脂质体莪术醇联合顺铂抗人卵巢癌细胞作用和机制研究

目的 研究脂质体莪术醇(LC)联合顺铂抗人卵巢癌细胞的作用和机制.方法 实验以卵巢癌细胞株SKOV3和HO8910为研究对象,以10 μg/ml LC为基准,联合不同浓度的顺铂(0、2、4、8、16、32、64 μg/ml)进行分组,MTT、Transwell和流式法分别检测各组细胞增殖、侵袭、迁移能力和凋亡率的变化,Western blot检测各组AKT、p-AKT和cleaved-Caspase8、9、3蛋白表达的变化.结果 MTF结果显示,与单用顺铂或者LC组比较,联合用药组的肿瘤细胞增殖率降低(P＜0.05),联合用药中顺铂对SKOV3的IC50为(12.67±2.03)μg/ml[单用顺铂的IC50:(38.28±5.98)μg/ml];联合用药中顺铂对HO8910的IC50为(10.55±1.55)μg/ml[单用顺铂的IC50:(26.41 ±2.30) μg/ml].联合组(8μg/ml的顺铂+ 10 μg/ml的LC)的卵巢癌细胞侵袭和迁移率均降低(P＜0.05),凋亡率最高(P＜0.05).Western blot结果提示联合用药组卵巢癌细胞的p-AKT蛋白的表达水平降低(P＜0.05),cleaved-Caspase8、9、3蛋白水平上升(P＜0.05).结论 低剂量LC可以增强顺铂抑制人卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,促进肿瘤细胞凋亡,联合用药可能通过PI3K/AKT通路促进卵巢癌细胞凋亡.     

白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP耐药逆转的初步研究

目的探讨白藜芦醇对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP的耐药逆转作用及其作用机制。方法体外培养人卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP,以MTT法检测单用白藜芦醇对SKOV-3/DDP的杀伤影响,确定其对此细胞株的逆转剂量;同法测定无毒剂量白藜芦醇干预后SKOV3/DDP对顺铂耐药性的变化,通过流式细胞仪检测白藜芦醇逆转剂量干预细胞株后细胞的凋亡情况,采用RT-PCR方法检测白藜芦醇处理SKOV3/DDP细胞前后MDR-1和Bcl-2基因的表达。结果回归分析得出,当白藜芦醇终活性浓度<115.68 U/ml时,对SKOV-3/DDP细胞生长无明显抑制作用,其抑制率小于10%。DDP组于24、48、72 h作用耐药SKOV3/DDP细胞的IC50分别为（23.31±0.42）、（9.01±0.72）、（6.45±0.83）μg/ml,当与逆转剂量（100 U/ml）的白藜芦醇联合应用时白藜芦醇使DDP对耐药SKOV3/DDP细胞的IC50均降低,差异有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与24 h RF值相比,48 h和72 h RF值差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05);与对照组相比,DDP组和白藜芦醇+DDP组人卵巢癌SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1 mRNA、Bcl-2 mRNA及MDR-1/Bcl-2值与对照组比较,组间差异均有统计学意义(（印）P（正）<0.05),且白藜芦醇+DDP组SKOV3/DDP细胞凋亡数、MDR-1/Bcl-2值明显高于DDP组(（印）P（正）<0.05)。结论白藜芦醇与卵巢癌发生、发展的密切相关,可有效逆转人卵巢癌SKOV3/DDP细胞的顺铂化疗耐药性,且可通过下调MDR-1和Bcl-2的mRNA表达以减少P-gp蛋白表达及药物外排,维持细胞内的DDP浓度。     

