TM6SF2在肝癌中的差异表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响

目的探究TM6SF2在肝癌中的差异表达及其对肝癌细胞生物学行为的影响。方法免疫组化检测15例肝癌/癌旁组织TM6SF2表达量,Western blot检测人肝癌细胞系Hep G2及正常肝细胞L-02 TM6SF2表达量。基于TCGA数据库分析TM6SF2在肝癌中表达及生存曲线。基于PCDNA 3.1质粒构建TM6SF2过表达载体,通过慢病毒包装感染Hep G2,筛选稳定细胞株,Western blot检测过表达效率。针对空白组、对照组和TM6SF2过表达组,CCK-8法和细胞克隆形成法检测细胞增殖活性,Annexin V-FITC/PI双标记法检测细胞凋亡,Transwell法检测细胞侵袭能力。基于肝癌组织临床样本,q-PCR检测TM6SF2和SLC27A5表达量,分析其表达相关性。结果 TM6SF2在肝癌组织及细胞中表达均降低。TM6SF2低表达肝癌患者5年生存期更短。成功构建过表达TM6SF2稳定细胞株Hep G2后,TM6SF2过表达可以降低Hep G2细胞增殖活性、侵袭能力,促进细胞凋亡。TM6SF2和SLC27A5在肝癌组织中表达正相关。结论 TM6SF2表现出了较强的抑癌基...     

非小细胞肺癌组织中lncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p的表达及临床意义

目的 研究非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA(LncRNA)MNX1-AS1、微RNA(miR)-218-5p表达及临床意义。方法选取2015年1月至2017年1月湖北省中医院诊治的120例NSCLC患者,取术中获取的NSCLC组织和癌旁组织,应用荧光定量PCR检测LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达。分析NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p的相关性及与临床病理特征的关系。以LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p相对表达量的均值(2.321、1.213)为界分为高、低表达组,分析其对NSCLC患者生存预后的影响。结果 NSCLC组织中LncRNA MNX1-AS1表达高于癌旁组织,miR-218-5p表达低于癌旁组织(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1与miR-218-5p呈负相关(r=-0.561,P<0.01)。不同淋巴结转移、肿瘤分期患者LncRNA MNX1-AS1、miR-218-5p表达比较,差异有统计学意义(P<0.05)。LncRNA MNX1-AS1高表达组生...     

