组细胞N、D0、SF2降低,SER升高。结论:大黄酰缬氨酸体外能明显抑制Hela细胞生长,增加Hela细胞的放射敏感性。     

氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响及其机制

目的观察氯喹对三阴乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,并探讨其机制。方法用氯喹20,40和80μmol·L~(-1)分别处理MDA-MB-231细胞24和48 h,采用CCK-8法和细胞克隆形成实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,Western印迹法检测细胞周期相关蛋白即细胞周期蛋白D3、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和CDK4,细胞凋亡相关蛋白即活化胱天蛋白酶3和活化聚腺苷二磷酸-核糖聚合酶(PARP)及自噬标志蛋白即自噬微管相关蛋白轻链3B(LC3B)和自噬底物SQSTM1表达水平。结果氯喹20,40和80μmol·L~(-1)与MDA-MB-231细胞作用24和48 h后,均能有效抑制细胞增殖(P<0.01)。与细胞对照组相比,氯喹20和40μmol·L~(-1)处理24 h,G_0/G_1期细胞百分比显著增高(P<0.01);80μmol·L~(-1)组G_2/M期细胞百分比升高(P<0.01),且细胞凋亡率增加(P<0.01)。处理48 h,与细胞对照组相比,氯喹用药3组细胞凋亡率均显著升高(P<0.05)。氯喹3组处理24 h,与细胞对照组相比,细胞周期蛋白D3、CDK2和CDK4表达水平降低(P<0.01),活化胱天蛋白酶3和活化PARP表达增强(P<0.01),LC3B和SQSTM1表达水平显著升高(P<0.01)。结论氯喹可通过抑制MDA-MB-231细胞自噬、阻滞细胞周期进程并促进细胞凋亡而抑制其增殖。     

壁虎粗多肽诱导SHSY-5Y细胞凋亡的机制研究

目的壁虎粗多肽(GCP)诱导人神经母细胞瘤SHSY-5Y细胞凋亡的机制研究。方法采用MTT法检测细胞增殖情况;倒置显微镜观察SHSY-5Y细胞的形态学变化;划痕实验检测划痕愈合能力变化;Hoechst33258荧光染色检测细胞核凋亡形态学的变化;Western印迹检测凋亡过程中胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9等关键因子水平的变化。结果 MTT结果显示,GCP对SHSY-5Y细胞增殖有明显抑制作用,24、48 h IC_(50)分别为0.211和0.192 g·L~(-1)。GCP组细胞数量少于对照组,排列成簇,胞体膨胀,可见凋亡细胞。低、中、高GCP组细胞迁移抑制率分别为32.92%,44.00%和98.04%(P<0.05)。荧光显微镜下,空白组细胞核呈圆或椭圆形,均匀分布,GCP组细胞核荧光不均匀,核变小,有致密光团。GCP还通过上调胱天蛋白酶3和胱天蛋白酶9的表达,导致SHSY-5Y细胞凋亡。结论 GCP能抑制SHSY-5Y细胞的增殖和迁移,诱导SHSY-5Y细胞凋亡。其机制可能与上调胱天蛋白酶3、胱天蛋白酶9的表达,活化线粒体凋亡通路有关。     

西妥昔单抗对三阴性乳腺癌细胞的放射增敏作用的机制研究

目的对以往研究发现的西妥昔单抗(C225)对乳腺癌细胞的放射增敏作用的机制进行探讨。方法取指数生长期的三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞,分正常对照组、单独药物组(30nmol/L C225)、单独照射组(8Gy X线)和联合处理组(30nmol/L C225+8Gy X线)。通过蛋白印迹法检测C225与X线联合应用对p-表皮生产因子受体(EGFR)蛋白以及下游信号蛋白p-Akt、p-P38表达的影响以及对凋亡相关基因胱天蛋白酶(caspase)-3蛋白表达。结果蛋白印迹法结果显示C225与X线联合应用时,可使细胞p-EGFR信号蛋白表达下降,对pAkt和p-P38蛋白表达有明显抑制作用,同时使caspase-3蛋白表达显著增强。结论 C225对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的放射增敏作用可能是与EGFR下游信号蛋白Akt、MAPK磷酸化活性降低,以阻断PI3K/Akt信号通路的活化,以及增加肿瘤细胞对放射线的凋亡反应有关。     

抑制生长因子受体连接蛋白-2表达对乳癌细胞生长的影响

目的进一步验证生长因子受体连接蛋白-2(Grb2)的表达在乳癌发展中的作用。方法应用脂质体转染技术将Grb2小干扰RNA(siRNA)转染至乳癌细胞SKBr3中,台盼蓝计数法测定存活细胞数,TUNEL技术和AnnexinⅤ/PI染色分析转染后细胞的凋亡,免疫细胞化学技术分析转染后细胞Grb2的表达。Western蛋白质印迹法测定Grb2、细胞外信号调节激酶(p42/44ERK)、磷酸化p42/44ERK(P-p42/44ERK)、原癌基因蛋白质c-akt(Akt)、磷酸化Akt(P-Akt)和STAT5转录因子表达的改变。流式细胞术检测细胞活化的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)3的表达。结果台盼蓝计数法结果显示,转染Grb2siRNA可有效抑制SKBr3的生长。TUNEL实验显示,Grb2siRNA转染SKBr3细胞后,随着时间延长,凋亡细胞明显增加。AnnexinⅤ/PI测定结果亦提示,Grb2的抑制可明显诱导SKBr3细胞凋亡。转染48h后,SKBr3的活化caspase3表达水平由0.99%升至17.43%。免疫组化染色表明,Grb2siRNA转染细胞后,SKBr3细胞Grb2表达明显下降,由转染24h后的下降至转染72h后的+～-。Western蛋白质印迹分析证实,Grb2的抑制可导致SKBr3细胞P-p42/44ERK,P-Akt以及STAT5表达明显下降。P-p42ERK与p42ERK的相对吸光度值之比由未转染的(60±17)%下降至转染24h后的(38±13)%,及转染48h后的(21±8)%;P-p44ERK与p44ERK的相对吸光度值之比,由未转染时(104±16)%,分别下降至(49±13)%及(30±10)%;P-Akt与Akt的相对吸光度值之比由未转染的(40±6)%下降至(32±10)%和(15±4)%。与未转染组相比,转染24及48h后STAT5相对吸光度值分别下降为(64±6)%和(52±14)%。结论抑制Grb2的表达可抑制乳癌细胞生长并诱导细胞凋亡。