米非司酮对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP增敏作用研究

目的探讨米非司酮对卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的增敏作用。方法采用RPMI1640培养液对COC1/DDP细胞株进行培养,实验分2批进行,第一批将COC1/DDP细胞株分5组:对照组(不加任何药物)、顺铂组(2μg/ml)、高剂量米非司酮组(15μg/ml)、中剂量米非司酮组(10μg/ml)、低剂量米非司酮组(5μg/ml);第二批将COC1/DDP细胞株分5组:对照组(不加任何药物)、顺铂组(2μg/ml)、高剂量米非司酮加顺铂组(15μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂)、中剂量米非司酮加顺铂组(10μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂)、低剂量米非司酮加顺铂组(5μg/ml米非司酮和2μg/ml顺铂)。培养结束后采用MTT法观察各组COC1/DDP细胞株增殖活力和生存率的变化。结果与对照组比较,顺铂组和低剂量米非司酮组对细胞增殖活力的影响,差异均无统计学意义(P>0.05);随着米非司酮浓度的升高,对COC1/DDP细胞抑制作用逐渐增强,中、低剂量米非司酮组与顺铂组比较细胞增殖活力和生存率差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01),高剂量组与低剂量组比较有统计学意义(P<0.01);各剂量米非司酮加顺铂组与顺铂组比较对细胞增殖活力和生存率的影响,差异有统计学意义,且随着米非司酮浓度的升高,对COC1/DDP细胞抑制作用逐渐增强(P<0.05或P<0.01)。结论单药米非司酮和联合顺铂对COC1/DDP细胞增殖活力均具有显著抑制作用,米非司酮可提高顺铂化疗的敏感性,且与米非司酮的浓度呈剂量依赖关系。     

姜黄素促卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP凋亡机制探索

目的研究姜黄素对耐药卵巢癌细胞的促凋亡作用及其可能的机理。方法用MTT法检测不同浓度姜黄素、化疗药物〔顺铂(DDP),紫杉醇〕及姜黄素联合化疗药物(姜黄素+顺铂,姜黄素+紫杉醇)作用于卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP细胞48h后各组的细胞抑制率,并用流式细胞仪检测上述各组细胞的凋亡率。RT-PCR技术检测姜黄素、顺铂、姜黄素+顺铂作用于COC1/DDP细胞48h后各组的磷脂酰肌醇3-激酶催化亚基(PI3KCA)mRNA的表达。结果不同浓度姜黄素作用COC1/DDP 48h后,细胞的抑制率和凋亡率随着姜黄素浓度的升高相应增高,姜黄素联合化疗药物作用组比单用化疗药物组的细胞抑制率及细胞凋亡率高(P<0.05)。顺铂与姜黄素联合用药与顺铂单独作用相比PI3 KCA mRNA的表达降低(P<0.05)。结论姜黄素能够促进卵巢癌耐药细胞株COC1/DDP的凋亡,这一作用可能与姜黄素和化疗药物协同诱导该细胞系的凋亡有关,其机制可能为降低PI3 KCA基因的表达。     

内质网应激反应与人卵巢癌细胞顺铂耐药性关系的实验研究

目的:探讨顺铂敏感的人卵巢癌SKOV3细胞与顺铂耐药的卵巢癌SKOV3/DDP细胞之间内质网应激的差异及其与顺铂敏感性的关系。方法:采用人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞,给予顺铂进行体外实验。Hochest33342染色,激光共聚焦显微镜观察细胞核形态。免疫荧光结合免疫印迹技术检测内质网应激标志蛋白Grp78和PDI的表达。用钙离子敏感的荧光探针Flour-4/AM和Rhod-2/AM分别检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞浆和线粒体钙离子含量变化。结果:MTT法检测人卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞生存率,两种细胞对顺铂的敏感性存在明显差异,SKOV3细胞对顺铂敏感性显著高于SKOV3/DDP细胞;Hochest33342染色结果显示顺铂(6μg/ml)作用24h,可以引起SKOV3细胞发生明显的凋亡,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用SKOV3细胞,导致Grp78和PDI的表达明显增加,内质网应激介导的凋亡信号分子CHOP、Caspase-4表达增加,线粒体Cyt C的释放以及Caspase-3的活化增加,而SKOV3/DDP细胞无明显变化;顺铂作用于SKOV3细胞,引起胞浆和线粒体钙离子含量的显著增加,而SKOV3/DDP细胞无显著变化。结论:顺铂敏感性不同的人卵巢癌细胞,其在顺铂作用下的内质网应激反应存在显著差异,顺铂敏感的细胞其内质网应激强度高,并且其在顺铂作用后的胞浆和线粒体钙离子明显升高,内质网应激途径和线粒体途径凋亡被激活,这些结果表明卵巢癌顺铂耐药可能与内质网应激耐受有关。     