SH3BP4基因对肝癌细胞迁移和增殖作用的实验研究

目的：构建SH3结构域结合蛋白4（SH3-domain binding protein 4,SH3BP4）重组腺病毒载体及shSH3BP4慢病毒载体,初步探索SH3BP4对肝癌细胞迁移增殖能力的影响。方法：PCR扩增SH3BP4 cDNA序列并构建腺病毒重组质粒pAdEasy-SH3BP4,HEK293细胞包装重组腺病毒AdSH3BP4;构建SH3BP4基因短发夹型RNA干扰慢病毒载体,转染至HEK293T细胞,包装重组慢病毒shSH3BP4。采用Western blot检测SH3BP4在人正常肝脏细胞及肝癌细胞的内源性表达,将SH3BP4过表达实验部分设为3个组：Mock组、AdGFP组和AdSH3BP4组,Mock组为空白对照组,AdGFP组为感染腺病毒AdGFP的对照组,AdSH3BP4组为感染腺病毒AdSH3BP4的实验组;将SH3BP4敲低实验部分设为2个组：shControl组和shSH3BP4组,shControl组为感染慢病毒shPLL3.7的对照组,shSH3BP4组为感染慢病毒shSH3BP4的实验组。通过Transwell和划痕实验检测SH3BP4过表达和敲低对肝癌细胞迁移能力的影响;MTS和直接克隆形成实验检测SH3BP4过表达和敲低对肝癌细胞的增殖能力的影响。结果：经限制性内切酶酶切及DNA测序验证,成功构建AdSH3BP4重组腺病毒载体和shSH3BP4慢病毒载体。Transwell结果表明,AdSH3BP4组（74.800±0.544）相较于空白对照组（219.467±2.640）与AdGFP组（210.533±8.498）,迁移的细胞数明显减少（P=0.000）;而shSH3BP4组（191.467±3.906））比shControl组（91.733±2.763）细胞的迁移数目明显增加（P=0.000）。划痕实验结果表明,AdSH3BP4组的细胞修复率[（10.400±0.036）%]明显低于空白对照组[（37.500±0.063）%]与AdGFP组[（50.000±0.063）%]（P=0.000）;而shSH3BP4组[（55.00±0.05）%]明显高于shControl组[（23.3±0.029）%]（P=0.000）。MTS结果表明：AdSH3BP4组在96 h的吸光度值（0.921±0.053）与空白对照组（1.091±0.043）及AdGFP组（1.062±0.024）相比明显降低（P=0.005）。shSH3BP4组在96 h的吸光度值（1.497±0.020）与shControl对照组（1.142±0.103）相比明显升高（P=0.004）。直接克隆形成实验结果表明,AdSH3BP4组的细胞克隆形成数（34.333±2.082）相较于空白对照组（86.333±4.726）与AdGFP组（87.333±1.528）明显减少（P=0.000）,而shSH3BP4组（65.000±6.557）却明显高于shControl组（31.000±2.000）（P=0.001）。上述实验结果说明SH3BP4过表达能显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力,而SH3BP4敲低能明显促进肝癌细胞的迁移、侵袭和增殖能力。结论：SH3BP4可抑制肝癌细胞迁移、侵袭和增殖,可能为肝癌的诊治提供一个新的靶标。     

lncRNA OIP5-AS1通过海绵吸附miR-143-3p调控COL1A1促进胃癌发展

目的 探究长链非编码RNA（lncRNA）Opa相互作用蛋白5反义RNA1（OIP5-AS1）对胃癌发展的调控机制。方法 qRT-PCR检测lncRNA OIP5-AS1在正常胃细胞系（GES-1）和胃癌细胞系（AGS和SGC7901）中的表达水平;构建OIP5-AS1敲低载体、miR-143-3p抑制剂（miR-143-3p inhibitor）以及Ⅰ型胶原α1（COL1A1）敲低载体并转染胃癌细胞系,运用CCK-8实验、伤口愈合实验、Transwell实验检测lncRNA OIP5-AS1、miR-143-3p、COL1A1在胃癌细胞增殖、迁移、侵袭中的作用;采用双荧光素酶报告基因、q RT-PCR、Western blot实验检测lncRNA OIP5-AS1以及miR-143-3p、COL1A1之间的靶向调控作用。结果 OIP5-AS1在胃癌细胞AGS、SGC7901中表达水平分别是GES-1细胞的6.10和5.53倍,差异有统计学意义（P<0.01）。同时,敲低OIP5-AS1会抑制胃癌细胞增殖[AGS:（0.71±0.07）比（1.20±0.11）;SGC7901:（...     

lncRNA OIP5-AS1在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达及对缺氧缺糖复供诱导的细胞凋亡的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)Opa相互作用蛋白5反义转录本1(OIP5-AS1)在脑缺血再灌注大鼠模型中的表达及其对缺氧缺糖复供(OGD/R)诱导的PC12细胞凋亡的影响.方法 构建脑缺血再灌注大鼠模型,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)方法检测脑组织中OIP5-AS1水平.PC12细胞分成Contr...     

POT1-AS1在胃腺癌组织中的表达及其对细胞增殖的影响

目的 探讨POT1-AS1在胃腺癌(GAC)组织中的表达及其对细胞增殖的影响.方法 收集2016年6月至2018年12月在西安交通大学第一附属医院普通外科手术切除的80对GAC组织及其癌旁正常组织标本(所有患者术前未接受过放、化疗等辅助治疗)、正常人胃黏膜上皮细胞(GES-1)和GAC细胞株(BGC-823、MGC-8...     

上调lncRNA OIP5-AS1通过靶向miR-181d-5p减少脂多糖诱导的心肌细胞损伤

目的 探讨长链非编码(long non-coding RNA,lncRNA)OIP5-AS1在脂多糖诱导心肌细胞损伤中的作用及内在机制.方法 将大鼠原代心肌细胞分为两组,分别感染空载慢病毒(对照组)和载有OIP5-AS1序列的慢病毒(实验组),实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)验证感染效率.对照组和实验组细胞分别滴...     

lncRNA ACTA2-AS1通过靶向下调miR-586 表达抑制子宫内膜癌生物学行为的研究

目的 分析长链非编码RNA(lncRNA)ACTA2-AS1在子宫内膜癌中的表达,探讨ACTA2-AS1对子宫内膜癌细胞周期和迁移的作用及其分子机制。方法 采用GEPIA数据库分析ACTA2-AS1在子宫内膜癌组织中的表达水平。qRT-PCR检测ACTA2-AS1在子宫内膜癌细胞系和正常子宫内膜上皮细胞ESC中的表达水平。分别转染空白质粒(NC组)和ACTA2-AS1过表达质粒(ACTA2-AS1组)至AN3CA细胞。流式细胞法和细胞划痕实验分别检测ACTA2-AS1对子宫内膜癌细胞AN3CA的G₀~G₁期细胞比例和迁移能力的影响。LncBase v.2数据库预测ACTA2-AS1的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证ACTA2-AS1对靶基因的调控作用。qRT-PCR或Western blot法检测磷酸酶及张力蛋白同源物基因(PTEN)和PI₃K-AKT-mTOR信号通路蛋白表达。结果 GEPIA数据库显示ACTA2-AS1在子宫内膜癌组织中的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。ACTA2-AS1在子宫内膜癌细胞系中的表达水平显著低于ESC细胞(P<0.05),ACTA2-AS1表达最低的细胞系是AN3CA(P<0.01)。与NC组比较,上调ACTA2-AS1表达可以增加G₀~G₁期细胞比例(P<0.01)。NC组和ACTA2-AS1组AN3CA细胞迁移率分别为69.54%±6.64%和40.46%±3.76%,上调ACTA2-AS1可以抑制AN3CA细胞迁移能力(P<0.01)。ACTA2-AS1能够靶向结合miR-586(P<0.01)。与NC组比较,上调ACTA2-AS1可明显抑制miR-586表达(P<0.01),PTEN基因表达明显增加(P<0.01),PI₃K-AKT-mTOR信号通路蛋白表达降低。结论 ACTA2-AS1在子宫内膜癌组织和细胞系中表达降低。对于存在PI₃K-AKT-mTOR信号通路的子宫内膜癌类型,上调ACTA2-AS1表达通过靶向调控miR-586,促进PTEN基因表达和抑制PI₃K-AKT-mTOR信号通路活化,抑制子宫内膜癌细胞周期和迁移。     

下调lncRNA SPINT1-AS1通过靶向miR-211-5p对卵巢癌细胞生长和侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)SPINT1-AS1对卵巢癌细胞生长和侵袭的影响及分子机制。方法 GEPIA数据库分析卵巢癌组织和正常组织中lncRNA SPINT1-AS1的表达。荧光实时定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)方法测定卵巢癌细胞系SKOV-3、A2780、OC3、HO-8910和永生化卵巢上皮细胞系IOSE80中lncRNA SPINT1-AS1的表达。将SKOV-3细胞分为si-SPINT1-AS1组(转染lncRNA SPINT1-AS1 siRNA)和si-NC组(转染siRNA control)。MTT法和Transwell小室实验测定下调lncRNA SPINT1-AS1对SKOV-3细胞增殖活性和侵袭的影响。Western blot检测增殖表型蛋白(PCNA、CyclinD1)和转移表型蛋白(MMP2、MMP9)的表达。采用双荧光素酶报告系统鉴定lncRNA SPINT1-AS1和miR-211-5p的靶向关系。qRT-PCR检测下调lncRNA SPINT1-AS1对miR-211-5p表达的影响。结果 与正常组织比较,卵巢癌组织中lncRNA ...     