顺铂作用于耐顺铂卵巢上皮癌细胞后其细胞生物学特性的改变

目的:探讨耐顺铂卵巢癌SKOV3/DDPⅡ细胞对于顺铂作用后其细胞周期、凋亡、增殖及铂类耐药相关基因ARHGDIB和CCND1表达量的变化。方法:采用流式细胞术检测不同浓度和时间顺铂作用后SKOV3/DDPⅡ细胞周期和凋亡率的变化,并与标记GFP的上皮性卵巢癌细胞株SKOV3-GFP(敏感株)相比较;通过3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法检测不同浓度和时间顺铂作用后细胞增殖的变化;实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测裸鼠体内瘤块耐药基因CC-ND1和ARHGDIB基因的表达情况。结果:半抑制浓度的顺铂作用48h后,SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞分布于G0/G1期的比例相对于无顺铂处理组明显下降(P<0.01,P<0.05),SKOV3/DDPⅡ细胞分布于G2/M期的比例则相对于无顺铂处理组明显升高(P<0.01);而顺铂作用48h内SKOV3-GFP和SKOV3/DDPⅡ两株细胞凋亡率随时间和浓度的增大而增大;以9.9,19.8,29.7μmol/L浓度的顺铂处理6d以后,SKOV3/DDPⅡ的增殖抑制得到解除,并继续生长,而SK-OV3-GFP细胞则随顺铂作用时间延长增殖持续受到抑制。顺铂作用体内移植瘤5次后,CCND1在SKOV3/DDPⅡ-5的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高92.98倍,作用第8次后,ARHGDIB在SKOV3/DDPⅡ-8的相对表达比SKOV3/DDPⅡ-0增高2.51倍。结论:具有耐药表型的卵巢上皮癌细胞在顺铂作用下降低分布于G0/G1期细胞数使细胞生长受到一定程度的抑制,但在顺铂刺激后肿瘤细胞过度表达CCND1基因使细胞顺利通过G1/S检查点促进肿瘤细胞增殖,同时上调表达ARHG-DIB基因抵抗顺铂诱导的肿瘤细胞凋亡。     

hMLH1基因对人卵巢癌耐药细胞株顺铂敏感性的研究

目的 探讨错配修复基因hMLH1对人卵巢癌耐药细胞株SKOV3/DDP顺铂耐药的逆转作用及其机制.方法 分别用重组质粒pcDNA3.1-hMLH1和空质粒pcDNA3.1转染SKOV3/DDP细胞.RT-PCR和Western blot检测hMLH1的表达.MTT检测转染前后SKOV3/DDP细胞对顺铂敏感性的变化.经顺铂DDP作用后,流式细胞术和Western blot法检测细胞凋亡情况.结果 与对照组相比,瞬时转染24 h后,SKOV3/DDP细胞中hMLH1 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05).MTT结果显示,转染细胞的IC50值(13.95±2.45)较未转染的细胞(94.16±5.18)明显减小.流式细胞仪和Western blot检测结果表明,顺铂作用24 h后,转染了重组质粒的耐药细胞的凋亡率提高到(33.33±2 31)%,同时凋亡抑制蛋白Bcl-2的表达受到抑制(1.35±0.39),与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 hMLH1基因能增强卵巢癌耐药细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与降低该耐药细胞内Bcl-2的表达水平,促进细胞凋亡有关.     

miR-130a对卵巢癌A2780细胞顺铂耐药性的影响及其机制的研究

目的 探讨miR-130a表达的改变对卵巢癌A2780细胞（包括顺铂敏感细胞株A2780s和耐药株A2780/DDP）顺铂耐药性的影响及其机制。方法 将A2780s、A2780/DDP细胞各分为4组,分别予以单纯脂质体处理、转染阴性对照小RNA、miR-130a模拟物(可使miR-130a表达增加)、miR-130a抑制物(降低miR-130a表达)处理,MTS法检测各组细胞增殖情况和对顺铂的耐药性,RT-PCR、Western blot 法检测未处理和处理后细胞多耐药基因1（MDR1）、抑癌基因（PTEN） mRNA和蛋白的表达。结果 A2780/DDP细胞MDR1 mRNA和MDR1的表达产物P-糖蛋白(P-gp）的表达高于A2780s细胞（PMDR1 mRNA和P-gp表达水平;下调miR-130a的表达,同样不影响细胞的增殖, 但增强其对顺铂的敏感性, 并可降低MDR1 mRNA和P-gp的表达,提高PTEN蛋白的表达。结论 miR-130a抑制物通过上调PTEN蛋白和下调P-gp的表达来逆转卵巢癌A2780细胞系对顺铂的耐药性。miR-130a有望成为耐药性卵巢癌基因治疗的新靶点。     