FOXF1在肝癌中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究插头框F1基因(forkhead box F1,FOXF1)在肝癌中的表达及其对细胞增殖和凋亡的影响,探讨其分子机制.方法 应用real time PCR和Western blot分析癌旁组织和肝癌组织中FOXF1表达变化.MHCC-97H细胞和Huh7细胞分别分为3组:阴性对照组、siRNA-1组和siRN...     

lncRNA FEZF1-AS1和IGF2BP1在肝癌组织中的表达及临床意义

目的：探讨长链非编码RNA(lncRNA)Fez家族锌指蛋白1反义RNA1(FEZF1-AS1)和胰岛素样生长因子2-mRNA结合蛋白1(IGF2BP1)在肝癌组织中的表达及临床意义。方法：收集行手术治疗的60例原发性肝癌病人的肝癌组织和癌旁组织标本,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测肝癌组织、癌旁组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平;免疫组织化学染色法检测肝癌组织、癌旁组织中IGF2BP1蛋白表达水平;分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达水平与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier生存分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1表达与肝癌病人生存率的关系;Pearson分析肝癌组织lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平相关性。结果：肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1、IGF2BP1 mRNA表达水平及IGF2BP1蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织(P<0.01);肝癌组织中lncRNA FEZF1-AS1与IGF2BP1 mRNA表达水平呈正相关(...     

LncRNA ZFPM2-AS1靶向miR-519e-5p对脊索瘤U-CH1细胞生物学行为的影响

目的：探讨lncRNA ZFPM2-AS1靶向miR-519e-5p对脊索瘤U-CH1细胞生物学行为的影响。方法：体外培养U-CH1细胞,将ZFPM2-AS1的小干扰RNA以及miR-519e-5p的模拟物分别转入U-CH1细胞中,并随机分组：si-NC组、si-ZFPM2-AS1组、miR-NC组、miR-519e-5p组、si-ZFPM2-AS1+anti-miR-NC组、si-ZFPM2-AS1+anti-miR-519e-5p组;实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）检测U-CH1细胞中lncRNA ZFPM2-AS1与miR-519e-5p表达量;MTT、流式细胞术、划痕实验、Transwell实验分别检测U-CH1细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭;双荧光素酶报告实验检测lncRNA ZFPM2-AS1与miR-519e-5p的靶向调控关系;蛋白印迹（western blotting）法分析蛋白E-cadherin、N-cadherin表达。结果：与si-NC组、miR-NC组比较,si-ZFPM2-AS1组、miR-519e-5p组细胞活力、划痕愈合率、侵袭细胞数及蛋白N-...     

沉默lncRNA CTD-2510F5.4抑制Huh-7人肝癌细胞增殖侵袭及RAC-GAP1表达

目的:研究lncRNA CTD-2510F5.4沉默对Huh-7人肝癌细胞增殖侵袭功能的影响及其与RACGAP1的可能调控关系.方法:使用TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库分析lncRNA CTD-2510F5.4在肝癌与正常组织中的表达,以及与RACGAP1的表达相关性.对Huh-7人肝...     

DACH1在肝癌中的生物学作用及机制

目的探讨DACH1在肝癌中的生物学作用及其作用机制,为肝癌的早期诊断、治疗和预后评估提供帮助。方法采用免疫组化方法检测30例肝癌组织和配对的正常组织样本中DACH1的表达水平。运用Western Blot方法检测DACH1,筛选出低表达DACH1的肝癌细胞株。构建过表达DACH1的慢病毒转染HepG2细胞株,并通过Western Blot方法验证DACH1表达改变的情况。采用CCK8检测高表达DACH1的HepG2细胞株在24、48、72、96 h增殖情况。采用流式细胞技术检测高表达DACH1的HepG2细胞株周期变化情况,并运用Western Blot方法检测周期相关蛋白CyclinD1、CDK4、Cyclin E1、CDK2表达变化情况。高表达DACH1的HepG2细胞株建立裸鼠皮下移植瘤模型,观察体内增殖情况并用采用免疫组化验证肿瘤中DACH1的表达。结果DACH1在肝癌组织中的表达低于正常组织(P <0.001);DACH1在肝癌细胞中的表达低于正常肝细胞株,HepG2、Hep3B、Huh7细胞系中HepG2的DACH1表达最低(P <0.05)。高表达DACH1的... 更多     