热疗联合三代铂类药物对卵巢癌细胞株SKOV3的影响

目的 探讨热疗分别联合三代铂类药物即顺铂（DDP）、卡铂（CBP）、奥沙利铂（OXA）对卵巢癌细胞株SKOV3增殖的影响及其可能机制。方法 SKOV3细胞采用热疗（42 ℃）或常温（37 ℃）联合不同浓度的DDP（终浓度分别为0、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0 μg/mL）、CBP及OXA（终浓度均为0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0 μg/mL）处理, MTT法检测对SKOV3细胞增殖的影响,采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）技术检测SKOV3细胞经相应处理后核苷酸切除修复交叉互补组基因(excision repair cross-complementing group 1, ERCC1)、凋亡抑制基因（Survivin）的表达变化。结果 DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株SKOV3的增殖呈抑制作用,并呈剂量依赖性（P<0.05）,42 ℃热疗能增强铂类药物对SKOV3细胞株的增殖抑制作用; DDP、CBP、OXA对卵巢癌细胞株增殖的半数抑制浓度（IC50）分别为（7.271±0.096） μg/mL、（37.609±0.779）μg/mL、（28.328±0.698） μg/mL,42 ℃热疗联合上述铂类药物后IC50分别为（2.075±0.244） μg/mL、（19.591±0.453） μg/mL、（19.089±0.424） μg/mL,增敏倍数分别为2.075±0.244、1.92±0.044、1.484±0.039（P<0.05）,其中对DDP的增敏效果最显著;在三代铂类药物中,热疗均能下调ERCC1 mRNA的表达（P<0.05）,且CBP下调最显著;热疗联合CBP、OXA作用于SKOV3时均能下调Survivin mRNA的表达（P<0.05）,其中OXA组更显著,但DDP联合热疗对Survivin mRNA表达的影响差异无统计学意义（P>0.05）。结论 热疗联合三代铂类药物能增强铂类药物对SKOV3细胞的增殖抑制作用,增加肿瘤细胞对铂类药物的敏感性,其增敏机制可能与下调ERCC1 mRNA和Survivin mRNA表达有关。     

白藜芦醇通过上调miR-361-3p逆转卵巢癌顺铂耐药的研究

目的 研究白藜芦醇(RES)逆转卵巢癌顺铂(DDP)耐药的作用机制。方法 选取人卵巢癌SKOV3细胞,采用DDP构建SKOV3/DDP耐药细胞株。使用细胞计数试剂盒8(CCK-8)和5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷(EdU)实验检测RES和DDP对SKOV3/DDP细胞的半数抑制浓度(IC₅₀)和增殖能力的影响;采用实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)检测RES对微RNA-361-3p(miR-361-3p)的调控作用;采用流式细胞术检测RES和DDP对细胞凋亡的作用;细胞转染miR-361-3p抑制剂后检测DDP对细胞增殖和凋亡的作用。采用Western blot检测丝裂原活化蛋白激酶/细胞外信号调节激酶(MAPK/ERK)信号通路关键蛋白的表达。结果 RES终浓度4μmol/L对SKOV3/DDP细胞生长无明显抑制作用(P>0.05),可作为最大安全浓度。RES+DDP组的IC₅₀明显低于DDP组(P<0.05)。RES可明显上调SKOV3/DDP细胞miR-361-3p的表达(P<0.05)。miR-361-3p抑...     

CIK细胞对卵巢癌化疗耐药的逆转作用及对ERCC表达的影响

目的 探讨细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞在杀伤人卵巢癌耐顺铂(DDP)细胞株(SKOV3/DDP)的效应当中是否存在着逆转化疗耐药作用及其对切除修复交叉互补基因组1(ERCC1)、切除修复交叉互补基因组2(ERCC2)表达的影响.方法 四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测DDP、CIK细胞、无毒剂量CIK细胞联合顺铂对人卵巢癌亲本细胞株(SKOV3)和SKOV3/DDP的体外杀伤活性.实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)和Western-blot分别检测经无毒剂量CIK细胞作用下两组细胞中ERCC1、ERCC2基因表达的变化.结果 DDP和CIK细胞对SKOV3、SKOV3/DDP两组细胞均有杀伤效应,且随DDP浓度和效靶细胞比值的升高呈依赖性增加;与单纯DDP作用相比,无毒剂量CIK细胞联合DDP对SKOV3/DDP细胞具有较明显的协同作用(P＜0.05).CIK细胞作用SKOV3/DDP细胞后,靶细胞中ERCC1 mRNA和蛋白的表达量较干预前降低,差异有统计学意义(P＜0.05);ERCC2 mRNA和蛋白的表达量较干预前降低,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 CIK细胞可以部分逆转SKOV3/DDP细胞对DDP的耐药性,且CIK细胞逆转SKOV3/DDP的耐药作用可能与ERCC1表达下调有关联,而与ERCC2表达下调无关联.     

灰树花多糖治疗卵巢癌体外实验观察

目的体外实验探讨灰树花多糖治疗卵巢癌的作用。方法以不同浓度灰树花多糖(终浓度为100、250和500μg/ml)处理人SKOV3细胞,台盼蓝染色和MTT检测对细胞增殖的抑制作用,Annexin V/PI双标记流式细胞术检测与荧光显微镜观察检测细胞凋亡。另设阴性对照组,仅用培养液;10μg/ml顺铂(DDP)作为阳性对照。结果台盼蓝排染和MTT检测证实,灰树花多糖明显抑制SKOV3细胞增殖;Annexin V/PI双染流式细胞术检测显示,灰树花多糖100、250、500μg/ml作用细胞24、48、72 h均能诱导细胞凋亡,凋亡率与时间、剂量存在依赖关系;Annexin V/PI双染荧光显微镜观察检查细胞凋亡率显示了与流式细胞术检测类似结果。结论灰树花多糖显著抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

土贝母皂苷甲增强人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性

目的探讨土贝母皂苷甲(tubeimoside 1,TBMS1)促进人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂(cisplatin,DDP)的增敏作用。方法采用MTT法分别检测顺铂和TBMS1对A2780/DDP细胞作用的半抑制浓度值(IC50),将实验分为对照组:只加等量生理盐水;顺铂组:给予6μmol/L顺铂处理;联合用药Ⅰ组:6μmol/L顺铂+3μmol/L TBMS1;联合用药Ⅱ组:6μmol/L顺铂+6μmol/L TBMS1。按上述方法处理细胞后,MTT法检测细胞活力;电泳法检测细胞内DNA损伤;流式细胞技术检测细胞凋亡及周期;Western blot分析周期蛋白A(Cyclin A)和周期蛋白D1(Cyclin D1)的表达。结果 TBMS1(3、6μmol/L)与顺铂(6μmol/L)联用使人卵巢癌A2780/DDP细胞对顺铂的敏感性增强;细胞的DNA损伤随TBMS1浓度的增加而明显增多;细胞周期被阻滞在S期,联合用药Ⅰ和Ⅱ组S期所占比例分别为(51.23±3.53)%、(77.34±2.80)%;细胞凋亡率为(5.19±0.78)%、(7.11±1.06)%;Cyclin A的表达为1.89±0.28及2.91±0.43,CyclinD1为0.66±0.09及0.28±0.05(P<0.05,P<0.01)。结论 TBMS1显著增加顺铂对A2780/DDP细胞增殖抑制作用,Cyclin A、Cyclin D1可能参与其调节。     