lncRNA PCA3高表达促进前列腺癌细胞增殖、迁移并抑制细胞凋亡

目的 探究lncRNA PCA3高表达在前列腺癌细胞中的功能。方法 将构建的含有PCA3全长的pcDNA3.1质粒及对照瞬时转染PC3细胞,提取细胞总RNA进行反转录,并采用实时定量PCR检测转染效率;采用MTS的方法检测PCA3高表达对细胞增殖能力的影响;利用Transwell实验检测PCA3高表达对细胞迁移能力的影响;采用流式细胞仪检测PCA3高表达对细胞凋亡的影响。结果 高表达后lncRNA PCA3、PC3细胞的增殖、迁移能力增强,UV诱导的凋亡降低。结论 lncRNA PCA3高表达可以促进PC3细胞的恶性表型。     

Lnc-FOXD3-AS1通过激活SMAD1/5/8促进缺铁性贫血大鼠体内Hepcidin表达

目的:探讨长链非编码RNA FOXD3-AS1(lnc-FOXD3-AS1)对缺铁性贫血(IDA)大鼠模型Hepcidin表达调控作用。方法:无特定病原级(SD大鼠)接受反复放血和饲喂低铁饲料诱导IDA模型。将大鼠分为对照组、IDA组、IDA大鼠经lnc-FOXD3-AS1过表达治疗组(pcDNA-FOXD3-AS1+IDA组)、IDA大鼠经过表达空载体治疗组(pcDNA-null+IDA组)、IDA大鼠经pcDNA-FOXD3-AS1联合Smad1/5/8的激活抑制剂Compound C治疗组(pcDNA-FOXD3-AS1+Compound C+IDA组),每组n=8。试剂盒法检测各组大鼠血液中铁含量,用qRT-PCR法检测肝脏组织和血清中lnc-FOXD3-AS1的表达,western blot和ELISA法检测大鼠肝脏组织和血清Hepcidin以及SMAD1/5/8蛋白的表达和激活。结果:IDA组的大鼠IDA模型诱导成功。与对照组比,IDA组中大鼠肝脏组织和血清中铁含量维持在缺铁状态(均P<0.05),且Hepcidin、lnc-FOXD3-AS1和SMAD1/5/8的表...     

lncRNA HAND2-AS1和GLUT-1在口腔鳞癌中的表达及其意义

目的:检测口腔鳞癌患者中长链非编码RNA HAND2-AS1(lncRNA HAND2-AS1)和葡萄糖转运蛋白-1(GLUT-1)的表达情况,并探究两者与患者病理特征及预后的关系。方法:选取本院口腔科经病理检查确诊为口腔鳞癌患者68例,取其手术切除的口腔鳞癌组织和癌旁正常组织,采用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)分别检测癌组织及癌旁正常组织lncRNA HAND2-AS1与GLUT-1 mRNA表达水平,免疫组织化学法检测GLUT-1蛋白表达情况;通过Kaplan-Meier法绘制生存曲线评估lncRNA HAND2-AS1、GLUT-1蛋白表达对口腔鳞癌患者预后的影响;采用Cox回归分析口腔鳞癌患者预后的影响因素。结果:口腔鳞癌组织lncRNA HAND2-AS1表达水平低于癌旁正常组织,GLUT-1 mRNA表达水平、GLUT-1蛋白阳性表达率高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA HAND2-AS1低表达组术后5年总生存率低于高表达组,GLUT-1蛋白阳性组术后5年总生存率低于阴性组,差异有统计学意义(P<0.05)。lncRNA H...