Bcl-xL和Caspase3在人卵巢癌细胞株凋亡过程中的调节作用

目的 探讨Bcl-xL和Caspase3基因在顺铂诱导人卵巢癌细胞株凋亡过程中的表达及其在肿瘤细胞凋亡中的作用。方法 应用流式细胞术，RT—PCR技术和原位杂交技术，分别对顺铂诱导人卵巢癌敏感细胞株(COCl)及卵巢癌耐药细胞株(COCl／DDP)的细胞凋亡及其Bcl-xL和Caspase3表达进行研究。结果 ①不同顺铂浓度(3、6、9．9μg／m1)作用下COCl和COCl／DDP细胞凋亡率不同，COCl／DDP细胞明显低于COCl(P＜0．05)。②COCl和COCl／DDP细胞株中均有Bcl-xL基因表达，但COCl／DDP表达明显强于COCl。在6μg／m1顺铂作用下COCl和COCl／DDP细胞株中Bcl-xL基因表达下调，以COCl下降更明显。②原位杂交结果，6μg／m1顺铂作用后COCl和COCl／DDP细胞Cas—pase3呈阳性，可见到凋亡细胞特征性形态学变化。结论 凋亡抑制基因Bcl—xL在人卵巢癌多药耐药细胞株(COCl／DDP)中高表达，是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因，Caspase3在顺铂诱导凋亡的过程中被激活，促进凋亡。     

MicroRNA-101 对上皮性卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP 顺铂敏感性的影响

探讨 MicroRNA-101（miRNA-101）对上皮性卵巢癌耐药细胞 SKOV3/DDP 顺铂敏感性的影响及相关作用机制。方法 本研究通过细胞转染技术上调 SKOV3/DDP 细胞内 miRNA-101 的表达,采用RT-PCR 检测 miRNA-101 及 BDNF mRNA 的表达情况;CCK-8 检测 SKOV3/DDP 细胞顺铂敏感性及增殖力;Annexin V-FITC/ PI 流式细胞实验检测细胞凋亡率。结果 与阴性对照组比较,miRNA-101 转染组细胞 miRNA-101 表达量及细胞凋亡率增加 [ （1.000±0.022）vs（5.380±0.246）, <0.05],[ （11.020±0.685）%vs（26.158±1.278）%, <0.05];BDNF mRNA 表达量降低[ （1.000±0.042）vs （0.389±0.055）, <0.05];顺铂 IC50及细胞增殖力均下降[ （57.276±1.717）vs （33.176±2.465）, <0.05],[ （1.776±0.030）vs （1.642±0.252）, <0.05]。结论 miRNA-101 可有效增加 SKOV3/DDP 细胞对顺铂的药物敏感性,促进细胞凋亡。     

甲基硒酸对人卵巢癌顺铂耐药细胞株 SKOV3/DDP 耐药的逆转作用及机制

目的：通过用甲基硒酸(methyl-seleninic acid,MSA)作用于卵巢癌顺铂(cisplatin,DDP)耐药细胞株(SKOV3/ DDP),探讨其对卵巢癌耐药株耐药的逆转作用及机制。方法： MTT 法检测不同浓度DDP作用48 h后SKOV3和SKOV3/ DDP细胞增殖抑制率;并用Western印迹法检测SKOV3和SKOV3/DDP细胞中β-catenin蛋白的表达。MTT法检测2, 6 μmol/L MSA及其联合不同浓度DDP对SKOV3/DDP细胞的抑制作用;采用Western印迹法检测各组细胞中β-catenin蛋 白的表达,并进行定量分析。结果：不同浓度的DDP作用于SKOV3和SKOV3/DDP细胞48 h后,SKOV3/DDP细胞的 抑制率均低于SKOV3细胞(P<0.05);SKOV3/DDP细胞中β-catenin表达高于SKOV3细胞(P<0.05)。不同浓度MSA作用于 SKOV3/DDP细胞48 h后,细胞抑制率随MSA的浓度增高而增加(P<0.05)。2,6 μmol/L MSA联合DDP组SKOV3/DDP细 胞的48 h抑制率均高于单用DDP组而β-catenin的表达均低于单用DDP组(P<0.05)。结论：MSA能够逆转SKOV3/DDP细 胞对DDP的耐药性,此作用可能与其降低β-catenin表达有关。     

WT1反义核酸诱导卵巢癌细胞凋亡的实验研究

[目的]研究WT1反义寡核苷酸转染对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响。[方法]实验分4组:正常对照组(加入转染液)、反义组(脂质体+反义寡合苷酸转染)、正义组(脂质体+正义寡合苷酸转染)和脂质体组(只加入脂质体)。分组转染卵巢癌SKOV3细胞株后,流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期,MTT法检测细胞的增殖活性,RT-PCR检测WT1 mRNA表达水平,Western blot检测其蛋白表达水平。[结果]脂质体介导的WT1反义寡核苷酸转染明显抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,抑制率为49.48%,G0-G1期细胞分布率增加达(79.10±2.79)%,凋亡细胞群明显增多,凋亡率为(13.18±2.00)%,同时转染后细胞WT1 mRNA及蛋白表达水平下降,与对照组及其他各组相比较差异均有显著性意义(P<0.05)。[结论]WT1反义核酸能抑制卵巢癌细胞增殖,诱导细胞凋亡。WT1反义核酸用于卵巢癌的基因治疗具有一定的潜在意义。     

乳源免疫调节肽通过泛素-蛋白酶体途径抑制卵巢癌耐药性及其机制研究

目的 研究乳源免疫调节肽(PGPIPN)抑制卵巢癌耐药性及其机制.方法 MTT法检测PGPIPN与抗癌药顺铂(DDP)联合用药抑制人卵巢癌敏感细胞株(SKOV3)、耐药细胞株(SKOV3-DDP)和原代卵巢癌细胞的半数抑制浓度(IC50)和细胞增殖抑制率,PCR法和Western blot法检测人卵巢癌细胞株和原代卵巢癌细胞用药情况下泛素-蛋白酶体途径相关基因的表达.结果 PGPIPN和DDP联合用药细胞增殖抑制率显著高于单独DDP组或PGPIPN组,差异有统计学意义( P＜0. 05),PCR和Western blot结果表明 PG-PIPN通过调节泛素-蛋白酶体途径相关基因表达降低卵巢癌细胞的耐药性. PGPIPN促进SIAH和PSMA1 表达,降低β-catenin基因的表达(P ＜0. 05,P ＜0. 01),且有剂量依赖性.结论 PGPIPN通过泛素-蛋白酶体途径降低卵巢癌细胞对DDP的耐药性.     

白杨素联合氯喹抑制卵巢癌细胞增殖促进凋亡的研究

目的 探究白杨素联合氯喹对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法 选取手术切除后卵巢癌标本和正常卵巢标本,使用免疫组化法检测卵巢癌和正常卵巢组织自噬相关蛋白LC3的表达水平。使用CCK-8法检测卵巢癌细胞SKOV3的增殖。使用Western blot和免疫荧光法检测SKOV3细胞中LC3的表达。使用电镜检测SKOV3细胞中自噬小体的数目。使用流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡情况。结果 LC3在卵巢癌中的表达量高于其在正常卵巢组织中的表达。分别用0、20、40、60、80、100μmol/L浓度的白杨素处理SKOV3细胞24 h,随着浓度增加,细胞增殖能力降低。40μmol/L白杨素处理SKOV3细胞24 h后,与对照组相比,白杨素上调了LC3的表达(P<0.05)。与对照组比较,白杨素处理24 h的SKOV3细胞后,透射电镜下可以观察到其中间出现较多的自噬小体(P<0.05),在对照组则未观察到自噬小体的存在。当白杨素与CQ联合使用24 h后,联合处理组的LC3蛋白表达量高于白杨素和氯喹单独处理组(P<0.05)。白杨素可以诱导SKOV3细胞的凋亡,且白杨素+氯喹组凋...     

人卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP的建立及相关基因表达水平的研究

目的建立人卵巢癌顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP,初步探讨其耐药机制。方法采用顺铂(DDP)浓度梯度递增诱导法,建立人卵巢癌OVCAR-3细胞株的顺铂耐药细胞株OVCAR-3/DDP;通过细胞计数和MTT法评估细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期情况,以评价OVCAR-3/DDP的生物学特性;采用RT-PCR法检测Mfn2、EGFR及MMP2 mRNA水平。结果成功建立了OVCAR-3/DDP顺铂耐药细胞株,其对DDP耐药指数是1.92;与亲本细胞株OVCAR-3相比,OVCAR-3/DDP生长速度减慢,倍增期是OVCAR-3细胞的1.36倍(P<0.05);流式细胞术检测结果显示细胞主要停滞于G2/M期(P<0.05);与OVCAR-3细胞相比,OVCAR-3/DDP细胞中Mfn2、EGFR及MMP2 mRNA水平均明显升高(P<0.05)。结论建立的OVCAR-3/DDP细胞株对顺铂耐药性稳定;OVCAR-3/DDP细胞对顺铂耐药可能与Mfn2、EGFR、MMP2基因转录水平上调有关。